高效液色谱法测定汽水中的苯甲酸[整理后]
高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸钠含量
2.实验原理
石油醚 (流动相）
碳酸钙 （固定相）
在高效液相色谱仪上，将
色带
浓度不同的苯甲酸标准溶液与未
知样品在相同色谱条件下进行分
离试验，分别测得它们在色谱图
上的保留时间tR和峰面积A，可 直接用tR进行定性分析，并以峰 面积A作为定量测定的参数，采
用工作曲线法（外标法）测定食
品中的苯甲酸钠含量。
样品处理：准确移取15ml饮料样 品于烧杯中，加NaHCO3溶液 （20g/L）5ml，加热除去样品中 的二氧化碳，加水稀释到50ml， 经0.45um滤膜过滤即可。
讨论：为什么样品和
标准溶液都要用 0.45um滤膜过滤？
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4.3溶液测定
稳定基线 20min
标准溶液 的测定
样品溶液 测定
1.调整流速为1.0ml/min，稳 定20min 2.测定标准溶液，记录相对保 留时间、峰面积 3.测定样品，记录苯甲酸钠的 峰位置，峰面积
高效液相色谱仪的应用
——饮料中苯甲酸钠含量的测定
设计理念及思路
一、课件设计理念
本课件是根据全国高职高专教育“十一五”规划 教材《仪器分析》（魏培海、曹国庆主编）制作。此 课件适合一般高职高专学生的课堂教学。
我国现行高职教育以理论知识为主要课程内容， 存在着理论课程过于集中，理论与实践间隔时间长、 忽视知识与具体工作的联系，不能有效地培养学生能 力。本课件以工作过程为导向，结合本专业实际情况， 将工作过程融于课堂教学中，旨在通过实现课堂教学 模式的创新来实现教学效果的提升。
5.结果分析
根据__?__确定样品的中 的苯甲酸钠的色谱峰 以标样的_?_为纵坐标， __?__为横坐标绘制标准曲线
根据标准曲线求取样品中 苯甲酸钠的浓度
高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸_山梨酸和糖精钠
第34卷第10期辽宁化工Vol.34,No.10 2005年10月Liaoning Chemical Industry October,2005分析检测高效液相色谱法快速测定饮料中的苯甲酸、山梨酸和糖精钠刘渭萍(辽宁省产品质量监督检验院,辽宁沈阳110004)摘要:将饮料样品定量稀释后,用针筒式水膜过滤器处理后,直接进样,外标法进行液相色谱定性、定量分析。
用此方法进行了不同水平的加标回收率测试,证明方法快捷可靠,非常适用于大量的样品的快速测定。
关键词:食品添加剂;针筒式水膜过滤器;苯甲酸;山梨酸;糖精钠中图分类号:O657.7+2文献标识码:A文章编号:10040935(2005)10045403随着化学添加剂的诞生和发展,人类健康不断受到威胁。
食品添加剂对人体的毒性概括起来有致癌性、致畸性和致突变性[1,2],这些毒性要经过较长时间才能显露出来,即对人体产生潜在的毒害[3,4],这也是人们关心食品添加剂安全性的原因。
近年来我国使用的食品添加剂由20世纪70年代的几十种发展到目前卫生部颁发许可使用的1516种[5,6](截止到1997年7月),食品添加剂的绝对用量虽然只占食品的千分之几到万分之几[7,8],但是随着现代食品工业的发展,食品的种类日益增加,食品添加剂的超量和超范围使用现象十分严重,因此食品添加剂对人类产生了极大的危害,对食品添加剂的检测也越来越受到人们的重视。
1实验部分1.1仪器与试剂(1)Agilent1100液相色谱(二级管阵列检测器)。
(2)甲醇(色谱纯)。
(3)水(石英亚沸二次蒸馏水)。
(4)乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵,加石英亚沸二次蒸馏水溶解至1000mL,经滤膜(0.45L m)过滤。
(5)碳酸氢钠溶液(20g/L):称取2g碳酸氢钠(优级纯),加水至100mL,振摇溶解。
(6)苯甲酸标准储备液:准确称取0.1000g (精确至0.0001g)苯甲酸(色谱纯),加碳酸氢钠溶液(20g/L),加热溶解,移入100mL容量瓶中,加水定容至100mL,苯甲酸含量为1mg/m L。
高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸
4、液相色谱的结构
• 一 流路系统： 流动相、管路、泵、混 合器、脱气机等组成
• 在225nm下测其峰面积：
体积/mL 2.00 含量/mg 0.010 峰面积 280594
3.00 0.015 415433
4.00 0.020 555024
5.00 0.025 687406
6.00 0.030 831821
