血小板抗体检测试剂盒(固相凝集法)使用操作说明
血清抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
血清抗体(固相凝集法)检测标准操作规程1. 引言血清抗体(固相凝集法)检测是一种常用的免疫学检测方法，用于检测体内是否存在特定病原微生物抗体。
本文档旨在规范血清抗体(固相凝集法)检测的操作流程，确保准确性和可重复性。
2. 实验材料- 试剂：包括抗原和抗人免疫球蛋白球（用于制备抗人血清）。
- 血清样本：待检测的血清样本。
- 试验器材：包括试管、酶标板、孵育箱、离心机等。
3. 实验步骤3.1 血清样本的准备1. 将待检测的血清样本离心10分钟，取清晰的上清液进行检测。
2. 将血清样本标记好编号，并在记录表上记录相应信息。
3.2 抗原制备1. 根据需要的抗原种类和浓度，制备抗原溶液。
2. 将制备好的抗原标注好名称、浓度和保存日期，并储存在冰箱中。
3.3 反应系统的制备1. 将所需的抗原溶液和血清样本放在冰箱中保持冷藏状态。
2. 提前准备好所需的试管、酶标板等实验器材。
3.4 实验操作1. 取出冷藏的抗原溶液和血清样本，放在室温下预热10分钟。
2. 将抗原溶液、血清样本和洗涤缓冲液按照比例加入酶标板中，轻轻摇晃使其充分混合。
3. 孵育酶标板在孵育箱中，温度设定为37℃，时间为45分钟。
4. 定时结束后，将孵育完的酶标板放在离心机中，离心5分钟，倒掉上清液。
5. 加入洗涤缓冲液，轻轻拍打酶标板底部以去除未结合的物质，倒掉上清液。
6. 重复洗涤步骤3次后，倒掉上清液，轻轻用纸巾吸干酶标板底部的液体。
7. 加入显色液，孵育酶标板在孵育箱中，温度设定为37℃，时间为30分钟。
8. 定时结束后，加入终止液，停止显色反应。
9. 使用酶标仪读取吸光度，记录各孔的OD值。
4. 数据处理与结果判读1. 根据各孔的OD值计算平均OD值和标准差。
2. 利用设定的标准曲线，计算待测样本的抗体浓度。
3. 根据抗体浓度和设定的标准，判读样本的阳性与阴性结论。
4. 记录数据并生成报告。
5. 安全注意事项1. 实验操作时需戴上实验手套，严禁食用。
血小板相关抗体IgMelisa试剂盒,人ELISA试剂盒
血小板相关抗体IgMelisa试剂盒，人ELISA试剂盒血小板相关抗体IgMelisa试剂盒，人ELISA试剂盒Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置标准品稀释液：1.5ml×1瓶酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）用途：科研实验等领域科学研究，不得用于临床诊断。
供应商：上海樊克生物有限公司血小板相关抗体IgMelisa试剂盒，人ELISA试剂盒操作步骤标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl?，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到?第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各?取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul?，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标?准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别?加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度?分别为1800ng/L，1200ng/L?，600ng/L，300ng/L，?150ng/L）。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在?酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）?。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍?干。
血小板试剂盒操作流程
血小板抗体筛检和交叉配型试剂盒操作流程血小板抗体筛检：将机采三人份新鲜O型血小板血浆（注意：72小时内采集，室温震荡保存，无聚集。
）混合均匀，用生理盐水调整血小板浓度为100-200*109个/L，将血小板加入反应板孔中央，每孔50µl（注意：移液器枪尖不要触碰反应板底部和周边）。
50g离心5min用洗液（蒸馏水30倍稀释）洗涤反应板3次，每次静止放置半分钟，以除去未与反应板上包被的血小板单克隆抗体结合的血小板（注意：洗液要逐滴加入并轻轻甩去沾干不能拍板）。
向每个反应孔中加入2滴（100µl）低离子介质，并向相应的孔中分别加入1滴（50µl）待检患者血清（血浆）、阴性、阳性对照。
37℃水浴孵育30min用洗液洗涤反应板5次（方法同上）立即加入1滴（50µl）抗人IgG试剂和1滴（50µl）指示细胞，振动混匀。
200g离心5min肉眼判读结果血小板交叉配型：将机采三人份新鲜O型血小板血浆混合均匀，用生理盐水调整血小板浓度为100-200*109个/L。
同时将供者和受者富含血小板血浆3000rpm 5min离心，使血浆和血小板分离，移出上层血浆至另一试管中备用，用生理盐水将血小板调整至上述浓度。
将血小板分别加入标记好的反应板孔中央，每孔50µl（注意：血小板为72小时内采集，室温震荡保存，无聚集；移液器枪尖不要触碰反应板底部和周边）。
50g离心5min用洗液（蒸馏水30倍稀释）洗涤反应板3次，每次静止放置半分钟，以除去未与反应板上包被的血小板单克隆抗体结合的血小板（注意：洗液要逐滴加入并轻轻甩去沾干不能拍板）。
