β-葡聚糖、甘露寡糖的测定方法
酵母细胞壁多糖的作用及其成分检测方法
酵母细胞壁多糖的作用及其成分检测方法徐智鹏;胡骏鹏;周小辉【摘要】本文对酵母细胞壁多糖的作用及其功能性成分的检测方法进行综述.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2015(000)011【总页数】3页(P40-42)【关键词】酵母细胞壁多糖;甘露聚糖;β一葡聚糖;作用;检测方法【作者】徐智鹏;胡骏鹏;周小辉【作者单位】安琪酵母股份有限公司,湖北宜昌443003;安琪酵母股份有限公司,湖北宜昌443003;安琪酵母股份有限公司,湖北宜昌443003【正文语种】中文【中图分类】S816.7酵母细胞壁多糖是一种源于酵母的天然高效免疫增强剂，其主要功能成分为甘露聚糖和β-1，3/1，6葡聚糖（以下称β-葡聚糖）。
甘露聚糖是寡糖一种，其相对分子质量为2000～20000，主链由几十个甘露糖分子以α-1，6糖苷键组成，支链由几个甘露糖通过α-1，2和α-1，3相连。
酵母β-葡聚糖不同于植物细胞壁中的β-1，4葡聚糖，作为来源于酵母细胞壁的重要结构物质，由10～20个单糖组成特异性结构的多糖，主链由D-葡聚糖通过β-1，3键的方式相结合，支链由β-1，6键结合的多聚糖（周祥等，2013）。
1 酵母细胞壁多糖的作用1.1 调节肠胃环境研究发现，病原菌如大肠杆菌、沙门氏菌、梭状芽孢杆菌和弧菌等的细胞表面都含有凝集素，其能特异性识别动物肠壁细胞上的“特异性糖类”受体，并与该受体结合而附着于肠壁上，在肠壁上发育繁殖，分泌毒素，导致肠道疾病的发生（刘源等，2007）。
酵母细胞壁的功能性成分甘露聚糖与病原菌在肠壁上的受体结构非常相似，并与凝集素有很强的结合能力。
凝集素一旦与甘露聚糖结合便无法继续附着于肠壁上，由于病原菌不能利用甘露聚糖，导致缺乏能量而死亡并排出体外。
而有益菌如双歧杆菌、乳酸杆菌等可以以甘露聚糖为能源，甘露聚糖进入消化道后段经浓缩才能被动物消化道菌群中的有益菌选择性发酵利用，以有机酸、CH4、CO2、H2 的形式释放或参与代谢，提供能量。
葡聚糖检测方法
葡聚糖检测方法（试剂盒方法翻译）一．提供试剂瓶1：exo-1,3-β-Glucanase (100 U/mL) plus β-Glucosidase(20 U/mL) suspension, 2.0 mL瓶2：Amyloglucosidase (1630 U/mL) plus invertase(500 U/mL) solution in 50 % v/v glycerol, 20 mL瓶3：GOPOD Reagent Buffer. Buffer (48 mL,pH 7.4), p-hydroxybenzoic acid and sodium azide(0.4 % w/v).瓶4：GOPOD Reagent Enzymes. Glucose oxidaseplus peroxidase and 4-aminoantipyrine. Freeze-dried powder.瓶5：D-Glucose standard solution (5 mL, 1.00 mg/mL) in0.2 % w/v benzoic acid瓶6：Contr ol yeast β-glucan preparation ( 2 g, β-glucan content stated on the bottle label).二．提供试剂的处理1.向瓶1中加入8ml醋酸钠缓冲液，分装-20℃存放。
2.直接使用瓶2中的试剂，稳定在4°C ~ 2年或者-20°C > 4年。
3.将瓶3的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，稳定在4°C >2年。
4.将瓶4的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，黑暗环境存放，稳定在4 °C 2 - 3个月,在-20°C或> 12个月。
5.直接使用瓶5中的试剂，在室温下稳定> 4年。
6.直接使用瓶6中的试剂，在室温下稳定> 5年。
β-葡聚糖
β-葡聚糖β-葡聚糖是用独特的工艺开发的一种新的产品，其来源于新鲜的食品啤酒酵母。