峰面积
1000000 800000 600000 400000 200000
3、为什么要选择液相色谱方 法？
• 高速：HPLC采用高压输液设备，流速大大增加，分析速度极快， 只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。
• 高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小， 因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。
• 高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器—— 10-11g
50 100 150 200 250 300 350 波长/nm
三、实验阶段
• 2.仪器参数设置
• 流动相: 甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L） (5:95)
• 流速:1mL/min • 进样量：10uL • 检测器波长：225nm
三、实验阶段
• 3.标准曲线绘制
• 分别移取苯甲酸标液2mL、3mL、4mL、5mL 、6mL于 50mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。
6、如何定性，如何定量
• 1、定性分析：在确定的色谱分离条件下，苯甲酸有一定的保留时间， 在相同的实验条件下，分别测定苯甲酸纯物质和饮料样品中各组分的保 留值，将两者进行对比，就可确定饮料中何种组分为苯甲酸，对其进行 定性。
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量摘要: 采用高效液相色谱法同时检测饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠。
样品经除乙醇（如果含有乙醇），氨水调pH至中性，定容，过水相微孔滤膜，以 C18 （6 × 250mm）色谱柱分离，用配紫外检测器的高效液相色谱仪进行检测。
结果显示安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度在 1.0mg/ L ～ 100. 0mg/ L 范围内呈线性关系，回收率在87% ～ 98% 之间，相对标准偏差在 1%以下，最低检测限0.5mg/kg，适用于同时检测碳酸饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量。
关键词:碳酸饮料；安赛蜜；苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 高效液相色谱仪防腐剂能抑制微生物生长繁殖，在食品中应用普遍，我国到目前为止已批准了32种使用的食物防腐剂，其中最常用的有苯甲酸钠、山梨酸钾等经常用于食品防腐，苯甲酸钠价格低廉，主要用于碳酸饮料和果汁饮料。
糖精钠及安赛蜜作为甜味剂应用于食品中调整食品口味，它们属于高倍甜味剂。
这些产品的甜度都比蔗糖高，现在糖精钠的使用得越来越少，而安赛蜜普遍添加到饮料中。
但过量使用会对人体产生毒副作用，甚至引发癌症。
因而对各类食品进行安全质量控制尤为重要。
现有的国家标准方法中，只有同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠的方法。
由于碳酸饮料中一般添加安赛蜜比较普遍，很少添加糖精钠，在日常工作中，为节约时间提高分析效率，就要求检测人员研究出适合食品中普遍存在的多种添加剂同时测定的检测方法。
1 材料与方法1. 1 仪器（1）赛默飞世尔高效液相色谱仪U3000带紫外检测器；（2）C18 ( 4.6× 250mm) 色谱柱；(3)万分之一电子天平；（4）无油真空抽滤装置 (5)水浴锅（6）刻度吸管10mL,移液管5mL,容量瓶50mL(7)0.22μm水相微孔滤膜1.2 试剂：（1）盐酸（优级纯）；（2）氨水 ( 优级纯) ; （3）甲醇 ( 色谱纯 ) ;（4）醋酸铵(20mmol/L)：称取1.54g优级纯醋酸铵，加入少量水溶解后，转入1000mL的容量瓶中，加水定容到刻度，经0.22μm水相微孔滤膜用真空抽滤装置抽滤后备用。
高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸、糖精钠、山梨酸
苯 甲酸 、 山梨 酸 、糖 精 钠 标 准 物 质 ：纯 度 均 ＞ 柱 ，各 峰 能达 到 有 效 分 离 （ 离度 均 大 干 １ ５ ， 分 ．）
２ 、仪 器 与设备
