苏云金芽孢杆菌使用说明

合集下载

芽孢杆菌农药的使用说明

芽孢杆菌农药的使用说明

芽孢杆菌农药的使用说明1. 什么是芽孢杆菌农药?嘿,朋友们!今天咱们聊聊一种神奇的农药——芽孢杆菌农药。

你可能会问,这玩意儿到底是个啥?简单来说,芽孢杆菌是一种天然的细菌,它可不是那种让你觉得毛骨悚然的坏家伙,恰恰相反,它可是咱们的好朋友,专门用来对付那些讨厌的害虫和病菌。

想想看,谁不想在自家菜园里种点儿无农药的蔬菜,吃着放心呢?芽孢杆菌农药的主要成分是芽孢杆菌,这种细菌在土壤里可算是个老油条了,能够自然地产生一些物质,专门对付害虫的防御系统。

用它来喷洒作物,既环保又有效,真是一举两得。

就像吃了个双皮奶,既满足了味蕾,又不会担心长胖,爽歪歪!2. 如何使用芽孢杆菌农药?2.1 准备工作要使用芽孢杆菌农药,首先得准备好喷雾器。

这玩意儿可是咱们施药的“神器”,没有它,咱的好东西可就派不上用场了。

然后,记得选择个晴朗的天气,最好是在早上或傍晚,不然阳光太猛烈,药效可能会打折扣哦!就像出门前选衣服,不能在大太阳下穿毛衣吧?接下来,咱们要根据说明书上的比例,将芽孢杆菌农药稀释到合适的浓度。

一般来说,药水和水的比例得根据不同的作物来调整,别一味地随意加哦!就像调味料,太多了就容易掩盖原味。

调配好后,摇一摇,确认药水均匀,这样才能给作物最好的保护。

2.2 喷洒技巧喷洒的时候,可得讲究点儿技巧哦!记得把喷雾器的喷嘴调到合适的状态,喷出细腻的雾状,这样能更好地覆盖到每一片叶子。

喷的时候,不妨顺着风向喷,避免风把药水吹跑,简直是“瞎猫碰上死耗子”,费力不讨好!喷洒的力度也要控制得当,别太猛了,不然不仅药水飞到你身上,作物也受不了,结果适得其反。

喷完之后,记得把喷雾器洗干净,别让它留下药水的痕迹,免得下次用的时候“阴魂不散”。

而且,刚喷完的作物,最好能让它们“安静”一会儿,不要马上去触碰,给它们点儿时间吸收养分,慢慢变得强壮起来,就像锻炼后要给肌肉恢复的时间。

3. 注意事项3.1 观察效果用芽孢杆菌农药后,别忘了观察一下作物的状态哦!如果发现害虫数量明显减少,那就说明咱的选择没错,效果杠杠的。

微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bt)的研究现状及应用

微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bt)的研究现状及应用

微生物杀虫剂苏云金芽孢杆菌(Bt)的研究现状及应用作者:高成华来源:《农业工程技术·温室园艺》2015年第06期苏云金杆菌又称苏云金芽胞杆菌,简称Bt。

苏云金杆菌的发现,为人们利用微生物消灭植物病虫害提供了美好的前景。

化学杀虫剂的长期使用对生态环境产生了严重的破坏,而害虫种群的抗药性也日益提高,因此生物杀虫剂因为其“绿色环保”的特点日益引起人们的广泛关注。

现在,人们已经用发酵罐大规模地生产苏云金杆菌并制成粉剂或可湿剂、液剂,应用于农业,对100多种害虫有不同的致病和毒杀作用。

苏云金芽孢杆菌是目前世界上产量最大、应用最广的生物杀虫剂。

本文简要介绍作为生物杀虫剂的Bt的发展历史、研究现状和应用情况。

研究历史[1]1901年,日本学者石渡繁胤(Ishiwata Shigetane)从虫尸体液中分离出苏云金杆菌猝倒变种(Bacillus.thuringiensis var.sott)成为苏云金杆菌研究的起点[2]。

