清除氧自由基
抗氧化剂清除自由基原理
抗氧化剂清除自由基原理自由基，听起来就像是一群捣蛋鬼在我们的身体里肆意破坏。
你知道吗？它们可没少给我们的身体找麻烦。
那抗氧化剂呢，就像是身体里的超级英雄，专门来对付这些自由基的。
今天呀，我就来给大家讲讲这其中的奥秘。
我有个朋友叫小李，有段时间他总是感觉身体特别疲惫，皮肤也变得粗糙，还老是生病。
他就去问医生这是怎么回事。
医生说呀，很可能是身体里自由基过多导致的。
小李当时就懵了，啥是自由基啊？医生就给他解释，自由基简单来说就是身体在新陈代谢或者受到外界因素影响时产生的一些不稳定分子。
就好比一个调皮的小孩，手里拿着一把剪刀，到处乱剪东西，在身体里到处破坏细胞、损伤DNA这些重要的东西。
那抗氧化剂呢？它就像是自由基的天敌。
抗氧化剂有很多种，像维生素C、维生素E啊，还有类胡萝卜素等等。
这些抗氧化剂是怎么清除自由基的呢？咱们先说说维生素C吧。
维生素C就像是一个慷慨的捐赠者。
自由基不是不稳定嘛，就缺电子。
而维生素C呢，它有多余的电子，它就会大方地把自己的电子送给自由基。
这一送啊，自由基就变得稳定了，不再到处搞破坏了。
就好像一个饥饿的人，维生素C给他送来了食物，他吃饱了就安静下来了。
再说说维生素E。
维生素E就像一个坚强的卫士。
它可以融入到细胞膜里面。
你想啊，细胞膜就像一个城堡的城墙，保护着细胞里面的东西。
自由基要是想破坏细胞，得先攻破这城墙吧。
维生素E就在这城墙里面守着呢。
当自由基来进攻的时候，维生素E就挺身而出，牺牲自己的电子，来中和自由基的活性，不让自由基去伤害细胞。
这多伟大呀，就像一个士兵，为了保护城堡里的百姓，英勇地和敌人战斗。
类胡萝卜素也很厉害呢。
它就像一个聪明的魔术师。
类胡萝卜素能够吸收自由基的能量，把这股破坏的能量转化成无害的形式。
这就好比一个魔术师把一个危险的魔法变成了一个好玩的小把戏。
类胡萝卜素通过这种方式，让自由基失去了作恶的能力。
我还有个朋友小王，她特别爱美，很注重保养。
她就知道多吃富含抗氧化剂的食物对皮肤好。
超氧自由基清除能力测定法-操作图解
超氧自由基（·O2-）的清除能力测定法（连苯三酚自氧化法）（适用于：SOD及各种抗氧化剂）操作图解具体方法1 溶液配制1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。
1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。
1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA）40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。
用pH计测量，pH应为7.4。
用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。
（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。
1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中）取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。
再往里加连苯三酚14.6 mg (M。
W.126.1 )，即得。
（当天有效,以上为1个样品的用量）。
2 测试液2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。
（空白参比：Tris-HCl 缓冲液）ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。
由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。
此时的ΔA为ΔA0。
3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。
(整理)氧自由基与氧自由基清除剂依达拉奉
氧自由基与氧自由基清除剂依达拉奉山东大学齐鲁医院麻醉科（250012）于金贵一、氧自由基（一）自由基的概念自由基（freeradical，FR）是指外层轨道上有未配对电子的原子、原子团、分子或离子的总称。
