酶联免疫斑点技术(ELISPOT)及其应用研究进展
酶联免疫斑点检测技术对结核性脑膜炎的诊断分析
酶联免疫斑点检测技术对结核性脑膜炎的诊断分析结核性脑膜炎是由结核分枝杆菌感染引起的一种病毒性脑膜炎，其症状包括头痛、发热、恶心、呕吐、抽搐等，严重时可导致神经系统和认知功能损伤。
因为该病的症状常常类似于其他病毒性脑膜炎症状，难以通过临床症状来确诊，因此需要靠特定的实验室检测方法进行诊断。
酶联免疫斑点检测技术（Enzyme-Linked Immunospot Assay，ELISPOT）是一种用于检测细胞因子、抗体、蛋白质等的生物分子的定量分析方法，其原理是通过特定的抗体捕获被检分子，进行显色反应并计数，从而得出样品中所含目标分子的浓度。
这种技术可以用于检测具体的细胞因子、蛋白质等分子，对于结核性脑膜炎的诊断也有很高的应用价值。
在酶联免疫斑点检测技术中，将患者血清样本与结核分枝杆菌特异性抗原结合，使得与该菌感染相关的蛋白质或抗体形成复合物，然后通过酶标记的特异性二抗捕获复合物并显色。
若样品中含有结核分枝杆菌特异性抗体，则会形成具有分子特异性的抗体斑点，否则则不会有这些斑点。
因此，结核性脑膜炎患者的血清样品所形成的斑点数量越多，就越可以证明该患者存在结核分枝杆菌感染的可能性。
酶联免疫斑点检测技术有许多的优势。
首先，该技术有很强的特异性和灵敏度，可以精确地检测出异物样本中特定的分子。
其次，该技术操作简单、快捷，样本数量也可以灵活调整。
此外，该技术可以在早期诊断结核性脑膜炎疾病，有很高的临床应用价值。
但是，该技术也存在一些问题。
首先，人体有时会出现假阳性反应，导致并不表示其真实感染结核分枝杆菌，这需要通过配合其他临床方法来确定是否为真实感染。
此外，该技术的检测结果可能受到患者病情、抗体水平等因素的影响，需要在检测前进行充分的预处理和准备。
总的来说，酶联免疫斑点检测技术在结核性脑膜炎的诊断中有很高的应用价值。
虽然该技术还有一些问题需要解决，但已经成为了现代医疗技术的一种重要手段，为临床医生提供准确的疾病诊断和治疗建议。
酶联免疫斑点试验检测技术(Elispot)在诊断结核性脑膜炎中的应用
提供 ， 脑脊液 Ｔ — Ｎ Ｐ Ｒ） 平 ≥５０ ｃｐｅ／ ｌ 断 为 阳 ＢＤ Ａ（ Ｃ 水 ０ ｏ ｉ ｍ 判 ｓ
性 ， ５ ０ｃｐｅ ｍ 判 断 为 阴 性 。 检 测 结 果 使 用 Ｐｉ ５０软 ＜ ０ ｏｉ ／ ｌ ｓ ｒｍ ． ｓ
件包进行数据统计和统计学分析。两组 间率 的比较采用卡方
特 异 性 ｒ 扰 素 （Ｆ —） 平 可 以 用 于 结 核 分 枝 杆 菌 感 染 的 干 ＩＮ ｒ 水
断为 阳性 ， 抗 原 检 测 结 果 为 阴性 ， 果 判 断 为 阴 性 ； 有 ３种 结 所 脑 膜 脑 炎 病 例 均 常 规 行 脑 脊 液 Ａ Ａ、 脊 液 Ｔ — Ｎ Ｐ Ｒ） Ｄ 脑 Ｂ Ｄ Ａ（ Ｃ
检测 。脑脊 液 Ａ Ａ使 用 酶 标 法 进 行 检 测 ， 据 国 内 同行 Ｄ 根 ２０ ０４年对脑脊 液 Ａ Ａ在结 核性脑 膜脑 炎 中研 究 的标准 Ｊ Ｄ ， 脑脊液 Ａ Ａ１８Ｕ Ｌ判断为 阳性 ， ８Ｕ Ｌ判断为阴性 ； Ｄ ＞ ／ ＜ ／ 脑脊
液 Ｔ —Ｎ Ｂ Ｄ Ａ荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 试剂 由达 安 基 因有 限 公 司
选 非 结 核 性 脑 膜 脑 炎 病 例 均 通过 临床 治 疗 转 归 及 实 验室 检 查 最终确诊 。
方 法
所 有 病 例 均抽 取 乙 二 胺 四 乙 酸 （ Ｄ Ａ） 凝 血 ５ｍ ， ＥＴ 抗 ｌ送
实 验 室 行 Ｅｉ ｏ检 测 。检 测 结 果 根 据 斑 点 数 量 设 定 ， 一 反 ｌｐ ｔ ｓ 每
术 在 结 核 性 脑 膜脑 炎 中 的应 用 价 值 。
临 床 资 料
、
果
