结核分枝杆菌的核酸检测
Xpert
Xpert摘要】目的应用结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）对肺外结核患者的非呼吸系统标本中的MTB及其RIF耐药性进行检测，探讨该方法在肺外结核病诊断中的应用价值，为临床上的应用提供参考。
方法鸡西市传染病医院感染结核二科2017年12月至2018年12月的肺外结核病临床诊断患者171例采集所有非呼吸系统标本，脓液、穿刺液和尿便标本50份，脑脊液及胸腹水标本121份，脓液、穿刺液和尿便进行涂片镜检、结核菌固体培养，对培养阳性的标本进行传统药敏检测，脑脊液及胸腹水只给予常规生化检测，所有标本进行Xpert MTB/RIF 检测,分析该方法与传统涂片、固体培养在不同标本检测结核菌的阳性率，及在浆膜腔积液、脑脊液中的病原检出率。
结果与传统涂片镜检和固体培养对比, Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的敏感度显著高于涂片镜检和固体培养，并且该技术检测结核菌及利福平耐药结果报告时间(2 h)比固体培养大大缩短(6～8周)，在穿刺液、脓液、粪便及尿液中Xpert MTB/RIF检测具有明显优势。
结论 Xpert MTB/RIF检测穿刺液、脓液、粪便及尿液中的MTB灵敏度、特异度均较高，而对于浆膜腔积液及脑脊液并不具优势，但其快速、可检测RIF耐药的优点能为临床肺外结核的诊疗提供帮助。
【关键词】肺外结核；结核分枝杆菌／利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）；结核病是威胁人类健康的疾病之一，据世界卫生组织估计，2016年全球约167万例死于结核病，其中肺外结核占10％～42％，由于肺外结核临床症状不典型、临床标本不易获得且含菌量较少，使诊断较为困难。
近年来，结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）作为核酸检测的一种，已有大量临床研究。
该技术自应用以来已逐步证实了其对肺结核的诊断价值，显示出了较高的敏感性和特异性。
核酸质谱检测结核分枝杆菌耐药方法的建立
核酸质谱检测结核分枝杆菌耐药方法的建立余艳芳1赵开顺1屠春林1陈娓2梁海鹰2易清清3【摘要】目的建立核酸飞行质谱(MassARRAY)方法检测结核耐药基因突变检测体系，并评估其检测临床耐药结核病的应用价值。
方法收集2016年1月-2019年6日上海市嘉定区中心医院肺科肺结核有治疗经历患者的菌培养样本55例，其中药物敏感样本10例,45例耐多药样本中，耐异烟(、耐氟)诺酮类(左氧氟沙星、莫西沙星)的样本45例、耐二线类注射药物(阿米卡星、卷曲霉素)的样本23例;供试样本均提取核酸，先用一代测序验证质谱检测的准确性，再根据临床药敏试验结果，验证质谱检测复治样本的有效性,主要评价指标为检测的灵敏度、特异性和一致性。
结果与一代测序相比，该体系检测临床菌株异烟(、氟)诺酮类药物和二线注射类药物的灵敏度分别为100%(37/37)、100%(34/34)和100%(10/10)，特异性分别为100%(18/18)、100%(21/21)和100%(45/45)，总一致率100%，—致性检验Kappa值为1#以最低抑菌浓度法(MIC)为金标准，该体系检测临床菌株异烟(、氟)诺酮类药物和二线注射类药物的灵敏度分别为82.2%(37/45)、75.6%(34/45)和45.5%(10/22)，特异性分别为100%(10/10)、100%(10/10)和100%(33/ 33)，两种方法的总一致率为89.1%，一致性检验Kappa值为0.703#结论质谱检测基因突变与最低抑菌浓度法检测结核菌耐药总体具有一定的一致性,可快速检测结核分枝杆菌的耐药性，有望成为复治患者辅助临床治疗的新手段#【关键词】结核分枝杆菌;核酸飞行质谱;复治患者；耐药Establishment of MassARRAY system for detection of drig resistancc of Mycobacterinm thberculosisYU Yan-fang1，ZHAO Kai-shun1，TU Chun-lin，CHEN Wei2，LIANG Hai-ying，YI Qing-ying31.Departmeoi o Respirators Medicinp；2.Departmeoi o Pulmonology；3.Departmeot o Central Laborators，Shanghai Jiading District Ceneal Hospital Afiliated a Shanghai Universita O MePicioo&Healta Sciences，Shanghai 201800，China'Abstract]Objective To establish the detection system of drug-resistant gene mutation of Mycobacterium tuberculosis(MTB)by MALDAPOF MS(MassARRAY)，td