实验五蚕豆根尖微核检测技术
蚕豆根尖微核技术实验方案
实验方案(蚕豆根尖微核技术)
一、实验题目
蚕豆根尖微核技术检测流仓河污水污染情况
二、实验目的
1、利用植物压片技术和微核实验原理，设计实验方案，研究环境中存在的毒害物；
2、理解环境致突变因子对生物体DNA的损伤
3、掌握环境因子遗传毒性检测的微核实验方法
4、培养初步的科研能力
三、材料仪器与方法
1.1材料仪器
选取蚕豆大小均匀籽粒饱满无虫害100颗，采集于流仓河污水，烧杯，剪刀，培养皿，量筒100ml，，胶头滴管，显微镜，卡诺固定液，5 mol/L盐酸，石炭酸品红溶液，天平（带砝码）
1.2方法
1.2.1污水处理
将采集到的污水稀释100倍、10倍、不稀释，用自来水做对照
1.2.2蚕豆根尖的培养处理
将蚕豆用蒸馏水浸泡一天使其充分吸胀，然后用滤纸浸水放于培养皿中在25℃恒温箱中培养24h。
每12小时换水一次。
待蚕豆初生根长至2cm左右，选取长度一致的蚕豆，分别用蒸馏水，1倍稀释液，10倍，50倍，100倍，分别处理6h，其中蒸馏水作为阴性对照处理。
然后再放于25℃恒温箱恢复培养24h。
卡诺固定液固定24 h；固定好的幼根以蒸馏水浸洗两次，用5 mol/L的盐酸于28℃水解约25 min，至幼根被软化即可；然后用蒸馏水洗净切取0.5cm的根尖，用改良的石炭酸品红溶液染色5~10分钟。
1.2.3制片
用常规压片法制作临时装片。
1.2.4镜检计数
每剂量组选取5个根尖，每个根尖随机镜检1000个细胞，计算微核率MCN‰=观察到微核细胞数/观察细胞总数*1000‰。
蚕豆根尖微核监测法
12.2.5 组装前的注意事项
取出豆种，用调温水浸洗 3 次，每次 5 min，
按照规定的条件恢复培养24 h。
处理6h
处理过程中，根尖如出现相关的急性毒性症
状，则按要求增加试样急性毒性预试验；否 则，直接进行后续试验。
实验步骤
4.根尖固定
用卡诺氏液固定
切取顶端 l.0 cm 左右根尖置于具盖指管内（同一试样处理 的根尖放入一个指管），加卡诺氏液固定 2 h。固定时间 最长不超过 24 h。
8．插拔时不要抓住线缆拔插头，以免损伤线缆。
12.2.6 台式计算机组装基本步骤
1．主机的安装 （1）准备好机箱并安装电源，主要包括打开空机箱和安装电源； （2）驱动器的安装，包括硬盘、光驱的安装； （3）CPU和散热器的安装，在主板处理器插座上安装CPU及散 热风扇； （4）内存条的安装，将内存条插入主板内存插槽内； （5）主板的安装，将主板固定在机箱内； （6）显卡的安装，根据显卡接口类型将显卡安装在主板上合适 的扩展槽内； （7）声卡等的安装，根据声卡的总线类型选择合适的扩展槽将 它们安装在主板上； （8）机箱与主板间连线的连接，是指各种指示灯、电源开关线、 PC喇叭等面板插针的连接，以及硬盘、光驱。
用乙醇保存
如不能及时染色制片，则弃去卡诺氏液，用实验用水洗净， 加入乙醇溶液浸没，于冰箱内冷藏，72h内染色镜检。
33
浸洗根尖
最新7,8,9综合实验蚕豆根尖微核检测技术
实验原理
微核（micronucleus，MCN）： 是真核生物细胞内遗传物质的一种异常结构
微核率（ MCN ‰）与作用因子的剂量或累积 效应呈正相关
污染指数
实验材料
蚕豆根尖
实验步骤
1、浸种催芽 2、用被检液处理根尖，并设对照 3、根尖恢复培养 4、根尖固定（转70%酒精于冰箱中保存备用） 5、HCl解离：将酒精倒出，清水漂洗2次，加入6mol/L
HCl，室温下解离10min至根尖软化 6、染色压片：倒去HΒιβλιοθήκη l，清水漂洗2次，每次3∼5min。
最后浸于水中，用于染色压片。 7、显微镜观察、微核细胞记数：每一处理观察3个根尖、
1000个细胞，统计MCN ‰ ，计算污染指数
下周实验
观看录像资料
1、分子遗传学实验设备及基本技术（60‘） 2、遗传工程初探（37'）
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测CuAs污染的诱变性
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测Cu 、As 污染的诱变性3张 莉 刘登义33 王友保 (安徽师范大学生命科学学院,芜湖241000)【摘要】 应用蚕豆根尖细胞微核技术检测Cu 、As 及其复合污染的诱变性能,计数了蚕豆根尖细胞微核千分率(MCN ‰)和污染指数(PI )并进行了F 检验.结果表明,在一定浓度范围内(Cu <200mg ・L -1,As <15mg ・L -1),随着Cu 、As 浓度的增加,MCN ‰上升;24个试验处理组PI 均在2以上,各处理组MCN ‰有显著差异,和对照组有极显著差异(α<0.01),表明Cu 、As 及其复合处理对蚕豆根尖细胞的分裂活动有明显影响.