生物芯片在结核分支杆菌抗体检测中的应用
生物芯片在结核分支杆菌抗体检测中的应用
生物芯片在结核分支杆菌抗体检测中的应用目的探讨利用生物芯片技术对结核分支杆菌抗体进行快速检测。
方法利用物芯片标本对2 000例确诊为结核的患者血液进行LAM、16- kDa、38- kDa 信号的检测及结果分析。
结果在2 000例结核患者中，结核LAM、16- kDa、38- kDa指标的检出率分别为47.2%（944/2000）、18.2%（364/2000）、23.2%（464/2000）。
结论生物芯片可用作结核病有效的临床诊断手段。
标签：生物芯片；结核；抗体；检测随着基因技术的快速发展，生物芯片在遗传病及蛋白检测中得到了广泛的应用。
20世纪90年代人们采用分子生物学的原理对结核等进行了相关的研究，并将其做为结核病在细菌学上临床诊断的手段之一，相关的研究也不断的深入。
当前，人们研究中使用的结核抗原主要有三种，包括：①结核致病细菌的细胞壁蛋白，常用的有38- kDa和16- kDa等蛋白；②结核细菌细胞壁的脂多糖抗原，产用的有LAM和TBGL等蛋白；③结核细菌的菌体。
我国现阶段的耐多药性结核病的临床发病率呈逐年增加的事态，结核病的早期诊断就显得尤为重要。
为探讨利用生物芯片技术对结核分支杆菌抗体进行快速检测，该研究以病原体蛋白分子为模型对结合LAM、38- kDa及16- kDa进行检测和分析。
在检测过程中把抗原点在芯片的膜表面，并将其与患者血清样本进行杂交，以CCD 原理对患者样本进行检测。
该研究就2009年1月—2012年12月间收治的2 000例结核患者的血清样本进行了测试，现将结果报道如下。
1 实验部分1.1 患者样品来源实验收集了确诊的结核病患者2000例的血清样本，并用50例医院健康体检的血清样本作为对照。
对受试着进行空腹取血，将抽取的血液以1500 转的速度进行离心后取上清液，并进行相关的样本的检测。
1.2 测试方法将蛋白与样本杂交后对样品进行编号处理，在蛋白芯片的盒窗口中加入 4 滴试剂A将芯片膜湿润。
基因芯片技术及其在结核分枝杆菌检测中的应用
基因芯片技术及其在结核分枝杆菌检测中的应用摘要：基因芯片技术，是指将已知核酸序列的DNA或RNA片段作为探针，在芯片上做成点阵，再与待测标本中的DNA或RN;片段，按照碱基互补配对原则进行杂交，经特定软件的分析处理，获取大量相关基因信息的技术。
本文对该技术及其在结核分枝杆菌检测中的应用进行综述。
关键词：基因芯片技术；结核分枝杆菌结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，主要侵犯肺脏。
在某些经济欠发达地区，许多结核病患者因为得不到全程，合理的救治而产生结核耐药，这使得控制结核病的发生发展成为世界性难题。
目前，临床实验室采用的检测结核分枝杆菌的方法主要有抗酸染色法和细菌培养法等 .2001 年康润田[1]等应用抗酸染色、细菌培养、荧光染色、PCRPCR反向探针膜杂交法，检测59例标本(其中，结合组 43例，对照组 16例)中的结核分支杆菌，比较分析后，阳性率( %) 结果如下图：依上图，可以得出的结论为：抗酸染色法简便、实用、快捷 , 但非结核性分枝杆菌亦可出现阳性结果；细菌培养作为结核病诊断的金标准，虽优于抗酸染色法，但时间比较长，影响早期用药；荧光染色和PC是可供选择的检测方法，却可能出现假阳性和假阴性；而依赖于基因芯片的PC杂交梳法敏感性和特异性均高，是比较准确的检测方法[1]。
1.基因芯片基因芯片 (gene chip) 技术是随着“人类基因组计划” (human genome project,HGP) 的进展而发展起来的 , 它是 21 世纪以来影响最深远的重大科技进展之一 , 是分子生物学、微电子学及物理学综合交叉形成的高新技术。