to evaluate its application value in the detection of clinical drug-resistant tuberculosis.Methods Bacte/ai culture of55patients with previously treated were collected eeom puemonaeyiub:ecueosise:ieaim:nipaiinisin ShanghaiJiadingDisieiciC:nieaeHospiiaeeeom sanuaey2016io June2019，including10drug sensitive samples，and45multi drug resistant sampPs.Among them，there were45/ soniazid resistant，fuoroquinolones resistant(Pvoaoxacin，moxi/oxacin)resistant samples，and23second-line in-.eciion eeLiiani(amikacin，capeeomycin)eeLiianiLampeeL.Nuceeicacid waLeyieacied and meaLueed wiih iheeiei generation to ve/fu the accuracy of MALDAPOF MS(MassARRAY)detection.According to the results of clinical drug sensitivity test，the6X6—016$-of mass spectrometry detection of reWeataent samples was verified.The main evaluation indicators were the sensitivity，specificity td consistency of detection.Res p us Compared with the first-generation sequencing，the sensitivity of the system to detect clinical strains isoniazid，fuoroquinolones and second-line injection drugs was100%(37/37)，100%(34/34)td100%(10/10)，the specificity was100%(18/18)，100%(21L21)and100%(45L45)，ihe ioiaeconLi iencywaL100%，and ihekappaeaeueoeiheconLiiencyieLi was1.Taking Minimum Inhibito/Concentration(MIC)as the gold standard，the sensitivity of the system for the detection of clinical strains isoniazid，fuoroquinolones and second-line injection drugs was82.2%(37/45)，75.6% (34/45)and45.5%(10/22)，the specificity was100%(10/10)，100%(10/10)and100%(33/33)，the totaldol:10.3969/j.imn.1009-6663.2021.01.017基金项目:上海市嘉定区卫生健康系统科研项目(No.2017ZD05)；上海市嘉定区科委科研项目(No.JDKW-2019-W03)作者单位)201800上海，上海健康医学院附属嘉定区中心医院1•呼吸内科、2.J市科、3.中心实验室通信作者:屠春林，E-mail:tuchunlin1218@consistency of the too methods was89.1%,and the kappa value of the consistency test was0.703.Conclusion The detection of gene mutabon by MALDVEOF MS(MassARRAY)is consistent with the detection of drug resistance by MIC method in clinical tubercle bacillus(TB)isolates,which can quickly detect the drug resistance of Mycobac-teium tuberculosis,and is expected to become a new method of auxiliay clinical Oeatment for previously treated patients.'Key words]Mycobacterium tuberculosis;MALDVEOF MS(MassARRAY)；retreatment patients(previously treated patieno)&drug resistance2019年世界结核报告显示,2018年全球结核潜伏感染人群占全人群的1/4左右（感染人群高达约17亿），其中结核新发病例近1000万，其中中国新发结核患者86.6万;报告显示我国58%初诊结核病例（细菌学上确认）对利福平耐药，复诊患者（有治疗经历的患者）100%耐利福平，耐药结核病（drug-resistant tuberculosis,DRNB）尤其是耐多药结核病（mu/idrug-resistant tuberculosis,MDR-EB）是严重影响中国乃至世界的公共卫生难题［1］。
