酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素评价
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素评价发布时间：2022-08-23T13:46:05.087Z 来源：《医师在线》2022年4月8期作者：冯霞[导读]酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素评价冯霞（黔南州人民医院；贵州黔南州558000）【摘要】目的：评价酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素，探讨应对措施。
方法：180份经酶联免疫吸附法检测乙肝五项的血液样本均由黔南州人民医院检验科提供，并在2020年7月-2022年3月的时间范围内收集样本，其中给予抗凝处理的90份设定为实验组，未给予抗凝处理的90份设定为对照组，两组比较检测结果存在的差异。
结果：实验组血液样本阳性率与对照组相比更高，且两组的差异得到P＜0.05，即具备统计学意义。
结论：乙肝五项检测采用酶联免疫吸附法进行时血清状态会影响检测结果，检测前采取正确处理措施有利于保证临床检验质量。
【关键词】检测结果；影响因素；乙肝五项；酶联免疫吸附法乙肝是临床对乙型病毒性肝炎的简称，主要是由乙型肝炎病毒（HBV）感染而引起的可传染性肝炎。
乙肝发病隐匿性较强，初期诊断难度较大，但随着病情发展，患者开始有恶心、肝部肿大、腹胀、肝脏疼痛、乏力等症状表现，临床方面主要选择乙肝五项检测对患者病情严重与否、传染力强弱与否进行判断。
酶联免疫吸附法的特点和优势在于灵敏度、特异性高，由于操作过程具有一定的复杂性，再加上繁琐的操作步骤，因此很多环节会因为外界因素或人为因素导致最后的检测结果出现误差，并有假阴性、假阳性的情况[1]。
本文选择黔南州人民医院检验科经酶联免疫吸附法检测乙肝五项的血液样本180份进行分组研究，详见如下报告：1 资料与方法1.1一般资料收集血液样本时间：2020年7月-2022年3月；血液样本来源：黔南州人民医院检验科。
180份经酶联免疫吸附法检测乙肝五项的血液样本中90例实验组予以抗凝处理，48例为男性，42例为女性，最小年龄26岁，最大年龄58岁，年龄平均值（43.8±2.6）岁；90例对照组未予以抗凝处理，47例为男性，43例为女性，最小年龄27岁，最大年龄59岁，年龄平均值（43.6±2.5）岁。
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析
酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析摘要]目的：探讨酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果中的常见影响因素。
方法：随机选择2014年5月至2015年6月来我院门诊或者病房进行乙肝五项检测的患者160名，将所有患者的血标本分为4个组，抗凝组与不抗凝组，静置水浴时间20分钟组与静置水浴时间40分钟组，每组各40个标本，都对其进行酶联免疫吸附法和胶体金标法检测，比较各组标本的检测结果。
结果：抗凝组与不抗凝组比较，不抗凝组的阳性率低于抗凝组，且差异明显，具有统计学意义（P<0.05），静置水浴40分钟组的阳性率明显低于静置水浴20分钟组，且差异明显，具有统计学意义（P<0.05）。
结论：标本的血清状态及静置时间的长短可以影响酶联免疫吸附法检测乙肝五项的结果，检测过程应严格按照标准步骤进行，以保证检测结果的准确性。
关键词:酶联免疫吸附法；乙肝五项；影响因素【中图分类号】R4【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0430-02 乙肝五项是医院常做的检测项目，其表面抗原HbsAg是患者感染乙肝病毒的标志物，是最常用的感染指标[1-2]。
ELISA（酶联免疫吸附法）是临床实验室常用的检测手段，常用于检测血标本，具有操作简单、特异性强、灵敏度高的特点[3-4]。
但是在检测过程中，由于工作人员自身或外界原因，容易在加样、孵育、洗板、显色、终止等各个环节的细节出现问题，从而导致最后检测结果的假阳性，影响结果的准确性[5]。
因此分析其影响因素并采取相应的处理措施显得十分必要。
本文就标本的血清状态及静置时间两个方面在ELISA检测乙肝五项中的影响进行分析，旨在总结经验避免再次出现问题，内容如下。
1资料与方法1.1一般资料选择2014年5月至2015年6月来我院门诊或者病房进行乙肝五项检测的患者160名，其中男性89名，女性71名，平均年龄在30.17±4.95岁。
