葡聚糖检测方法
葡聚糖气相红外分析
葡聚糖分析1单糖组成分析1.1薄层色谱法分析本品为灰树花倍他葡聚糖，样品经酸水解后可采用薄层色谱法进行单糖组成分析。
照《中华人民共和国药典》（2005年版二部）附录VI B 薄层色谱法进行测定，具体分析条件如下：样品制备：取样品2mg溶于6mol/L的盐酸2mL中，装于安瓿瓶中封管，置于105℃恒温水解1h，经浓缩后，冻干，少量水溶解备用。
薄层板：Silica gel60 F254 plate展开剂：正丙醇：水：氨水＝60：30：2.4显色剂：苯胺－二苯胺对照品：半乳糖，阿拉伯糖，葡萄糖、甘露糖和木糖标准品上样：取水解液10uL用微量移液器进行点样本品的薄层色谱分析结果如下图3所示：1 2 3 4 5 6 7 8图5：灰树花倍他葡聚糖的薄层色谱（No.1~8分别为：半乳糖，阿拉伯糖，葡萄糖，样品1样品2，样品3，甘露糖，木糖）测定结果：灰树花倍他葡聚糖经水解后，用TLC法检查，只在葡萄糖标准品位置上出现一个斑点，表明本品只含有葡萄糖。
1.2气相色谱法分析本品为灰树花倍他葡聚糖，样品经衍生化处理后可采用气相色谱法进行单糖组成分析。
照《中华人民共和国药典》（2005年版二部）附录VE 气相色谱法进行测定，具体分析条件如下：仪器：HP5890II型气相色谱仪，美国安捷伦公司。
样品制备：采用糖腈乙酸脂法进行衍生化，取水解干燥后的样品5mg，加入10mg盐酸羟胺和5mg肌醇，加入0.5mL吡啶，封口后于90℃下加热反应30min，间或振荡。
取出后冷却至室温，加入0.5mL醋酸酐，90℃下继续反应30min，反应产物直接进气相色谱分析。
色谱条件：色谱柱为AC225（30m×0.25um）柱温215℃，进样口温度270℃，检测器温度270℃。
本品的气相色谱分析结果如下图6所示：图6：β-葡糖糖中单糖组成气相色谱分析结果显示：在本品的气相色谱图上只检测到单一的葡萄糖峰，可以确定本品为葡聚糖。
2红外光谱（IR）多糖的α或β构型是决定糖苷键定向及多糖空间构象的重要因素之一，而多糖的空间构象又对多糖活性的发挥起着十分重要的作用。
酵母中的葡聚糖试剂
酵母中葡聚糖试剂通常用于检测酵母细胞壁中的葡聚糖含量。
葡聚糖是酵母细胞壁的主要成分之一，其含量与酵母细胞的生理状态、品种、培养条件等因素有关。
使用葡聚糖试剂进行检测的方法通常包括以下步骤：
1.准备试剂：按照试剂盒说明书准备试剂，通常包括葡聚糖标准品、葡聚糖
酶、底物等。
2.样本处理：将待测酵母样本进行处理，如破碎细胞壁，提取葡聚糖等。
3.反应：将样本与试剂混合，在适宜的温度和pH条件下反应一定时间，使葡
聚糖酶与底物充分反应。
4.检测：通过比色法或荧光法等方法检测反应产物的吸光度或荧光强度，从
而计算出样本中的葡聚糖含量。
需要注意的是，不同品牌和批次的葡聚糖试剂可能存在差异，因此在使用时应遵循试剂盒说明书上的操作步骤和注意事项。
同时，为了获得准确的结果，样本处理和实验操作都应严格按照要求进行。
葡聚糖gpc级
葡聚糖gpc级
葡聚糖GPC级是一种用于分子量测定的标准品，常用于聚合物分子量的测定。
GPC是凝胶渗透色谱法的缩写，是一种常用的分离和分析方法，用于测定聚合物的分子量和分布。
葡聚糖GPC级是一种经过高度纯化的葡聚糖标准品，其分子量经过精确测定，可用于校正凝胶渗透色谱法测定分子量的准确性和精度。
在使用葡聚糖GPC级时，需要注意以下几点：
1.选用合适的葡聚糖GPC级标准品，根据需要测定的聚合物的分
子量和分布范围选择合适的标准品。
2.在使用前，应将葡聚糖GPC级标准品充分溶解并混合均匀，以
保证其浓度和纯度的一致性。
3.在使用过程中，应保持葡聚糖GPC级标准品的干燥和密封性，
避免其受潮和污染。
4.在使用后，应将葡聚糖GPC级标准品妥善保存，避免其受到物
理和化学因素的干扰，以保证其质量和稳定性。
总之，葡聚糖GPC级是一种重要的标准品，可用于凝胶渗透色谱法测定聚合物的分子量和分布。
在使用时，需要注意选择合适的标准品、保持其纯度和稳定性，以保证测定结果的准确性和可靠性。
1,3-β-D-葡聚糖检验简介
1,3-β-D-葡聚糖检测临床价值
早期诊断：侵袭性真菌感染增多且复杂，早期症状无 特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死 亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早 期诊断。