结核分枝杆菌的核酸检测
常用技术
传统实时荧光定量PCR检测 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测 环介导等温扩增检测 实时荧光核酸恒温扩增检测 交叉引物恒温扩增检测 基因探针检测
抗酸染色
1.阳性率30% 2.无法区分TB or NTB
每张检查3-5min或更长时间→阳性率低因素之一
1.假阳性率高 2.结合抗酸染色
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
痰标本与处理液 1：2混合
吸取2ml处理样品 到反应盒
系统内自动完成
荧光染色
结核菌需要先培养出来（2-6周） 再加入不同浓度抗菌药物的培养基中继续培养4-8周报告药敏结果
2014年WHO关于结核诊断的标准
肺结核 所有患者，包括儿童，当疑似肺结核并可咳痰时，应送2份痰做 涂片镜检 或 1份痰做Xpert MTB/RIF检测 对于涂阴疑似肺结核患者，应当使用Xpert MTB/RIF 或培养 进行 诊断
结核分枝杆菌核酸及 血清学检测
唐媛媛 潍坊市第二人民医院 检验科
结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
抗酸杆菌涂片镜检：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本
结核分枝杆菌耐药性检测
二、常用的MTB DST检测方法
（二）探针熔解曲线法
采用多色探针熔解曲线法快速检测MTB对RFP、INH、Sm、EMB和FQs 常见耐药决定区域，简便、快速，闭管检测不会交叉污染或造成实验室 污染，只需1台通用的荧光定量PCR仪，无需繁琐的杂交、显色过程，整 个检测过程只需2～3 h，可较全面地了解耐药基因突变信息，辅助诊断 MDR-TB和pre-XDR-TB（指对FQs或至少1种二线注射类药物耐药）；其 缺点是不报告具体的突变类型。
二、常用的MTB DST检测方法
分子DST方法
该方法是基于MTB对抗结核药物耐药分子机制，采用分子生物学技术检 测MTB的耐药基因型。分子DST已成为DR-TB的确诊方法之一，其建立 在基因扩增基础上，快速（2～48 h）、敏感地从MTB分离株或预处理的 临床标本（包括涂阴、培阴的标本）中检出MTB耐药基因突变；分子 DST只在初始阶段需要有较高的生物安全条件，标本消化处理和DNA提 取后标本的传染风险降低。
绝大多数常用的表型DST需要MTB纯培养物，MTB生长慢的特性决定了 该方法需花费较长时间，而且可能因为生长不良或其他微生物污染而导 致结果的不确定性，但该方法可检测多种抗结核药物的耐药性。
二、常用的MTB DST检测方法
（一）传统的DST方法
1.绝对浓度法（absolute concentration method）：将1 mg/ml菌悬液用生理 盐水倍比稀释至10^-2 mg/ml，吸取0.1 ml菌液分别接种于含高、低浓度药 液培养基和对照培养基上，置37 ℃培养4周，按下列方式报告菌落生长情 况：分枝杆菌培养阴性（－）：斜面无菌落生长；分枝杆菌培养阳性 （+）：菌落生长占斜面面积的1/4；分枝杆菌培养阳性（++）：菌落生 长占斜面面积的1/2；分枝杆菌培养阳性（+++）：菌落生长占斜面面积 的3/4；分枝杆菌培养阳性（++++）：菌落生长布满整个斜面；培养基斜 面上菌落数少于20个时，报告菌落数。
牛副结核分枝杆菌核酸检测说明书
牛副结核分枝杆菌核酸检测说明书牛副结核是一种由牛分枝杆菌引起的慢性传染病，它不仅给养牛业带来严重损失，还对人类健康构成潜在威胁。
为了有效地控制和防止牛副结核的扩散，牛副结核分枝杆菌核酸检测成为一种非常重要的检测方法。
牛副结核分枝杆菌核酸检测是一种基于分子生物学原理的快速且高效的检测方法。
它通过对牛体组织或分泌物中的DNA进行检测，能够迅速准确地鉴定是否感染牛副结核分枝杆菌。
与传统的培养方法相比，牛副结核分枝杆菌核酸检测具有更高的灵敏度和特异性，能够检测到病菌更早期的感染，从而有助于尽早采取控制措施。
牛副结核分枝杆菌核酸检测方法操作简便，不需要繁琐的培养过程，大大缩短了检测时间。
在进行检测前，首先需要采集牛体组织样本或分泌物样本，如肺组织、鼻分泌物、尿液等。
接着，将样本中的DNA提取出来，并利用特定的引物和酶进行核酸扩增反应。
最后，通过聚合酶链反应（PCR）技术和电泳分离，可以判断样本中是否存在牛副结核分枝杆菌的核酸。