1.1基因芯片的概念基因是指具有遗传效应的 DNA片段，位于细胞的染色体上。
我们将大量的基因片段按一定的顺序固定在特定的载体上，即为基因芯片，它是专门应用于核酸检测的一种生物芯片。
在一块约1cm2大小的芯片上，可固定数千甚至上万的基因片段，由此形成一个密集的基因方阵，方便对多个基因进行同步检测[2]。
结核杆菌抗体测定结果
结核杆菌抗体测定结果随着亚健康慢慢的侵袭了我们的国家，大家开始诚惶诚恐的注意保重自己的身体了。
锻炼身体，吃东西补身体这些就先不说了。
为了防止疾病悄悄的侵袭我们健康的体魄，基本上大家每一年都做至少一次两次的体检，以此来发现身体的问题，好及时的进行治疗。
那其中就有一项结核杆菌。
接下来就介绍一下结核杆菌抗体的测定结果。
目前，检测结核分枝杆菌的常见方法是直接涂片抗酸染色、痰结核菌常规培养和生物芯片蛋白技术。
与抗酸染色法、痰结核菌常规培养法比较，生物蛋白芯片技术具有检测速度快，敏感性和特异性高的特点。
对诊断结核杆菌感染、动态观察结核病患者的疗效有良好作用。
生物蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌抗体。
较敏感、特异性强又纯化的抗原为细胞壁的脂阿拉伯甘露糖(LAM)、16kDa蛋白和38kDa蛋白。
LAM是构成结核分枝杆菌细胞壁的重要组成成分，其特异性强，能刺激结核感染者产生抗体;16kDa蛋白是有潜力的免疫诊断抗原;38kDa蛋白为脂蛋白。
其与细胞膜或菌体表面的脂肪结构相连。
对小儿来说，只要感染过结核菌，结核抗体试验就呈阳性反应，它只是诊断结核感染的一个参考，不能说一定就是结核病。
国人大多年长儿及成人感染过结核菌，绝大多数人是不发病的。
这和儿科结核菌素试验(PPD)检查一样，也是诊断结核病的一个参考，结核菌素试验是在皮内注射0.1ml的药液，48-72小时看结果，PPD试验也只有强阳性(需配合临床表现和胸片等其他检查)才有意义。
如呈阴性反应，就说明没感染结核菌;弱阳性和阳性反映，也只能说明感染了结核菌，不能确诊为结核病。
临床发现，LAM、38 kDa抗体检出率可能与年龄增加、机体抵抗力或免疫力下降有关。
其结果随结核病患者的年龄增加而升高，因此采用生物蛋白芯片技术联合检测3种结核抗体，可提高其诊断结核的敏感性和特异性，也可作为结核病的血清学诊断方法之一。
研究证实，门诊及住院结核病患者痰抗酸染色阳性患者的LAM、16 kDa、38 kDa抗体检出率均较高，而经过治疗的患者的3种结核抗体检出率均较低。
基因芯片技术及其在结核分枝杆菌菌种鉴定及耐药性检测方面的研究进展
基因芯片技术发展到今天不过短短 十几年时间．虽然还存在这样或那样的 问题，但其在基闪表达谱分析、基凶诊 断、药物筛选及序列分析等诸多领域已 呈现出广阔的应用前景．随着研究的不 断深入和技术的更加完善．基因芯片一 会在生命科学研究领域发挥出其非凡 的作用。尤其在结核病方面，在分枝杆菌 的基阗分型、菌种鉴定和耐药基因的检 测等方面．将发生越来越重要的作用，我 们相信这一天很快就会到来。 ５参考文献 『１］ 朱国萍，解俊．ＤＮＡ芯片一世纪之交的