它是一种多糖，主要化学结构β-1，3 葡聚糖和β-1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。
简介Glucan，为D-葡萄糖单体借由糖苷键的键结所形成的多糖。
由于D-葡萄糖残基彼此间结合样式的不同而分为多种，广泛分布于微生物、植物、动物界。
其中异碳头糖苷键是以β方式连接的为β-葡聚糖，如褐藻类的海带多糖（laminarin，主要以β-1，3键），地衣类的木聚糖（β-1，4和β-1，3键），高等植物的纤维素、（β-1，4结合）等[1]。
特点1. 优良免疫激活剂2. 强大的自由基清除剂3. 激活巨噬细胞、噬中性细胞等清除由辐射造成细胞分解碎片4. 能够使巨噬细胞辨别和破坏变异细胞5. 协助受损组织如淋巴组织细胞加速恢复产生细胞素（IL-1）6. 促使包括抗生素，抗真菌，抗寄生药在内的其他药物更好地发挥效用7. 减低血液中的低密度脂肪，提高高密度脂肪，减少高血脂的发生性状无色或略黄色粘稠溶液、略特性的的气味用途1．健康食品营养补充2．胶囊类3．功能饮料、口服液等4．医药及化妆品配料5．其他抗衰老、抗辐射等功能性食品测定方法β-葡聚糖含量的测定方法，大致可归纳为如下几类：（1）粘度法：其原理是大麦抽提液的粘度主要由β-葡聚糖产生(Burnett，1966；White等，1983)。
这种方法可靠性较差，因为不同来源的β-葡聚糖的分子量不同；而在葡聚糖含量相同时，分子量较大者产生的粘度较大，这样β-葡聚糖粘性的大小并不完全取决于其含量，也取决于分子量大小(Sanlinier等，1994)。
另外，抽提条件对其粘度有明显的影响。
（2）沉淀法：其原理是利用特定的盐或有机溶剂沉淀抽提液中的β-葡聚糖(Wood，1986)。
该方法的局限性在于抽提不能完全排除其它物质的干扰。
在高温下抽提时，抽提液中含有其它成分如淀粉等，因而干扰测定的结果。
β-葡聚糖测定方法
β-葡聚糖测定方法(总4页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除6.2 交联β-葡聚糖含量测定 AACC 32-236.2.1实验目的在大麦、麦芽、麦芽汁和啤酒产品质量控制中经常需要测定其中的β-葡聚糖含量，Megazyme方法很好的解决了测定中的系列问题，本方法能够在一天内测定50-100个样品。
本方法现在也适用于燕麦产品及燕麦纤维产品β-葡聚糖含量测定。
6.2.2实验原理样品水化后加入真菌多糖酶在pH6.5缓冲液中培养，提取液离心（或过滤）后加入β-葡萄糖苷酶，在葡糖糖氧化－过氧化酶缓冲液保护下产生葡萄糖。
图6.1 葡聚糖测定原理示意图Megazyme测试包：（可以测定100个样品）⑴全套测定方法；⑵真菌多糖酶；⑶β-葡萄糖苷酶；⑷葡糖糖标准液；⑸大麦和燕麦纤维标准样品。
6.2.3实验试剂：⑴真菌淀粉酶（bottle 1）〔（1-3）（1-4）β-D-葡萄糖4-葡聚糖水解酶〕：（活力>1000U/mL）制备：1.0mL真菌淀粉酶用20mM NaH2PO4缓冲液（pH6.5）稀释至20.0mL。
将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。
最终真菌淀粉酶浓度50U/mL。
⑵β-葡萄糖苷酶（bottle 2）：（活力>40U/mL）制备：将1.0mLβ-葡萄糖苷酶用50.0mM醋酸钠缓冲液（pH4.0）稀释至20.0mL。
将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。
最终β-葡萄糖苷酶浓度2U/mL。
⑶葡糖糖标准液：100μg⁄0.1mL，用0.2%叠氮化钠溶液溶解。
⑷大麦标准样品：含量见标签。
⑸燕麦纤维标准样品：含量见标签。
⑹NaH2PO4缓冲液制备（20mM，pH6.5）：3.12g NaH2PO4－2H2O溶解于900ml蒸馏水中，用100mM氢氧化钠溶液（4g/L）将pH值调至6.5（大约需50mL），加0.2g叠氮化钠，将溶液定容至1L。
β-葡聚糖测定方法
β-葡聚糖酶活力测定方法(NY/T911-2004)∙ 1.原理β-葡聚糖酶能将木聚糖降解成还原性糖。
还原性糖在沸水浴条件下可以与3,5-二硝基水杨酸（DNS)试剂反应显色反应。