指导用药：快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有 针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗 效高，价格适宜的药物提供准确的依据。
30
小结
1,3-β-D-葡聚糖是侵袭性真菌感染早期 诊断、疗效观察、预后评估有价值的实 验诊断。
1,3-β-D-葡聚糖检验其敏感性优于GM 侵袭性真菌感染的诊断与治疗是一个复
杂过程，实验室与临床应密切联系，为 临床医生提供诸如显微镜检查、真菌培 养、血清学标志物等多方面信息。
31
内毒素定量检测
13
侵袭性真菌感染的诊断标准 EORTC/MSG2008修订版
宿主因素 临床特征 病原学
真菌镜检 真菌培养 组织病理学检查 血清学检查方法（间接证据）
CSF隐球菌抗原阳性——确诊 GM-test, G-test——临床诊断
Clinical Infectious Diseases 2008; 46
外
骨折
感染
内
肝脏疾病
休克
大手术术后
41
内毒素定量检测的临床意义
发热原因的快速辅助诊断（< 1小时）； 早期判断革兰阴性菌的感染情况； （Gˉ菌所致）脓毒症、MODS等重症疾患的早期诊断 帮助临床医生快速合理筛选适当的药物(抗生素)； 判断抗感染治疗效果及预后； 肠源性内毒素血症的预判及评估；
评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚 糖浓度变化，评价选用药物的有效性。
监护病程：监护深部真菌感染易感人群的病发状态。 动态观察：易感人群，监测临床疗效。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖(知识分析)
附1真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测标准操作规程1.目的规范真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测的操作规程，保证结果准确性。
2.原理实验条件下，来源于某些真菌细胞壁的(1-3)-β-D葡聚糖能够特异性地激活本试剂盒反应试剂的酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。
利用(1-3)- β-D葡聚糖标准品建立β-D-葡聚糖生物效应与透光度变化关系的标准曲线，便可定量地测定人血液的(1-3)- β-D葡聚糖含量。
3.试剂真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测试剂盒，湛江安度斯生物有限公司。
试剂盒包装规格：20人份/盒。
β-G试剂冻干粉状，0.25 ml / 支，10支β-G试剂复溶液无色液体，0.3 ml / 支，10支样品稀释瓶无色液体，0.9 ml / 支，20支复溶后的试剂溶液应在10分钟内使用。
若当次试验有剩余，可将剩余的试剂溶液置-20℃以下冷冻保存，一周内使用。
不能反复冻融试剂溶液。
4.检测设备：LKM动态试管检测仪。
5.实验用具：250 μl无热原吸头、20-200 μl移液器、75℃试管恒温仪、旋涡混合器、塑料试管架、无热原真空采血管（肝素抗凝剂）。
6.标本采集及送检要求6.1标本采集要求6.1.1采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无β葡聚糖采血管；6.1.2常规住院病人早上用药前空腹采血，血透患者透析前采血。
6.2标本的送检和保存要求标本采集后应在半小时内离心，4小时内检测完。
若当日不能及时检测的标本应将离心后的血浆转移至无β葡聚糖的容器内-20℃以下冷冻保存，一周内使用。
7.实验操作7.1在试验开始前，先开启LKM动态试管检测仪，预热，一段时间后发出哔的一声，试管仪温度达到37℃，待用；7.2取本试剂盒所配的无热原真空采血管取受试者静脉血1～2 ml，以400 g离心10分钟；7.3取富含血小板的血浆100 μl，加到样品稀释瓶中，在旋涡混合器上轻轻混匀，然后插入75℃试管恒温仪中加热10分钟；7.4加热10分钟后，将样品稀释瓶从75℃试管恒温仪中取出，使其降至室温即可，即为1:10稀释的样品供试溶液；7.5取β-G试剂1支，开启；7.6取β-G试剂复溶液1支，开启后用移液器取0.25 ml加入β-G试剂中，轻轻摇匀，澄清后得试剂溶液备用；7.7打开检测软件连接LKM动态试管检测仪，进入临床检查采集数据界面，点击“开始”按钮，使检测软件进入待采集状态；7.8取本试剂盒所配的专用反应试管，先取已制备好的样品供试溶液100 μl加入反应试管中，然后加入50 μl试剂溶液，每个样品供试品溶液平行两管；7.9加样完毕，依次拿起试管在旋涡混合器上轻点一下，使试管中的溶液均匀混合，然后把各试管逐一插到LKM动态试管仪中，反应开始，37℃反应75分钟，在反应结束前填写试验相关的信息；7.10反应完毕，检测软件将自动处理数据，计算出样品供试溶液中的（1-3）-β-G葡聚糖测量值，进入“临床检查数据报告”可查看检验结果，进入“临床检查数据分析”可查看反应曲线。
