25-羟基维生素D的临床检测

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25羟基维生素d(25-oh-vd)的原理

25羟基维生素d(25-oh-vd)的原理是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。

已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入与标记抗体特异结合的酶，再与底物一起温育。

底物经酶的催化变为有色产物，通过颜色变化对待测物质进行定量测定。

25羟维生素D是维生素D在体内的主要存在形式。

维生素D为类固醇衍生物，属脂溶性维生素，为环戊烷多氢菲类化合物。

维生素D主要由人体皮肤经紫外线照射后合成，少部分从食物或补充品中摄入。

维生素D不仅仅影响钙磷代谢，而且具有广泛的生理作用，是维持人体健康、细胞生长和发育的必不可少的物质，与多种疾病密切相关。

带你了解25-羟基维他命D检测方法

家庭科学·新健康健康一点通2023·11优生活·营养主义七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七维他命D 主要包括维他命D2与维他命D3，能在肝脏当中转化为25-羟基维他命D3与25-羟基维他命D2，总称为25-羟基维他命D ，能衡量维他命D 营养状态。

25-羟基维他命D 是机体当中必需的脂溶性维他命，是维持人们身体健康、人体生长与发育的重要微量元素。

维他命D 是一种身体必需维他命，自然情况下，紫外线照射以及食物来源是补充维他命D 的主要来源，一般来说不同年龄段群体维持骨骼健康所需维他命D 参考摄入量有所不同，因此需要根据自身情况合理补充维他命D 。

维他命D2和D3能从食物当中获取，也能在人体当中通过特殊化学反应衍生，通过血液进入肝脏，并在维他命D-25羟化酶的作用下转化为25-羟胺D2和25-羟胺D3，在肾脏的催化下转化为有生理活性的1，25-羟基维他命D 。

25-羟基维他命D 在人体当中能留存3周时间，3周之后就会经过肝脏代谢出体外，它相对稳定并且具有相对高的浓度。

这个指标水平高低反映出身体对维他命的转化能力，也能反映出身体的食物摄入量，因此一般应用在人们的营养状况调查当中。

身体维持正常维他命D 水平对钙磷调节比较重要，如果身体缺乏维他命D ，身体仅仅只能吸收七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七七10-15%钙元素与60%左右磷元素，25-羟基维他命D 通过与维他命受体结合，有助于提升钙吸收率，从原来的吸收率能提升到30-40%，而磷吸收率可以提高到大约80%。

维他命D 对骨骼具有一定作用，因此儿童与老人都要注意补充维他命D ，如果儿童缺乏，就会增加软骨病发生风险，如果老年人缺乏，则会患骨质疏松症、增加骨折风险等，同时与自身免疫性疾病、糖尿病等都有一定关联。

25-羟基维他命D 是维他命D 营养状况的评估指标。

总25羟基维生素D操作规程

25羟基维生素D测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：25羟基维生素D测定(缩写VD-T)；组合检验项目申请：贫血组合项目测定；临床医生根据需要提出检验申请。

2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。

或采用含分离胶的真空采血管。

2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5 下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2对于测定和吸样有干扰的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定48h。

需较长时间保存应将血清存放于-20℃。

冰冻标本仅可冻融一次。

为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

2.3.2采血后应使血液充分凝固，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白；可使用选用分离胶促凝的血液标本。

3 方法原理VD-T测定采用竞争化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：第一步：将标本、预处理试剂1和预处理试剂2添加到反应管中，经过孵化，释放出与维生素D结合蛋白结合的25-羟基维生素D。

第二步：将预处理后的标本，抗25-羟基维生素D抗体碱性磷酸酶结合物添加到反应管中，经过孵化，样本中的25-羟基维生素D和抗5-羟基维生素D抗体碱性磷酸酶结合物形成复合物。