非接触微机械印刷法ｒ『＇０ｓＰＯＴ和软光刻 复制等。主要有两种基本方法．①原位合 成：“３：②合成点样法［，一］：另外一种方法 是合成点样的改进型。除上述３种方法 外，还有以凝胶块为阵点的芯片或者也 可以通过导电的吡咯单体的聚合形成微 阵列。探针的荧光素标记分为间接标记 和直接标记。间接标记是指将生物素连 接在探针上．利用亲和素对生物素有极 高亲和力的原理．进行分子杂交．然后用 偶联有荧光素或链霉亲和素进行检测。 直接标记是通过荧光素直接与探针核苷 或磷酸戊糖骨架共价结合。或掺入荧光 素一核苷三磷酸以标记探针．杂交后，直 接检测荧光信号ｍ】。（２）样品的制备。包 括样品ＤＮＡ或ＲＮＡ的分离提纯和用 ＰＣＲ技术对靶基因片段扩增以及对靶基 因标记。将样品进行提取、扩增，获取其 中的蛋白质或ＤＮＡ、ＲＮＡ．然后用荧光标 记。由于目前的检测体系还不能检测出 未扩增的标记样品．所以待测样品在杂 交前一般都要进行ＰＣＲ反应。在扩增过 程中对靶ＤＮＡ进行标记。（３）基因探针 的固定化。生物分子探针是与靶分子互 补的序列。基因探针的固定化方法目前 常用的有两种：聚赖氨酸法、醛基一氨基 法。（４）杂交反应。杂交反应是一个复杂 的过程，受很多因素的影响。选择合适的 反应条件使生物分子问的反应处于最适 状况中。（５）芯片信号的检测与分析。样 品中靶基因与固定在芯片上的探针发生 特异性杂交而结合在芯片上的不同点． 荧光素分子受特定波长的激发光照射出 特定波长的荧光，杂交越完全，得到的信 号也就越强。 ２基因芯片技术在结核病研究中的应 用 ２．１ 基因芯片技术用于分枝杆菌菌种鉴 定 ＮＴＭ的分离率全国差异很大［－引。 ２０００年非结核分枝杆菌的分离率平均为 １１．１％，耐药率为９５．９％，耐多药率为 ８３．７％［”Ⅲ。ＮＴＭ具有天然的对抗结核药 物的耐受性。传统的分枝杆菌菌种鉴定 是鉴定结核杆菌复合群和非结核分枝杆 菌，耗时长，步骤繁琐。最近发展起来并 广泛使用的快速培养技术．如
基因芯片技术在分枝杆菌菌种鉴定和结核耐药性检测中的应用及评价
前景 。
关键词 ： 基 因芯 片 ； 分枝杆菌 ； 结核 ； 检测 ； 符合率 ； 利福平 ； 异 烟肼 中 图分 类 号 ： Ｑ ７ ８ ９ 文献标识码 ： Ａ
合 率为 ８ ９ ． ５ （ ４ ７ ０ ／ ５ ２ ５ ） ， Ｋａ ｐ ｐ ａ 值为 ０ ． ７ １ ， Ｐ ＞Ｏ ． ０ ５ ； 两种药物药 敏结果总符合 率为 ９ ２ ． ０ （ ９ ６ ６ ／ ｌ ０ ５ ０ ） 。结 论 基 因 芯 片 技术 能 够 准 确 地 筛 选 出 非 结 核 分 枝 杆 菌 ； 对 利 福 平 和 异 烟 肼 耐 药 性 检 测 与 培 养 法 有 很 好 的符 合 率 和 高 度 一 致
ｂ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ ｄ ｒ ｕ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ＬＩ Ｘｉ ａ ｏ ｆ ｅ ｉ ， ＬＩ ＡＮＧ Ｇｕ ｉ — ｌ ｉ ａ ｎ ｇ ， ＰＵ Ｄｏ ｎ ｇ ， ｅ ｔ ａ １ ． （ １ ． Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ Ｊ Ｂｉ ｏ ｍｅ ｄｉ ｃ ａ ｌ Ｅｎ ｇ ｉ
—
—
２ ０ ４
Ｃｈ ｉ ｎ Ｊ Ｌａ ｂ Ｄｉ ａ ｇ ｎ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ， ２ ０ １ ５， Ｖｏ ｌ １ ９， Ｎｏ ． ２
文章编号 ： １ ０ ０ ７ —４ ２ ８ ７ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ２ —０ ２ ０ ４ ０ ４
基 因芯 片技 术 在 分 枝 杆 菌 菌 种 鉴 定 和 结 核 耐 药性 检测 中 的应 用 及 评 价
基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌
基因芯片检测临床标本结核分枝杆菌目的：评价基因芯片檢测技术在结核病诊断中的效果。
方法：收集我院2012年4月至2013年6月符合标准的432例进行基因芯片耐药基因技术检测，同时进行传统比例法药物敏感试验，后者作为金标准，对两组检测结果进行比较评价。
结果：基因芯片技术检测结核菌异烟肼耐药性的灵敏度和特异度分别为78.13%和89.88%，与金标准差异有统计学意义（P＜0.01）；基因芯片技术检测结核菌利福平耐药性的灵敏度和特异度分别为86.57%和91.95%，与金标准差异有统计学意义（P＜0.01）；基因芯片技术检测结核菌同时耐异烟肼和利福平（耐多药）的灵敏度和特异度分别为70.11%和90.14%，与金标准差异有统计学意义（P＜0.01）。
结论：基因芯片检测技术是一种快捷、简便、灵敏度高的方法，对于结核菌耐药性的检测具有很好的效果，但直接用于临床标本检测结核菌的耐药性不够理想。
标签：基因芯片；结核分枝杆菌；耐药性结核病是一种严重危害人类健康的慢性传染病，曾一度得到控制，但20世纪80年代以来，全球呈现“复燃”的趋势，随着人类免疫缺陷病毒的出现，耐多药菌株的产生，耐药结核病控制工作面临着严峻的挑战。
为了进一步推进耐药结核病防治工作，医务工作者开展了大量基因芯片检测技术的研究，试图以基因芯片快速检测技术替代耗时的传统检测方法。
本研究以传统的比例法药物敏感试验为金标准，评估基因芯片技术检测临床各种标本中结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药性的灵敏度和特异度，了解基因芯片技术在临床的应用价值，从而为耐多药结核病患者提供有效的抗结核治疗方案。
1资料与方法1.1一般资料选取我院2012年4月至2013年6月住院和门诊患者，收集患者留取的各种标本共计1350份，每份标本直接行基因芯片技术检测和罗氏培养，剔除了非结核分枝杆菌（NTM），对基因芯片技术检测阳性同时罗氏培养阳性的标本共计432份纳入进一步研究。
432份阳性标本直接行基因芯片技术耐药基因检测和比例法药物敏感试验，了解结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药情况。
生物蛋白芯片检测结核分枝杆菌抗体对结核病的诊断价值
表 ｌ 结 核 叠 白 芯 片 法 检 测 结 核 病 人 和 对 照 组 的 结 果
的 ，其 与 细 胞 膜 或 者 菌 体 表 现 的脂 肪结
构 相 连 ， 在 培 养 液 中 的 含 量 较 牛 分 枝 其
杆 菌 或 者 卡 介 苗 培 养 液 的 含 量 高 出 １ ０ 倍 以 上 ， 因 此 感 染 后 刺 激 机 体 产 生 的 抗 ３ Ｋ ａ蛋 白 抗 体 含 量 远 高 于 牛 分 枝 ８Ｄ
维普资讯
《 海南 医学 １ ０ ６年第 ｌ 卷 第 １ 期 ２０ ７ １
文 章编号： ０￣６ ０２ ６１ １ ２ １ ３ ３ （ ０） —１ —０ ０ ５ ０ １ ９
临 床 研 究
生物蛋 白芯片检测结核分枝杆菌抗体对结核病 的诊断价值
路 宝 川
（ 疆 哈 密 吐 哈 石 油 医 院 ， 疆 哈 密 新 新
检测 ． 现报 道 如下 ： １ 资料 与 方 法 １ 对象 选择 ． １ ２０ ０ ４年 ８月 ～ ０ ６ ２０ 型生 物 芯 片识 别 仪 进 行 结 果 分析 。
２ 结 果
生 物 蛋 白芯 片技 术 检 测 的 结 核 分 枝
杆 菌 Ｉ 抗 体 的 三 种 抗 原 分 别 为 ：脂 阿