葡聚糖检测(G试验)
检验科细菌室新项目：真菌感染定量检测－（1-3）-β- D-葡聚糖检测（G试验）临床各科室：我科细菌室最新购买的MB-80微生物快速动态检测系统已安装调试完毕，现已应用临床辅助诊断深部真菌的感染。
与真菌培养相结合可提高诊断阳性率。
检测项目：G试验检测标本范围：血液标本送检时间：每周一至周五报告时间：当日报告标本送检要求：采样过程要求无菌操作，常规病人早上用药治疗前空腹采血取样（血透患者透析前采血），标本类型：抗凝静脉血，使用无热原真空采血管（细菌室取采血管），采集血液2-3ml并立即混匀。
半小时内送检。
参考值：1、＜10pg/ml阴性2、10pg/ml—20pg/ml观察3、＞20pg/ml阳性检测目的：检测血液中的1-3-β-D葡聚糖的含量，此物质为真菌细胞壁的特异成分，通过检测该物质的可溶性抗原，可快速诊断深部真菌的感染。
真菌1-3-β-D葡聚糖检测的临床意义：通过对血液中真菌1-3-β-D葡聚糖的含量测定，可早期、快速诊断侵袭性真菌感染，可用于真菌感染早期筛查，适用于念珠菌,曲霉,肺孢子菌,镰刀菌,地霉,组织胞浆菌,毛孢子菌等，不能用于检测隐球菌和接合菌感染。
对真菌感染症状进行诊断，阳性结果代表存在侵袭性真菌感染注意事项：1对阳性样品，应再次取血检测，以确诊。
2对观察期病人，应每周取1—2次血检测以观察病情发展。
3对确诊病人，应每周做2次检测，以观察用药后的效果。
滨州医学院附属检验科细菌室电话：6582检验科细菌室新项目：内毒素定量检测临床各科室：我科细菌室最新购买的MB-80微生物快速动态检测系统已安装调试完毕，现已应用临床内毒素定量检测。
检测项目：内毒素定量检测检测标本范围：血液标本送检时间：每周一至周五报告时间：当日报告标本送检要求：采样过程要求无菌操作，常规病人早上用药治疗前空腹采血取样（血透患者透析前采血），标本类型：抗凝静脉血，使用无热原真空采血管（细菌室取采血管），采集血液2-3ml并立即混匀。
灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定
《灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定》一、引言在当今社会，随着人们对健康和养生意识的提高，灵芝及其相关产品受到了广泛的关注和青睐。
作为一种珍贵的中草药，灵芝被传统中医视为“仙草”、“灵药”，被认为具有多种保健功能。
而其中的β-葡聚糖成分更是备受瞩目，被认为是灵芝功效的重要成分之一。
对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定变得至关重要。
二、β-葡聚糖的定义和作用1. β-葡聚糖是一种多糖类聚合物，由多个葡萄糖分子通过β-1,3-葡聚糖键和β-1,6-葡聚糖键连接而成。
它存在于许多植物和真菌细胞壁中，包括灵芝。
2. 研究表明，β-葡聚糖具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，是灵芝保健功效的重要保障。
三、灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法1. 具体测定方法包括但不限于高效液相色谱法、紫外光谱法、红外光谱法、核磁共振方法等。
这些方法各有优劣，需要根据实际情况进行选择。
2. 综合考虑测定方法的准确性、灵敏度、稳定性、成本等因素，高效液相色谱法被认为是目前测定β-葡聚糖的最佳方法。
四、灵芝产品中β-葡聚糖的含量标准1. 根据《灵芝孢子粉》（GB/T 21835-2008）标准可以得知，β-葡聚糖的含量是灵芝产品质量的重要指标之一。
通常，β-葡聚糖含量越高，产品的保健功效也越明显。
2. 目前，市场上灵芝产品的β-葡聚糖含量参差不齐，对其进行准确测定有助于消费者选择高品质的产品。
五、结语通过对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法和含量标准的了解，我们可以更好地认识灵芝产品，选择高质量的产品，并更好地享受灵芝的保健功效。