新生儿血清25-羟基维生素D水平检测及临床意义

对７９７例新生儿进行分组，采用电化学发光免疫分析法，分别测定各组新生儿血清中［２５（ＯＨ）Ｄ］含量，并统计分析各组间［２５（ＯＨ）Ｄ］水平差异。结果男性新生儿血清［２５（ＯＨ）Ｄ］水平为（１４．９１ ±７．５５）（１４．２０￣１５．６１）ｎｇ／ｍｌ，女性为（１５．５１ ± ７．４３）（１４．７３￣１６．２９）ｎｇ／ｍｌ；不同性别新生儿［２５（ＯＨ）ＤＪ水平比较，差异无统计学意义（１．４８３，Ｐ＝０．１３８）。不同日龄新生儿血清［２５（ＯＨ）Ｄ］水平比较，
ｎｅｗｂｏｎｗｒｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄｄｉｖｉｄｅｄｔｏｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｕｐｓｂｙｇｅｎｄｅｒ，ａｇｅ，ｓｅａｓｏｎ，ａｎｄｄｉｓｅａｓｅｔｈｅｙｓｕｆｅｒｉｎｇ．ｔｈｅｓｅｒｕｒｎｌｅｖｅｌｏｆ２５一ｈｙｄｒｏｘｙｖｉｔａｍｉｎＤ３［２５
乏２５例，其构成比分别为２３．５９％、１９．８２％、５３．４５％；和３．１４％。不同疾病组间新生儿维生素Ｄ营养状况比较，差异有统计学意义（Ｘ＝２５．４０８，Ｐ＝０．００１）。结论不同性别、不同年龄的新生儿血清［２５（ＯＨ）Ｄ］水平不同，差异无统计学意义。不同季节、不同疾病新生儿血清［２５（ＯＨ）Ｄ］水平及营养状况不同。差异有统计学意义。

25羟基维生素临床意义

血清25-羟维生素D测定在临床诊断上的重要意义1、血清25羟维生素D的生成及代谢维生素D既是一种维生素，也是一种类固醇激素，主要包括VD2（麦角钙化醇）及VD3（胆钙化醇）体内可由胆固醇变为7-脱氢胆固醇储存在皮下，经阳光及紫外线作用下再转化为VD3，因而称7-脱氢胆固醇为维生素D3原。

在酵母和植物油中有不能被人吸收的麦角固醇，在阳光及紫外线照射下可转变为能被人吸收的VD2，所以称麦角固醇为D2原。

食物中维生素D在小肠中以乳糜微粒形式吸收，胆盐促进其吸收。

在血液与一种特异载脂蛋白-维生素D结合蛋白（DBP）结合后转运，先在肝脏线粒体经25-羟化酶系统作用转变为25-（OH）2 VD3，随后转运至肾小管上皮细胞在线粒体内经1α-羟化酶作用生成1,25（OH）2VD3，它是活性最强的维生素D代谢衍生物。

25-（OH）2 VD3是肝内的储存及血液中运输的形式，在肝内可与葡萄醛酸或硫酸结合，随胆汁排出体外［1］。

维生素D在体内转化为活性的1, 25 （OH）2VD3，通过其细胞内维生素D受体(VDR)介导.才能发挥作用。

VDR分布在全身多种组织细胞中，与1, 25 (OH)2VD3激素信号分子结合成激素-受体复合物,该复合物与靶基因特定DNA序列上的激素反应元件结合,对结构基因的表达产生调节, 从而调节机体钙磷代谢、细胞增殖与分化以及免疫功能等功能。

2、血清25羟维生素D在骨骼系统的临床意义存在于骨骼、肠道和肾脏的VDR发挥其经典的骨骼生物效应，促进钙的吸收利用。

1, 25 （OH）2VD3调节甲状旁腺素（PTH）和成纤维细胞生长因子23（FGF23）的分泌，对维持体内正常骨矿平衡和骨形成起到举足轻重的作用。

维生素D缺乏可能导致典型的钙的吸收利用降低如：佝偻病、骨软化症、骨量减少、骨质疏松症等。

近年来还发现，维生素D新的骨骼效应为：增强肌力、减少跌倒，防治骨质疏松性骨折［5］。

人体肌肉组织有特定的维生素D受体，老年人血清维生素D水平高可以增加肌肉力量，减少跌倒发生。

总25-羟基维生素D检测项目简介(产)

总25-羟基维生素D检测
维生素D是一种脂溶性维生素，又属于内分泌激素，基本的化学结构为胆固醇。

人体的皮肤在紫外线的照射下可自行合成维生素D3。

维生素D具有多种重要的生物学功能，包括参与经典的骨代谢调节——促进钙磷的吸收，还具有多系统的生理调节功能：包括能有效抑制肿瘤细胞的增殖并促进其分化；能抑制T、B 细胞的增殖和细胞因子的产生；能促进增加胰岛素的分泌和提高胰岛素的敏感性等，越来越多的研究提出维生素D在维持人体健康中的至关重要的作用。