在 ７ 例 结 核 性 脑 膜 脑 炎 的 诊 断 中 ，ｌｐ ｔ 性 者 ４ ３ Ｅｉ ｏ 阳 ｓ ５
酶联免疫斑点试验
酶联免疫斑点试验
酶联免疫斑点试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISPOT）是一种高灵敏度的免疫学检测技术，可用于检测单个细胞
的分泌物，如细胞因子、抗体、酶等。
该技术广泛应用于疾病诊断、
药物筛选、疫苗研究等领域。
ELISPOT的原理是利用特定的抗体捕获分泌物，然后使用酶标记的二
抗或底物来检测捕获的分泌物。
具体步骤如下：
1. 准备试板：将多孔板涂上特定的抗体，使其能够捕获分泌物。
2. 细胞处理：将待检测的细胞加入试板中，使其与涂有抗体的孔相互
作用。
3. 洗涤：将试板洗涤，去除未结合的细胞和其他杂质。
4. 二抗标记：加入酶标记的二抗，使其与捕获的分泌物结合。
5. 洗涤：将试板洗涤，去除未结合的二抗和其他杂质。
6. 底物反应：加入底物，使其与酶标记的二抗反应，产生可见的斑点。
ELISPOT的优点是灵敏度高、特异性好、操作简单、结果可靠。
它可
以检测单个细胞的分泌物，因此可以用于研究细胞免疫应答、肿瘤免
疫学、感染病毒的免疫学等领域。
此外，ELISPOT还可以用于药物筛
选和疫苗研究，帮助科学家们开发更有效的药物和疫苗。
ELISPOT的缺点是需要较长的实验时间和较高的成本，同时需要专业
的实验技能和设备。
此外，ELISPOT只能检测单个细胞的分泌物，无
法检测细胞表面分子的表达情况。
总之，ELISPOT是一种重要的免疫学检测技术，具有广泛的应用前景。
随着技术的不断发展，ELISPOT将会在疾病诊断、药物筛选、疫苗研
究等领域发挥越来越重要的作用。
酶联免疫斑点试验在结核性腹腔积液诊断中的应用
酶联免疫斑点试验在结核性腹腔积液诊断中的应用目的运用联免疫斑点试验（ELISPOT）法对结核性腹腔积液进地诊断，并探讨其应用价值。
方法对62例明确诊断为结核性腹腔积液及54例恶性肿瘤性腹腔积液（对照组）分离其中单个核细胞，采用TB-ELISPOT法检测其结核菌抗原特异性T淋巴细胞反应，同时对腹腔积液TB-DNA采用荧光定量PCR法检测，并比较两种方法的特异性和灵敏度。
结果TB-ELISPOT法及TB-PCR法检测腹腔积液，其灵敏度分别为93.5%、64.5%，两种方法相比较差异有显著性统计学意义(χ2=15.1，P＜0.01)；两种方法检测的特异性分别为94.4%、85.2%，经比较，差异无统计学意义(χ2=1.49，P>0．05)。
结论TB-ELISPOT法对腹腔积液进行结核分枝杆菌检测灵敏度高、特异性好，是一种较为理想的实验室辅助诊断方法。
标签：酶联免疫斑点试验；腹腔积液；结核；诊断腹腔积液在临床上较为常见，以往对于结核性腹腔积液的实验室检查多采用涂片找抗酸杆菌及PCR法检测结核杆菌，但这些方法灵敏度不够理想，近年来也有很多文献报道了采用ADA、CEA对鉴别结核性、癌性胸腹腔积液的应用价值，但而这些方法特异性较差，特别是40岁以上的结核性与癌性腹腔积液的鉴别较为困难[1]。
酶联免疫斑点试验（ELISPOT）是由Czerkinsky等于1983年建立的一种对于单细胞水平分泌特异性抗体的新免疫学方法，以后运用于检测分泌细胞因子的抗原特异性T淋巴细胞的数量。
由于结核杆菌可以诱导T淋巴细胞产生细胞免疫反应，Lalvani等首先将ELISPOT法用于结核诊断，以往曾有关于ELISPOT 法检测血液中特异性T淋巴细胞的报导[2]。
本文对腹腔积液采用ELISPOT法检测，并探讨其在对结核性腹腔积液诊断价值。
1资料与方法1.1一般资料2011年8月~2012年10月我院住院患者，共116例。
根据实验室检查、影像学、病理结果及检临床表现确诊为结核性腹膜炎患者62例，年龄17～51岁，平均年龄33岁。
研究酶联免疫斑点法检测在涂阴肺结核患者的诊断价值