在未来的研究中，还需要不断完善测定方法，并建立更为科学的含量标准，以推动灵芝产品行业的健康发展。
个人观点：作为一名研究者，我认为对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定是非常重要的。
只有通过科学的手段对其进行准确测定，才能更好地保障消费者权益，促进行业良性竞争，推动灵芝产品的健康发展。
乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法
Quality Control乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法徐聪玲1，2，钟世欢1，2，张思奇1，2，黄 南1，2，杨天明1，王 辉11 浙江公正检验中心有限公司，浙江杭州 3100092 赞宇科技集团股份有限公司，浙江杭州 310009摘 要：[目的]目前国内尚无酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准。
本文利用离子色谱法建立快速、准确的乳制品中酵母β-葡聚糖检测方法。
[方法]样品加入沉淀剂离心后，倒去上清液，反复数次至无干扰，加入1 mol/L盐酸溶液，经121 ℃ 60 min酸水解，调节pH值稀释后，过钠柱，用离子色谱仪测定。
[结果]通过对水洗次数、色谱柱选择等因素选择优化，葡萄糖在1～20 μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数R2>0.999，方法检出限为5 mg/100 g，定量限为15 mg/100 g；葡萄糖的回收率为84.8%～94.9%，相对标准偏差为2.34%（n=6）。
[结论]该方法稳定，定量准确，适用于乳制品中酵母β-葡聚糖含量的检测。
关键字：酵母β-葡聚糖；离子色谱仪；乳制品；葡萄糖文章编号：1671-4393（2023）07-0094-05 DOI:10.12377/1671-4393.23.07.180 引言酵母β-葡聚糖具有增强动物免疫力、抗肿瘤、抗感染、降低胆固醇、促进伤口愈合等功能，2010年5月20号，被原卫生部批准为新资源食品，可添加到乳制品、功能饮料、焙烤制品、糖果等食品中；2012年使用范围再次扩大至较大婴儿配方乳粉。
此外，酵母β-葡聚糖还具有脂肪样口感，可作为低卡路里食品添加剂，在色拉调料、奶酪类似物等冷冻甜点中作为脂肪替代物使用，具有广泛的应用价值，国内已有乳品企业将其作为营养强化剂添加在产品中。
但国内目前没有酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准，因此，本文利用酵母β-葡聚糖是一种无味无臭不溶于水的多糖，且不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，可与蛋白、基金项目：浙江省基础公益研究计划（LGN19B05003）作者简介：徐聪玲（1990-），女，黑龙江讷河人，大专，工程师，研究方向为食品机械与管理； 钟世欢（1992-），女，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；张思奇（1995-），男，甘肃礼县人，本科，助理工程师，研究方向为食品检测；黄 南（1986-），女，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；杨天明（1990-），男，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；王 辉（1985-），男，浙江杭州人，大专，工程师，研究方向为食品检测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
葡聚糖检测方法（试剂盒方法翻译）
一．提供试剂
瓶1：exo-1,3-β-Glucanase (100 U/mL) plus β-Glucosidase(20 U/mL) suspension, 2.0 mL
瓶2：Amyloglucosidase (1630 U/mL) plus invertase(500 U/mL) solution in 50 % v/v glycerol, 20 mL
瓶3：GOPOD Reagent Buffer. Buffer (48 mL,pH 7.4), p-hydroxybenzoic acid and sodium azide(0.4 % w/v).