作 造 成 了 不 可 忽 视 的影 响 。我 国 现有 结 １分 钟 ， 待 检 血 清 ３ｕ， 血 清 完 全 渗 抗 体 检 测 ；２ 非 活 动 性 感 染 及 接 受 过 卡 加 ０ｌ待 （）
核 病 人 约 ４０万 例 ， 年 病 死 近 ｌ ５ 每 ３万 人 入 后 ， 时 滴 加 ５ｕ 试剂 Ｂ 待 试 剂 Ｂ完 介 苗 接 种 者 ； ３ 涂 片 、 养 检 测 为 阴 性 及 ０ｌ ． （） 培
结核分枝杆菌蛋白芯片法检测对结核病辅助诊断的应用
ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ ｐ ｏ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ｐ ｒ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ａ ｎ ｄ ｎ ｅ ｇ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｐ ｒ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｃ ｈ ｉ ｐ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗｅ ｒ ｅ ７ ０ ． ３ ％（ １ ２ １ ／ １ ７ ２ ）ａ ｎ ｄ
ｉ ｎ ｃ ｌ ｕ ｄ ｉ ｎ ｇ ２ ７ ９ ｓ ａ ｍ ｐ ｌ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ（ １ ６ ０ ｓ ｅ ｎ ａ ｍ ｓ ａ ｍ ｐ ｌ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｐ ｕ ｌ ｍｏ ｎ ａ ｒ ｙ ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ ｃ ｕ ｌ ｏ ｓ ｉ ｓ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ １ １ ９ ｓ ａ ｍ ｐ ｌ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｗ ｉ ｔ ｈ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ）ａ ｎ ｄ ２ ７ ９ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍ ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ ｙ ｓ ｕ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｓ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｔ ｈ ｏ ｓ ｅ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄ ｂ ｙ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｔ ｈ ｅ ｓ ｅ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ａ ｎ ｄ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｉ ｆ ｃ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｃ ｈ ｉ ｐ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗ ｅ ｒ ｅ ７ ５ ． ６ ％（ １ ２ １ ／ １ ６ ０ ） ａ ｎ ｄ ８ ７ ． ２ ％（ ３ ４ ７／３ ９ ８ ）
蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌IgG抗体结果分析(一)
蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌IgG抗体结果分析(一)〔摘要〕目的：分析结核菌的特异性细胞壁脂阿拉伯甘露糖(LAM)的抗体、16KDa抗体和38KDa 抗体3种特异性抗体的检出率及临床意义。
方法：用PBI型生物芯片识别系统及相应检测试剂盒进行检测。
结果：在检测的434例标本中，全阴占62．7%，3种抗体均为阳性的占4．1%，LAM抗体和38KDa抗体同时阳性占29．5%，LAM抗体单项阳性的占2．8%，16KDa抗体单项阳性占0．9%。
结论：LAM抗体、16KDa抗体和38KDa抗体的检测对结核病的诊断具有重要的临床意义。
〔关键词〕结核杆菌抗体；蛋白芯片技术检测；结果分析结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(Mycobacteruintuberculosis)引起的一种慢性传染病。
目前全球有结核患者2000万人，我国目前有4亿人感染过结核菌，现有的传染性核患者达200万人。
利用蛋白芯片技术，检测抗结核菌的特异性细胞壁脂阿拉伯甘露糖(Lipoarabinomannan,LAM)抗原的抗体、16KDa抗体和38KDa抗体3种对结核杆菌诊断具有特异性的3种抗体，对结核病的诊断及治疗具有重要的临床意义。
１实验方法1．1标本来源2005年6月至2004年6月，本院住院及门诊患者。
1．2仪器及试剂PBI型生物芯片识别系统及相应试剂盒，南京大渊生物工程有限责任公司生产。
1．3操作方法取静脉血2ml，分离血清。
按本产品使用说明书进行操作。
2结果2．1试验结果434例血液标本中有162例标本检出3种抗体中的一种或几种抗体，阳性率为37．3%。
结果见表1。
表1434例结核分枝杆菌IgG抗体检出结果（略）3讨论3．1结核分枝杆菌的LAM是细胞壁重要组成成分结核菌的LAM含量比其他分枝杆菌的含量高许，因此许多研究都认为检测患者血清中的抗LAM抗体是诊断结核病的重要标志之一。
LAM要分布于细胞壁表面，组成成分为碳水化合物。
基因芯片在分枝杆菌菌种鉴定及结核耐药基因检测的诊断价值
基因芯片在分枝杆菌菌种鉴定及结核耐药基因检测的诊断价值【摘要】目的：研究基因芯片检测应用在分枝杆菌菌种的鉴定以及结核耐药基因检测中的临床应用价值。
方法：选取2018年6月~2019年6月我院采集的158例痰涂片检测为阳性的肺结核患者作为研究资料，将采集的患者痰液标本进行基因芯片检测鉴定以及使用全自动分枝杆菌检测系统（BD BACTEC MGIT 960，以下简称“MGIT-960”）培养，并实施耐药性检测分析。
对比不同方法的一致性。
结果：RFP检测中，124例患者样本内通过基因芯片法与培养法结果相同均为115例：以MGIT-960培养为参考，基因芯片法准确定为92.7%、灵敏度为79.3%、特异性为96.8%、Kappa为0.790；INH的检测中，124例患者样本内通过基因芯片法与培养法结果相同均为98例，基因芯片法准确定为88.3%、灵敏度为78.1%、特异性为92.4%、Kappa为0.712。
组间比较差异有显著性（P> 0.05）。