向每个反应孔中加入2滴（100µl）低离子介质，并向相应的孔中分别加入1滴（50µl）供受者血浆阴性、阳性对照。
37℃水浴孵育30min用洗液洗涤反应板5次（方法同上）立即加入1滴（50µl）抗人IgG试剂和1滴（50µl）指示细胞，振动混匀。
(固相凝集法)
血小板单层
阴性
2.3 药物依赖性抗体检测
血小板筛检（谱）细胞 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 （已包被血小板单抗）
药物 （终浓度100U/ml) 血小板单层
阴性
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞） 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
反应板 （已包被血小板单抗）
阴性
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞） 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
2.2.2 自身游离抗体检测
患者血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 （已包被血小板单抗）
反应板 （已包被血小板单抗）
血小板单层
阴性
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞） 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
3 交叉配型
供血者血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
受血者血清/血浆 50μl/孔 阳性 水浴30min 洗涤5次
反应板 （已包被血小板单抗）
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞） 抗人IgG
各50μl/孔 200g,5min离心
阳性反应 200g,5min离心
阴性反应
2.4 HLA-I类群反应性抗体(PRA)检测
O型健康人血小板 50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
人血小板活化因子(PAF)分析检测ELISA试剂盒使用说明书
人血小板活化因子（PAF）分析检测ELISA试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用Purpose目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中转化生长因子（PAF）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血小板活化因子（PAF）水平。
用纯化的转化生长因子（PAF）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子（PAF），再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的转化生长因子（PAF）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人血小板活化因子（PAF）浓度。
试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）塑料膜板盖1块半块标准品：100ng/ml 1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）标准品稀释缓冲液1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）生物素标记的抗OT抗体1瓶（8.0ml）1瓶（4.0ml）亲和链酶素-HRP 1瓶（12ml）1瓶（5ml）洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存标准品：45μmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存自备材料：1. 蒸馏水。
血小板抗体(固相凝集法)检测标准操作规程
1目的为规范血小板抗体检测操作，保证检测的有效性及临床用血的安全性，依据《输血实验室管理规程》4.19.4条款的要求制定本规程。
2适用范围适用于医疗机构输血科（血库）进行血小板抗体检测。
3职责医疗机构输血科(血库)技术人员负责血小板抗体的检测。
4原理微孔板反应孔中包被有抗血小板单克隆抗体（针对血小板表面糖蛋白IIb/IIIa、Ib/V/IX），血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部表面形成血小板单层。
加入受检血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体和反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗IgG及IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗IgG的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
5设备与材料5.1材料血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）。
5.2设备平板离心机、血型血清学专用离心机、电热恒温水浴箱。
6检测环境室温应控制在18-25℃，湿度应控制在30%-70%。