研究酶联免疫斑点法检测在涂阴肺结核患者的诊断价值目的探讨酶联免疫斑点法（ELISPOT）在涂阴肺结核患者中的诊断价值。
方法将2016年5月～2017年3月期间我院收治的346例肺结核患者，其中A 组涂阴肺结核患者（180例）、B组为非涂阴肺结核患者（166例），两组均采用ELISPOT检测肺泡灌洗液、外周血液中分泌的结核抗原特异性干扰素的T淋巴细胞水平，之后绘制出两组患者的工作特征曲线（ROC），并计算出曲线下的面积；将A组肺泡灌洗液做结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测、涂片抗酸染色、培养分枝杆菌，比较诊断价值与阳性率。
结果A组、B组患者的血液ELISPOT 检测的特异性分别为84.44%（152/180）与90.96%（151/166）；肺泡灌洗液ELISPOT 检测的特异性分别为92.78%（167/180）与94.58%（157/166）（P>0.05）；A组、B组患者的肺泡灌洗液ELISPOT检测的ROC曲线下面积分别为0.938与0.869，差异有统计学意义（P＜0.05）；涂阴肺结核的肺泡灌洗液ELISPOT 检测的阳性率为91.67%（165/180），而结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测、涂片抗酸染色、培养分枝杆菌的阳性率分别为34.44%（62/180）、15.56%（28/180）、31.67%（57/180）（P＜0.05）。
结论在涂阴肺结核患者的临床诊断中，应用ELISPOT 检测肺泡灌洗液中分泌的结核抗原特异性干扰素的T淋巴细胞水平，检测效率高、敏感性与特异性强，可作为涂阴肺结核的诊断方法予以推广。
[Abstract] Objective To discuss the value of ELISPOT in Diagnosis of Smear negative pulmonary tuberculosis. Methods 346 cases with TB from May 1 2016 to March 2017 year in our hospital were selected as objects.The group A was smear negative pulmonary tuberculosis patients （180 cases），and the group B was non smear negative pulmonary tuberculosis patients （166 cases）.Bronchoalveolar lavage fluid and peripheral blood IFN-y T levels of two groups were detected by ELISPOT.The curve of the two groups （ROC）was drew，and AUC was calculated.Mycobacterium tuberculosis nucleic acid amplification fluorescence detection，Smear fast stain，and mycobacteria culture in bronchoalveolar lavage fluid of group A were done.Diagnostic value and positive rate were compared. Results Specificities of ELISPOT for blood in group A and group B were 84.44%（152/180）and 90.96%（151/166）；Specificities of ELISPOT for bronchoalveolar lavage fluid in group A