消毒剂消毒效力及有效期验证方案
消毒剂消毒效果及有效期验证方案
目录1.概述2.验证范围3.验证目的4.验证参考文件5.验证小组名单6.验证小组职责7.验证内容8.结论与评价9.再验证周期1.概述1.1.本公司的洁净区分为A级、B级、C级和D级，拟定用于洁净区表面消毒的有三种消毒剂：75%乙醇、0.1%新洁尔灭溶液、2%甲酚皂溶液。
本次验证方案将选用以上3 种消毒剂分别进行验证试验。
1.3.作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。
在利用消毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10分钟，利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于5分钟。
1.4.为了确认消毒剂的消毒效力，通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。
实验室考察部分，定量悬浮试验法适用于浸泡或液封方式的消毒方法；表面实验法适用于擦拭或喷洒方式的消毒方法。
洁净区设施表面材质有不锈钢、镀锌板及玻璃三种，故表面试验法选用不锈钢载片、镀锌板及玻璃载片模拟洁净区设施表面进行验证试验。
现场考察试验部分选择冻干车间的配液间（C级洁净区）、灌装间（A/B级洁净区）、灌装间操作人员手部消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。
1.5.A/B级洁净区使用的消毒剂需经0.22〃n除菌过滤。
2.验证范围本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等。
3.验证目的通过消毒剂消毒效果及有效期的确认，科学制订消毒程序，以保证各洁净级别的操作间及设备外表面、人员手部按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒防止污染的效果。
4.验证参考文件《药品生产验证指南》（2003版）；《医疗机构消毒技术规范》（2012年版）；《中国药典》（2010年版）；《药品GMP指南-无菌药品》、《现代医药工业微生物实验室质量管理与验证技术》。
5.验证小组名单6.验证小组职责7.验证内容7.1.验证前参与实施验证的人员必须已经接受本方案的培训且考核合格。
5消毒剂消毒效果验证方案
8. 消毒剂消毒效果验证内容8.1 消毒剂消毒效果的验证8.1.1 菌悬液配制接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养琼脂培养基中，于30～35 ℃培养18～24 h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，于23～28 ℃培养24～48 h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1 ml 含菌数100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23～28 ℃培养5～7 d，加入3～5 ml 0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后用管口带有无菌棉花的无菌毛细吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1 ml 含菌数（孢子数）100 cfu 的菌（孢子）悬液。
试验菌悬液应在24 h 内使用。
8.1.2 消毒剂消毒效果验证8.1.2.1 设置三组平行试验，如下图所示分组用量（ml）菌悬液培养基 3.0%过氧化氢水溶液0.9%氯化钠溶液A 1 100 10 0B 0 1 10 100C 1 100 0 18.1.2.2 根据验证菌的特性，分别选择贴于营养琼脂培养基平皿及玫瑰红钠琼脂培养基平皿上，分别于30~35 ℃培养72 h、23~28 ℃培养120 h，记录各平皿上菌落数。
8.1.2.3 每步操作应充分震荡混合，并将每组混合液分为两组，将上述样品混合后，采用薄膜过滤法，按《微生物检查SOP》进行操作，检查微生物数量。