1911年,Berliner发现一杆菌,并详细描述了该菌的形态和培养特征,定名为苏云金杆菌(Bacil-lus.thuringiensis),指明苏云金杆菌含伴孢晶体(Paraspora crystl)[3]。

1938年,苏云金杆菌商品化,用于防治地中海粉螟。

20世纪50年代许多国家进行了商业性生产。

1953年,Hannay第一次发现苏云金杆菌的杀虫活性与伴孢晶体有关,并和Fitz-James于1955年证实,伴孢晶体是一种蛋白质。

1981年,Schnept和Whiteley首次将HD21菌株伴孢晶体的基因克隆到大肠杆菌中,并得到表达。

20世纪60年代用血清学技术进行Bt的鉴定和分类。

自二次世界大战后,苏云金芽孢杆菌被广泛使用,至今已有60多年[4]。

由于其推广力度以及人们的农药使用意识的传统观念限制,目前生物农药仅占全部农药市场份额很少一部分,从此可看出,苏云金芽孢杆菌杀虫剂任然具有较大的发展潜力。

从崖城农田土壤中发现一种具有杀死植物害虫功能的细菌——苏云金解析

从崖城农田土壤中发现一种具有杀死植物害虫功能的细菌——苏云金解析

从崖城农田土壤中发现一种具有杀死植物害虫功能的细菌——苏云金芽孢杆菌崖城高级中学高一(1)班龚彩秀指导老师:翟鸿武一次偶然的机会让我在一本生物杂志上接触到苏云金芽孢杆菌(Bacillus Thuringiensis ,Bt)当时的我觉得很神奇——它能杀死农作物害虫。

人类从刀耕火种以来,一直备受害虫的威胁,给人类的生活造成了多种危害,其中虫害是威胁农作物高产的主要原因之一,全世界每年因此损失约数千亿美元,每年世界上因虫害而造成的农产品损失估计为13%。

在我国,水稻每年因虫害减产10%以上,小麦减产近20%,棉花产量损失达20%~30%。

为了控制农林病虫害,人们不得不大量使用化学农药,但长期大剂量地使用化学合成的农药,致使多种害虫对化学杀虫剂产生了一定的抗性,因此不但不能有效地控制害虫,结果还面临着三大难题无法解决,①环境污染,残毒上升,人畜均遭毒害;②用药浓度不断提高,防治费用不断增加,不得不无休止地研制新农药;③杀伤天敌,破坏了生态平衡,引起害虫再猖獗和次虫害虫大爆发,导致自然界中恶性循环。

苏云金芽孢杆菌由于能在生长代谢过程中产生对多种农林害虫具有特异性杀虫毒力的生物活性蛋白,并能由此生产相应的微生物杀虫剂来用于害虫生物防治而受到国内外的广泛重视。

广泛的研究与应用实践证明,与化学农药等其他类型的杀虫剂相比,Bt杀虫剂具有杀虫特异性强,对人、畜及非目标昆虫无毒副作用;安全性能好,不污染环境,由于具有多种类型的杀虫晶体蛋白,昆虫难以产生抗性或产生抗性较缓慢;具较低的生产成本等优点。