因其含有未配对的电子，故化学性质非常活泼，极易与其生成部位的其他物质发生反应，而这种反应的最大特点是以连锁反应的形式进行。
氧原子上有未配对电子的自由基称为氧自由基。
人体吸入的分子氧，在正常状态下绝大多数（98%）都连接4个电子，它们最终与H+结合，代谢还原为H2O。
但有极少数氧（1~2%）在代谢过程中被夺去或接受一个电子而形成活性氧，即氧自由基。
（二）氧自由基的生理作用氧自由基在生理上是必需的物质，如合成ATP 和前列腺素、中性粒细胞杀灭细菌、酸性粒细胞杀灭寄生虫等过程都必须有氧自由基参与。
氧自由基在体内的生成与清除保持动态平衡，且在体内存在时间甚短。
由于其化学性极强，反应剧烈，过量产生会对机体造成极大危害。
（三）氧自由基的种类及其作用1. 超氧化物阴离子：氧自由基连锁反应的启动者，使生物膜、激素和脂肪酸过氧化。
2. 羟自由基（OH∙）：作用最强的自由基，可破坏氨基酸、蛋白质、核酸和糖类。
3. 过氧化氢（H2O2）：过渡型氧化剂，主要使巯基氧化，可氧化不饱和脂肪酸。
4. 单线态分子氧（1O2）：氧分子的激发状态，亲电子性强，在光作用下可由O2直接产生，对细胞有杀伤作用。
5.其他含氧的自由基如脂质过氧化物（ROOH）：易于分解再产生自由基，腐化脂肪，破坏DNA，可与蛋白质交联使之形成变性交聚物。
（四）机体抗氧化机制机制一：直接提供电子，以确保氧自由基还原；机制二：增强抗氧化酶的活性，以有效地消除或抵御氧自由基的破坏作用如酶类抗氧化剂超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）；非酶类抗氧化剂如维生素E、维生素C、辅酶Q、还原型谷胱甘肽（GSH）、葡萄糖、含硫氨基酸和不饱和脂肪酸等。
一种用中草药对超氧自由基的清除方法
一种用中草药对超氧自由基的清除方法中草药在中医药领域中被广泛应用，并且有着许多药用价值。
其中，一种重要的作用是清除超氧自由基，该自由基是人体内的一种有害物质，与多种疾病的发生和发展有密切关系。
以下将介绍一种用中草药对超氧自由基清除的方法，供您参考。
我们首先介绍的是黄芪。
黄芪是一种常见的中草药，具有抗氧化和免疫调节的特性。
研究表明，黄芪中的活性成分可以显著清除超氧自由基，减少其对细胞和组织的损害。
黄芪可通过提高细胞内抗氧化酶活性和抑制自由基的产生，发挥其清除超氧自由基的作用。
因此，黄芪可以作为一种有效的中草药用于清除超氧自由基。
另外，石斛也是一种可以用于清除超氧自由基的中草药。
石斛含有丰富的多糖类和黄酮类化合物，具有很强的抗氧化能力。
研究发现，石斛中的活性成分能够增加细胞内抗氧化酶的活性，清除超氧自由基并减轻氧化损伤。
石斛还可以促进细胞的修复和再生，增强机体的抗自由基能力。
此外，川贝母也是一种被广泛用于清除超氧自由基的中草药。
川贝母富含多种活性成分，如川贝母苷、川贝甾醇等。
研究表明，川贝母中的这些成分具有显著的抗氧化活性，可以清除超氧自由基并保护细胞免受其损伤。
此外，川贝母还能够减少氧化应激引起的细胞死亡，保护细胞的正常功能。
综上所述，黄芪、石斛和川贝母是三种常见的中草药，均具有优秀的清除超氧自由基的能力。
它们可以通过增加细胞内抗氧化酶活性、抑制自由基的产生和减少氧化损伤等机制发挥作用。
将这些中草药纳入日常饮食或适当药用，有助于维护人体的健康和延缓衰老的过程。
但需注意，使用中草药时应咨询专业医生或中医师的建议，并遵循正确的使用剂量和方法，以确保安全和有效性。
耐氧菌的耐氧机制
耐氧菌的耐氧机制
耐氧菌是指能够在高氧环境下生存和繁殖的微生物。
它们具有一些耐氧机制，使其能够适应和抵御氧气对其产生的毒性影响。
以下是一些常见的耐氧机制：
1. 抗氧化酶系统：耐氧菌通常会产生较高水平的抗氧化酶，如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽还原酶（GR）。
这些酶可以将氧自由基转化为无害的物质，减少对细胞的损伤。
2. 氧自由基清除剂：耐氧菌可能会合成一些分子来清除氧自由基，例如抗坏血酸（维生素C）、α-生育酚（维生素E）和硫酸铁等。
这些物质可以中和氧自由基，减少对细胞的损伤。