and group B were 92.78%（167/180）and 94.58%（157/166）（P>0.05）.AUC of ELISPOT for bronchoalveolar lavage fluid in group A and group B were 0.938與0.869 （P＜0.05）；The positive rate of ELISPOT for bronchoalveolar lavage fluid in smear negative pulmonary tuberculosis was 91.67%（165/180），and the positive rate of Mycobacterium tuberculosis nucleic acid amplification fluorescence detection，Smear fast stain，and mycobacteria culture were 34.44%（62/180），15.56%（28/180），31.67%（57/180）（P＜0.05）. Conclusion In the clinical diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis patients，application of ELISPOT detection of IFN-y T levels in bronchoalveolar lavage fluid is of high detection efficiency，and high sensitivity and specificity，which can be used as a method for diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis to be promoted.[Key words] Smear negative pulmonary tuberculosis；Enzyme-linked immunosorbent assay；Bronchoalveolar lavage fluid；Diagnostic value我院应用该技术来检测肺泡灌洗液中分泌的结核抗原特异性干扰素的T淋巴细胞水平，并与其它检测方法进行了比较，旨在探讨ELISPOT在涂阴肺结核患者中的诊断价值，现报道如下。
ELISPOT工作原理
ELISPOT工作原理ELISPOT是一种基于酶联免疫斑点（enzyme-linked immunospot）技术的生物学实验方法，用于检测单个活细胞产生的细胞因子数量，以获得关于特定免疫反应的定量信息。
ELISPOT方法已成为研究和临床诊断中常用的细胞免疫分析技术。
本文旨在介绍ELISPOT技术的原理和应用。
1. ELISPOT技术的基本原理ELISPOT技术的基本原理是利用单个细胞在聚焦区域中分泌细胞因子的能力。
首先在多孔板上涂覆特定抗体，并使用细胞悬浮液孵育，使细胞吸附在多孔板上，然后刺激细胞产生细胞因子，特异性抗体识别并结合细胞因子，供试细胞被固定，而其产生的细胞因子仍然可扩散进入周围。
接着使用酶标技术，添加酶标抗体-酶复合物识别并结合周围可扩散的细胞因子，形成可被酶底物着色的斑点。
ELISPOT试验可用于检测细胞因子的免疫反应，可以在不光化细胞，也无需使用放射性同位素进行标记的情况下，测定非常微量的细胞因子。
2. ELISPOT技术的应用ELISPOT技术的应用非常广泛，可以用于研究细胞免疫学、癌症、感染病原体和自身免疫性疾病等。
下面将分别介绍这些应用。
2.1. 研究细胞免疫学ELISPOT技术可以用于检测不同和同种发育阶段、性别、某些基因型或特定条件下的免疫细胞产生的细胞因子。
例如，可以对不同的激活剂进行测试，检测免疫细胞的分泌情况，揭示特定免疫反应的机制。