关键词 蚕豆 Cu As 微核检测 诱变性文章编号 1001-9332(2001)05-0777-03 中图分类号 X171.5 文献标识码 AU tilization of micronucleus test in Vicia f aba root tips cell to detect the mutability of Cu and As pollution.ZHAN G Li ,L IU Dengyi and WAN G Y oubao (College of L if e Science ,A nhui Norm al U niversity ,W uhu 241000).2Chin.J.A ppl.Ecol .,2001,12(5):777～779.The micronucleus test in V icia f aba root tips cell was utilized to detect Cu ,As and their combined pollution.The MCN ‰and PI were determined and the F 2test was used to evaluate the statistical difference in MCN ‰among differ 2ente treatments.The results showed that within a certain concentration of Cu 2+(<200mg ・L -1)and As 3+(<15mg ・L -1),MCN ‰increased as the concentrations increased.The PI of all the 24treatment was over 2,and there existedobvious difference compared with the control (α<0.01).This study shows that Cu ,As and combined pollution had significant effects on cytogenetical toxicity of V icia f aba root tip cell.MCN ‰is lower than normal level in the com 2plex treatment of Cu and As because of antagonism actions.K ey w ords V icia f aba ,Cu ,As ,Micronucleus test ,Mutability. 3教育部留学回国人员基金和安徽师范大学青年基金资助项目(2000QL37). 33通讯联系人. 2000-12-08收稿,2001-04-02接受.1 引 言微核试验(micronucleus test ,MCN )是根据环境污染物能引起DNA 损伤,诱发染色体畸变而形成微核的原理来检测诱变物质对染色体损伤的一种简便易行的方法[1,5,10,12].其中蚕豆根尖细胞微核技术(Vicia 2micronucleus test ,缩写为Vicia 2MCN )已成为我国环境生物检测的常规化方法之一.利用Vicia 2MCN 监测环境污染和检测危险化学品也已得到广泛的运用[2～4,11,13～15],但作为一项世界性的环境生物学检测指标,仍有一些问题有待解决[8].本文研究了Cu 、As 及其复合污染对蚕豆根尖细胞有丝分裂指数(IM )和微核率(MCN F )的影响,以期为Vicia 2MCN 技术走向标准化、规范化提供一些基础理论资料.2 材料与方法211 实验材料蚕豆(V icia f aba )(大片青皮豆),由芜湖市种子公司购得.212 实验设计与方法蚕豆种子用0.5%NaClO 消毒30min ,自来水冲洗干净后,水培48h ,吸胀后,于23℃培养箱中催芽24～48h.待根长长至1～1.5cm 时,用Cu 、As 及其复合物浸泡(实验按正交设计,如表1所示)处理10h 后自来水冲洗,修复24h ,剪取蚕豆根尖,用卡诺氏液固定24h 后,转移至70%酒精中保存.用时将保存的根尖取出,用蒸馏水漂洗后放入0.1mol ・L -1HCl ,60℃水浴中解离25min ,取出根尖,水洗数次,改良碱性品红染色5min ,压片观察,计数微核千分率(MCN ‰)及污染指数(PI ),并进行统计学处理[7,9],每个处理镜检3个根尖(蚕豆根尖细胞微核的识别标准同陈光荣等)[2,3];同时,参照朱广廉等[16]的方法,计数细胞有丝分裂指数和相对有丝分裂指数(Relative mitosis index ,以下简写为RIM %).