8.1.2.4 回收率的计算要求C组的回收率大于70%时，消毒剂消毒效果验证可认为有效。
8.1.2.5 不符合评估标准，为不合格。
依据数据分析原因，以便总结经验，对验证方案进行修改、完善。
8.1.2.6 依据验证检测记录进行项目结果评估。
见附录4《消毒剂消毒效果验证结果与评估》。
8.2 消毒剂微生物挑战试验8.2.1用已校验的1 mL 移液管吸取＜100 cfu/mL 菌悬液，分别接种至含消毒液10ml的试管中，盖紧试管塞，振荡，室温放置10 min后，将试管内消毒液转至含培养基100ml的瓶中，振荡混匀，采用薄膜过滤法，按《微生物检查SOP》进行操作，检查微生物数量。
消毒剂消毒效力及有效期验证方案
消毒剂消毒效力及有效期验证方案一早起床，打开窗户，清新的空气迎面扑来，心情格外舒畅。
今天，我要写一份关于消毒剂消毒效力及有效期验证的方案。
想到这里，我立刻精神抖擞，开始梳理思路。
1.消毒剂选择杀菌能力：选择具有高效杀菌能力的消毒剂，如过氧化氢、酒精等；安全性：选择对人体和环境相对安全的消毒剂，如酒精、过氧化氢等；便捷性：选择使用方便、易于储存的消毒剂，如酒精、碘伏等。
2.消毒效力测试方法平板计数法：将消毒剂作用于微生物平板，观察杀菌效果；环境模拟法：模拟实际环境，将消毒剂作用于物体表面，观察杀菌效果；动物实验法：对动物进行消毒处理，观察其抗感染能力。
3.消毒效力评价指标杀菌率：消毒剂对微生物的杀灭程度；消毒速度：消毒剂达到杀菌效果所需时间；持久性：消毒剂在一段时间内保持杀菌效果的能力。
我们来看看消毒剂的有效期验证。
消毒剂的有效期关系到其使用效果和安全性，我们需要对其有效期进行严格测试。
1.有效期测试方法加速试验法：将消毒剂置于高温、高湿等极端环境下，观察其性能变化；实际储存法：将消毒剂储存在实际环境中，定期检测其性能；质量变化法：通过检测消毒剂的质量变化，判断其有效期。
2.有效期评价指标性能稳定性：消毒剂在储存过程中保持性能不变的能力；安全性：消毒剂在储存过程中对人体和环境的影响；有效期：消毒剂保持杀菌效果的时间。
1.消毒剂使用注意事项使用前需充分了解消毒剂的性质和适用场景；按照说明书使用，确保消毒效果；注意消毒剂的安全存放，防止误食、误用；使用后对环境进行清洁，避免污染。
2.消毒剂市场调查了解市场上常见的消毒剂品牌和产品；比较不同品牌消毒剂的价格、性能和售后服务；选择性价比高的消毒剂。
3.消毒剂推广与应用加强消毒剂知识的普及，提高人们对消毒剂的认识；针对不同场景，推广合适的消毒剂产品；政府部门加强对消毒剂市场的监管，保障消费者权益。
至此，一份完整的消毒剂消毒效力及有效期验证方案终于完成。
看着自己的劳动成果，我感到十分欣慰。
消毒剂消毒效力及贮存期验证方案
目录一、概述 (4)二、验证目的 (4)三、验证范围 (4)四、验证参考文件 (4)五、验证职责 (4)六、消毒剂名称、对象和有效期 (6)七、验证前的准备 (6)八、验证内容 (7)九、结论与评价 (13)十、再验证周期 (13)十一、变更/偏差控制 (13)十二、附件 (13)十三、变更记载及原因 (13)十四、附表........................................................................................................................... ..14一.概述大容量注射剂生产洁净区用75%乙醇和0.2%新洁尔灭对洁净区进行化学消毒，两种消毒液每月进行更换，防止耐药菌株的产生，本验证是按验证周期对消毒剂的消毒效果及贮存期进行验证。
二.验证目的确认洁净区按照规定的清洁、消毒程序进行清洁消毒后，能够达到防止交叉污染的目的，并在消毒有效期内能确保达到生产工艺所需要的消毒效果。
三.验证范围75%乙醇、0.2%新洁尔灭的消毒效力以及贮存期。
四确认人：日期：复核人：日期：五确认人：日期：复核人：日期：六七.验证前的准备7.1参与验证的人员在实施验证前必须接受本方案的培训。
7.2设备设施确认验证用主要设备、仪器仪表的校验确认7.4消毒剂的配制：严格按照《消毒剂的配制规程》进行操作，洁净区使用的消毒剂均在D级洁净区消毒剂配制间内进行配制，且必须经第二人复核后贴配制标签；A级洁净区所使用的消毒剂必须经过0.22μm的除菌过滤器过滤。