ＬＣ～１ ＡＶＰ高效 液 相 色谱 仪 ，电 子天 平 （ 多 的 影 响 ，同 样长 度 的 色谱 柱 ，３ｂ ｍ粒 径 的 填 料 分 ０ 赛 ｔ
检 测波长 ：２ ０ ｍ； ３ｎ
进样 量 ： １ ． 。 ０ｔｌ Ｊ
４ 、标 准溶 液的 配置
用超 纯 水分 别 将 ３ 种标 准 物 质配 置成 约 １ ／ ｍｇ ｍｌ
禁 、滥 用 以及 超 范 围 、超 标 准 使 用添 加 剂 ，都 会给 的标 准 储备 溶液 （ 容时 可加 入 １ ２ 无水 乙 醇消 定 — 滴 食 品 质量 、安 全 卫生 以 及 消费 者 的健 康 带来 巨大 的 泡 ），使用 时用 超纯 水稀释 成适 宜浓 度的混 合 损 害 。食 品添 加 剂 的种 类和 数 量越 来 越 多 ，对 人们 健康 的 影 响也 就越 来 越大 。随 着研 究 的不 断 改进 和
前 关于 食 品 中防 腐 剂与 甜 味剂 的 检测 方 法 有很 多 ，
［１ １ ２１ ３
￣
主 要 涉 及 的检 测 方 法 有 薄 层 色谱 法…、气 相 色谱 法 棒小 心将 样 品转移 至 ２ ｍｌ ５ 容量 瓶 中 ，并用 少量 水 清 液 相 色 谱 法 等 。本 文 在 液 相 色谱 方 法 基 础 洗烧 杯 内壁 ，清 洗液 一 并转 移 至容 量 瓶 中 ，并加 水 “
测。
上对 色 谱 条件 进一 步 优 化 ，同 时检 测 饮料 中三 种 食 定容 至 刻度 ，摇 匀 ，经０ ４ ｍ水 系滤膜 过 滤 ，待 ．５ 品添加 剂 ，使其 检测 效果 更佳 、可操 作性 更 强。
高效液相色谱法测定汽水中苯甲酸含量的测量不确定度评定
高效液相色谱法测定汽水中苯甲酸含量的测量不确定度评定樊岩;屈颖
【期刊名称】《职业与健康》
【年(卷),期】2007(23)20
【摘要】目的对高效液相色谱法测定汽水中苯甲酸含量的测量不确定度进行评定。
方法采用高效液相色谱法测定汽水中苯甲酸的含量,建立数学模型,分析不确定度来源。
结果通过对各变量的分析,计算各变量的不确定度,最后计算出合成标准不确定度。
结论该方法建立的数学模型合理、可靠。
【总页数】3页(P1819-1821)
【关键词】高效液相色谱法;汽水;苯甲酸;测量不确定度
【作者】樊岩;屈颖
【作者单位】天津工业大学;天津市药品检验所
【正文语种】中文
【中图分类】R115
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定食品中苯甲酸含量的不确定度评定 [J], 刘剑
2.高效液相色谱法测定糖果中苯甲酸含量的测量不确定度评定 [J], 赵飞;王苗苗;贾宏新
3.高效液相色谱法测定全脂乳粉中苯甲酸含量的测定不确定度评定 [J], 陈荔红
4.高效液相色谱法测定酱腌菜中苯甲酸含量不确定度评定 [J], 张勉
5.高效液相色谱法测定二乙氨羟苯甲酰基苯甲酸己酯含量的不确定度评定 [J], 郑红林
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高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量
实验八、高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量【目的与要求】1．掌握高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2．了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3．熟悉碳酸饮料样品的处理方法【方法原理】苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。
因此国家严格限制其使用量。
在本实验中，样品首先经过超声和加热处理，以除去二氧化碳和乙醇。
然后经滤膜过滤后注入高效液相色谱仪，通过反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230nm波长处检测。
以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。
【仪器和材料】1．仪器与器皿高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100ml烧杯（3个）；1.00ml 和100µL移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22µm）。
2．试剂（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02mol/L，色谱纯）；流动相使用前均超声脱气处理10min。
