免疫学试验设计2012-10

检测胸腺肽能否增强人的免疫力

实验目的：1，检测胸腺肽这种药物能否增强机体的免疫了。

2，选择合适的指标来评估机体的免疫力。

3，熟练掌握NK细胞活性检测的实验原理以及实验方法。

实验原理：测试胸腺肽（给药途径为肌肉注射）是否能增强人体的免疫力。本实验采用配对设计：随机抽取10名健康的男性和10名健康的女性。首先抽取每个人的血液样本（20份）作为对照组。然后，肌肉注射胸腺肽。一小时后，抽取每个人的血液样本（20份）作为实验组。

由于，考虑到实验的繁琐以及短时间内（1个小时）免疫细胞的数目可能并没有产生明显的变化。因此，这里采用测量NK细胞的活性来对免疫力进行评估。

测量NK细胞的活性的实验原理：NK细胞作为一种重要的非特异性免疫细胞能杀伤侵入机体的细菌以及病毒，它的活性可以用来评估机体免疫力的强度。实验中，我们首先采取血液标本（混有抗凝剂），然后加入淋巴细胞分离液，通过离心处理来分离出淋巴细胞层。然后，将NK细胞与靶细胞孵育，让他们充分作用。靶细胞被杀伤后，会释放乳酸脱氢酶。我们根据对乳酸脱氢酶浓度的测量来间接评估NK细胞的活性。

实验步骤：

一配对设计

1，从同济医学院招募10名健康的男性与10名健康的女性作为志愿者。抽取他们的血液样本（共20份）作为对照组并编号。

2，然后，分别对20名志愿者注射胸腺肽。由于，胸腺肽是一些小分子的多肽而且我们采取的给药途径是肌肉注射，因此我们采用给药后1小时的血液样本作为实验组来评估机体的免疫力。抽取的实验组标本同时要进行编号处理。

二测量NK细胞的活性

1，首先吸取2ml的淋巴细胞分离液于试管中，然后将试管倾斜45°，沿管壁缓缓注入2ml 的抗凝血标本。然后离心2000rpm，20min。

2，将毛细吸管直接伸到灰白色层（在血浆和分层液间），轻轻地吸取该层细胞（即为PBMC）。然后将所得PBMC用5倍体积的1640洗涤一次，将混悬液2000rpm×5min。

3，弃去上清液，加入0.2ml完全RPMI-1640 ，混匀。

4，按照下表加入各种试剂

5，将板子放入温箱中孵育1个小时。

6，从各孔中吸取100ul溶液转移至新的小孔中。然后将平板置于37℃的温箱中预温10min, 再向其中加入新鲜配制的底物溶液0.1ml, 37℃避光反应10～15min。

7，终止酶促反应，在各个小孔中用毛细吸管滴一滴1mol/L柠檬酸30μl。

8，用酶标检测仪在570nm波长下读取各孔OD值, 并计算NK细胞活性。NK细胞活性（%）=（实验组OD值-自然释放对照组OD值）/（最大释放对照组OD值-自然释放对照组OD

值）×100%。

结果的处理：

性

别

男女

编号1 2 3 4 5 6 7 8 9 1

11 1

2

1

3

1

4

1

5

1

6

1

7

1

8

1

9

2

对

照

组

实

验

组

差

值

我们得到的数据进行处理，即取实验组与对照组的差值。我们得到20个差值，d1，d2，d3 (20)

对其进行统计学处理，得到P值。同时，我们也可以只对男性（或者女性）的数据资料进行统计学分析，同时可以得到P（男性）或者P（女性）。获得的P值与0.05进行比较。

注意：由于注射胸腺肽不会降低人体的免疫力，因此这里得到的P值应该是单侧的值。