八.验证内容为了确认洁净区所使用消毒剂的消毒效力，本次验证拟通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。
（一）实验室考察1.材料清单（1）细菌：金黄色葡萄球菌 (ATCC6538)大肠杆菌(ATCC25922)（2）细菌芽孢：枯草杆菌芽孢(ATCC9372)（3）真菌：白色念珠菌(ATCC10231)培养基：大豆胰蛋白胨琼脂培养基(TSA)、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、营养肉汤培养基。
完整版消毒剂消毒效果验证方案
完整版消毒剂消毒效果验证⽅案消毒剂消毒效果验证⽅案⽬录1.引⾔ (3)1.1概述 (3)1.2 验证⽬的 (3)1.3验证项⽬⼩组成员及职责 (3)略1.引⾔1.1概述消毒是指杀死病原微⽣物、但不⼀定能杀死细菌芽抱的⽅法。
通常⽤化学的⽅法来达到消毒的作⽤。
⽤于消毒的化学药物叫做消毒剂。
洁净车间包括操作室和设备及⽣产⽤器具均应进⾏消毒，消毒效果是否彻底直接影响到产品的质量，⽣产前必须验证消毒⽅法的适应性和消毒效果。
本公司车间洁净区分为⼗万级、万级、万级下的局部百级，所使⽤的消毒剂种类及使⽤对象如下图所⽰：1.2验证⽬的确保洁净区按照规定的清洁、消毒程序进⾏清洁消毒后，能够达到防⽌交叉污染的⽬的, 并在消毒有效期内能确保达到⽣产⼯艺所需要的效果。
1.3验证项⽬⼩组成员及职责1.3.1验证⼩组成员1.3.2.1验证委员会职责1.3.2.1.1负责验证⽅案的审批；1.3.2.1.2负责协调验证的各项⼯作，保证本⽅案规定的项⽬能够顺利实施;1.3.2.1.3负责验证数据及⽅法审核；1.3.2.1.4负责验证报告的审批；1.3.2.1.3负责再验证周期的制定；1.3.2.1.6 负责发放验证证书。
1.3.2.2⽣产管理部职责1.3.2.2.1 制定验证⽅案；13222 组织协调验证活动，确保验证进度；1.3.2.2.3组织验证⼯作的实施并作好记录，收集、归纳并评估结果。
1.3.2.3质量管理部职责1.3.2.3.1制订验证确认检测项⽬；1.3.2.3.2负责取样、检验并出据检验报告；1.3.2.3.3 确定验证周期。
1.3.2.4物资管理部负责按⽣产要求提供符合标准的消毒剂。
2.相关⽂件2 清洁剂、消毒剂管理规程3 清场管理规程4 消毒剂配制使⽤标准操作规程5 ⽣产⽤⼯具、容器清洁标准操作规程6 清洁⽤具清洁标准操作规程7 洁净区操作室清洁标准操作规程8 ⼈员进出洁净区标准操作规程9 物料进出洁净区标准操作规程10洁净区环境监控标准操作规程备注检杳⼈复核⼈⽇期⽇期3.1操作⽅法待⽣产结束后按操作室和设备及⽣产⽤的器具清洁规程进⾏清洁、消毒，对操作室和设备及⽣产⽤的器具进⾏清洁、消毒后分别以⽆菌棉签采样，接种后培养 24?48⼩时观察结果，以确定消毒的效果。
消毒剂消毒效果验证方案
1. 概述: 污染药物常见细菌有霉菌、杂菌、致病菌（沙门氏菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌）这些细菌来源于制药环境未净化空气, 不洁净门、窗、制药设备、工具及进行工艺操作旳人等, 为减少制药环境中微生物污染, 常采用旳灭菌措施有物理措施和化学措施。
对车间空气进行初、中、高效过滤, 阻留细菌进入车间, 紫外灭菌等均属物理灭菌法。
运用甲醛薰蒸、臭氧来杀灭空气中细菌；以75%乙醇擦拭设备表面；4%来苏儿擦门、窗、墙、地面消毒都属化学灭菌法。
选使用方法定检查措施, 用上述多种消毒剂, 对人员及车间旳空气、门、窗、墙、地面、地漏进行消毒效果旳验证, 优化选择最佳旳清洗消毒剂, 确认消毒剂旳清洁效果。
2．目旳：通过用多种清洗消毒剂对车间人员、空气、门、窗、设备设施进行消毒效果旳验证确认, 优化选择最佳清洗消毒剂。
3. 范围: 本方案合用于清洗消毒剂消毒效果旳验证。
4. 验证内容：4.1消毒剂种类:75%乙醇；0.2%新洁尔灭；0.5%洗必泰、70%乙醇和2%甘油混合液、臭氧；媒酚皂；84消毒液。
4.2消毒对象: 洁净区旳人员、空气、设备、门、窗、墙、地面、地漏、洁具等。
4.3消毒效果试验措施：多种清洁对象按对应旳清洗消毒规程操作后，用预先湿润旳无菌棉签擦抹清洁对象表面任意位置25cm2，将擦拭后旳棉签置入加有适量灭菌生理盐水旳灭菌广口瓶中，振摇15min，取1ml浸出液照微生物程度检查项下细菌、霉菌（酵母菌）计数措施进行试验（药典法），计算菌落数。