并且相关数据显示在儿童、孕产妇以及老年等多个人群中普遍缺乏，需要注重监测与补充。

25-羟基维生素D是衡量人体内维生素D营养状态的最佳指标，临床的治疗方案应根据总的25-羟基维生素D含量来制定。

临床意义：
在产科的应用中，主要用于优生优育,如果缺乏对孕妇自身以及胎儿具有影响。

1、缺乏对于孕妇的影响为：容易导致孕妇骨质变形、剖宫产分娩概率升高以及妊娠期糖尿病、妊娠高血压、细菌性阴道病等的患病风险增加。

2、缺乏对于新生儿的影响为：会影响新生儿体重以及新生儿骨骼发育，并且提高婴幼儿呼吸道感染、反复喘息、幼儿湿疹、Ⅰ型糖尿病的发生率。

因此妊娠期妇女应注重维生素D的监测与补充，以降低妊娠期相关疾病的患病风险，和新生儿的骨骼健康。

适检人群：
所有妊娠期妇女以及哺乳期妇女
适检时间：
①整个妊娠期都需要注重监测与补充，特别是妊娠末三个月；
②产后42天需要注重监测与补充；
样本采集要求：
1mL血清，需及时分离血清，干燥管采集，-20℃送检。

项目的价格及报告时间：。

慢性自发性荨麻疹患者血清中25羟基维生素D与白介素25水平的检测及其意义

慢性自发性荨麻疹患者血清中25羟基维生素D与白介素25水平的检测及其意义慢性自发性荨麻疹（Chronic Spontaneous Urticaria，CSU）是一种常见的皮肤疾病，其特点为反复出现的瘙痒性皮疹和病程超过6周。

荨麻疹病程长，容易复发，严重影响患者的生活质量。

目前，其发病机制仍不完全清楚，其中免疫调节系统的紊乱被认为是该疾病的主要原因之一。

25羟基维生素D（25-hydroxyvitamin D，25(OH)D）是维生素D的主要代谢产物，被广泛认为是一个重要的免疫调节因子。

白介素25（Interleukin-25，IL-25）是一种细胞因子，可以调节和促进免疫系统的反应。

过去的研究显示，血清中25(OH)D与IL-25的水平在某些免疫相关疾病中存在相关性。

因此，本文旨在研究慢性自发性荨麻疹患者血清中25(OH)D与IL-25的水平，并探讨其在荨麻疹发病机制中的意义。

本研究纳入了100例CSU患者和100例健康对照组。

通过采集患者的血清样本，利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中的25(OH)D和IL-25水平。

结果显示，与健康对照组相比，慢性自发性荨麻疹患者的血清25(OH)D水平显著低于健康对照组（P<0.05）。

同时，慢性自发性荨麻疹患者的血清IL-25水平也显著升高（P<0.05）。

进一步分析表明，慢性自发性荨麻疹患者的血清25(OH)D 水平与病程呈负相关（r=-0.478，P<0.001），即血清25(OH)D水平越低，病程越长。

此外，血清IL-25水平与病程呈正相关（r=0.381，P<0.001），即血清IL-25水平越高，病程越长。

这一结果表明，25(OH)D的缺乏与慢性自发性荨麻疹的发生和病程密切相关。

25(OH)D可以通过调节免疫细胞的功能，影响机体对过敏原的反应，从而影响荨麻疹的发病过程。

此外，IL-25作为一种免疫调节因子，在慢性自发性荨麻疹的发生和发展中扮演着重要角色。

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维生素D主要的生理功能是调节体内钙、磷代谢并维持血浆钙、磷水平稳定，参与个体牙齿和骨骼的正常生长发育。

维生素D主要包括五种化合物，分别为维生素D1、D2、D3、D4和D5，家族成员中最重要的是D2和D3，通常所说的维生素D即指这两种形式。

非活性的维生素D在肾脏转换为具有生物活性的代谢物1,25-双羟基维生素D，行使激素功能（D-荷尔蒙）[1, 4]。

D-荷尔蒙调节肠道的钙吸收, 骨骼的矿物质化, 成骨细胞的分化和骨质合成，此外该激素还会影响神经肌肉的功能。

作为维生素D在体内的主要储存形式，血清中的25-羟基维生素D浓度可以作为人体维生素D含量的最佳指标。

但是维生素D中毒极为罕见，而维生素D缺乏却十分常见，这与年龄、人种、肤色、生活习惯等等有关。

据统计，全球有超过10亿人缺乏维生素D[1, 6, 7]。

内分泌学会2011年6月6日发表《维生素D缺乏评估、治疗和预防的临床实践指南》该指南针对不同年龄段、不同疾病背景的维生素D缺乏高危、低危人群，进一步明确了维生素D缺乏的有效评估、饮食补充和药物预防治疗的具体实施方法，指明了维生素D在非血钙受益上的不确定性，旨在达到维生素D缺乏防治的最优化[8]。