此外，由于ELISPOT对特异性和非特异性T和B淋巴细胞的敏感性非常高，所以可以使用这种技术来监测疫苗接种效果或者进行不同细胞因子分子和癌细胞的功能评估等。
2.2. 癌症的研究和治疗免疫疗法已成为一种治疗恶性肿瘤的新式方法，其中包括活体细胞治疗和肿瘤抗原刺激，此类方法具有极大的潜力来抑制肿瘤细胞的增长和扩散。
ELISPOT技术用于评估肿瘤抗原特异性T细胞水平的变化，可以在研究和临床实验中确定特异性的肿瘤抗原。
ELISPOT技术具体可用于肿瘤特异性免疫反应的检测、克隆增殖能力的测定、转移性肿瘤特异性T细胞反应的检测，以及抗肿瘤免疫反应治疗效果的评估等。
酶联免疫斑点技术
酶联免疫斑点技术摘要:介绍了酶联免疫斑点技术(ELISPOT)的发展历程，检测原理及应用方面的相关内容。
关键词：酶联免疫斑点技术；免疫检测技术随着酶免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用, 使体外检测各种细胞因子和抗体研究有了新的突破。
在研究免疫应答机制时, 以往人们常用酶联免疫吸附试验(ELISA) 检测体液中游离的细胞因子(CK) 或抗体, 但由于游离的循环抗体或CK 半衰期不同, 使之在体液中不断地被代谢或与靶器官结合, 而不能确切地反应体内抗体及CK 水平。
80 年代中期, Sedgw ick、Ho lt 和Czerk in sky 等根据ELISA 技术的基本原理, 建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和CK 分泌细胞的固相酶联免疫斑点(ELISPOT) 技术, 因其具有较高的特异性和敏感性, 目前正被国内外广泛应用, 对探索自身免疫系统疾病发病机制具有重要意义。
1.ELISPOT技术的发展史1.1溶血空斑技术.80 年代初用于检测抗体形成细胞, 是对细胞免疫学的重要方法学贡献, 可从单细胞水平研究抗体的产生。
但该方法不够灵敏。
另外, 许多抗原决定簇与红细胞表面耦联困难, 使该方法应用受到限制。
1.2细胞ELISA.以酶标记物取代放射标记定量细胞表面分子, 因微量板内有细胞的存在将会产生较高背景。
另外, 细胞需固定于平板上, 也会引起非特异性结合, 产生假阳性结果。
固定还会引起一些细胞表面抗原的破坏而影响检测的敏感性。
1.3ELISPOT.由于上述原因, 1983 年两个研究小组分别在瑞典和奥地利同时报道了另一抗体分泌细胞的检测技术, 即ELISPOT。
1988 年, 首次用该方法检测CK IFN-γ分泌细胞, 目前已多用此方法检测CK, 其技术方法亦在逐步更新。
多年来作者实验室已用该方法检测重症肌无力及多发性硬化患者外周血的CK 分泌细胞, 共计数百例, 并发表论著数篇, 总结了一些方法学方面的经验。
酶联免疫斑点技术及其在结核诊断中的研究进展
作者单位 ：北京市结核病胸部肿瘤研究所结核病分子生物学研 究室 通讯作者 ：张宗德 ，电子信箱 ：ｚｄ １＠１３ｃ ｒ ｚ ４ ７ ６ ．ｏ ｎ
结核 病与 胸部 肿 瘤 ２０ ０ ８年 第 ４ 期 胞 。Ｅ ＩＰ 简 单 、 稳定 、灵 敏 ，不 受细 胞 Ｌ Ｓ ＯＴ 因子 代 谢等 因素 的 影 响 ，可 在单 细胞 水 平 检 测 淋 巴 细胞 对 特 异 性 抗 原 的 反 应 能 力及 计 数 特 异性 抗 原 刺 激 下 分 泌 性 淋 巴细 胞产 生 的 情 况 ，能够 比较 真 实 地 反 映 体 内 细胞 因子 的 水 平 ，Ｅ Ｉ Ｐ 现 已被 运 用 于 各 种疾 病 诊 断 和 Ｌ Ｓ ＯＴ 科 学研 究 中 。 Ｔ Ｔ 应 用 的纯 化 蛋 白衍生 物 （ｕｉｅ Ｓ所 ｐ ｒ ｉｄ ｆ ｐｏ ｉｄｒ ａｖｓ Ｐ ｒｔｎ ｅｉ ｔ ｅ，Ｐ Ｄ）是 存在于结 核分枝 杆 ｅ ｖｉ
产 生 多 种 细胞 因子 发 挥 免疫 效 应 ，其 中 Ｙ干 扰 素 （Ｆ Ｙ）是 最 为 关键 的细 胞 因子 。 因 ＩＮ—