4.4清洗消毒剂消毒效果评价原则:空气清洁效果评价原则:在臭氧发生器启动60分钟后:①各洁净区域旳臭氧浓度≥12ppm（原则10～15 ppm）。
②生物指示剂细菌（金黄色葡萄球菌6583株, 菌液浓度1×107个/ml）挑战性试验检查不得有细菌生长。
臭氧灭菌消毒效果见《臭氧灭菌效果验证方案》。
手清洗消毒剂旳杀菌效果评价原则:菌落数<60CFU/25cm2设备清洗消毒剂杀菌效果评价原则:菌落数≤50CFU/25cm2车间门、窗、墙清洗消毒评价原则:菌落数≤50CFU/25cm24.4.5地面、地漏清洗消毒评价原则:4.4.6洁具清洗消毒评价原则:菌落数≤120CFU/25cm24.5清洗消毒剂杀菌效果旳验证确认:4.5.1洁净区空气消毒:空气清洁效果评价原则见本文。
消毒液消毒效力及有效期验证
稀释级
结果
杀灭
对数值
试验组活菌浓度对数值
试验组活菌浓度对数值
0.5%84消毒液
金黄色葡萄大肠埃希菌
10-1
10-2
10-3
10-4
枯草芽孢杆菌
10-1
10-2
10-3
10-4
白色念珠菌
10-1
10-2
10-3
10-4
结论：
。
操作人/日期：复核人/日期：
表6表面试验法试验记录
样品培养：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌于30～35℃培养3天，白色念珠菌于20～25℃培养5天，培养结束后点计菌落数。
结果计算：计算试验组和对照组的活菌浓度(cfu/ml)，并换算为对数值(N)，并按下式计算杀灭对照值
杀灭对数值(KL) =对照组平均活菌浓度的对数值(NO)－试验组活菌浓度对数值(NX)
●第1组
目的：观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。
操作方法：吸取消毒剂4.5ml于试管内，吸加0.5ml菌悬液(含菌量为1×108cfu/ml～5×108cfu/ml)，混匀。作用10分钟，吸此样液0.5ml至含有4.5ml稀释液试管中混匀。吸取该最终样液0.5ml，接种于平皿中，做活菌培养计数。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌用TSA培养基；白色念珠菌用SDA培养基。
中和剂选择实验结果消毒剂组间误差率结论第一组第二组第三组第四组第五组第六组金黄色葡萄球菌大肠枯草芽孢杆菌白色念珠菌乙醇溶液金黄色葡萄球菌大肠枯草芽孢杆菌白色念珠菌84消毒液金黄色葡萄球菌大肠枯草芽孢杆菌白色念珠菌操作人日期
1
本文件用于验证洁净区按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒、防止污染的目的，在消毒有效期内能确保其消毒效力符合要求。
消毒剂消毒效果验证
消毒剂（75%、新洁尔灭）消毒效果验证方案编制/日期：审核/日期：批准/日期：洁净室消毒剂消毒效果验证方案一、目的公司对于洁净室的消毒采用：洁净室操作台、设备表面、器具及净化室墙壁、地面、门窗等消毒，用0.2％（1:500）新洁尔灭溶液、1.25％84消毒液擦拭消毒；洁净室人员手部消毒用75％乙醇溶液，0.2％（1:500）新洁尔灭溶液品种每月更换一次消毒液品种。
此次消毒验证主要为针对公司所用消毒液进行消毒有效性的试验，以确保生产环境得以控制。
洁净室的清洁和灭菌是清除微生物的主要手段，但必须保障灭菌的有效性、彻底性，因此必须对洁净室的消毒、灭菌效果进行验证。
洁净室消毒效果的验证是以物理、化学、及微生物方法考察洁净室人员的手部、操作间、器具应用相应消毒剂消毒后消毒效果，确保消毒剂使用的有效性，为生产合格产品提供无菌环境保障。
本公司生产用洁净室分别采用空气杀菌和消毒液消毒。
因此本验证方案分别对各种消毒液进行消毒效果验证。
二、范围1.洁净室操作间（工作台、设备表面、墙壁、地板、门窗）、器具所使用的各种消毒液的消毒效果验证。
涉及消毒剂有：0.2％新洁尔灭溶液、1.25％84消毒液、75％乙醇溶液。
2.洁净室人员手部消毒液使用过程中不同时间的消毒效果验证。
涉及的消毒液有0.2％新洁尔灭溶液、75％乙醇溶液。