结论：利用基因芯片检测能够精准地鉴定出菌种类型以及耐药基因检测，且与MGIT-960培养具有较好的一致性，具有重要的临床推广价值。
【关键词】基因芯片；分枝杆菌；菌种鉴定；耐药基因；肺结核1 资料和方法1.1 一般资料选取2018年6月~2019年6月我院采集的158例痰涂片检测为阳性的肺结核患者作为研究资料，其中男性患者99例、女性患者59例，患者年龄为16~70岁，平均年龄（46.58±11.24）岁。
研究中患者均符合《肺结核诊断》(WS288-2017)中肺结核临床诊断标准，并排除其他重大疾病；经过病理检测后确诊为肺结核。
1.2 仪器及试剂基因芯片检测平台及分枝杆菌配套试剂生产厂家为北京博奥生物有限公司，其中包含DNA提取液、聚合酶链式反应扩增试剂、RNA杂交缓冲液等；MGIT-960培养设备以及试剂生产厂家为美国碧迪公司1.3 方法使用基因芯片检测16种分枝杆菌，结核耐药基因检测为利福平（RFP）耐药性基因rpo上的6个点位（见表1）以及异烟肼（INH）耐药性基因KatG与inhA 启动子的各1个位点（见表2）。
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随着基 因技术 的快速发展 ，生 物芯片在遗传 病及蛋 白检测 中得到了广泛的应用 。 ２ ｏ世纪 ９ ｏ 年 代人 们采用分子生物学的原 理对结核等进 行了相关 的研究 。并将 其做为结 核病在细菌 学上 临床诊断 的手段 之一 ， 相关 的研究也不 断的深入 。当前 ， 人们研
以上年龄组 。图 １ 为患者各年龄段 阳性 的发 生率 。 从图 １ 中可以
分子为模 型对结合 Ｌ Ａ Ｍ 、 ３ ８ 一ｋ Ｄ ａ 及１ ６ 一ｋ Ｄ ａ 进行检测 和分析 。
在检测过 程中把抗原点在芯 片的膜表面 。并将 其与患者 血清样 本进行杂交 ， 以Ｃ Ｃ Ｄ原理对患 者样 本进行检测 。该研究 就 ２ ０ ０ ９ 年１ 月一２ Ｏ １ ２年 １ ２月 间收治 的 ２ ０ ０ ０例结 核患 者 的血清样 本 进 行了测试 ， 现将结果报道 如下。
【 摘要】目的 探讨利用生物芯片技术对结核分 支杆 菌抗 体进 行快速检测。方法 利用物 芯片标本对 ２ ０ ０ 例 确诊 为结核 的患 者血液进行 Ｌ Ａ Ｍ、 １ ６ 一ｋ Ｄ ａ 、 ３ ８ 一ｋ Ｄ ａ信号的检测及结果分析 。结果 在 ２ ０ ０例结核患者 中， 结核 Ｌ Ａ Ｍ、 １ ６ 一ｋ Ｄ ａ 、 ３ ８ 一ｋ Ｄ ａ指 标 的检 出率分别为 ４ ７ ． ２ ％（ ９ ４ ４ １ ２ ０ ０ ０ ） 、 １ ８ ． ２ ％（ ３ ６ ４ １ ２ ０ ０ ０ ） 、 ２ ３ ． ２ ％（ ４ ４１ ６ ２ ０ ０ ０ ） 。结论 生物芯片可用作结核病有效的临床诊断手段 。 【 关键词】 生物芯 片； 结核 ； 抗体 ； 检 测
影像与检验
Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ＆ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｉ ｇ ｎ Ｍ ｅ ｄ — ｃ ｉ ａ ｌ Ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ 口固 — ■ ■ 譬 誓 一
生物芯片在结核分支杆菌抗体检测中的应用
李宝坤 王艳 杰 赵丹玉 冯 晓帆 １ １ ０ ８ ４ ７ 辽宁中医药大学基础医学 院生物化学与分子生物学教研室 ． 辽 宁沈 阳
【 作者简 介】 李宝坤 （ １ ９ ７ ８ ． ７ 一 ） ， 女， 辽 宁锦 州人 ， 现在辽宁 中医药 大学 基础 医学 院生物化学与分子生物学教研室任职 ，职称是讲 师。本 科毕业 于辽 宁 医学院临床医学专业 ，研究生就读于中国医科大学生物化 学与分 子生