另设自来水对照,实验设3个重复.PI =处理组微核千分率平均值对照组微核千分率平均值RIM %=处理组细胞有丝分裂指数对照组细胞有丝分裂指数×100%表1 Cu 、As 及其复合处理的实验设计T able 1Experimental design of Cu and As treatments Cu (mg ・L -1)As (mg ・L -1)151530000+10+50+150+305050+050+150+550+1550+30100100+0100+1100+5100+15100+30200200+0200+1200+5200+15200+30400400+0400+1400+5400+15400+303 结果与讨论311 Cu 、As 处理对MCN ‰和RIM %的影响蚕豆根尖各个处理的微核千分率(MCN ‰)和PI 应用生态学报 2001年10月 第12卷 第5期 CHIN ESE JOURNAL OF APPL IED ECOLO GY ,Oct.2001,12(5)∶777～779值见表2.通过对24份处理组及1份对照组的微核千分率进行F检验(表3),表明各处理有着显著性差异,和对照组相比有极显著的差异(F=5.47>F0.01= 2118,α<0.01).此外,在出现微核的细胞中,微核数量多少不同,从1个、2个到多个不等.自来水对照中常为单微核,各处理组单细胞微核数多在1个以上,说明各处理组诱变性能强,毒性大.表2 Cu、As及其复合污染对蚕豆根尖细胞MCN‰和相对有丝分裂指数的影响T able2E ffects of Cu,As and their combination pollution on MCN‰and RIM%of root tips cell in Vicia f abaCu+As(mg・L-1)X±SE X-CK PI RIM% 400+30 3.03±0.01 1.70 2.2872.01 400+1511.97±0.0510.649.0079.23 400+520.52±4.6919.1915.4388.70 400+118.42±1.1817.0913.8582.67 400+0 2.75±0.16 1.42 2.0768.20 200+3019.93±0.9818.6014.9985.43 200+1521.68±5.6220.3516.3093.77 200+522.33±2.0421.0016.7991.26 200+137.60±3.7236.2728.2793.78 200+040.52±2.0339.1930.4787.16 100+3015.07±0.7313.7411.3384.16 100+1521.12±3.2519.7915.8891.25 100+522.88±2.5721.5517.2094.60 100+134.91±0.3133.5826.2698.01 100+034.99±2.4533.6626.3190.17 50+307.76±0.20 6.43 5.8376.54 50+1513.20±1.0011.879.9384.82 50+523.37±4.9222.6417.5797.21 50+125.±1.4124.1419.1597.83 50+029.89±3.7628.5022.47106.280+3018.18±1.0415.3113.6979.270+1520.09±1.1418.7615.1083.220+59.54±0.35 6.217.1894.120+1 3.67±0.01 2.34 2.76103.31 CK 1.33±0.20--100 单一Cu处理下,随着Cu浓度的增加,MCN‰上升,表明Cu对蚕豆根尖细胞毒害作用增强;当Cu浓度达到400mg・L-1时,MCN‰下降很多,同时发现蚕豆根尖细胞有丝分裂受到严重阻碍,处于有丝分裂过程的细胞数明显低于对照组,RIM%仅达68.20%;随着As的加入,Cu的生长抑制效应得到缓解,蚕豆根尖细胞分裂数增加,MCN‰则上升;As浓度进一步提高时,As表现出拮抗Cu对蚕豆根尖细胞毒害的作用, MCN‰又下降.Cu浓度低于200mg・L-1时,Cu对蚕豆根尖细胞毒害明显,MCN‰较高;而As的加入又使MCN‰下降.单一As处理下,As浓度低(1mg・L-1)时,MCN‰较低,而RIM%却高于对照,说明低浓度As对蚕豆根尖细胞的毒害作用较小,甚至有刺激、促进生长的作用;随着As浓度增加,MCN‰显著上升, As的毒害作用增强,当As浓度超过15mg・L-1后,蚕豆根尖细胞的分裂数显著降低,同时MCN‰下降. 综上所述,Cu、As对MCN‰的影响不呈简单的正表3 蚕豆根尖微核检测的F检验T able3F2test in micronucleus test in Vicia f aba root tips cell变异Variation DF SS MS F F0.05F0.01处理Handle244688.38195.35 5.47 1.74 2.18误差Error501786.2735.73总变异Total variation746474.65相关,当Cu的浓度低于100～200mg・L-1,As浓度低于15～30mg・L-1时,MCN‰与Cu、As的浓度呈正相关,当超过这个范围后,会抑制蚕豆根尖细胞分裂,造成MCN‰增长减弱,直至呈负相关.