三、验证小组成员四、试验用品4.1、待验证消毒剂按照本公司消毒液配制操作细则分别配制：0.2％新洁尔灭溶液、1.25％84消毒液75％乙醇溶液。
五、验证方法5.1.洁净室消毒液消毒效果验证5.1.1可接受标准：GB/T15980-1995一次性使用卫生用品卫生标准YY0033-2000无菌医疗器具生产管理规范5.1.2洁净室清洁消毒按照公司《洁净室工艺卫生管理制度》，分别清洁、消毒洁净工作区百级、万级、十万级操作间的工作台面、设备表面、地板、墙面和门窗等。
5.1.3洁净室采样选取制品暴露时间最长、设备及操作人员最多，无菌要求最高的装配及包装车间作为验证测试重点。
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实用标准文案消毒剂的选用原则：目的：确认各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达到消毒、防止污染的目的，并在消毒剂有效期内能确保其消毒效力能符合要求。
范围：本验证方案适用于本公司洁净区的墙面、天花板、门窗、机器设备、仪器、操作台、地漏、推车、桌椅等表面以及操作人员双手（手套）的消毒等。
1.参考文件1.1.《医疗器械生产质量管理规范》1.2.《中国药典》2015 版第4 部微生物限度检查法2.概述2.1.本公司的洁净区为D 级，拟定用于洁净区表面消毒的有五种消毒剂：75% 乙醇、0.1% 新洁尔灭溶液、0.2%新洁尔灭溶液、0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液。
本次验证方案将选用以上5 种消毒剂分别进行验证试验。
作用对象一样的消毒剂每月轮换使用，避免表面微生物产生耐药菌株。
在利用消毒剂进行表面擦拭消毒过程中消毒剂的作用时间应不少于10 分钟，利用消毒剂进行浸泡消毒的不少于5 分钟。
消毒剂的种类、消毒对象、消毒方法和有效期湖北普爱药业有限公司验证管理标准文件第1 页共5 页消毒剂灭菌效果验证2.2.为了确认消毒剂的消毒效力，通过实验室考察部分和现场考察部分分别进行验证。
其中，用定量悬浮试验法和表面实验法进行实验室考察试验部分。
洁净区设施表面材质基本都是不锈钢和玻璃两种，故表面试验法选用不锈钢载片和玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验。
两种试验方法作用的消毒剂见表。
湖北普爱药业有限公司验证管理标准文件第1 页共5 页现场考察试验部分选择车间（D 级）的配液间、灌装间设备表面消毒前和消毒后分别进行取样，测定其微生物数量。
3.确认前准备3.1.验证用试剂与材料3.1.1.菌种3.1.2.培养基湖北普爱药业有限公司验证管理标准文件第1 页共5 页消毒剂灭菌效果验证3.1.3.消毒液拟定选用的中和剂3.1.2.稀释液0.9% 无菌氯化钠溶液（NS）3.1.3.器具及设备3.2. 验证用试剂与材料记录见附录14.消毒剂消毒效力试验4.1.中和剂鉴定试验4.1.1.试验目的通过该试验，确认所用的中和剂对对应的消毒剂有良好的中和作用，对试验用菌剂及其恢复期培养示范有害或不良影响。
湖北普爱药业有限公司验证管理标准文件第1 页共5 页4.1.2.菌液的制备及计数4.1.2.1金. 黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌工作菌液的制备接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24 小时。
取上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液做10 倍系列稀释成1×10 8~5 ×108CFU/ml 的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为1×10 8~5 × 108CFU/ml ，可不再用0.9 ％无菌氯化钠溶液稀释）。
计数时，将1×108~5×108CFU/ml 的工作菌液10 倍系列稀释成含50 ～100CFU/ml 菌液，并同时采用营养琼脂培养基30～35℃培养2 天计数。
计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。