关 的样本 的检测 。
１ ． ２ 测 试 方 法
将蛋 白与样 本杂交后对样 品进行编号处 理 ，在蛋 白芯片 的 盒窗 口中加入 ４滴试剂 Ａ将芯 片膜湿润 。取 １ ０ 样本血 清 ， 摇匀后加入 到芯片窗 口中， 使样本血清渗 透到蛋 白芯 片中 ， 先后 加入 ６滴试剂 Ｂ 、 １ ０滴试剂 Ｃ 、 ６ 滴试 剂 Ｄ。待反应完全 后 ， 放人 仪 器 中进行检测 。
２ 结果
２ ． １ 结核 指 标 检 出率 比 较 ３ 讨 论
图１ 各年龄段患者结核发生率
利用生物蛋 白芯 片对 结核患者的蛋 白制备 进行检测 ．需 要
将几个 蛋 白指 标进 行联 合检测 ．如可 将 Ｌ Ａ Ｍ、 ３ ８ 一Ｋ Ｄ ａ及 １ ６ 一 Ｋ Ｄ ａ等蛋 白 联合 ．联合检测有利 于结核病 阳性蛋 白检测 的准确 率【 ｌ － ３ ］ 。 该研究以 Ｌ Ａ Ｍ蛋 白及 ２种重组 的结 核分枝杆 菌蛋 白抗原 对 患者进行检测 。 其结 果并不一致 ， 这主要是 由于结 核分枝杆 菌 抗 原的特性造成 的， 分支杆菌的抗原种类 多且 十分 的繁杂 ， 在人
表 １为 ２ ０ ０ ０例 患者 的结核 Ｌ Ａ Ｍ、 １ ６ 一ｋ Ｄ ａ 、 ３ ８ 一ｋ Ｄ ａ指标 的 检 出率 ， 从表 １ 中可以看 出 Ｌ ＡＭ检 出率 为 ４ ７ ．ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ２ ％（ ９４ ４ １ ２ ０ ０ ０ ） ， １ ６ 一 ｋ Ｄ ａ检出率为 １ ８ ． ２ ％（ ３ ６ ４ ／ ２ ０ ０ ０ ） 。 ３ ８ 一ｋ Ｄ ａ的检出率为 ２ ３ ． ２ ％（ ４ ４／ ６
１ 实验 部 分
看出 ６ ｏ 岁以上患者 的阳性率最高 ， 其次为 １ ～ ２ ９ 岁年龄组 。
１ ． １ 患者样 品来源
实验 收集 了确诊 的结 核病患者 ２ ０ ０ ０ 例的血清样本 ． 并用 ５ ０
例 医院健康 体检 的血 清样本作为对照。对受 试着进行空腹取血 ，
将抽取 的血液 以 １ ５ ０ ０转 的速度 进行离心后取 上清液 ， 并 进行相
菌体 。 我 国现 阶段的耐多药性结 核病的临床 发病率呈逐 年增加 的 事态 ， 结 核病的早期诊断就显得尤为重要 。为探讨利用生物芯片 技术对结 核分支杆菌抗体进 行快 速检测 ，该研 究 以病原 体蛋 白
２ ． ２ 患者各年龄段 阳性 变化
依据结核患者的年龄 ， 将 其分为 １ ～ ２ ９ 岁、 ３ ０ ～ ５ ９ 岁及 ６ Ｏ 岁
冲 图分类号】Ｒ ４ ５ ０
【 文献标识码】 Ａ
【 文章编号】 １ ６ ７ ４ — ０ ７ ４ ２ （ ２ Ｏ １ ３ ） ０ ８ （ ａ ） 一 ０ １ ８ ３ — ０ ２
２ ０ ０ ０ ） ， 蛋白检出率顺序依此为 Ｌ Ａ Ｍ、 ３ ８ 一ｋ Ｄ ａ 及１ ６ 一ｋ Ｄ ａ 。 其 中结
对于 ５ ０ 例 健康 体 检 的对照 组 患者 ， Ｌ Ａ Ｍ 指标 阳性 的有 ５
例， １ ６ 一ｋ Ｄ ａ 及３ ８ 一ｋ Ｄ ａ 指标均称阴性 。
表 １ 患者 Ｌ Ａ Ｍ、 １ ６ 一ｋ Ｄ ａ 、 ３ ８ 一ｋ Ｄ ａ 指标 的检 出率
究 中使用 的结核抗 原主要有三种 ， 包括 ： ①结核致病 细菌 的细胞 壁 蛋 白， 常用 的有 ３ ８ 一 ｋ Ｄ ａ 和１ ６ 一ｋ Ｄ ａ 等蛋 白 ： ②结 核细菌细胞 壁 的脂 多糖 抗原 ， 产用 的有 Ｌ Ａ Ｍ和 Ｔ Ｂ Ｇ Ｌ 等蛋 白： ③结核细菌 的