牛副结核分枝杆菌核酸检测不仅可以用于早期诊断，还可以用于病原学研究和流行病学调查。
它能够明确感染的牛只，从而帮助养牛场控制疫情，预防病原菌传播。
此外，通过对感染牛只的检测，可以了解牛副结核的感染率和传播途径，为防控措施的制定提供科学依据。
在进行牛副结核分枝杆菌核酸检测时，需要注意以下几点：1. 严格按照操作规程进行操作，避免污染和交叉感染；2. 使用高质量的试剂和器材，确保检测的准确性和可靠性；3. 做好样本的保存和传递，防止样本的变质和丢失；4. 结合临床症状和其他检测结果，综合判断牛是否存在副结核感染。
总之，牛副结核分枝杆菌核酸检测作为一种快速准确的检测方法，在牛副结核的防控和诊断中具有重要的意义。
通过广泛应用该检测方法，可以有效减少病原菌的传播和牛副结核的发生，保障养牛业的健康发展，同时也为人类的健康提供了保障。
大家应积极采用该检测方法，共同维护养牛业的可持续发展，为建立绿色、安全的畜牧业做出贡献。
磁珠法在痰液结核分枝杆菌核酸检测中的应用研究
磁珠法在痰液结核分枝杆菌核酸检测中的应用研究目的应用配体包被磁珠技术富集痰液中的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）以用于实时荧光定量PCR检测。
方法采用磁珠法富集提取107例临床痰液样本中结核分枝杆菌的DNA，采用ABI 7500 Real-time PCR仪进行核酸定量分析，结果和传统提取方法进行比较。
结果采用磁珠法富集提取的结核分枝杆菌DNA（阳性率66.36%）高于普通DNA抽提方法（阳性率62.62%），也高于罗氏培养（阳性率38.32%），明显高于痰涂片结果（阳性率31.78%）。
结论磁珠法对提高结核分枝杆菌的核酸定量检测阳性率有积极作用，特别对他其他方法检测为弱阳性或者假阴性的病人效果显著。
标签：配体包被磁珠；结核分枝杆菌；核酸第一简介：张时良，男，（1980-05），汉族，籍贯：江苏宜兴，学历：本科，职称：主管技师，研究方向：分子生物学临床工作。
通讯作者：周红，Email：hongzhou0123@。
结核病（Tuberculosis，TB）是当今世界范围内最为重要的传染性疾病之一。
我国是结核病高负担国家之一，患病人群数量巨大，面临着严峻的结核病流行形势[1-2]，目前缺乏有效的早期、快速、特异的诊断手段。
因此，加强结核病的实验室诊断技术研究，对及时发现确诊疾病、有效治疗控制传染源、从而控制结核病的流行具有极为重要的意义。
近年来，随着分子实验诊断技术的不断发展，聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）技术以其简单快速，成本低廉，灵敏度和特异度高等特点而被广泛应用于传染病的诊断。
相比于传统的临床诊断方法，分子实验诊断技术可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷，能够通过应用PCR技术而缩短临床标本（呼吸系统标本和肺外标本）中检测和鉴别结核分枝杆菌的时间，提高结核分枝杆菌的检出率，从而提高病人的发现率[3-4]。
目前国内一般都是通过优化核酸提取这一过程来提高PCR的阳性率[5]，国外已经开始通过配体包被磁珠技术（Ligand-coated magnetic bead technology）来富集痰液中的结核分枝杆菌[6，7]，以提高痰涂片的阳性率。
结核病的分子检测
• 可自动孵育、自动检测、 自动报告阳性或阴性结果
• 培养周期42天，MGIT系 统平均报阳时间4-11天
比固体培养方法更为敏感－提高10%的阳性检出率 可进行后续的菌型鉴定和药敏实验 相较固体培养更短的报告时间： 培养：10天 vs 28-42天 药敏：11天 vs 28天 缺陷：液体培养污染率更高。
自动染片机和显微扫描仪提高 工作效率和结果的准确性
常用培养基：罗氏培养基，37℃培养 培养周期：56天 结果观察： 培养第3天、第7天各观察1次，以后每周观 察一次。发现有菌生长，立刻进行抗酸染色 菌落特征：典型菌落为干燥、坚硬、表面呈 颗粒状，乳酪色或淡黄色，形似菜花样。
•准确，灵敏度略高于涂片法； •可以鉴别死菌与活菌； 优点 •可进一步进行菌种鉴定和药敏试验 •历史悠久，使用广泛（１９００年从 •Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ鸡蛋培养基开始使用）
临床问题及需求
临床问题
结核病疫情严重
结核病疫情严重，中国的结核病疫情全球 位列第二位，仅次于印度。
结核病的现有诊断水平低下
传统的痰涂片抗酸染色阳性率仅16%，痰 结核分枝杆菌培养阳性率30%-40%，但是 耗时6-8周，时间太长！
新型的诊断工具缺乏 分子生物学诊断技术比如普通DNA、RNA分 子检测技术已经应用于临床，但存在污染， 联合现有的DNA/RNA诊断技术快速诊断阳 性率仅40%，且无法行耐药检测。 17
上海市结核病分级诊疗文件
21