较低浓度Cu(< 200mg・L-1)、As(<30mg・L-1)复合处理时,由于相互拮抗,减弱了彼此的毒性,MCN‰较其单独作用时为低.较高浓度Cu(>200mg・L-1)、As(≥30mg・L-1)复合处理时,相互的拮抗作用,减弱了其单独作用对细胞有丝分裂的抑制作用,MCN‰较单独处理时为高.312 关于Vicia2MCN技术的分析Vicia2MCN技术因材料易得,操作简单,反应灵敏等优点,目前研究和运用较多,同时由于它克服了动物培养细胞需要一定条件和时间,细胞同步化困难,微核率低及细菌检测方法中菌种鉴定、操作严格等缺点而成为拟代替其它生物检测系统的一种常规的环境污染物和危险化学品的检测指标,其广泛性很大.然而,化学诱变物质的遗传毒害是在细胞分裂间期时的DNA和染色体的复制合成过程中产生的[1,6],这种损害在细胞学上的可见标志是在分裂中通过微核形式显示的.没有细胞的分裂活动,毒性物质就没有作用遗传物质的机会,就难以表现这种物质的遗传毒性;也就是说,没有细胞的分裂活动,即使毒性很强的物质,也无法通过微核等细胞遗传学的手段检测[6].实验结果证明了这一点,在大剂量的重金属作用下,理论上它应有较高的诱变性能,但对各实验处理组和对照的多重比较(表4)则表明,较高浓度的Cu(400mg・L-1)或As(30mg・L-1)处理组严重阻碍根尖细胞分裂,RIM%仅68.20%～79.27%,其MCN‰和对照组表4 蚕豆根尖微核检测的q检验T able4q2test in micronucleus test in Vicia f aba root tips cellCu+As(mg・L-1)MCN‰显著水平Significant level01050101Cu+As(mg・L-1)MCN‰显著水平Significant level01050101 200+040.52a A200+3019.93bc B200+137.60ab AB400+118.42bc B100+034.99ab AB0+3018.18bc B100+134.91ab AB100+3015.07bc B50+029.89ab AB50+1513.20bc B50+125.47b AB400+1511.97bc B50+523.37bc AB0+59.54bc B100+522.88bc AB50+307.76c B200+522.33bc AB0+1 3.67c B200+1521.68bc B400+30 3.03c B100+1521.12bc B400+0 2.75c B400+520.52bc B Ck 1.33c B0+1520.09bc B877应 用 生 态 学 报 12卷差异不显著;而能保证细胞具有一定程度分裂水平的处理(如50～200mg・L-1的Cu处理)和对照组则差异显著或极显著.所以在利用蚕豆根尖细胞微核试验进行监测时,首先必须保证测试材料具有一定的细胞分裂水平,也即被检测对象不会严重阻碍细胞分裂,否则过低的细胞分裂水平会导致过低的微核千分率,而不能反映出被检测对象的实际诱变能力.可以认为,在RIM%低于或接近80%时,应考虑该方法的可靠性.其次,检测时要保证MCN‰在合理的剂量效应区内,过低或过高的检测剂量有时会产生相反的结果,如单用1mg・L-1As处理,RIM%达103.31%,MCN‰较低,和对照差异不显著,容易得出As无明显遗传毒性的错误结论,至于被检测对象的剂量效应区需按检测对象的不同进行具体研究.4 结 论411 Cu、As单独处理条件下,随着浓度的增加,遗传毒性逐渐增强,甚至会抑制植物细胞的有丝分裂活动. Cu和As复合处理具有相互拮抗作用,表现为促进植物生长和分裂活动,较低浓度Cu(≤200mg・L-1)和As共存使MCN‰降低,而较高浓度Cu(>200mg・L-1)、As复合则表现为MCN‰上升.412 在利用蚕豆根尖细胞微核试验进行监测时,应该满足两个基本条件:首先,必须保证测试材料具有一定的细胞分裂水平,这是正确检测的首要条件;其次应确保被检测对象在合理的剂量效应区范围内.