4.1.2.2白. 色念珠菌工作菌液的制备接种白色念珠菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，23～28℃培养24 ～48 小时。
取上述培养物用0.9 ％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释成1×10 8~5 ×10 8CFU/ml 的工作菌液（如肉汤培养物的浓度已为1×10 8~5 ×108CFU/ml ，可不再用0.9 ％无菌氯化钠溶液稀释）。
计数时，将1×108~5×108CFU/ml 的工作菌液10 倍系列稀释成含50～100CFU/ml 菌液，并同时采用改良马丁琼脂培养基23 ～28 ℃培养3 天计数。
计算该稀释级的平均菌落数，将计数结果换算成每毫升浓菌液的菌落数。
4.1.3.鉴定试验操作4.1.3.1配. 制75% 乙醇、0.1%新洁尔灭溶液、0.2%新洁尔灭溶液、40mg/L 的二氧化氯、60mg/L 的二氧化氯，具体操作执行《清洁剂和消毒剂管理》。
将配置好的消毒剂置20 ℃±1℃恒温水浴锅中备用。
湖北普爱药业有限公司验证管理标准文件 第 1 页 共 5 页消毒剂灭菌效果验证4.1.3.2分. 组操作试验分组及稀释操作方法简表具体操作第1组目的：观察消毒液对试验菌有无杀灭或抑制能力。
操作：取消毒剂4.5ml+ 工作菌液0.5ml ，混匀作用10min 后，取混合液0.5ml+ 稀释液4.5ml ，混匀作用10min ，取0.5ml 注皿，平行制备2 皿。
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30 ～35 ℃培养3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置23 ～28℃培养5 天计数计数。
第2组目的：观察残留消毒剂被中和后受到消毒剂作用后的试验菌是否恢复生长。
操作：取消毒剂4.5ml+ 工作菌液0.5ml ，混匀作用10min 后，取混合液0.5ml + 中和剂4.5ml ，混匀作用10min ，用稀释液稀释成10 -1。
分别取未稀释溶液（混合液0.5mll+ 中和剂4.5ml 的混合液）及10-1 0.5ml 注皿，各平行制备2 皿。
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于30 ～35 ℃培养3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于23 ～28 ℃培养5 天计数。
第3组目的：观察中和剂是否有抑菌性操作：取中和剂4.5ml+ 工作菌液0.5ml ，混匀作用10min ，取混合液0.5ml l+ 稀释液4.5ml ，混匀作用10min 后，用稀释液进行10 倍系列稀释成10 -2、10 -3。
取相应稀释级0.5ml 注皿，各稀释级平行制备2 皿。
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30 ～35 ℃培养3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3 天计数计数。
第4组目的：观察中和产物，或未被完全中和残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。
操作：取消毒剂和中和剂1:1 的混合液4.5ml+ 工作菌液0.5ml ，混匀作用10min ，取混合液0.5ml l+ 稀释液4.5ml ，混匀作用10min 后，用稀释液进行10 倍系列稀释成10-2、10-3。
取相应稀释级0.5ml 注皿，各稀释级平行制备2 皿。
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30 ～35 ℃培养3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30 ～35℃培养3 天计。
第5组目的：作菌落数对照用操作：取稀释液4.5ml+ 工作菌液0.5ml ，混匀作用10min ，取混合液0.5ml l+ 稀释液4.5ml ，混匀作用10min 后，用稀释液进行10 倍系列稀释成10 -2、10 -3。
取相应稀释级0.5ml 注皿，各稀释级平行制备2 皿。