反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中β-葡聚糖酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中β-葡聚糖酶的活力。
∙ 2. 操作∙ 2.1.标准葡萄糖曲线的制作2.1.1 吸取PH5.5的0.1M乙酸-乙酸钠+缓冲溶液4.0mL,加入DNS试剂5.0mL，沸水浴加热5min。
用自来水冷却至室温，用水定容至25.0mL,制成标准空白样。
2.1.2 分别吸取葡萄糖溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL和7.00mL,分别用PH5.5的0.1M醋酸缓冲溶液定容至100mL,配制成浓度为0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、0.40mg/mL、0.50mg、0.60mg/mL和0.70mg/mL葡萄糖标准溶液。
2.1.3 分别取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各2.00mL（做两个平行），分别加入到刻度试管中，再分别加入2.0mL缓冲液94.4)和5.0mLDNS试剂。
电磁振荡3s-5s,沸水浴加热5min。
然后用自来水冷却到室温，在用水定溶液至25mL。
以标准空白为对照调零，在540min处测定吸光度A值。
以葡萄糖糖浓度为Y轴、吸光度A值为X轴，绘制标准曲线。
每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线∙ 3. 酶样测定吸取10.0mLβ-葡聚糖溶液,37℃平衡20min。
吸取10.0经过适当稀释的酶液，37℃平衡10min。
∙吸取2.00mL经过适当稀释的酶液（已经过37℃平衡），加入到刻度试管中，再加入5mLDNS试剂，电磁振荡3s-5s。
然后加入8.0g/lβ-葡聚糖溶液2.0ml，37℃保温30min,沸水浴加热5min。
灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定
《灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定》一、引言在当今社会，随着人们对健康和养生意识的提高，灵芝及其相关产品受到了广泛的关注和青睐。
作为一种珍贵的中草药，灵芝被传统中医视为“仙草”、“灵药”，被认为具有多种保健功能。
而其中的β-葡聚糖成分更是备受瞩目，被认为是灵芝功效的重要成分之一。
对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定变得至关重要。
二、β-葡聚糖的定义和作用1. β-葡聚糖是一种多糖类聚合物，由多个葡萄糖分子通过β-1,3-葡聚糖键和β-1,6-葡聚糖键连接而成。
它存在于许多植物和真菌细胞壁中，包括灵芝。
2. 研究表明，β-葡聚糖具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，是灵芝保健功效的重要保障。
三、灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法1. 具体测定方法包括但不限于高效液相色谱法、紫外光谱法、红外光谱法、核磁共振方法等。
这些方法各有优劣，需要根据实际情况进行选择。
2. 综合考虑测定方法的准确性、灵敏度、稳定性、成本等因素，高效液相色谱法被认为是目前测定β-葡聚糖的最佳方法。
四、灵芝产品中β-葡聚糖的含量标准1. 根据《灵芝孢子粉》（GB/T 21835-2008）标准可以得知，β-葡聚糖的含量是灵芝产品质量的重要指标之一。
通常，β-葡聚糖含量越高，产品的保健功效也越明显。
2. 目前，市场上灵芝产品的β-葡聚糖含量参差不齐，对其进行准确测定有助于消费者选择高品质的产品。
五、结语通过对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法和含量标准的了解，我们可以更好地认识灵芝产品，选择高质量的产品，并更好地享受灵芝的保健功效。
在未来的研究中，还需要不断完善测定方法，并建立更为科学的含量标准，以推动灵芝产品行业的健康发展。