此 ，检 ￣ ｌＮ— 水 平或 分 泌ＩＮ— ｇ Ｆ Ｆ Ｙ的 效应 Ｔ 细 胞 的水 平就可 以判 断是 否存在 结核 感染 。 Ｅ ＩＰ Ｔ 通 过 检测 分 泌 细 胞 因子 的细 ＬＳ 量 夹 ， Ｌ Ｓ Ｌ Ｓ ＯＴ ￣Ｅ Ｉ Ａ方 法 ：
结核 诊断 技 术 ，它是通 过抗 原特 异性Ｔ 巴细 淋 胞 反应 频 率 来 检 测结 核 感 染 患 者 的 细胞 免 疫
功能 。
１酶联免疫斑点技术的原理
结 核 病 的 免疫 学 机 制 主要 是 机 体 对结 核
２ ９５
敏 感度 均 为 ８ ％，健 康 成 人 中Ｐ Ｄ－Ｌ Ｓ ＯＴ ０ Ｐ Ｅ ＩＰ 的 敏 感 度为 ９ ％；英 国健 康 成 人 中两 种 肽 段 ８
酶联免疫斑点法
酶联免疫斑点法酶联免疫斑点法（Enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT）是一种用于检测单个细胞分泌物（包括细胞因子、抗体和其他蛋白质）的方法。
该技术将单个细胞和特异性抗体共同培养于多孔的固体基质上，当特异性抗体捕获了细胞分泌物时，就会形成一个“免疫斑点”，而该斑点会通过化学反应显示出来，从而可进行定量分析。
该技术的优点一是提高了灵敏度和特异性，促进了单个细胞分泌物的检测能力。
二是实验条件较容易控制，能够极大地减少误差。
另外，与其他技术相比，ELISPOT技术具有较高的自动化水平和适应性。
同时，该技术可用于评估和比较不同治疗方案或疫苗的效果、评估细胞免疫反应、疾病诊断和监测、评估药物毒性和进行基础研究。
在实验中，ELISPOT可分为两个阶段。
第一阶段是细胞培养，即将感兴趣的细胞和特定的刺激物共同培养。
第二阶段是免疫斑点检测，即将细胞移到多孔的固体基质上，添加特异性抗体进行反应，以发现并定量斑点。
常用的免疫斑点计数仪可以通过电子显微镜对固定、染色的免疫斑点进行准确计数，从而获得准确的结果。
通过该技术，研究人员可以研究细胞免疫和疫苗的作用机制，及早发现传染病或肿瘤的预警信号，以促进更好的预防和治疗。
此外，酶联免疫斑点法也适用于儿童疫苗接种后对疫情的监测和跟踪，以及老年人免疫力的评估。
需要指出的是，这种技术并不能够直接用于临床检测，仅在研究领域发挥作用。
一些商业实验室已经开始使用该技术进行疫苗测试和特定蛋白质的检测，在检测和诊断方面具有很大的潜力。
总之，酶联免疫斑点法是一种基于细胞分泌物检测的技术手段，在生物医学研究、药物开发以及疾病预防和治疗等方面具有较为重要的应用价值。
酶联免疫斑点试验的原理
酶联免疫斑点试验的原理1. 引言酶联免疫斑点试验（Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay，简称ELISPOT）是一种用于检测细胞分泌物的敏感且高通量的免疫学技术。
该技术可以定量检测单个细胞分泌的蛋白质或细胞因子，在免疫学研究、药物开发和临床诊断中具有广泛的应用。
2. 原理概述ELISPOT技术基于酶标记抗体和特异性抗原结合的原理。
它通过将待测细胞与特定抗原刺激后，将细胞分泌物捕获到固相载体上，然后使用酶标记二抗进行检测，最后通过显色反应可视化并计数斑点数量。
该技术具有高灵敏度、高特异性和高通量等优势。
3. 实验步骤步骤一：制备固相载体在ELISPOT实验中，常用的固相载体是多孔膜板或膜片。
首先，在载体表面涂覆特异性抗原或抗体，以便捕获待测细胞分泌的特定蛋白质或细胞因子。
步骤二：孵育待测细胞将待测细胞加入到含有特异性抗原的培养基中，使其与抗原发生特异性反应。
通常，实验者会设置对照组，包括阴性对照组（只有培养基）和阳性对照组（含有已知分泌物的细胞）。
步骤三：洗涤将孵育后的细胞用洗涤缓冲液洗去未结合的细胞和其他杂质。
步骤四：二抗处理加入酶标记的二抗（如辣根过氧化物酶标记的抗IgG），使其与待测细胞分泌物中的特异性蛋白质或细胞因子结合。