第一类：结核杆菌种特异性的分子检测 • 实时荧光定量PCR检测DNA（IS6110、HSP65、rpoB等） • 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测（Xpert MTB/RIF） • 环介导等温扩增法(LAMP） • 实时荧光核酸恒温扩增检测技术 • 交叉引物扩增技术（CPA） • 线性探针技术
结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血
结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定对肺结核患者诊断的价值研究发布时间：2022-12-19T07:39:21.433Z 来源：《健康世界》2022年21期作者：鲁成娇1 杨艳1 鲁成志2 李彦娴1 彭晓云2 肖明英2 [导读] 目的：分析比较结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定对肺结核患者的临床诊断价值鲁成娇1 杨艳1 鲁成志2 李彦娴1 彭晓云2 肖明英21.保山中医药高等专科学校临床医学院云南保山 6780002.保山市人民医院感染科云南保山 678000摘要：目的：分析比较结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定对肺结核患者的临床诊断价值。
方法：回顾性分析2019年1月-12月期间在保山市人民医院分院感染科收治的结核病患者临床资料，比较痰涂片检测肺结核患者对应四种检查方法的诊断效能。
结果：肺结核患者痰涂片检测与结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）、结核分枝杆菌IgG、IgM检测、结核DNA核酸测定、血沉（ESR）测定的灵敏度分别为92.6%（25/27）、63.3%（19/30）、68.9%（20/29）、81.6%（31/38），特异度分别为：22.9%（14/61）、73.6%（39/53）、73.4%（47/64）、36.5%（27/74）。
结论：结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）灵敏度明显高于其他检测方法，配合该病临床表现能够提升临床应用价值，该方法可用于肺结核诊断的重要辅助手段。
关键词：结核感染T细胞斑点实验（T-SPOT.TB）；结核分枝杆菌IgG、IgM检测；结核DNA核酸测定；血沉（ESR）；痰涂片抗酸染色技术；肺结核结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，曾在世界范围内广泛传播，被称作“白色瘟疫”，我国是人口大国，结核病发病率高居世界前列。
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100菌条/ml
全自动、同时检测利福 67℃恒温扩增，扩增
平耐药基因、特异性高，时间短，特异性高，生
生物安全性高
物安全性高
2.5小时
1000～10000菌条/ml
适合大批量筛查，低费 用
最多一次同时检测八个 标本用量较少，除痰标 假阳性，易污染，需专
样本
本以外的标本需进一步 业人员操作
认证
样本类型（一）
IFN-γ释放试验（T-SPOT.TB）： 肝素锂或肝素钠抗凝血
标本留取标准
1.痰标本：
（1）可疑肺结核患者：初诊病人应收集3份标本（当日 即时、夜间和次日晨痰），治疗中或随访病人应按期留 取2份痰标本（晨痰、夜间痰），体积3～5ml，盛于广口 和具有螺旋盖子的痰瓶中。
耐药结核 ✓当患者具有耐药结核的风险，或者合并HIV感染，或者病情严重 时，应使用Xpert MTB/RIF做初始诊断；
肺外结核 ✓所有患者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本 进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初 始诊断
GeneXpert
Xpert MTB/RIF
实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进 行定量分析的办法。
目的基因片段 方法
时间 检测敏感度 优点
缺点
Xpert MTB/RIF
rpoB 半巢式实时荧光PCR
TB-LAMP
gryB及IS6110 环介导恒温扩增
结核杆菌DNA
IS6110 实时荧光定量PCR
2小时
1小时
131菌条/ml
▪ INH单耐药的患者通常不会考虑立即改变治疗方案，与此相反，对RIF单耐药的患者，无 论INH是否耐药，都会采取与耐多药患者相同的治疗方案1。
▪ 约9Байду номын сангаас%利福平耐药的结核患者同时异烟肼耐药，也就是耐多药结核患者2。
1. Sven O. Friedrich et al,. Suitability of Xpert MTB/RIF and Genotype MTBDRplus for Patient Selection for a Tuberculosis Clinical Trial. Journal of Clinical Microbiology. 2011 (49):2827-2831.