个人观点：作为一名研究者，我认为对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定是非常重要的。
只有通过科学的手段对其进行准确测定，才能更好地保障消费者权益，促进行业良性竞争，推动灵芝产品的健康发展。
乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法
Quality Control乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法徐聪玲1，2，钟世欢1，2，张思奇1，2，黄 南1，2，杨天明1，王 辉11 浙江公正检验中心有限公司，浙江杭州 3100092 赞宇科技集团股份有限公司，浙江杭州 310009摘 要：[目的]目前国内尚无酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准。
本文利用离子色谱法建立快速、准确的乳制品中酵母β-葡聚糖检测方法。
[方法]样品加入沉淀剂离心后，倒去上清液，反复数次至无干扰，加入1 mol/L盐酸溶液，经121 ℃ 60 min酸水解，调节pH值稀释后，过钠柱，用离子色谱仪测定。
[结果]通过对水洗次数、色谱柱选择等因素选择优化，葡萄糖在1～20 μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数R2>0.999，方法检出限为5 mg/100 g，定量限为15 mg/100 g；葡萄糖的回收率为84.8%～94.9%，相对标准偏差为2.34%（n=6）。
[结论]该方法稳定，定量准确，适用于乳制品中酵母β-葡聚糖含量的检测。
关键字：酵母β-葡聚糖；离子色谱仪；乳制品；葡萄糖文章编号：1671-4393（2023）07-0094-05 DOI:10.12377/1671-4393.23.07.180 引言酵母β-葡聚糖具有增强动物免疫力、抗肿瘤、抗感染、降低胆固醇、促进伤口愈合等功能，2010年5月20号，被原卫生部批准为新资源食品，可添加到乳制品、功能饮料、焙烤制品、糖果等食品中；2012年使用范围再次扩大至较大婴儿配方乳粉。
此外，酵母β-葡聚糖还具有脂肪样口感，可作为低卡路里食品添加剂，在色拉调料、奶酪类似物等冷冻甜点中作为脂肪替代物使用，具有广泛的应用价值，国内已有乳品企业将其作为营养强化剂添加在产品中。
但国内目前没有酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准，因此，本文利用酵母β-葡聚糖是一种无味无臭不溶于水的多糖，且不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，可与蛋白、基金项目：浙江省基础公益研究计划（LGN19B05003）作者简介：徐聪玲（1990-），女，黑龙江讷河人，大专，工程师，研究方向为食品机械与管理； 钟世欢（1992-），女，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；张思奇（1995-），男，甘肃礼县人，本科，助理工程师，研究方向为食品检测；黄 南（1986-），女，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；杨天明（1990-），男，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；王 辉（1985-），男，浙江杭州人，大专，工程师，研究方向为食品检测。
β-1,3-葡聚糖含量测定方法
β-1,3-葡聚糖含量测定方法
β-1,3-葡聚糖（也称为1,3-β-D-葡聚糖或胞外多糖）是一种可溶性聚糖，常用于农业、食品和医药工业。
测定β-1,3-葡聚糖的含量可以通过以下方法之一实现：
1. 紫外可见光谱测定：将葡聚糖溶液经稀酸或酶处理后，通过
测定其在特定波长下的吸收光强度来确定其浓度。
这种方法对于测定
高浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为简便。
2. 蒸发法：将葡聚糖溶液加热至葡聚糖变为糊状物，并将其继
续加热蒸发至干燥。
然后称量得到的干燥物的质量，通过质量差来计
算葡聚糖的含量。