步骤五：显色反应加入适当的底物和显色剂，通过酶催化作用产生可见信号。
常用的显色剂是BCIP/NBT，在酶催化下会生成紫色斑点。
步骤六：计数和分析使用显微镜对固相载体进行观察，并使用计算机软件或手工计数斑点数量。
斑点的数量代表了待测细胞分泌物的水平。
4. 原理解析特异性抗原和抗体结合固相载体表面涂覆的特异性抗原或抗体与待测细胞分泌物中的特定蛋白质或细胞因子结合。
这种结合是通过免疫反应中抗原与抗体之间的特异性识别实现的。
酶标记二抗检测酶标记二抗是一种能够与待测细胞分泌物中的特异性蛋白质或细胞因子结合并具有酶活性的二级抗体。
常用的酶标记二抗有辣根过氧化物酶标记的抗IgG。
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者方 面 具有 ９％ ９ 的符 合 率 。当 比较 Ｔ Ｔ方 法和 自 Ｓ
建 Ｅ ＩＰ Ｔ方 法 时发现 ， ６ 的 Ｔ Ｔ阳 性 受试 者是 ＬＳ Ｏ ３％ Ｓ Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ阴性 ， ２ 的 Ｔ Ｔ阴 性 受 试 者 是 Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ Ｌ ＳＯ １％ Ｓ ＬＳ Ｏ 阳性 。另 外 ， ８ 的 Ｅ ＩＰ Ｔ Ｍ Ｔ阴性 受 试 者 是 ７％ ＬＳ Ｏ— Ｐ Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ Ｂ Ｇ阳 性 ， 这 些 人 中 大 部 分 都 接 种 过 Ｌ ＳＯ —Ｃ
胞 中检 出 １ 分 泌待 检 Ｃ 个 Ｋ的细 胞 ， 其灵 敏 度 非 常 高 。 为其 使用 了识 别 Ｃ 子 中 ２ 不 同表 位 因 Ｋ分 个 的 ２种 单克 隆抗 体 ，因而 这种 方 法有 着 高度 的特
异性 ［。 过显 色 反应 ， ５通 ］ 在细 胞 分泌 可溶 性 蛋 白的 相应位 置 上显 现清 晰 可辨 的斑 点 ，可 直接 在 显 微 镜下 人工 计数 ，或通过 Ｅ ＩＰ Ｔ分 析 系 统对 斑 点 Ｌ ＳＯ
领 域 。本 文介 绍 了 Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ的原 理 和特 点 ，对 Ｅ ＩＰ Ｔ的应 用 研 究进 展 进行 了综述 。 Ｌ ＳＯ ＬＳＯ 关 键 词 ：酶联 免疫 斑 点 （Ｌ Ｓ Ｏ 应 用 Ｅ ＩＰ Ｔ 中 图分 类 号 ：￥ ５ ． ＋ ８ ２ ４３ 文 献 标 识 码 ：Ａ
进 行计 数 ， 进行 高通 量 筛选 ， 率远 远 高 于其他 检 效
测 方法 ［。Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ自创 立 至今 ２ ６ ＬＳＯ ］ ０多 年来 不 断发
Ａ ｓ ｙＥ ＩＰ Ｔ 技术 是利 用预 先包 被好 抗 原或抗 ｓａ ，ＬＳ Ｏ ） 体 的微量 板从 单细 胞 水平 检测 特异 性 抗 体分 泌 细 胞或特异 性细胞 因子 （ｙｏ ｉｅＣ） ｃ ｔｋ ｎ，Ｋ 分泌细 胞 的免 疫 学检测技 术 。 ９ ３年 ，ｅｇ ｉｋ 和 Ｃ ｅｋｎ ｋ １８ Ｓ ｄｗ ｃ ｔ ｚｒ ｉｓ ｙ 嘲 等根据 酶 联免疫 吸 附试验 （Ｌ Ｓ） Ｅ ＩＡ 的基 本原 理 结
摘 要 ：酶联 免 疫 斑 ． （ｎ ｙ ｅ ｌｎ ｅ ｍ ｕ ｏ ｐ ｔＡ ｙ Ｌ Ｓ Ｏ 技 术是 上 世 纪 ８ 年 代 发 展起 最 Ｅ ｚｍ — ｋ ｄ Ｉｍ ｎ ｓｏ ｓ ａ ，Ｅ ＩＰ Ｔ） ｉ ｓ ０
来的一种免疫学研 究新技术 ，具有较 高的特异性 、敏 感性和和准确性 ，被广泛应用于与免 疫学相 关的研究
Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ的 原理 与 Ｅ ＩＡ相 似 ，但 Ｅ Ｉ Ａ是 Ｌ ＳＯ ＬＳ ＬＳ