目前已推广使用的表达Bt毒素基因的转基因植物都有较为显著的抗虫性能,在大田栽培中无需或只需喷洒少许化学杀虫剂,从而大大减少了对环境的污染。

因此苏云金芽孢杆菌作为新型生物农药解决了一个长期以来让无数劳动农民头痛的问题。

而对生物有着浓厚兴趣的我对它有种相识恨晚的感觉,而这次的“科技创新”活动让我坚定了对它认识的决心,在老师和同学们的帮助下,我开始了我的创新实验。

苏云金杆菌cry1aa基因的表达和定点突变

苏云金杆菌cry1aa基因的表达和定点突变

ABSTRACTInsectswoulddevelopresistancewhichcorrelatedwiththeB口cf盯淞历“rf愕fP珊括toxins,aIlddecreasingofpHofitsmidgutjuicetothemechanismisunknown.AmodifiedSDS—alkalinemethodwasusedtoextractplasmidsofBt4.0718strain,andPCRanalysisdemonstratedthatP3plasmidcontainc,),1Aagene.Byanalyzetheconsensusregionof13kindsofcWlAagenewithmeNationalCenterforBiotechnologyinfbnnation’sBLASTWWWserver’primersH01andH02weredesignedtoampli6edfWlAagenefromP3plasmid,thenthePCRDmductssubclonedtoobtainrecombinantMDAastrain.The3.5一kbB日历HIandS口fIinsertofpMDl8一TwasinsertedintothepET30avector,thentransfoⅡnedE∞,fstrainBL2l(DE3)togiVingETAastrain,anda141-kDfusionproteinwasoverexpressedasinclusionbodybyinducedwithIPTGSite—directedmutagenesiswasperfomedinat、Vo-st印PCRwiththreeprimers.Thefragmentsproducedinmefirststepwereusedasthe“bigprimer"inthesecondPCRtoarnplifiedthel048-bpfragmentsandsubcloned.A224-bpmutatedf}agmentobtainedbydigeStingpMDMXwith砌PIand丑fsHIIandsubstitutedmefhgmentinpMDAaatthesarnepositiontogetrecombinantplasmidpMDMa.pMDMadigestedwithB日mHIandSb,I,the3.5-kbmutated矗agmentwasinsertedintothepET30aVectortoobtainthemutagenicstrainETMaC812AandC814A.SDS—PAGEshowedthatthemutamc,),1AagenewasalsooVerexpressed.Inclusionbodies舶mETAastrajna11dmutatedETMastraindissolVedunderdifferentpHorconcentrationsof2一M[ercaptoemanols锄epHorindiVidually.SDS-PAGEshowedt11at,undertheconcentrationof2-Mercamoethanol,inclusionbodies疔ommutatedETMastrainweremoreeasytodissolve,andcoulddissolvebetterin10wpHorlowconcentrationof2一MercaptoethanolthaJlinclusionbodiesf_romETAastrain.ItdemonstratedthatthernutagenesisofC8l2AandC814Acouldsignallychangethedissolvabilityofjnclusjonbodies.ThestudyprDVideaValuableoptionflorresistancemanagement,andonsuchabase,出eroleofdisulphideintheprotoxinstabiIitya11dtoxicitycanbemr出erachievedKleywords:8口c“,£岱f是“r豫il拿挖s扭,c,ylAagene,overexpression,Site—directedmutagenesis,resistance前言1.苏云金芽孢杆菌1.1苏云金芽孢杆菌(Bt)概论苏云金芽孢杆菌(肋cf,,“s胁“rf娼招瑚如,简称Bt)是一种在自然界广泛分布的革兰氏阳性细菌,按照《伯杰氏细菌鉴定手册》第九版可将其归属为第二类第十八群芽孢杆菌属(口口c讲珊)中的一种【lJ。