金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置30 ～35 ℃培养3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置30～35℃培养3 天计数。
第6组目的：作为阴性对照用操作：分别取稀释液和中和剂各1.0ml 注入无菌平皿中，各制备2 皿。
4.1.3.3结. 果判断试验结果应符合下列全部条件，判断所选中和剂合格。
第1 组无菌生长，或仅有少数试验菌菌落生长。
第2 组菌落数比第1 组菌落数多，但比第3 、4、5 组菌落数少，且符合下表要求第3、4、5 组有相似菌落数生长，其每组间菌落数误差率不超过15% 。
计算公式如下：湖北普爱药业有限公司验证管理标准文件第1 页共5 页（3 组间菌落平均数- 各组菌落平均数）的绝对值之和误差率＝————————————————————————× 100 ％3×3 组间菌落平均数第6 组无菌生长。
否则，说明试剂有污染，应重新进行试验。
4.1.4.中和剂鉴定试验记录见附录2 。
4.2.定量悬浮试验4.2.1.试验目的由于0.2%的新洁尔灭溶液、0.1% 新洁尔灭溶液、60mg/L 二氧化氯溶液、0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液是通过浸泡或液封消毒，通过定量悬浮试验，确定其消毒效力是否符合要求。
4.2.2.试验操作4.2.2.1配. 制0.2%的新洁尔灭溶液、0.1%新洁尔灭溶液、60mg/L 二氧化氯溶液、0.5% 醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液，操作执行《清洁剂和消毒剂管理》。
将配置好的消毒剂置20 ℃±1℃恒温水浴锅中备用。
4.2.2.2由. 于0.2% 的新洁尔灭溶液、0.1% 新洁尔灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌。
0.5%醋酸氯己定溶液、0.1%醋酸氯己定溶液为高效消毒剂，能杀灭芽孢，故定量悬浮试验用菌枯金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌。
4.2.2.3将. 菌液制备成1 ×10 8~5 ×10 8CFU/ml 的工作菌液，菌液的制备及计数同8.1.2 。
4.2.2.4将. 试管按需要分组排列在试管架上，试验组分3 组（4min 、5min 、6min各一组），并由左向右逐管标明消毒剂、中和剂、10 -1、10 -2。
对照组分1 组，并由左向右逐管标湖北普爱药业有限公司验证管理标准文件第1 页共5 页4.2.2.5向. 个试管加入4.5ml 相应的试剂，标明10 -1、10 -2、10 -3、10 -4。
加入4.5ml 的稀释液。
4.2.2.6吸. 取工作菌液0.5ml 加入标明消毒剂的试管中，对照组加入标明稀释液的试管中，迅速混匀，并开始计时。
4.2.2.7待. 菌液与消毒剂相互作用至8min 、10min 、12min ，吸取菌液和消毒剂混合液0.5ml ，加入标明中和剂的试管中，迅速混匀。
4.2.2.8中. 和作用10min 后，吸取0.5ml 加入标明10-1的试管中，混匀后吸取0.5ml 加入标明10-2试管中（对照组以此类推，对照组直至10 -4）。
4.2.2.9.试验组分别取中和剂管、10-1、10-2管溶液1ml 按平皿法测定存活菌数；对照组取10 -3、10-41ml 按平皿法测定存活菌数。
每管平行制备2 皿。
4.2.2.1金0 黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌芽孢菌用营养琼脂培养基，倒置于30 ～35℃培养3 天计数；白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基，倒置于23～28℃培养5 天计数。
4.2.3.结果计算计算试验组和对照组的活菌浓度（CFU/ml ），并换算为对数值（N ），并按下式计算杀灭对数值:杀灭对数值（KL）＝对照组平均活菌浓度的对数值（NO ）－试验组活菌浓度对数值（NX）4.2.4.可接受标准杀灭对数值（KL）应不低于3~5 个对数单位。