（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g山梨酸，加超纯水定容至250ml。
（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g苯甲酸，加超纯水定容至250ml。
【操作步骤】1．样品处理碳酸饮料（雪碧）：移取10ml碳酸饮料于烧杯中，超声处理5min。
然后用微孔滤膜（0.22 µm）过滤于另一烧杯中，滤液备用。
吸取100 µL滤液于离心管中，并加入900 µL超纯水，混合均匀标记为样品。
2．标准溶液配制（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。
吸取50 µL 滤液于另一离心管并加入950µL 超纯水，得到50 µg/ml 的苯甲酸标准品，混合均匀后标记为苯甲酸标准品。
高效液相色谱法测定汽水中的苯甲酸
苯甲酸简介及其在汽水中的作用
苯甲酸简介
苯甲酸是一种有机化合物，化学式为C6H5COOH，具有苯甲酸的特殊气味。它微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等 有机溶剂。
苯甲酸在汽水中的作用
苯甲酸在汽水中主要作为防腐剂使用，可以抑制微生物的生长和繁殖，延长汽水的保质期。同时，苯甲酸还可以 赋予汽水清爽的口感和特有的风味。但是，过量摄入苯甲酸可能会对人体健康产生不良影响，因此需要严格控制 其在汽水等食品中的含量。
不足
在实验过程中，发现样品处理过程中存在一些操作不规范的情况，如样品称量不准确、溶 解不完全等，对实验结果产生了一定影响。此外，在色谱条件优化方面还有待进一步提高 。
反思
针对实验中的不足之处，需要进一步加强样品处理操作的规范性和准确性，优化色谱条件 以提高分离效果和检测灵敏度。同时，还需要加强实验过程中的质量控制和数据分析能力 ，确保实验结果的准确性和可靠性。
高效液相色谱法测定汽水中的苯甲 酸
目录
• 实验目的与意义 • 实验原理及设备介绍 • 实验步骤与操作注意事项 • 实验结果展示与讨论 • 实验中的常见问题及解决方案 • 实验总结与展望
01 实验目的与意义
实验目的
测定汽水中苯甲酸的含量
通过高效液相色谱法准确测定汽水中苯甲酸的含量，为汽水质量控制提供依据。
包括输液泵、进样器、色谱柱、检测 器等部分，用于实现样品的分离、检 测和数据处理。
超声波清洗器
用于清洗色谱柱和其他实验器具，保 证实验结果的准确性。
电子天平
用于准确称量样品和标准品，保证实 验的精确性。
容量瓶、移液管等玻璃仪器
用于配制溶液和定容等操作。
试剂与材料准备
01
02
03
04
水质全分析实验指导书高效液相色谱法测定水样中的苯甲酸
实验一高效液相色谱法测定水样中的苯甲酸一、实验目的1.通过对高效液相色谱法测定样品中的苯甲酸2.掌握采用高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法3. 掌握外标法的步骤和计算方法二、实验原理苯甲酸和苯甲酸钠是食品行业通用的防腐剂，是我国目前最常用的食品防腐剂，其主要作用是防止由微生物的活动而引起的食品变质。
据科学报道，目前影响我们食品安全的最大问题是食品腐败和微生物的繁殖，正是由于食品中使用了防腐剂，而使我们避免了更多食品中的不安全因素。
面粉中添加了增白剂最终转化成的苯甲酸不超过60 ppm，我国GB2760－1996《食品添加剂卫生使用标准》中规定，苯甲酸及苯甲酸钠在酱油、醋中的最大使用量为1000 ppm，葡萄酒中为800 ppm，碳酸饮料中为200 ppm。
苯甲酸分子式为：苯甲酸具有紫外吸收特性，可用紫外检测器进行检测。
标准品或待测样品进入液相色谱之后，经反相色谱柱分离，紫外检测器检测，可获得以保留时间为横坐标，紫外信号（电压或电流）为纵坐标的色谱图，不同物质保留时间不同，并且物质浓度与色谱峰面积成正比。
本实验通过高效液相色谱采用外标法对常见饮料（如雪碧）中苯甲酸进行测定（实际样品测定之前必须进行过滤），根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
外标法常用于测定主要成分含量，是以待测组分的纯品作为对照品，以对照品和待测组分的保留时间和峰面积相比较进行定性和定量分析，外标法包括工作曲线法和外标一点法，本实验采取工作曲线法。
配置5个不同浓度的纯品，分别进行色谱分析，得到峰面积和浓度的线性关系表达式。
将待测组分峰面积代入公式，得到待测组分浓度。
三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；C18色谱柱；容量瓶（50mL）、10ml比色管、10ml 移液管、胶头滴管、洗耳球、小烧杯、针筒过滤器、2ml进样瓶。