微生物农药——BT农药

微生物农药——BT农药

杀虫机理
苏云金杆菌可寄生130多种鳞翅目幼虫。 苏云金杆菌可寄生 130多种鳞翅目幼虫。 130多种鳞翅目幼虫 此外,膜翅目、 双翅目、 此外,膜翅目、双翅目、直翅目和鞘翅 目中的一 些昆虫也可被此菌感染。 目中的一些昆虫也可被此菌感染。 控制 毛虫、小蔡蛾、棉铃虫等。 毛虫、小蔡蛾、棉铃虫等。 苏云金杆菌杀虫的作用在于它所产生的 某些毒素。这些毒素 主要是δ 某些毒素。这些毒素主要是δ内毒素和 外毒素。
在昆虫病原细菌中, 在昆虫病原细菌中,以 苏云金杆菌在害虫 防治中的应用最为广泛, 效果也最好。 其杀虫 范围有一定的广谱性, 并且具有不亚于某些化 学杀虫剂的速效性。 学杀虫剂的速效性。在这一点上苏云金杆菌 优 于真菌和病毒制剂。
苏云金杆菌的生态习性
(1)营养条件 苏云金杆菌是弱寄生菌,容易培养,能利用的碳、 苏云金杆菌是弱寄生
BT的制备
用玉米粉,豆饼粉,NaH2PO4和NaCl来调整原料粉 中C,N,P,Cl含量,使其分别处于3-20%,1-10%, 0.512%,0.1-1.0%的范围内,加入5%-30%的谷壳, 10%30%的水,搅拌均匀得到固态发酵培养基,灭 菌后介 入苏金云芽孢杆菌菌种,发酵,干燥,粉碎 得到苏金云 芽孢杆菌农药原粉
微生物农药——BT农药
什么是微生物农药
包括农用抗生素和活体微生 物农药.为利用微 生物或其代谢产 物来防治危害农作物的病,虫, 草, 鼠害及促进作物生长.它包括以菌 治虫,以 菌治菌,以菌除草等.这 些微生物农药包括细 菌,真菌,病 毒或其代谢物.
微生物农药的分类
包括细菌,真菌,病毒,原生动物,线虫等,主要是前三者 微生物杀虫剂:细菌杀虫剂 真菌杀虫剂 虫剂
bt农药的介绍btbacilussthuringiensis苏云金芽孢杆菌用途最广开发时间最长产量最大应用最成功占生物防治剂总量的95以上已有60多个国家登记了120多个品种美国用以防治蔬菜害虫和玉米害虫的面积分别占总面积的80和50销售额从80年代末的4000万美元上升到90年代的5亿多美元内第一家bt杀虫剂生产企业我国目前已登记的bt杀虫剂粉剂有16种液剂12种生产厂家达76家年产量达20108kg30108kg由中国构建的高效杀虫重组苏云金杆菌已于2000年底通过了安全评价并获准进行商品化生产bt的杀虫机理bt毒蛋白在虫子体内被分解成有毒的多肽这些多肽与虫肠上皮细胞一些特异受体蛋白结合破坏细胞膜最后导致害虫死亡

微生物肥料菌种使用方法-枯草芽孢杆菌-地衣芽孢杆菌

微生物肥料菌种使用方法-枯草芽孢杆菌-地衣芽孢杆菌

种植专用EM菌种使用方法一、产品特点本品由枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、光合菌、乳酸菌、酵母酸、和放线菌等10属80多种微生物复合培养而成的有益微生物菌群。

1、外观:灰白色粉末,略带腥臭味。

2、主要成分:枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、光合菌、乳酸菌、酵母酸、放线菌和少量培养基干物质,总菌数≥200亿/克。

二、EM原液的制作方法本品10克可以制作10-20公斤EM原液【制作方法】制作EM菌种发酵液——EM原液A、菌种活化:取EM菌种10克、红糖0.1公斤(红糖先用热开水溶化),加入1公斤无菌的水中。

注:(先把水加热到100°C后加入红塘,而后继续加热5分钟。

冷却到40°C时加入EM种),密闭发酵( 35°C—37°C温度 )3-5天(第二天开始每天松动容器封口减压放气一次),打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。

可以作为液体菌种使用。

B、制作原液:将活化好的液体菌种加入二级发酵罐( 密闭 )( 加水比例按1:10-20的比例加入)。

二级发酵液配方:10% 的红糖、0.3% 微量元素、0.1% 氨基酸(尿素也可以),温度35-37度,发酵5-7天(第二天开始每天松动容器封口减压放气一次),打开容器口闻到有酸甜味即活化成功。

可以作为原液使用。

成品发酵液标准:(气味:酸甜,PH值:4.0-5.0,活菌含量:大于100亿/ml )【作用功效】1、EM菌种原液能分解木质素、粗纤维等大分子有机物,使其转化为利于动、植物吸收利用的小分子物质。