3. 细胞膜调节：耐氧菌通常具有更加稳定的细胞膜结构，能够降低氧气通过细胞膜引起的损伤。
这可能包括调节脂质组分的比例和结构，增加细胞膜的韧性和稳定性。
4. DNA修复系统：耐氧菌可能会具有更加高效的DNA修复机制，以应对氧气引起的DNA损伤。
这些修复系统可以修复氧自由基对DNA分子的氧化损伤，维护基因组的完整性。
这些耐氧机制的存在使得耐氧菌能够在高氧环境下生存和繁殖，并且在一定程度上减少了氧气对其产生的毒性影响。
然而，不同的耐氧菌可能具有不同的适应策略和耐氧机制，因此具体的机制和调控方式可能有所差异。
大气中活性氧自由基的生成与消除机制研究
大气中活性氧自由基的生成与消除机制研究引言大气中的活性氧自由基是指具有不成对电子的氧分子，具有强氧化性。
它们在大气中的生成和消除机制一直是科学家们关注的重要课题。
本文将介绍一些大气中活性氧自由基的生成和消除机制的研究成果。
1. 太阳辐射导致活性氧自由基的生成太阳光是大气中活性氧自由基的主要生成源之一。
当太阳光照射到大气中的氧分子时，一部分氧分子将从基态转变为激发态，形成激发氧分子。
这些激发氧分子具有高度反应活性，容易与其他氧分子碰撞反应生成活性氧自由基。
2. 大气中污染物引起活性氧自由基的生成大气中的污染物也能够促使活性氧自由基的生成。
例如，尾气排放中的一氧化氮和二氧化氮与氧分子反应生成亚硝基和亚硝酰自由基，它们都是活性氧自由基的前体物质。
此外，大气中的挥发性有机物也能与氧分子反应生成活性氧自由基。
3. 大气中通过光化学反应消除活性氧自由基为了维持大气的纯净和稳定，大气中的活性氧自由基需要被消除。
其中，光化学反应是一种重要的消除机制。
当太阳光照射到大气中的活性氧自由基时，它们可以与其他分子发生光化学反应，使其转变为无害的化学物质，从而消除了活性氧自由基。
4. 大气中活性氧自由基的生态作用除了消除污染物，在大气中生成和消除的活性氧自由基还具有重要的生态作用。
它们可以参与大气中各种氧化反应，如臭氧层的生成和降水中次级有机污染物的去除等。
同时，活性氧自由基还参与调节大气中的氧化还原平衡，影响大气中的气候和气象过程。
结论大气中活性氧自由基的生成和消除机制是一个复杂而重要的研究课题。
太阳辐射和污染物是活性氧自由基的主要生成源，而光化学反应是其主要消除机制之一。
活性氧自由基在维持大气的纯净和稳定方面起到了重要的作用。
我们的研究结果有助于更好地理解大气中的化学过程和环境变化，并为控制大气污染提供科学依据。
连苯三酚-邻苯三酚SOD 超氧自由基清除-过氧自由基清除-过氧阴离子自由基清除-超氧阴离子自由基清除
改进的连苯三酚法：一种适用于所有抗氧化剂超氧自由基（•O2-）清除试验（适用于SOD）【名词辨析】•O2-：该微粒既含有一个成单的电子，所以，可以属于自由基，又带一个单位负电荷，也属于阴离子。
所以，可以称为“超氧自由基”、“过氧自由基”、“过氧阴离子自由基”、“过氧阴离子”、“超氧阴离子自由基”、“超氧阴离子”。
SOD：过氧化物歧化酶，使过氧自由基发生岐化反应，而清除之。
连苯三酚：有些文献也称为“邻苯三酚”。
但邻苯三酚是不准确的名称。
因为分子含有三个取代基，应当称为“连”。
【操作示意图】操作示意图[1]操作示意图的说明：最初的连苯三酚（1,2,3-三羟基苯）法是专门为超氧化物歧化酶开发的，现在广泛用于测量其他抗氧化剂的超氧化物清除。
然而，强烈的pH影响被忽略了。
在本研究中，首次系统地研究了影响因素，大量实验证明pH值至关重要。
由于主要抗氧化剂含有羧酸、酯或内酯基团，pH 8.2应改为生理pH 7.4。
改进的程序如下。
将连苯三酚溶液（在1 M HCl中）与pH 7.4的Tris-HCl溶液充分混合；在37°C下每隔30秒测量一次A325nm值，持续5分钟。
由于ΔA325nm，控制值反映基质•O2-的初始浓度−, 应妥善控制，以保证方法的准确性。
改进的连苯三酚法是一种可靠且廉价的超氧自由基清除试验，适用于所有类型的抗氧化剂。
用石英比色皿，不能用玻璃比色皿，因为玻璃比色皿在325nm处有吸收。
【详细介绍】[1]有几种方法可以测定食品的超氧阴离子交换活性，包括细胞色素还原、硝基四氮唑蓝（NBT）、电子自旋共振（ESR）、化学发光、荧光和高效液相色谱。