瓶4：GOPOD Reagent Enzymes. Glucose oxidaseplus peroxidase and 4-aminoantipyrine. Freeze-dried powder.
瓶5：D-Glucose standard solution (5 mL, 1.00 mg/mL) in0.2 % w/v benzoic acid
瓶6：Contr ol yeast β-glucan preparation ( 2 g, β-glucan content stated on the bottle label).
二．提供试剂的处理
1.向瓶1中加入8ml醋酸钠缓冲液，分装-20℃存放。
2.直接使用瓶2中的试剂，稳定在4°C ~ 2年或者-20°C > 4
年。
3.将瓶3的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，稳定在4°C >
2年。
4.将瓶4的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，黑暗环境存放，
稳定在4 °C 2 - 3个月,在-20°C或> 12个月。
5.直接使用瓶5中的试剂，在室温下稳定> 4年。
6.直接使用瓶6中的试剂，在室温下稳定> 5年。
三．未提供试剂的制备（缓冲液的配置）
1.醋酸钠缓冲液(200 mM, pH 5.0)
在900ml去离子水中加11.6ml冰醋酸(1.05 g/mL)，用4M氢氧化钠(16 g/100 mL)调节ph=5.0，4℃存放。
2.醋酸钠缓冲液(1.2 M, pH
3.8)
在800ml去离子水中加入69.6ml冰醋酸，用4M氢氧化钠(16 g/100 mL)调节ph=3.8，室温存放。
3.氢氧化钾(2 M)
在800ml去离子水中加入112g氢氧化钾溶解，室温保存。
4.盐酸(37 % v/v; ~10 M)在室温下稳定> 10年
四．检测空白试剂的配置
1.试剂空白
0.2ml醋酸钠缓冲液(200 mM, pH 5.0)，再加入3mlGOPOD试
剂。
2. 葡萄糖标准
0.1ml葡萄糖标准溶液（1mg/ml）和0.1ml缓冲液(200 mM, pH 5.0)再加入3.0mlGOPOD试剂溶液。
五．测量1、3:1、6-β-GLUCAN ，待测样品的准备工作
A：测量总葡聚糖
1.粉碎待测样品。
过20-30目筛。
2.准确称取100mg粉碎的待测样，到培养管，保证样品沉到培养管
底部。
3.向培养管中加浓盐酸(37 % v/v)，封口，使用漩涡混合器充分混
合。
置30℃水浴锅中水浴45min，每15分钟混合一次（保证完全溶解样品）
4.在每个培养管中加入10ml去离子水，混合均匀。
5.在100℃沸水浴中培养2h。
6.冷去至室温，加入10ml氢氧化钾(2 M)。
7.用醋酸钠缓冲液(200 mM, pH 5.0)定容至100ml，冲洗培养管，混
合均匀。
8.1800r/min,离心10 min，得离心液。
9.移取0.1ml离心液到试管（俩份）。
10.加入0.1ml瓶1的处理液，并在40℃水浴1h。
11.加入3mlGOPOD试剂，在40℃下水浴20min。
12.测量在510nm的吸光度。
B：α-Glucan的含量测定
1.准确称取100mg粉碎的待测样，到培养管，保证样品沉到培养管
底部。
2.加入2 M氢氧化钾溶液2ml，冰浴搅拌混匀20min。
3.添加8毫升1.2m醋酸钠缓冲(pH= 3.8)搅拌。
立即加入0.2ml瓶2
试剂，搅拌均匀，在40℃水浴30min，间歇使用涡旋混合器混合。
4.样品包含> 10%α-glucan时，将上述溶液转移到100毫升容量瓶
(使用洗瓶水)定容，混合好，1800r/min,离心10 min。
5.样品包含< 10%α-glucan时，这样的样品大约是最后的体积10.3
毫升，1800r/min,离心10 min（无稀释）
6.移取0.1ml离心液到试管（俩份）。
7.加入0.1ml瓶1的处理液，加入3mlGOPOD试剂，在40℃下水浴
20min
8.测量在510nm的吸光度。
六．计算公式以及说明
总葡聚糖(% w/w)=ΔE x F/W x 90.
α-葡聚糖(% w/w)=ΔE x F/W x 90 (final volume 100 ml)
= ΔE x F/W x 9.27 (final volume 10.3 ml)
β-Glucan =Total Glucan -α-Glucan
备注：ΔE=样品OD-空白OD
F=?
W=样品称取质量。