7操作步骤7.1血标本采集及处理7.1.1检测样本准备7.1.1.1采集患者静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）或枸橼酸钠抗凝，经3000rpm离心5分钟，分离出血浆进行检测。
7.1.1.2如果患者血标本为如果患者血标本为不抗凝血，经3000rpm离心5-10分钟，取上清进行检测。
7.1.1.3如果患者血标本为血浆（血清），3000转离心5-10分钟。
7.1.2血标本处理样本4℃可保存7天。
若需长期保存，应离心后分离血清或血浆，－20摄氏度冻存。
7.2平衡室温取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。
7.3制备血小板悬液7.3.1商品化的冻干血小板稀释后直接使用。
医院检验中心血小板抗体测定PAIgGPAIgMPAIgA操作规程
医院检验中心血小板抗体测定（PAIgG，PAIgM，PAIgA）操作规程
（1）试剂
1）鼠抗人IgG多抗 cat NO 0279 蒸馏水复溶后分装，每支50ul，置-30℃贮存
2）鼠抗人IgM多抗 cat NO 0285 同上3）鼠抗人IgA多抗 cat NO 0278 同上4）FITC羊抗鼠荧光单抗 cat NO 0279 按说明书复溶，置-30℃贮存
（2）方法
血小板固定：取富含血小板的血浆0.4ml加1mlTEN缓冲液中。
再取上述稀释血浆0.4ml加等量2%的多聚
甲醛，室温固定15分钟。
洗涤：在已固定的血小板试管中加2mlTEN缓冲液，3000转/分，离心5分钟，洗涤2次。
弃上清液，加TEN
缓冲液0.4ml。
测定：测定管中分别加入IgG、IgM、IgA单抗50ul，将固定血小板50ul分别加入测定管和对照管。
室温
20分钟，用2mlTEN 3000转/分离心5分钟洗涤一
次后，再加0.6mlTEN。
上机：用各自的阴性对照。
阴性对照值在1.0左右，计数1万个血小板。
( 3 ) 参考范围
PAIgG 6.3-20.3%
PAIgM 2.6-14.5%。
抗体试剂盒使用方法
抗体试剂盒使用方法1. 引言抗体试剂盒是一种用于检测和定量分析特定抗体的工具，广泛应用于生命科学研究和临床诊断。
本文将详细介绍抗体试剂盒的使用方法，包括准备实验材料、样品处理、实验步骤、结果解读等内容。
2. 准备实验材料在开始实验之前，需要准备以下实验材料： - 抗体试剂盒：包括抗体、底物、缓冲液等。
- 样品：可以是血液、组织、细胞等。
- 实验仪器：如离心机、洗板机、显微镜等。
- 实验耗材：如离心管、试管、96孔板等。
- 实验液体：如去离子水、PBS缓冲液等。
3. 样品处理在进行抗体试剂盒实验之前，需要对样品进行处理。
处理步骤可以根据具体实验目的进行调整，但通常包括以下几个常见步骤： 1. 收集样品：根据实验需要，选择适当的样本收集方式。
例如，如果是血液样品，可以通过静脉采血或指尖采血收集。
2. 样品保存：根据实验要求，将样品储存于适当的条件下，如低温冷藏或冷冻保存。
3. 样品处理：根据实验需求，对样品进行处理，如离心、裂解、稀释等。
4. 实验步骤抗体试剂盒的使用方法通常包括以下几个步骤： 1. 准备工作台：清洁工作台，并准备所需实验仪器和试剂。
2. 样品加入：将待测样品加入到96孔板中。
根据实验要求，可以设置空白对照组和阴性对照组。
3. 加入抗体：向每个孔中加入适量的抗体试剂。
注意避免交叉污染。
4. 孵育反应：根据试剂盒说明书，设定适当的孵育时间和温度。
5. 洗涤步骤：用洗涤缓冲液洗涤孔板，去除未结合的物质。
6. 底物加入：加入底物溶液，在适当条件下进行反应。
7. 反应停止：停止底物反应，并记录反应时间。
8. 测量结果：使用合适的仪器，如酶标仪或荧光仪，测量吸光度或荧光强度。
9. 数据分析：根据试剂盒说明书提供的方法，对实验结果进行定量分析。
5. 结果解读抗体试剂盒的实验结果通常以定量的方式呈现。
根据试剂盒说明书提供的标准曲线或参考值范围，可以对样品中目标抗体的含量进行定量分析。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）使用操作方法
1、平衡室温
取出血小板抗体检测试剂盒（固相凝集法）、血小板抗体检测用指示红细胞（固相凝集法）、血小板抗体筛检细胞（冻干粉）放在室温中平衡至室温。
2、检测样本准备
将血浆（血清）3000转离心5-10分钟。
3、配制浓缩洗涤液
将浓缩洗涤液以1：24比例与蒸馏水混合（满瓶20ML浓缩洗涤液兑480ML蒸馏水）。
4、配制血小板抗体筛检细胞（冻干粉）
将冻干粉依比例与生理盐水混合（冻干粉0.5ML与0.5ML生理盐水混合），混合后放置5分钟，使用前轻轻摇匀。
5、标识
由包装内取出一条反应板，平衡至室温。
标记阳性对照、阴性对照、检测样本序号。
6、加血小板
向反应板孔中各加入1滴（约50µl）混匀的血小板悬液，轻摇反应板约10秒钟。
7、固着
将反应板用平板离心机以50g离心5分钟（专用血小板离心机用程序1）。
8、洗涤
将反应板用洗涤液洗3至4次，洗涤过程中轻摇微孔板，然后再轻轻甩掉洗涤液。
最后一次洗涤后将残余液体蘸干。
9、加样
先向各孔中加入2滴（100µl）低离子强度溶液，再分别滴加1滴（50µl）阳性对照、阴性对照、检测样本。
10、孵育
将反应孔用封口胶纸封好，轻摇混匀后置湿盒中37℃孵育30分钟（或气浴孵育35至40分钟）。
11、洗涤(同步骤8)反复洗涤5至6次。
12、加指示物
立即向上述各孔加入1滴抗人IgG（50µl）和1滴（50µl）混匀的血小板抗体检测用指示红细胞悬液，轻轻振荡混匀。
13、离心
将反应板以200g离心5分钟（专用血小板离心机用程序2）。
14、结果判定
观察并记录实验结果。
阳性反应为指示红细胞黏附在反应孔底部表面，而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央，弱阳性反应格局介于两者之间。