所有标本在检测前的一般情况无明显差异，无统计学意义（P>0.05），可以进行研究。
酶标仪检测乙肝五项的影响因素
酶标仪检测乙肝五项的影响因素目前，随着医学检验技术的不断发展，酶标仪各种仪器逐步进入实验室，给检验工作带来方便、快速、准确的同时，也会由于种种原因，使检测结果出现假阳性或假阴性的情况。
根据长时间的观察，我们总结以下六种因素可能会影响乙肝五项的检测结果。
１用血清和血浆测乙肝五项对结果的影响过去，我们常用血清标本测乙肝五项，但分离血清至少需要２０～３０ｍｉｎ，而采用肝素抗凝血浆可立即离心并直接上机测定。
随着酶标分析仪的发展，真空抗凝管因不用分离血清可以直接上机测试，并可以快速离心，使检验更快捷、方便。
为了探讨肝素抗凝血浆用于检测乙肝五项的可行性，我们对肝素抗凝血浆与血清标本测定结果作了以下比较.１．１资料与方法１．１．１一般资料正常人３００例均为健康体检的学生。
将每份血标本分作两份，１份不用抗凝剂，另一份则用抗凝剂。
患者均为确诊肝病患者，如三阳或乙肝携带者或其他疾病患者。
１．１．２试剂与仪器试剂上海科华生物技术有限公司（９６人份），质控血清为黑龙江省临检中心提供（１．０ｎｇ／Ｌ）；酶标仪为西班牙生产。
１．１．３方法ＥＬＩＳＡ法。
血浆：抗凝剂；肝素钠，每１００Ｕ肝素钠溶液可与２．０～３．０ｍｌ血液混匀，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心５～１０ｍｉｎ；血清：将标本溶于，３０００ｒ／ｍｉｎ，离心５～１０ｍｉｎ。
结果见表１、表２。
１．２结果采用血浆标本测定乙肝五项要优于血清标本（Ｐ＜０．０１），同时还具有快捷、准确之特点，值得临床推广应用。
在ＥＬＩＳＡ测定过程中，用血清当离心不好时，可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，血清中残留的纤维蛋白丝或洗涤液析出的结晶易使洗板机针孔处于全阻塞或半阻塞状态，造成未结和标记酶洗脱不测底，导致“花板”，以致出现假阳性或假阴性。
所以，经过上述试验对比乙肝五项测定用血浆标本更好。
２试剂的影响乙肝五项试剂生产厂家较多，不同厂家生产的试剂灵敏度与特异性存在一定的差异。
资料显示，不同厂家试剂的特异性和敏感性分别为８９．４％～９９．３％、７８％～８９％，存在较大差异。
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施
影响酶联免疫吸附试验检测结果的原因分析及应对措施酶联免疫（EliSA）是检验科目前常用的免疫学检测方法之一，其操作方便、简单，不须要特殊设备，使其在各级医院都可应用。
但如果忽视了影响其结果的因素，难免会造成假阴性或假阳性的结果。
因此了解影响结果的因素，是减少差错事故发生很必要的。
1实验室操作人员的基本素质因素实验室人员的素质主要包括五个方面：思想素质、文化素质、技术素质、心理素质、身体素质。
因为我们是为人服务的，所以我们的职业道德水平直接关系到人们的生命健康和生命安全。
如果在工作中出现了张冠李戴，就有可能造成严重后果。
其次文化素质和技术素质很重要，我们必须熟练掌握本专业的基本理论和操作技术。
还要不断努力学习新的理论知识，努力提高业务水平。
有良好的心理素质勇于面对工作中的挫折，在繁忙工作中有条不紊。
所以人员素质问题对检验结果有重要的影响因素。
2标本处理因素实验室人员收到标本后应：“三查七对”，对不符合要求的标本和申请单拒收，合格标本及时分离血清，避免溶血。
提取血清时不能混有大量纤维蛋白或细胞成分，对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，做好原始记录。
从冰箱取出的标本要预温至室温，对冰冻的样品要融化好，充分混匀再用。
3操作过程的影响因素3.1 操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度（保持在18～25℃），反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，各种条件必须符合要求。
3.2 正确使用加样器，加样器应垂直加入标本或试剂，避免摩擦包被板底部。
加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要一次性使用，加样次序要与说明书一致，否则易发生错误，造成实验重复性差。
3.3 手工洗板加洗液时冲击力不能太大，洗涤次数不超过说明推荐的次数，洗涤液在反应孔内滞留的时间不宜太长。
不要让洗液造成孔间污染，导致假阴性和假阳性。
3.4 要保证加液量一致，我们在使用时感觉加样器比滴瓶加样准确，滴瓶加液量不准造成显色不一，造成判断错误。
酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒影响因素分析
ＨＢ Ａ ｓ ｇ标准 品 由卫 生部 临检 中心 提供 ， 号 １ ０ ； ｓ 批 １ １ＨＢ Ａｇ Ｅ ＩＡ试 剂 盒 由上 海 华 泰 生物 工 程 实业 有 限 公 司提 供 ， 号 ＬＳ 批 ２ １０ ０ １ ０ １ ３ １ ：检 测 仪 器 使 用 Ｂｏ ｅ － Ｌ ０洗 板 机 、 ｉＴ ｋ— ｉ ｋ Ｅ Ｘ５ Ｔ Ｂｏｅ Ｅ ０ Ｉ ０酶标 仪 。 Ｘ８
１３ 方 法 ．
参照 《 国临床 检 验 操 作规 程 ＞ Ｌ Ｓ 双抗 夹 心 法 ， 法 全 ＞ ＩＡ Ｅ 本
主要用 于检测 大分 子抗 原 。 加抗 体包 被一 ４Ｃ ￣过夜 ， 洗涤 ３次 、 抛 ｆ ； 待 检抗 原 一 ３ ｃ ０ｒｉ 洗 涤 ３次 、 干 ； 酶标 抗 加 ７ｃ ３ ｎ， ａ 抛 加 体一 ３ ℃ ３ ｉ ， 涤 ３次 、 十 ； 底 物液一 ３ ℃ １ ｎ 加 ７ ０ｍ ｎ 洗 抛 加 ７ ５ｍｉ ，
酶联 免疫 吸附试 验 （ Ｌ Ｓ 是一 种 常用 的 固相 酶 免疫 测 Ｅ ＩＡ） 定 方 法 ， 在 临 床 检 测 时 其 影 响 因 素 也较 多 ， 者 以 Ｅ ＩＡ 但 笔 ＬＳ 检 测 ＨＢ Ａ ｓ ｇ为例 ， 讨 该试 验 的影 响 因素 ， 探 报道 如 下 ：
１ 资 料 与 方 法
以２
ＬＨＢ Ａｇ 准 品作 样 品 ，采 用 微 波 ９ 、７Ｃ ｓ 标 ０Ｓ ３ ￣ ￣
箱 ｌｈ两 种 不 同 温 育 法 检 测 ＨＢ Ａ 。 将 中 央 孔 和 周 围 孔 （６ ｓｇ ９
血 ． 血会 导致 非 特异 性 显色 而 出现假 阳性旧 溶 。③ 温 育 ： 如果
酶 标 板 周 围 与 中 间 升 降 速 率 不 同 ， 致 中 央 孔 与周 围 孔 吸 光 导
论影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法
论影响酶联免疫吸附试验结果的常见因素及控制方法[论文关键词] 酶联免疫吸附试验；影响因素；控制方法论文摘要：酶联免疫吸附试验(enayme liked immunosorbent assay，ELISA)是20世纪70年代发展起来的一种检测技术，因其具有敏感性高、特异性强、操作简单等优点，被广泛应用于各种抗原和抗体的测定，为辅助临床诊断与生物科研起到了积极的推动作用。
但ELISA测定中影响因素较多，操作过程中每个环节都会对试验结果产生影响，出现错误的结果。
现笔者对影响实验结果的常见因素及相应的控制方法分析探讨如下：1 试剂的因素1.1 试剂的选择试剂的选择是保证血液检测质量的关键要素。
虽然国家采用批批检定的形式对ELISA 试剂严格把关，但不同厂家的试剂在使用效果上仍存在在差异。
要选购知名度相对高、具有“三证”的试剂，不要用无批号的试剂，最好选用与仪器配套的试剂。
更不要使用过期的试剂和混用不同批号的试剂。
1.2 试剂的准备在临床实验室，对试剂的准备一般不太注意，通常的做法是在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此，在ELISA 测定中试剂的准备最为关键的是，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20～30 min后，再进行测定，使试剂盒在使用前与室温平衡，这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需的温度，以满足后面的测定需求。
2 样本的因素2.1 内源性干扰因素包括类风湿因子、补体、高浓度的非特异免疫球蛋白、异嗜性抗体、某些自身抗体等[1]。
2.1.1 类风湿因子在类风湿患者及正常人血清中，常含有较高或不同浓度的类风湿因子(RF)，其一般为IgM 型，亦有IgG和IgA型，具有与变性IgG产生非特异结合的特点，因为在ELISA测定中，其可与固相上包被的特异抗体IgG 以及随后加入的酶标的特异抗体IgG结合，从而出现假阳性结果。
酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析
酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析发表时间：2014-05-13T09:24:22.107Z 来源：《中外健康文摘》2013年第41期供稿作者：钱瑞[导读] 因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全，不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。