试剂：苯甲酸（分析纯）；乙腈（色谱纯）；重蒸馏水。
四、实验步骤1.按仪器操作规程开机，设定流动相为乙腈/水=60/40，平衡色谱柱。
高效液相色谱法测定饮料中山梨甲酸,苯甲酸和糖精钠
组成:高压输液系统,进样系统,分离系统,检测系统,数据记录和处理系统辅助装置脱气装置,梯度洗脱装置,柱温箱,自动进样器,馏分收集器,在线固相萃取装置,柱后衍生装置等原理:在适宜条件下,高效液相色谱可同时分离饮料中的糖精钠,苯甲酸,山梨酸.样品超声出去二氧化碳和乙醇,调ph至近中性,过滤后进高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱分离后,紫外检测器230nm波长处检测.以色谱峰的保留时间定性,利用色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量仪器:高效液相色谱仪,配备二极管阵列检测器,超声波清洗仪容量瓶烧杯微量进样器样品处理:吸取10.00~20.00ml汽水,放入50ml烧杯中,超声出去二氧化碳,用稀氨水调ph7.0,加水定容至50ml用微孔滤膜(0.45um)过滤,滤液备用色谱条件:色谱柱:C18,4.6mm×250mm流动相:甲醇0.02mol/L醋酸铵溶液(5:95)流速:1ml/min 检测波长:230nm取相同体积样品处理液和标准系列溶液注入高效液相色谱仪进行分离,以其标准溶液峰的保留时间为依据定性.以标准溶液的质量浓度为横坐标,相应峰面积为纵坐标,分别绘制标准曲线方程,从曲线上查出被测物质含量Ρ=C×Vo/1000m苯甲酸,糖精钠的灵敏波长为230nm,山梨酸的为254nm,在此波长测定苯甲酸和糖精钠的灵敏度较低,因此采用230nm为测定波长.出峰顺序为苯甲酸,山梨酸,糖精钠脱气:除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡对测定的影响.这些气体在输液过程中进入泵体,会妨碍柱塞及单向阀的正常工作,导致输液不准,脉动及压力波动从而影响组分保留时间和峰面积的重现性脱气方法:减压脱气,煮沸脱气,超声波震荡脱气过滤:0.45um或更小孔径滤膜目的:除去溶剂中的微小颗粒,避免堵塞色谱柱,尤其是使用无机盐配制的缓冲液。
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3.标准曲线的绘制 分别吸取苯甲酸标准使用液 （0.1mg/ml) 2.00、4.00、6.00、8.00、 10.00ml于10ml具塞比色管中，用超纯 水定容至刻度，混匀。过滤后分别取 10ul进样，测定不同浓度标准溶液的 峰面积。以苯甲酸标线。
6.005 6.015 6.015 6.012 6.010
五、结果记录及讨论
1.数据记录及处理 根据汽水中苯甲酸的峰面积从标准曲线上 查的其浓度，据下列公式计算： x=CV/m x---样品中苯甲酸的含量，g/kg C---从标准曲线上查得的样品浓度,mg/ml m---样品质量，g V---样品稀释总体积，ml
高效液相色谱法测定汽水中的 苯甲酸
一、实验目的
1.熟悉高效液相色谱操作条件的选 择，以达到化合物的良好分离效果
2.掌握高效液相色谱测定汽水中苯甲 酸的方法
二、实验原理
苯甲酸是一种常用的防腐剂，被广泛 应用于饮料及日常调味品中。我国食 品卫生标准规定饮料如汽水中苯甲酸 的最大使用量为0.2 g/kg。本实验利用 高效液相色谱法测定汽水中苯甲酸的 含量，以检测其饮用安全性。
2.讨论 思考题 1.为什么高效液相色谱流动相在使用前必 须经过脱气处理？ 2.改变流动相的配比，苯甲酸的保留时间 是否发生变化？若发生变化将如何变？
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三、仪器及试剂
高效液相色谱仪带紫外检测器 甲醇，（1+1）氨水， 0.02mol/L乙酸 铵溶液， 1mg/ml 苯甲酸标准储备液， 0.1mg/ml 苯甲酸标准使用液
四、实验步骤
1. 高效液相色谱条件 C18色谱柱，流动相甲醇+0.02mol/L乙酸铵 溶液，流速为1ml/min, 进样量为10ul，紫外 检测器波长为230nm 2.流动相的配制 甲醇和0.02mol/L乙酸铵溶液按10:90(v/v)混 合而成，用0.5um滤膜过滤后，经超声波脱气 即可使用
4.样品的处理与测定 取汽水样品约10g于小烧杯中，微温搅拌除 去二氧化碳，用（1+1）氨水调pH至约7， 加超纯水定容至25ml，离心后，取10ul 进样 分析。
苯甲酸浓度(mg/ml)
峰面积（微伏· 秒） 保留时间(min)
0.02 0.04 0.06 0.08 0.10
638128 1294282 1948733 2612316 3227299