所有这些方法都需要特殊且昂贵的仪器或生物试剂。
连苯三酚（1,2,3-三羟基苯）自氧化法相对便宜。
它最初由Marklund 专门为超氧化物歧化酶（SOD）而设计，而不是为其他抗氧化剂而设计。
近几十年来，由于其方便性，它还被用于测定其他抗氧化剂，如多酚、酚酸、单宁、黄酮、花青素、蒽醌、多糖，甚至各种营养添加剂和提取物。
清除氧自由基
1、超氧负离子黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生超氧负离子产生超氧负离子黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、清除超氧自由基负离子O2-徐艳,曲婷婷. 甘草消除氧自由基的体外研究[J]. 食品研究与开发,2006,(8).2、1.2.2NBT 光还原反应中主要试剂的配制1.2.2.1 测试缓冲液:0.026 mol/LMet- 磷酸钠缓冲液具体配制方法:首先配制0.1 mol/LpH7.8Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液a 称取Na2HPO4·12H2O( MW=358.14) 3.581 4 g 于100 mL 小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
b 称取NaH2PO4·2H2O(MW=156.01)0.780 g 于50 mL小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
c 量取91.5 mL a 液与8.5 mL b 液混合后, 该液即为0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液。
d 称取L- Met( MW=149.2) 0.194 1 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液定容至刻度。
1.2.2.2 NBT( 氯化硝基四氮唑蓝) 的配制(7.5×10-4mol/L)称取NBT( MW=817.7) 0.061 3 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
1.2.2.3 核黄素溶液(2×10-5 mol/L)a.称取EDTA( MW=292) 0.002 92 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。
b.称取核黄素( MW=376.36) 0.073 5 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。
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1、超氧负离子黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统产生超氧负离子产生超氧负离子黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、清除超氧自由基负离子O2-徐艳,曲婷婷. 甘草消除氧自由基的体外研究[J]. 食品研究与开发,2006,(8).2、1.2.2NBT 光还原反应中主要试剂的配制1.2.2.1 测试缓冲液:0.026 mol/LMet- 磷酸钠缓冲液具体配制方法:首先配制0.1 mol/LpH7.8Na2HPO4- NaH2PO4缓冲液a 称取Na2HPO4·12H2O( MW=358.14) 3.581 4 g 于100 mL 小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
b 称取NaH2PO4·2H2O(MW=156.01)0.780 g 于50 mL小烧杯中, 加少量蒸馏水溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
c 量取91.5 mL a 液与8.5 mL b 液混合后, 该液即为0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液。