参考文献1 Chang X2X(常学秀)et al.1999.Correlation analysis between UDS and MCN in V icia f aba treated with Cd2+and Al3+and UDS2tech2 nique in higher plants.Chi n J A ppl Ecol(应用生态学报),10(5):596～598(in Chinese)2 Chen G2R(陈光荣)et al.1983.The utilization of micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the lesion of pesticide reagente.J Cent ral Chi na Teachers College(华中师范学院学报),3(4):69～75(in Chinese)3 Chen G2R(陈光荣)et al.1985.A preliminary study on the utilization of micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the pollution of Qingshan lake.Chi na Envi ron Sci(中国环境科学),5(4):2～7(in Chinese)4 Degrassi FR et al.1982.Micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect mutagen danger in fresh2water pollution.M utat Res,97:19～335 Duan C2Q(段昌群)et al.1992.The effects of heavy metals on con2 tent of nucleic acid and activity of nuclease of V icia f aba.Envi ron Sci (环境科学),14(3):31～36(in Chinese)6 Duan C2Q(段昌群)et al.1995.Cytogenetical toxical effects of heavy metals on V icia f aba and inquires into the Vicia2micronucleus.Acta Bot Si n(植物学报),37(1):14～24(in Chinese)7 Guizhou Agricultural College(贵州农学院).1983.Statistical of Biolo2 gy and Experimentation Design.Beijing:Agricultural Press.14～27,76～114(in Chinese)8 K ihlman BA.1986.Handbook of Mutagenicity Test Procedures.Lon2 don:Elsevier Press.531～5549 Liu L2F(刘来福)et al.1988.Biological Statistics.Beijing:Beijing Normal University Press.248～260(in Chinese)10 Ma TH.1982.V icia cytogenetic tests for environmental mutagens:A report of the U.S.environmental protection agency gene2tox program.M utat Res,99:257～27111 Ma TH et al.1995.The improved A lli um2V icia root tip micronucle2 usassay for dastogenicity of environmental pollutants.M utat Res,344(2)185～19512 Shahin SA,El2Amovdi KH.1991.Induction of numerial chromosome aberrations during DNA synthesis using the fungicides nimrod and ru2 bigan24in root tips of V icia f aba L.M utat Res,261:169～17613 Wang H2X(王焕校)et al.1997.A preliminary study on the utilization of micronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the pollution of Dianchi lake.J Y unnan U niv(云南大学学报),15(1):138～145 (in Chinese)14 Wang Y2X(王永兴)et al.1997.A study on the utilization of mi2 cronucleus test in V icia f aba root tip cell to detect the pollution of Tai2 hu lake.Chi na Envi ron Sci(中国环境科学),17(3):252～255(in Chinese)15 Wang Y2Y(王英彦)et al.1988.The present situation of V icia2mi2 cronucleus test.Envi ron Sci(环境科学),10(4):66～70(in Chinese) 16 Zhu G2L(朱广廉)et al.1990.Plant Physiology Experimentation.Bei2 jing:Peking University Press.13～16,161～165(in Chinese)作者简介 张 莉,女,1972年生,硕士研究生,现主要从事植物生态学和植物保护生物学研究.已发表论文2篇.E2mail: wybzl@9775期 张 莉等:利用蚕豆根尖细胞微核技术检测Cu、As污染的诱变性。