用 于 检 测 体 液 中游 离 的 免疫 球 蛋 白 （ｇ 或 Ｃ ， Ｉ） Ｋ 由于游 离 的 Ｉ ｇ或 Ｃ 体液 中不断 地 被代谢 或与 Ｋ在
靶 器 官结 合 ，所 以 Ｅ Ｉ Ａ检 测 结果 虽 能提 示 机体 ＬＳ 的免疫 应答 功 能 ，却不 能确 切地 反 映 Ｉ ｇ和 Ｃ Ｋ产 生 细胞 的功 能 。Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ应 用 少量 的 Ｔ淋 巴细 胞 Ｌ ＳＯ 直 接进 行体 外检 测 ， 能从 ２ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ￣３ ０ ０ ０个 细
确 定 或 排 除 结 核 菌 感 染 的 标 准 存 在 许 多 问题 ［。 ７ １ Ｌ ｌａ ｉ等 隋 究证 实 ，Ｌ Ｓ Ｏ ａ ｖｎ 研 Ｅ ＩＰ Ｔ法 比 Ｔ Ｔ试 验 更 Ｓ 敏感 、 异和 方 便 。 Ｅ ＩＰ Ｔ可 以从 ６ ００个 白 特 用 ＬＳ Ｏ ０
细 胞 中检 测 到 １个 产 生 Ｉ Ｎ Ｆ —Ｙ 的 单 核 细 胞 ； 且 Ｅ ＩＰ Ｔ不受 Ｂ Ｇ影 响 ，极低 的假 阳 性率 对 排 除 Ｌ ＳＯ Ｃ 结 核感 染 尤 为重 要 。Ｍ ｎ ｅ ａ ｉ等 建 立 了检 测 ａｔ ｇｎ 明 ＩＮ Ｆ －Ｙ 的 Ｅ ＩＰ Ｔ方 法 ，用 于结 核 病 的诊 断 ， ＬＳ Ｏ 并 且和 Ｔ Ｔ 商 品化 的检 测 Ｉ Ｎ Ｓ、 Ｆ —Ｙ 的 Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ方 法 Ｌ ＳＯ 进行 了比较 。８ 受试 者 中， ５人在 家 庭 中要 接 ６个 ６ 触 到 结核 病 患者 ， ３人 是 结核病 患 者 ， 是 疑似 １ ８人 结核病 患 者 。所有 的受 试 者都 要 接 受 Ｔ Ｔ 自建 Ｓ、 Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ和 商 品化 Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ检 测 。结果 显示 ， ＬＳ Ｏ Ｌ ＳＯ 两种 Ｅ Ｉ Ｐ Ｔ方 法在 检 测 结 核病 患 者 和 疑似 结 核病 患 ＬＳＯ
文章 编 号 ：１０ — ５ ７ ２ ０ ） ６ ０ ０ — ４ ０ ５ ８ ６ （０ ７ ０ — ０ ５ ０
酶联 免疫斑 点 （ ｎ ｙ ｅ ｌ ｎ ｅ ｍ ｕ ｏ ｐ ｔ Ｅ ｚ ｍ — ｋ ｄ Ｉ ｍ ｎ ｓ ｏ ｉ
１ Ｅ ＩＰ ＬＳ ＯＴ用 于感 染 性 疾 病 的 诊 断
结 核病 对人 类 的影 响越 来越 严 重 ，每 年大 约
合细胞培养 技术 ；建立 并首先 报道 了这种 新技术 ， 用于检测 特异 性抗 体分 泌细 胞 。１ ８ ９ ８年 该方 法被
首次用于检 测 ＩＮ Ｆ —Ｙ分 泌细胞 嘲。
有 ２ ０万人 死 于结 核病 。 ０ 一直 以来 ， 查 结核感 染 筛
的首选 方 法 是 结 核菌 素 试 验 （ Ｓ ）， Ｔ Ｔ作 为 ＴＴ 而 Ｓ
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广 东畜牧兽 医科 技 ２０ 午 Ｉ 鲞２ 塑 ７ 箜 ｏ 箜
专题 综述 ・５・
酶联免疫斑 点技术 （ ＬＳ ＯＴ）及 其应用研 究进展 Ｅ ＩＰ
鲁俊 鹏 ，邹潍 力 。 ，王 声会 。 （． 南农 业大 学 兽医 学 院 ，广 东 广 州 ５０ ４ ；２ 东莞 市海 洋 与渔业 环 境监 测站 ，广 东 东 莞 １华 １６ ２ ． ５３０ ；３广 东温 氏食 品集 团有 限公 司 ，广 东 新兴 ５０ ３ ） ２０ ９ ． １２０ ’