2. Xichao Ou et al. A feasibility study of Xpert MTB/RIF test at the peripheral level laboratory in China. International Journal of Infectious Diseases. 2015 (31):41-46.
常用技术
传统实时荧光定量PCR检测 半巢式全自动实时荧光定量PCR检测 环介导等温扩增检测 实时荧光核酸恒温扩增检测 交叉引物恒温扩增检测 基因探针检测
抗酸染色
1.阳性率30% 2.无法区分TB or NTB
每张检查3-5min或更长时间→阳性率低因素之一
1.假阳性率高 2.结合抗酸染色
荧光染色
结核菌需要先培养出来（2-6周） 再加入不同浓度抗菌药物的培养基中继续培养4-8周报告药敏结果
2014年WHO关于结核诊断的标准
肺结核 ✓所有患者，包括儿童，当疑似肺结核并可咳痰时，应送2份痰做 涂片镜检 或 1份痰做Xpert MTB/RIF检测 ✓对于涂阴疑似肺结核患者，应当使用Xpert MTB/RIF 或培养 进行 诊断
结核分枝杆菌核酸检测
增加分子生物学阳性可以作为确诊标
准，及强调病原学检查的重要性。
3.4.2 分子生物学检查 结核分枝杆菌核酸检测阳性。 4 诊断原则 肺结核的诊断是以病原学（包括细菌学、 分子生物学）检查为主，结合流行病史、 临床表现、胸部影像、相关的辅助检查 及鉴别诊断等，进行综合分析做出诊断。 以病原学、病理学结果作为确诊依据。 5.3 确诊病例 结核分枝杆菌核酸检测阳性，及胸部影 像学检查支持即可确诊。
标本自动 清洗过滤
超声裂解 DNA提纯
DNA和PCR反应 试剂混合
半巢式实时荧光 定量核酸扩增检
测
打印检 测报告
将反应盒放入检测模块 （手工操作完成）
获得检测结果时间：1小时50分钟
MTB/RIF检测对MDR-TB的防控
“结核+利福平耐药”对多耐结核控制产生的效果最 为显著。即便补充异烟肼耐药，能提升的效果有限。
结核分枝杆菌核酸及 血清学检测
唐媛媛 潍坊市第二人民医院 检验科
结核分枝杆菌核酸检测是检测结核分枝杆菌特异的核酸 序列；
阳性结果提示该检测结核分枝杆菌核酸的存在，在排除 核酸污染的情况下，可确定该检测标本中存在结核分枝 杆菌。
结核分枝杆菌核酸检测较常采用的目的片段有16SrRNA、 IS6110、MBP64、rpoB、hsp65等
一种半巢式实时荧光PCR体外诊 断技术，可以检测结核分枝杆菌以 及利福平耐药性；
针对rpoB基因81bp利福平耐药 核心区间（RRDR）设计引物、探针 。5个探针结合到野生型，而不是突 变体目标。每个探针用不同的荧光 染料标记，允许同时检测。
痰标本与处理液 1：2混合
吸取2ml处理样品 到反应盒
系统内自动完成
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液（GeneXpert除外）、病理切 片
样本类型（二）
分枝杆菌菌种鉴定 临床分枝杆菌分离培养物
结核分枝杆菌药物敏感性试验： 临床分离结核杆菌纯培养物
结核抗体的检测： 血清
环介导等温扩增仪（TB-LAMP）
体外定性检测结核分枝杆菌复合群； 在恒温条件下进行基因扩增反应； 4种引物识别6个区域，特异性高； 扩增反应效率高，67℃，40min。 主要优点在于对实验室仪器的依赖程度较 小，而且试剂成本较低。
传统实时荧光定量PCR检测
目的：定量检测人标本中的结核分枝杆菌核酸 原理：PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累计
抗酸杆菌涂片镜检：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本
分枝杆菌分离培养：
痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺 活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液 、创伤标本、大便标本、血液
结核分枝杆菌的核酸检测：