蚕豆根尖微核检测
蚕豆根尖微核检测指导老师：吴麟组长：路青瑜小组成员:何悦李婷陈鸿谭小娥刘清唐珍冯沁李双吴海林符方亮摘要：本实验运用蚕豆根尖微核检测技术，分别用0.25mg/mL染发剂、0.5mg/mL 洗洁精对蚕豆根尖做处理，同时以0.25 mol/L叠氮化钠处理蚕豆根尖做阳性对照，自来水作阴性对照。
镜检后测得其微核率分别为17.55%，19.82%，23.18%，11.16%；染发剂、洗洁精处理的污染指数分别为1.7、1.8，结果表明均属于轻度污染。
关键词：蚕豆微核检测微核率Abstract：This experiment using vicia faba micronucleus test technology, respectively for 0.25 mg/mL colourants, 0.5 mg/mL of vicia faba detergent, at the same time to do processing mol 0.25 / sodium azide processing vicia faba do positive, negative control for water. After the microscopic micronucleus rate 17.55% respectively, 19.82%, 23.18%, 11.16%, Hair, detergent pollution index respectively with 1.7, 1.8, results show that belong to light pollution.Key word：Horsebean micronucleus test；micronucleus rate引言：染发剂和洗洁精都是我们生活中的日用品，特别是洗洁精。
化学去污剂主要分为阳离子型、阴离子型和非离子型3类(其中阴离子型表面活性剂使用频率最高)。
蚕豆细胞微核检测亚硝酸盐的遗传毒性
一、实验目的1．了解微核测试的原理和毒理遗传学在实际生活与工作中的应用范围及意义2．学习蚕豆根尖的微核测试技术二、实验原理微核（micronucleus, 简称MCN），也叫卫星核，是真核类生物细胞中的一种异常结构，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。
微核往往是各种理化因子，如辐射、化学药剂对分裂细胞作用而产生的。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。
微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。
一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片产生的。
有实验证明，整条染色体或几条染色体也能形成微核。
这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即形成了微核。
已经证实，微核率的大小是和作用因子的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点与染色体畸变的情况一样。
蚕豆根尖微(micronucleus，MCN)技术是一种检测化学品对生物毒害的遗传毒理学方法。
不仅具有简便、快速、重复性好和灵敏度高的优势，而且其检测结果与动物试验结果具有很高的一致性。
亚硝酸盐广泛存在于自然环境(水体、土壤、植物)中，许多腌制食品中亦含有亚硝酸盐。
在胃酸等环境下亚硝酸盐与食物中的仲胺、叔胺和酰胺或蛋白质分解产物等反应生成强致癌物N_亚硝胺。
亚硝胺还能够透过胎盘进入胎儿体内，对胎儿有致畸作用。
硝酸盐和亚硝酸盐作为化学物质的毒害性多有研究，但把蚕豆根尖细胞微核技术用于食品添加剂的安全评价和检测其对生物体诱变效应的遗传毒理性试验却未见报道。
NaNO2对蚕豆根尖的微核效应，由此证明蚕豆可以作为快速、灵敏检测食品中亚硝酸盐遗传毒性的供试材料。
三、实验材料蚕豆种子、显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、滤纸、蒸馏水NaNO2卡纳氏固定液（3甲醇：1冰醋酸）改良苯酚品红溶液四、实验过程1、被测试剂的配制与分组配制成0．01、0．02、0．04、0．08 mmol/L 4种不同的浓度；用蒸馏水将NaN02另设蒸馏水做对照(CK)组。