2、EM菌种原液在发酵代谢过程中形成优势菌群和产生的多种抗生性物质,能有效抑制有机物中病原菌的滋生。

3、EM菌种原液能分泌与合成有机酸、多种酶、生理活性物质,提高肥效。

4、EM菌种原液可以鳌合有机肥料中的重金属,降解其中的有毒有害物质,防止对土壤和作物的危害。

【用法用量】1、发酵农家肥或有机垃圾:每公斤本品可发酵农家肥(有机垃圾)500-1000公斤(生料、粗料用量大些)。

微生物杀虫剂_苏云金杆菌_Bt_

微生物杀虫剂_苏云金杆菌_Bt_

苏云金杆菌(B.t)是一种细菌杀虫剂,是由昆虫病原细菌苏云金杆菌(Bacil-lusthurgiensis)的发酵产物加工的制剂。

此菌1911年因贝利纳(E.Berliner)发现于德国苏云金地区而得名,属芽孢杆菌,革兰氏染色阳性,横裂繁殖。

一、苏云金杆菌(B.t)的杀虫机制和杀虫范围苏云金杆菌(B.t)制剂是胃毒剂,进入昆虫消化道后,伴孢晶体(主要成分为蛋白质)被昆虫碱性肠液破坏成较小单位的δ-内毒素,使中肠停止蠕动、瘫痪,中肠上皮细胞解离、停食,芽孢则在肠中萌发,经被破坏的肠壁进入血腔,大量繁殖,使害虫得败血症而死。

目前已知苏云金杆菌有30多个变种,某些变种营养体对数生长时期产生β—外毒素,耐热,是一种腺嘌呤核苷酸,也起杀虫作用。

苏云金杆菌杀虫谱广,能防治上百种害虫,对鳞翅目幼虫特别有效。

目前苏云金杆菌(B.t)及其混配制剂已用于防治蔬菜、水稻、玉米、棉、果树、茶树和林区等害虫。

如防治菜青虫、小菜蛾、稻苞虫、稻纵卷叶螟、玉米螟、棉铃虫、枣尽蠖、松毛虫、烟青虫、茶卷蛾、茶尺蠖等百种虫害,是应用最广的微生物杀虫剂。

中国50年代初曾从法国引进苏云金杆菌,并进行防治玉米螟试验,1959年又从捷克引进苏云金杆菌,1961年从前苏联引进苏云金杆菌蜡螟变种青虫菌。

与此同时,四川省农科院植保所与农业部成都药械厂合作从事苏云金杆菌的研发工作,至今全国已发展到80个厂家开发生产,使用面积达近600万公顷。

目前苏云金杆菌(B.t)的开发工作正在向改善工艺流程和提高产品质量方向发展,同时继续寻找自然存在的B.t新菌系和利用分子生物学技术已确定的菌系基因形成转合的B.t菌系。

近年来四川省农科院植保所植保技术工程公司与湖北康欣农药业有限公司(湖北省农科院Bt研究开发中心)合作推广应用苏云金杆菌(B.t)。

二、苏云金杆菌(B.t)杀虫效果好,持效期较长,并有后效作用据上海市蔬菜技术推广站用生绿B.t粉剂(16000国际单位/mg),亩用30g、50g和70g防治小菜蛾,施药后7天的平均防效分别为74.4%、82.1%和90.3%;5%抑太保乳油用亩50ml,防治小菜蛾,施药后7天的平均防效为79.9%。