指南认为,维生素D缺乏的高危人群（例如西班牙裔、黑种人、妊娠妇女和肥胖个体等）应当接受维生素D水平筛查。

外周血血清25-羟基维生素D水平低于20ng/ml者应被诊断为维生素D缺乏。

指南中写道，现有的所有证据均表明，儿童和成人预防佝偻病或骨软化的最低血25-羟维生素D水平应为20 ng/ml，但为了增强维生素D对钙、骨骼以及肌肉代谢的积极影响，血25-羟维生素D的水平应高于30 ng/ml。

二、25-羟基维生素D2和D3的检测Vitamin D total代表能够同时检测（25-OH) Vit D3 和D2，这比单独检测25-OH VitD3更全面。

Vitamin D total的检测范围如下表所示。

由于正常人体内Vit D2浓度无法检测到，所以对于一般患者和补充维生素D3的患者，Vitamin D total 测试的意义和VD3的检测意义相同。

但是对于补充VD2的患者，Vitamin D total 测试能够更全面反映患者体内的VD状态。

所以这是检测Vitamin D total更全面的原因所在。

一般患者补充Vit D3 患者补充Vit D2 患者体内可检测到的内源性Vit D(25-OH) D3 (25-OH) D3 (25-OH) D3+(25-OH) D2(25-OH) Vit D3测试可检测可检测可检测D3不可检测D2Vit D total测试可检测可检测可检测D3+D2检测值比较和意义Vit D total 与(25-OH) Vit D3 数值与意义相当Vit D total 与(25-OH)Vit D3 数值与意义相当Vit D total检测值为D3+D2，数值上大于(25-OH) Vit D3 ，更全面反应体内维生素状况三、建议维生素D缺乏危险人群饮食补充维生素D（每IU=25ng）四、目前测定25-羟基维生素D 的主要竞品及方法学比较五、检测25-羟基维生素D 缺乏的科室应用维生素D 缺乏症在世界范围内属于常见病，维生素D 作为一类脂溶性必需维生素参与体内多种生物学过程，除了调节体内钙、磷代谢并维持血浆钙、磷水平稳定外，近年来研究发现体内维生素D 状态与多种疾病的发生发展显著相关，维生素D 水平与各种疾病的关系成为健康研究领域热点。

如下图所示。

系统相关症状与疾病涉及的科室肌肉糖尿病胰岛素抵抗、胰岛素分泌减少内分泌科免疫系统肺结核、I 型糖尿病、多发性硬化、Sjögren -综合症、RA 、甲状腺炎、Crohn 氏病风湿科、感染科心脏高血压神经系统抑郁、精神分裂症、孤独症、帕金森病、Alzheimer 氏病神经内科肾脏肾病综合症、蛋白尿、Hämodialysis 肾内科所以，维生素D 的检测在临床多个科室都有很好的应用前景。

除了以前经常提到的传统科室骨科和儿科之外，现在还认为与风湿科、感染科、内分泌科、心血管科、肿瘤科及神经内科等科室都有密切的关联，现在，就维生素D 与这几大系统疾病之间的关系总结如下。

1，维生素D 与自身免疫性疾病[9]1.1 维生素D 与1型糖尿病1型糖尿病(T1DM)是由致病性T 细胞介导，最终导致分泌胰岛素的B 细胞严重受损的器官特异性自身免疫性疾病。

T1DM 患者普遍存在维生素D 缺乏，美国Joslin 糖尿病中心的研究者报告，约3/4的T1DM 幼儿和少年都缺乏足够的维生素D ，我国王宓等研究发现DM 患者发生维生素D 缺乏的风险是非DM 患者的3倍以上。

维生素D 在T1DM 发病机制中起到重要的作用，其可通过抑制炎性反应、促进胰岛素释放、减轻胰岛素抵抗等机制参与T1DM 的发病。

Norman 等和Cade 等通过动物研究发现，维生素D 缺乏的大鼠可出现胰岛素分泌减少，予单次皮下注射维生素D 后，大鼠葡萄糖耐量及胰岛素分泌明显改善。

此外，与野生型小鼠相比，VDR 基因缺陷小鼠血清胰岛素浓度及胞内胰岛素mRNA 表达均下降，血糖上升。

同样的，Dunlop等研究发现，维生素D能够直接激活骨骼肌、脂肪细胞上的过氧化物体增殖体激活受体8(PPAR8)，从而改善胰岛素敏感性。

在T1DM患者补充维生素D有着重要的意义。

Hypponen等学者研究发现缺乏维生素D的儿童其T1DM的发病风险增加200%，而补充维生素D可使DM的患病风险降低80%，同时，对婴儿确保补充足够维生素D有助于逆转T1DM发生的增加趋势。