实验06 蚕豆根尖微核检测技术
实验六蚕豆根尖微核检测技术一、实验目的⒈了解微核测试原理和毒理遗传学意义。
⒉学习蚕豆根尖的微核测试技术。
二、实验原理微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。
在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3～1/10，染色与主核一样或稍浅。
一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。
当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。
三、实验器材和药品松滋青皮蚕豆、显微镜、镊子、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、1mol／L盐酸、改良苯酚品红染液、NaN3。
四、方法与步骤⑴浸种催芽：择饱满、均匀的种子，洗净后用蒸馏水常规浸种、催芽24～30h，此期至少换水2次；待种子充分吸胀后，移入铺有干净、双层湿纱布的托盘内培养。
⑵用被检测液处理根尖：当初生根长到1～2cm时，选初生根生长良好的蚕豆6～8粒，分别放入蒸馏水（CK）、0.４mmol／L、0.８mmol／L、1.2mmol／L的NaN3中染毒8～12h。
⑶根尖细胞恢复培养：处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗3次，每次2～3 min；将处理液洗净后，置于湿棉花上恢复22～24h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。
以上温度均为25℃。
⑷根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下1～1.5cm长的幼根，用Carnoys 固定液固定20～24h。
固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置4℃冰箱中保存备用。
⑸酸解：用1mol／L盐酸在60±5℃下酸解8min，幼根软化即可。
⑹染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次1～2分钟。
最后浸于水中。
制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴1-2滴改良苯酚品红染液染色10～15min 后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响
利用蚕豆根尖细胞微核技术检测咖啡和茶叶对细胞生长的影响一、实验目的1、学习蚕豆根尖的微核测试技术。
2、探究咖啡对蚕豆根尖生长的影响。
3、探究茶叶对蚕豆微核的影响。
二、实验原理微核（micronuclei）试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。
无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。
用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。
微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。
若采用核型稳定的细胞,确立统一的操作协议,进行实验室间的合作建立数据库,应用探针技术的微核试验很可能被纳入遗传毒理学试验。
蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。
蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验。
咖啡问世以来受到世界各地人们的追捧,不论是老人还是年轻人。
众所周知咖啡有提神的功效，有助于防止放射线伤害，而且咖啡会起到预防肝癌的作用但是咖啡还有一些副作用，如：经常喝咖啡会使人上瘾，饮用过多的咖啡人麻痹瘫痪等。
茶叶在中国有着悠久的历史，如今也受到世界各地人们的青睐。
喝茶对人体有很大的益处，如：茶叶中的茶多酚可与重金属结合产生沉淀，使身体中的一些有害物质迅速排出体外，达到解毒的效果。
三、实验仪器、试剂、材料3.1主要实验仪器盖玻片、恒温水浴锅、恒温培养室（25℃）、冰箱、培养皿、棉花、纱布、计数器、光学显微镜、烧杯等。
3.2主要实验试剂卡纳氏固定液：三份纯酒精与一份冰醋酸混合制成、70%乙醇、0.1mol/L盐酸、改良苯酚品红染液。
3.3实验材料褐皮蚕豆种子、速冲咖啡、茶叶。