d 称取L- Met( MW=149.2) 0.194 1 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用0.1 mol/LpH7.8 磷酸钠缓冲液定容至刻度。
1.2.2.2 NBT( 氯化硝基四氮唑蓝) 的配制(7.5×10-4mol/L)称取NBT( MW=817.7) 0.061 3 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解后, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度。
1.2.2.3 核黄素溶液(2×10-5 mol/L)a.称取EDTA( MW=292) 0.002 92 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。
b.称取核黄素( MW=376.36) 0.073 5 g 于50 mL 小烧杯中, 用少量蒸馏水溶解。
合并 a 液和 b 液, 移入100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度( EDTA0.1 mmol,核黄素2 mmol)。
贮于冰箱中, 避光保存, 用时稀释100 倍。
1.2.3 甘草提取物溶液的配制1.2.3.1 甘草酸溶液的配制称取甘草酸0.05 g 用少量稀醇(10 %乙醇溶液)溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度, 即为 1 g/ mL 的甘草酸溶液。
1.2.3.2 甘草次酸溶液的配制称取甘草次酸0.05 g 用少量稀醇(10 %乙醇溶液)溶解后, 移入50 mL 容量瓶中, 用稀乙醇定容至刻度,即为 1 g/mL 的甘草次酸溶液。
1.2.3.3 甘草总黄酮组溶液的配制称取甘草总黄酮0.1 g 用少量稀碱液( 0.01 mol/LNaOH 溶液) 溶解后, 移入100 mL 容量瓶中, 用稀碱液定容至刻度, 即为1 g/L 的甘草总黄酮碱溶液。
( 甘草总黄酮全部溶解)1.2.4NBT 光还原法消除氧自由基原理核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2-, 当加入NBT 后, 在光照条件下, 与超氧自由基反应生成单甲月替( 黄色) , 既而还原成二甲月替( 呈兰色) 。
该产物在560 nm 下有最大吸收峰。
当加入抗氧化剂1.2.5 甘草消除氧自由基活性测定1.2.5.1 对照组吸光度的测定取 3 个微烧杯, 编好号后, 以反应系统总体积为 3.0mL计算, 按表 1 加入各试剂。
试剂加入后充分混匀,取0 号微烧杯放入暗处作空白( 调零时用) , 在560 nm波长下测定光密度。
1.2.5.2 各组提取物活性的测定以反应系统总体积为 3.0 mL 计算, 按表 2 加入每组试剂和提取液量。
在560 nm 波长下测定光密度, 以1, 2 号杯的A 值为对照计算出不同提取物溶液是否抑制NBT 的光还原反应, 及具有抑制作用的提取物在其反应系统中抑制NBT 光还原的相关百分率。
然后以所加提取物溶液量为横坐标, 以抑制百分率为纵坐标作图, 画出两者的相关曲线, 找出50 %抑制率的各溶液的量, 此提取物溶液量即为该物质一个活力单位清除·OH丛媛媛. 新疆胀果甘草多糖的分离纯化、结构分析和生物活性研究[D]. 新疆医科大学: 新疆医科大学,2008.对羟自由基（·OH）的清除实验按照Smirnof（1989）的方法，利用H2O2与Fe2+混合产生·OH 在体系内加入水杨酸捕捉·OH 并产生有色物质，该物质在510nm 下有最大吸收。
反应体系中含9.8mmol/L H2O22mL，9mmol/LFeSO42mL，9mmol/L 水杨酸-乙醇2mL，不同浓度的甘草多糖溶液2mL。
最后加H2O2启动反应，37℃反应30min;以超纯水为参比，在510nm 下测量各浓度的吸光度。
考虑到多糖本身的光值，以9mmol/L FeSO42mL，9mmol/L 水杨酸-乙醇2mL，不同浓度的多糖溶液2mL 和2mL超纯水作为多糖的本底吸收。