钱瑞（山丹县人民医院 734100) 【摘要】目的通过对酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析，探讨各因素对结果的影响，以便寻找解决的方法和加强质量控制，从而保证检测结果的准确性和精确性。
【关键词】酶联免疫吸附试验影响因素分析【中图分类号】R446.61 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）41-0059-02 酶联免疫吸附试验(ELISA)是将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测生物标本中微量的特异性抗体或抗原的临床检验方法，而且其反应中各组分的成本较为底廉，特别是对肝炎病毒的检测，最基层的医院也能开展。
因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全，不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。
为辅助临床诊断与生物科研起到了积极的推动作用。
在从事检验工作多年中深知ELISA测定中影响因素较多，由于其操作步骤复杂，操作过程中每个环节都会对试验结果产生影响，甚至出现错误的结果，因此，必须加强ELISA检测的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。
现将影响因素做以分析。
1 材料1.1试剂的准备目各种ELISA试验均有商品化的专用试剂盒。
应选择质量优良、有批准文号且在有效期内的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作。
从冰箱中取出的试剂应放在室温下或37℃平衡30分钟再进行测试。
保存试剂盒的冰箱应经常检查储存温度并做好记录，冰箱应避免频繁开关,试剂使用前应摇匀。
1.2标本的准备酶联免疫吸附实验中标本的质量也是影响结果的关键因素之一，标本的干扰物质容易引起假阳性或假阴性的结果。
1.2.1严格执行样本的查对制度，接受标本应将标本上的标签与申请单逐一核对，验收签字。
乙肝五项酶联免疫吸附法检测结果常见影响因素分析
乙肝五项酶联免疫吸附法检测结果常见影响因素分析苏咸玉【摘要】Objective To analysis the hepatitis b five enzyme-linked immunosorbent method to detect the common factors. Methods Randomly selected data in April 2013-April 2014 in our hospital outpatient and five test specimens of 132 cases of hospitalized patients with hepatitis b, adopt enzyme-linked immunosorbent method. Results This group of specimens of time stretching 20 min after positive rate 18.94%, static water bath after 40 min positive rate 9.08%and let stand for water bath after 60 mim positive rate 0.00%;This group of specimens under different condition of serum hepatitis b five test negative, positive performance are also different. Conclusion The effect of five clinical treatment for hepatitis b hepatitis b main judgement index of standardized operation strictly fol ow steps.%目的：分析乙肝五项酶联免疫吸附法检测结果常见影响因素。
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酶联免疫吸附法检测乙肝五项结果常见影响因素分析
【摘要】目的分析乙肝五项酶联免疫吸附法检测常见影响因素。
方法对酶联免疫吸附方法检测单乙肝病毒表面抗原阳性和表面抗原抗体同时阳性的标本其S/CO值小于4.0大于1.0的289例标本再用免疫荧光分析的方法检测的两种HBsA。