苏云金芽孢杆菌的概况及其研究进展

苏云金芽孢杆菌的概况及其研究进展
e vr n e t n io m n .Up ae he Btp sii e ha e iey u e n t e wo l,bu t s g s d i h s d t ,t e tcd sbe n w d l s d i h rd tisdo a e u e n te pe t c nr li eai ey h g r s l n n c mpaai ey h g o ti h p lc to . tc u d r d e te d s g o to sr ltv l ih, e ut g i o i r t l i h c s n t e a p iai n I o l e uc h o a e v
关 键 词 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 :杀 虫 剂 :晶体 蛋 白 ;杀 虫 活 性 ;特 征 ;作 用 机 理
分类号 ¥ 7 . 46 】
A Pr fl f Baclu hu i ginss nd Re e r h Pr g e s o I oeo i il s t rn e i a s a c o r s n t
u e n h o ti h p l ain i a tr lis ciiewi x e l ih a t i su e n te s d a d te c s n tea pi t fa b ce a n e t d t e t mey hg ci t i sd i h c o i c h r vy
( 国热 带农 业科 学 院环境 与植 物保 护研 究所 海 南儋 州 5 1 3 ) 中 7 7 7
摘 要 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 (aiu h r g ni.B ) 虫 剂 是 对 人 和 环 境 友 好 的安 全 型 细 菌 杀 虫 剂 。 目前 B 杀 B c lstui i s l n e s t杀 t 虫 剂 已 被 广 泛 应 用 .但 因 使 用 剂 量 较 大 ,导 致 防 治 害 虫 时 费 用 过 高 。若 在 生 物 防 治 中使 用 超 高 效 的 细 菌 杀 虫 剂 , 就 可 降 低 其 使 用 剂 量 B 0 5 — tO— 0 5菌 株 是 从 美 国 引进 的 高 效 杀 虫 菌 株 ,其 晶体 蛋 白的 特 征 分 析 尚未 完 成 ,其 毒 素 的 作 用 机 理 研 究 也 未 进 行 本 项 目 即将 开 展 如 下 研 究 : () 用具 有 特 异性 杀 虫 功 能 的B 0 5 一 1先 t0— O 5菌 株 进 行 发 酵 .继 续 完 成 对 防 治 中 国害 虫 防 治效 果 的 评 价 :再 分 析 细 菌 的 编 码 杀 虫 毒 素 基 因 和 毒 素 的 生 化 特 征 ;然 后 混 合
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
苏云金芽孢杆菌
编号
名称
北京华越洋生物 NRR00380
苏云金芽孢杆菌
基 本 信 息 :
名称:苏云金芽孢杆菌
规格:300ul 甘油菌
面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用,但随着冻融次数
的增加,细菌的活力会逐渐下降。
2,为保证菌种纯正,避免其它细菌污染,尽量先划平板,然后再挑单克隆
菌落进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 :
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
(必要时,可适当延长培养时间)。
菌 株 传 代 :
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中(尽量
增大接种量:如用无菌吸管吸取≥50μl 新鲜培养物至固体培养基,边移动边缓
慢释放),适宜温度下培养,用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注 意 事 项 :
1、菌种活化前,将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中,长时间室温下放
置会导致条件下进行;
3、一些菌种经过冷冻干燥保存后,延迟期较长,部分需连续两次继代培养才能
正常生长; 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基,敬请正确选择,不清楚时来 电询问; 5、某些厌氧菌的培养,自开封到接种完成,均需以无氧气体充填,以保持厌氧 状态;培养过程中亦要保持厌氧状态; 6、某些菌种,如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要 5-­‐10%CO2 促 进生长; 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况,应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性,请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保 藏 条 件 : -­‐20℃保存(复溶液于 2-­‐8℃保存) 保 藏 时 间 : 2-­‐10 年,应根据菌种状况及时转接
产生两大类毒素,即内毒素(伴胞晶体)和外毒素,使害虫停止取食,最
后害虫因饥饿和死亡。因此该杆菌可做微生物源低毒杀虫剂,用于防治直
翅 目 、 鞘 翅 目 、 双 翅 目 、 膜 翅 目 , 特 别 是 鳞 翅 目 的 多 种 害 虫
操 作 说 明 :
1,本品包含一份甘油菌,使用本甘油菌时可以不用完全融解,在甘油菌表
菌 株 复 溶 :
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖,吸取 1ml 左右复溶液,加入到冷冻
管中。轻轻振荡,使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮:
用无菌吸管吸取菌悬液,转移到复溶液滴瓶中。做好标识,在适宜温度下培
养。细菌在 30-­‐35℃培养箱中培养 24-­‐48h,真菌在 23-­‐28℃培养箱中培养 24-­‐72h
储存温度:-­‐80℃
基 因 组 :
苏云金芽孢杆菌
简 介 :
苏云金杆菌,简称 Bt,是包括许多变种的一类产晶体芽孢杆菌。该菌可
相关文档
最新文档