并以下式计算其清除率：清除率（%）=[（A0－（Ax－Ax0））/A0]×100%其中：A0 为空白对照液的吸光度；Ax 为加入多糖溶液后的吸光度；Axo 为不加显色剂H2O2多糖溶液本底的吸光度。
清除O2·1.2.2.3 胀果甘草多糖对超氧阴离子自由基（O2·）的清除实验1）采用邻苯三酚自氧化法的测定取5mL PH 8.2 的50mmol/L Tris-HCI 缓冲液。
2mL 超纯水，混匀后在25℃水浴中保温20min。
取出后立即加入在25℃预热过的3mmol/L 邻苯三酚0.5mL（以10mmol/LHCI 配制，空白管用10mmol/LHCI 代替邻苯三酚的HCI 溶液），迅速摇匀后倒人比色杯，420nm 下每隔30s 测定吸光度值。
2）样品活性测定在加入邻苯三酚前，先加入一定体积的多糖溶液，超纯水减少，然后按采用邻苯三酚自氧化法测定的方法操作，并计算抑制率。
抑制率（I%）计算公式为：I%=[1－（A3－A4）/（A1－A2）]×100%A1：不含样品的吸光度值；A2：不含样品和邻苯三酚的吸光度值A3：含有样品的吸光度值；A4：含样品，但不含邻苯三酚的吸光度值。
邻苯三酚：焦性没食子酚，没食子酚。
清除·OH韩强,林惠芬,朱玲莉. 一些天然提取物对超氧自由基和羟基自由基的清除作用[J]. 日用化学工业,2000,(3).利用邻苯三酚自氧化产生超氧自由基(O2-) , Fenton反应产生羟基自由(.OH) ;以比色法测定了一些天然提取物对这二种自由基的清除作用。
结果表明;这些取物大都具有清除作用,其中以芦丁、槲皮素、黄芪总黄酮较强。
按文献[ 12 ]的方法进行,同时参考[ 13 ]。
总体积3mL的反应液含下列试剂(以最终浓度表示):水杨酸,2. 5mmol ;乙二胺四乙酸二钠, 0. 5mmol ;FeSO4 0.5mmolH2O2, 1mmol ;KHPO4-KOH缓冲液, p H= 7. 40 ,0. 25 mol ;不同浓度的待测样品。
反应在25℃恒温水浴中进行,加入H2O引发反应,反应进行2h后,加入60μL 12mol HCl结束反应。
以6mL冷乙醚振摇萃取反应液2min ,吸取上层乙醚液4. 5mL ,于40℃水浴蒸干乙醚,然后依次加入双蒸水2mL、10 %三氯乙酸(W/ V) 0. 15mL (以0. 5mol HCl配制) 、10 %钨酸钠(W/ V ) 0. 25mL、0. 5 %亚硝酸钠(W/ V ) 0.25mL ,混匀;放置5min ,加0. 25mL 1mol KOH后,立刻于510nm处测吸光度值(A)。
样品黄芪总黄酮、芦丁、槲皮素为油溶性物质,以少量丙酮溶解供测试用, 并以等量丙酮做随行空白。
以Vit C做阳性对照物。
以下式计算各样品对·OH 的清除率(I %) :I % = [ 1 - (A Ⅲ- A Ⅳ) / (A Ⅰ- A Ⅱ) ]×100A Ⅰ:不含样品的吸光度值A Ⅱ:不含样品和H2O2的吸光度值A Ⅲ:含有样品的吸光度值A Ⅳ:含样品,但不含H2O2的吸光度值O..2清除试验韩强,林惠芬,朱玲莉. 一些天然提取物对超氧自由基和羟基自由基的清除作用[J]. 日用化学工业,2000,(3).按文献[ 9 ]的方法进行,同时参考[ 10 ] [ 11 ]。
总体积3mL的反应液含下列试剂(以最终浓度表示): Tris-HCI缓冲液,pH = 8. 20 , 50mmol ;二乙三胺五醋酸,1mmol ;邻苯三酚, 0. 2mmol ;不同浓度的待测样品。
反应在25℃恒温水浴中进行,加入邻苯三酚引发反应(邻苯三酚以10mmol HCI溶解并25℃预热),准确反应5min ,加入30μL 100mmol的DL2二巯苏糖醇(D T T)终止反应, 1h内记录325nm处的吸光度值(A)。
样品芦丁、槲皮素、黄芪总黄酮为油溶性物质,以少量甲醇溶解供测试用,并以等量甲醇做随行空白。
以抗坏血酸(Vit C)作阳性对照物。
按下式计算各样品对O÷2的清除率(I %) :I % = [ 1 - (A3- A4) / (A1- A2) ]×100A1:不含样品的吸光度值A2:不含样品和邻苯三酚的吸光度值A3:含有样品的吸光度值A4:含样品,但不含邻苯三酚的吸光度值。