AXSYM免疫荧光分析仪为美国雅培公司产品;HBsAg免疫荧光试剂盒为美国雅培公司产品,HBsAgELISA试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司产品,按常规方法检测。
HBV-DNA定量以1.00×10.3 copies/mL为判定阳性的标准,＜1.00×10.3 copies/mL判为阴性,＞1.00×10.3 copies/mL判为阳性。
结果采用ELISA 法HBsAg阳性234例(80.96%),HBsAg和HBsAb同时阳性55例(19.03%),S/CO 阳性平均值 3.78,阳性率100%;免疫荧光分析法HBsAg阳性202例(69.89%),HBsAg和HBsAb同时阳性34例(11.76%),S/CO阳性平均值14.98,阳性率81.66%。
结论乙肝五项是乙型肝炎治疗依据的重要指标,严格按照操作步骤进行操作,做好室内质控、室间评价是保证检测质量,杜绝假阳、假阴性结果的重要手段。
【关键词】乙肝五项;酶联免疫吸附法;乙型肝炎
ELISA试验以灵敏度较高,特异性较好的特点在临床广泛应用。
但操作中的每个环节对试验的检测结果影响较大,如不按常规操作,有时会出现假阳性和假阴性的情况。
我们根据多年在检验室的工作经验,总结以下可能会影响乙肝五项ELISA检测结果的因素。
1 资料与方法
1.1 临床资料289例标本均是我院门诊和住院患者检测乙肝五项的标本,其中男156例,女133例,年龄18~72岁,平均4
2.5岁。
最小年龄为1岁,最大年龄为83岁。
1.2 方法对酶联免疫吸附方法检测单乙肝病毒表面抗原阳性和表面抗原抗体同时阳性的标本其S/CO值小于4.0大于1.0的289例标本再用免疫荧光分析的方法检测的两种HBsA。
AXSYM免疫荧光分析仪为美国雅培公司产品;HBsAg 免疫荧光试剂盒为美国雅培公司产品,HBsAgELISA试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司产品,按常规方法检测。
HBV-DNA定量以1.00×10.3 copies/mL为判定阳性的标准,＜1.00×10.3 copies/mL判为阴性,＞1.00×10.3 copies/mL判为阳性。
2 结果
采用ELISA法HBsAg阳性234例(80.96%),HBsAg和HBsAb同时阳性55例(19.03%),S/CO阳性平均值3.78,阳性率100%;免疫荧光分析法HBsAg阳性202例(69.89%),HBsAg和HBsAb同时阳性34例(11.76%),S/CO阳性平均值14.98,阳性率81.66%。
3 讨论
乙肝病毒表面抗原(HBsAg)为乙肝病毒感染的最主要的病原标志和直接证据之一。
酶联免疫吸附试验(EusA)是临床进行乙型肝炎病毒(HBV)诊断的主要方法之一,因其试验灵敏度高,特异性好的特点在临床上得到了广泛的应用。
但操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大,如标本留取与处理、加样、孵育、洗板、显色、终止、比色及结果判读,如不注意可能导致假阳性或假阴性的结果[1]。
在实际操作中严格按照操作步骤进行操作,设立阴阳对照及临界值测定,同时做好室内质控、室间评价,以严谨的工作作风检测每一份标本,对有疑义的检验结果要复查,才能保证检测质量,杜绝假阳、假阴性结果。
在日常检验作中,有时为了尽快出检测结果,常在血液刚刚凝固时就强行离心分离血清,在ELISA测定过程中残留的纤维蛋白原易造成假阳性结果。
因不同静置时间离心的血清中含有不等量的过氧化物酶的细胞成分及纤维蛋白原,这些成分可粘附于酶标反应孔中,成为非特异性吸附酶标记物而致假阳性。
血液采集后应该使其充分凝固后再离心分离血清检测[2]。
为避免ELISA法的质量问题,降低结果的假阳性率,获得较为准确的试验结果,可采取下列措施[3]:①使用抗凝血标本,便于标本的离心分离;②标本过夜之后检测或让标本加热处理,让血块更好的收缩,使标本中的非特异性活性物质部分或全部失活,降低非特异性反映所致的假阳性结果;③检测之前加大离心转数,延长离心时间,使红细胞和纤维蛋白充分沉淀,使标本的离心分离更加彻底;④加样时不能加入红细胞和纤维,避免这两种干扰物质对试验结果的影响。
总之,乙肝五项是乙型肝炎治疗依据的重要指标,我们检验工作者要本着严谨负责的态度,尽量使检测结果能反映出体内的真实实际,更好的为临床治疗服务。
参考文献
[1] 龙聪.酶联免疫吸附法测乙肝两对半的注意事项.基层医学论坛,2008,12(7):245.
[2] 彭俊云.酶联免疫吸咐试验(ELISA)常见问题的原因分析与处理,2008,5(15):118-120.
[3] 姜东,付莲花,周哲明,等.用ELISA法检测乙肝两对半的试验中的一点体会.中国医药指南,2008,6(23):318-319.。