这种方法对于测定低浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为适用。
3. 原子吸收光谱法：通过将葡聚糖溶解后，在特定条件下使用
原子吸收光谱仪测定其特定金属离子沉淀物的质量，从而计算出含量。
这种方法对于含有特定金属离子的葡聚糖样品测定较为准确。
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A.1原理
根据β-葡聚糖和甘露寡糖在流动相和液相色谱柱的固定相之间具有不同的分配系数，将样品注入液相色谱柱，用H2O做流动相，糖类分子流出后，经示差检测器检测，用外标法定量。
A.2试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；蒸馏水或去离子水或符合GB/T6682中规定的一级水或相当纯度的水。
试验中所用制品按GB/T 603的规定制备。
A.2.1盐酸：37%。
A.2.2乙腈：色谱纯。
A.2.3氢氧化钠：40%。
A.2.4葡萄糖和甘露糖混合标液（1000mg/L）：分别称取葡萄糖和甘露糖各0.100g，用纯水定容100mL后用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。
A.3仪器
A.3.1水浴锅。
A.3.2漩涡混合器。
A.3.3电炉。
A.3.4手提式压力蒸汽灭菌锅。
A.3.5高压液相色谱仪；带示差检测器。
A.4分析步骤
A.4.1样品处理
精确称取1.000g（准确至0.0002g）样品放入一个20mL的耐热玻璃制的带螺帽的小试管中，加入7.5mL盐酸（37%），小心的将小瓶盖近后用漩涡混合器混合，得到均一的悬浮液。
将小瓶放入30℃水浴中处理45min，每15min用漩涡混合器震荡混合一次。
然后将悬浮物定量的转移到200mL杜氏瓶中（同时用约70-80mL的水洗涤后倒入瓶中），将瓶子放入高压灭菌锅121℃处理60min。
完成后马上冷却，将溶液调pH到6-7，然后定容至200mL。
使用0.45微米孔径的醋酸纤维素膜过滤备用。
A.4.2测定
A．4.2.1 液相色谱参考条件
A．4.2.1．1 色谱柱：Hyper REZ XP Carbohydrate Ca++，长300mm，内径7.7mm，粒径8μm。
A．4.2.1．2 柱温：70℃。
A．4.2.1．3 流动相：H2O，用前过0.22μm滤膜。
A．4.2.1．4 流速：0.6 ml/min。
A．4.2.1．5 进样体积:40μl。
A.4.3标准曲线的绘制
分别吸取甘露糖/葡萄糖标液12.5、25.0、37.5mL到50mL容量瓶中，用高纯水定容到刻度，得到甘露糖、葡萄糖各为250、500、750、1000mg/L的混合标样。
在上述色谱条件下准确进样40μl，得到色谱峰面积和标准物质量浓度之间的回归方程，绘制标准曲线。
A.4.4样品的测定
在同样的色谱条件下，将处理好的样品注入色谱仪中，记录各色谱峰的保留时间和锋面积。
用糖标样色谱峰的峰面积来定量，计算出样品中葡萄糖、甘露糖的含量。
A.5结果计算与表示
A.5.1结果计算
试样中β-葡聚糖或甘露寡糖含量X以质量分数（%）表示，按式（A.1）计算：
file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/msohtml1/01/clip_image002.gif
file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/msoh tml1/01/clip_image004.gif……………………………………（A.1）
式中：
A——根据样品溶液的峰面积，在标准曲线上查得的样品溶液的葡萄糖或甘露糖的含量，单位为毫克每升(mg/L)；
m——样品质量，单位为克（g）；
0.2——样品处理定容的体积，单位为升（L）；
0.9——将葡萄糖或甘露糖换算成β-葡聚糖或甘露寡糖的系数。
A.5.1结果表示
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，结果保留到小数点后一位。
A．6重复性
在重复条件下或得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的10%。