欧洲一项病例对照研究和芬兰出生队列研究也显示，婴儿期补充维生素D 与T1DM的发病危险呈显著负相关。

同时有研究得出，血清25-(OH)D的水平较低可能会增加儿童T1DM以及发生酮症酸中毒的风险。

1.2，维生素D与多发性硬化症多发性硬化症(MS) 是一种发生于中枢神经系统(脑部及脊髓)的自体免疫性疾病。

我国曹丽丽等[研究得出MS患者维生素D、VDR水平明显低于正常对照组，维生素D可以协助维持一种免疫抑制紧张状态。

但当维生素D及(或)其受体缺乏或减少时，这种免疫抑制状态受到破坏，发生免疫紊乱，而促进了MS的发生和发展。

同时他们还发现缓解期维生素D、VDR水平低于复发期，认为维生素D3和(或)其受体减少是MS的潜在危险因素，是MS频繁复发的病理生理基础。

维生素D作为一种免疫调节剂，既可预防及治疗疾病，又不会引起广泛的免疫抑制作用，并且在动物实验已经证实其对MS有一定的预防作用。

Munger等对美国7万军方人员的研究发现，MS患者脱髓鞘的发生与维生素D3水平的季节性波动一致，且口服维生素D3后可减少MS的发生。

在一项长达20年，以18.7万名美国女性为对象的研究发现服用含有维生素D的复合维生素片的人发生MS的比例比不服用维生素片剂的妇女低40%。

晒太阳是人类产生维生素D的主要方法，研究人员发现离赤道越远的地方罹患MS的人数越多。

在美国一项大型的研究中也发现，居住在较高纬度地区的妇女，诊断出MS的比例是居住在南方地区妇女的3.5倍。

1.3，维生素D与系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮(SLE)是一种病因不明，具有免疫异常和多系统损害的自身免疫性疾病，可累及全身多个器官、系统，临床表现复杂多样，缺乏特异性，可急性、慢性或隐匿起病。

最近的研究认为维生素D缺乏使人体发生免疫耐受缺失，可能与SLE的发生发展有关。

多项随机对照研究得出，SLE患者维生素D含量降低非常普遍，SLE患者的炎症本身可能提高维生素D的分解代谢从而导致患者维生素D缺乏，以及抗维生素D抗体也可导致维生素D减少。

国内外研究报道SLE 患者血清25(OH)D水平不足与缺乏的发生率在50%~75%。

维生素D在SLE调节氧化应激，且维生素D改善SLE动物模型的炎症反应。

然而，低的维生素D水平可能会引起一个持续的炎症的过程[18]。

动物实验也证明，血清维生素D水平在SLE 中有重要作用。

在SLE，活性维生素D与大剂量激素的治疗效果相似，可减轻狼疮鼠尿蛋白、关节肿胀及肾损害。

Doria等得出维生素D具有改善SLE病情甚至治疗SLE的能力。

同时，维生素D预防SLE的常见并发症(如认知功能障碍、代谢综合征、感染) 也起着重要的作用。

1.4，维生素D与类风湿性关节炎类风湿关节炎(RA)作为一种以滑膜炎和骨侵蚀为主的系统性炎症性自身免疫病，呈连续性、反复发作过程，致残率很高。

其发病机制尚未完全明确，目前认为与各种原因引起的机体免疫功能紊乱相关。

外周血25-羟维生素D水平与RA 密切相关，在RA病损部位关节软骨细胞、滑液细胞和巨噬细胞上均有VDR 表达[22]。

维生素D与细胞内特异性的VDR结合，不仅可以调节骨钙磷代谢改善骨质疏松，同时作为一种类激素物质可以通过树突状细胞和T、B淋巴细胞抑制炎症细胞因子如白细胞介素(IL)-17、干扰素-γ等的合成，促进抗炎细胞因子的分泌，参与RA患者免疫调节。

维生素D有预防RA的作用，最近研究调查了近3万名55~69岁间的妇女。

发现饮食中富含维生素D的妇女，发生RA的比例最低。

Pelajo等通过研究早期胶原性关节炎小鼠补充维生素D与未补充相比，得出补充维生素D可预防或延缓关节炎发生，并可避免模型鼠进展为严重的关节炎。

最近一研究报道RA患者其疾病的活动度及损害评分与血清维生素D水平呈负相关。

我国洪琼等通过对130例RA患者的研究得出：RA患者普遍存在维生素D不足与缺乏，并贯穿疾病始终。

维生素D缺乏除导致骨质疏松外，更是RA病情活动的危险因素。