高效液相色谱法测定鸡蛋中胆固醇研究(一)
高效液相色谱法测定鸡蛋、牛奶和猪肉中环丙 氨嗪及三聚氰胺的
高效液相色谱法测定鸡蛋、牛奶和猪肉中环丙氨嗪及三聚氰胺的实验研究魏瑞成，王 冉，刘伟荣(江苏省农科院 江苏省畜禽产品安全性研究重点实验室，江苏 南京 210014)摘 要：本实验研究建立用NH 2柱和97%乙腈水溶液做流动相洗脱测定鸡蛋、猪肉和牛奶中环丙氨嗪和三聚氰胺残留量的高效液相色谱法，样品均质后经NaOH 和20%氨水乙腈溶液重复提取2次、浓缩、过C 18固相萃取小柱净化等处理后上机检测，环丙氨嗪和三聚氰胺得到了很好的分离，各自的保留时间分别是8min 和12min 。
标准曲线在0.01～1.0μg /ml 浓度范围内呈线性相关，环丙氨嗪、三聚氰胺标准曲线的相关系数(r)分别为0.9999、0.9994。
检测限为0.02mg/kg ，定量限低于0.05mg/kg 。
关键词：环丙氨嗪；三聚氰胺；残留；高效液相色谱法Study on Analytical Method of Cyromazine and Melamine Residues in Egg, Milk and Pork with HPLCWEI Rui-cheng ，WANG Ran ，LIU Wei-rong(Key Laboratory of Animal-derived Food Safety of Jiangsu Province, Jiangsu Academy ofAgricultural Science, Nanjing 210014, China)Abstract ：A high-performance liquid chromatography (HPLC) with NH 2 column and 97% acetonitrile-water as mobile phase to determine the cyromazine and melamine residues in egg, milk and pork was described in this paper. Samples were treated with NaOH, extracted with acetonitrile containing 20% NH 4OH, and cleaned up by using C 18 column solid-phase extraction (SPE).A perfect separation for cyromazine and melamine was achieved with their respective retention time 8 and 12 min. The calibration curves for cyromazine and melamine are linear in the concentration range of 0.01 to 1.0 μg/ml, with the correlation coefficients of 0.9999 and 0.9994, respectively. The detection limits of both the compounds is 0.02 mg/kg and the quantification limit is less than 0.05 mg/kg.Key words ：cyromazine ；melamine ；residues ；high-performance liquid chromatography中图分类号：O657.72 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2008)12-0605-05收稿日期：2007-10-10基金项目：江苏省科技厅攻关项目(BM2003306)作者简介：魏瑞成(1979-)，男，硕士，主要从事畜产品安全性评价研究。
液相色谱-串联质谱法检测禽蛋类产品中26种类固醇激素的含量
液相色谱-串联质谱法检测禽蛋类产品中26种类固醇激素的含量李新一【摘要】本实验采用高效液相色谱-电喷雾质谱法对禽蛋类产品中的26种类固醇激素进行了测定。
实验过程包括乙腈提取、ZnCl2去除磷脂、PLEXA固相萃取柱净化等。
柱后注射法观察ZnCl2去除磷脂效果，并对固相萃取条件进行了优化。
实验结果表明，应用酶水解法测定游离或结合态的类固醇激素精确性好（RSD≤15%），本方法的定量限为0.05~25 ng/g，平均回收率为63.2%~121.5%。
该法可用于检测不同种类（鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋、鸽子蛋）与不同养殖方式（普通鸡蛋、有机鸡蛋）的蛋类产品，具有灵敏度高，实用性强等特点。
此外，此法也可进行类固醇激素残留检测，为食品安全风险评估提供参考依据。
%A means employed liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) in electrospray ionization mode(ESI)for analyzing 26 steroids in egg was constructed.The step included extraction with acetonitrile and re-moval of phospholipids by zinc chloride(ZnCl2) before SPE cleanup with a Plexa cartridge.The effect of ZnCl2 on phospho-lipid removal was directly observed using the post column infusion and SPE washing and elution conditions were optimized using a shallow gradient procedure.The results indicated that enzyme hydrolysis was used to determine free and conjugated steroids and satisfactory precision (RSD≤15%) was aquired, th e limits of quantification were between 0.05 and 25 ng/g depending on steroid types,the recoveries ranged from63.2%to 121.5%and this method was effectively employed to com-pare thesteroids in eggs belonging to different species (i.e., hen,duck,quail and pigeon eggs) or different raising system (i.e., normal anic eggs).The developed method is sensitive and useful for detection and quantification of steroids in eggs and can be used for residue controlprograms.Furthermore,the acquired steroid content will provide a reference for food risk assessment analysis.【期刊名称】《中国饲料》【年(卷),期】2015(000)013【总页数】9页(P29-37)【关键词】类固醇激素;蛋类产品;液相色谱-串联质谱;主成分分析【作者】李新一【作者单位】全国畜牧总站中国饲料工业协会，北京朝阳 100125【正文语种】中文【中图分类】S816.17类固醇激素在动物的生长发育、成熟和衰老的各阶段发挥着重要的作用，其作用机制是在体内充当化学信使，通过与雄激素、雌激素、皮质激素的受体结合，激发信号转导，从而发挥相应的作用。
鸡蛋中提取胆固醇
试剂和溶液：除另有规定外，使用分析纯试剂，水为GB/T6682推荐使用的一级水甲醇：色谱纯无水乙醇石油醚：沸程30-60℃无水乙醚无水硫酸钠氢氧化钾60%氢氧化钾溶液：60克氢氧化钾，加水40ML 混合溶解胆固醇：纯度≥99%标准贮备液：胆固醇标准品0.05g(精确至0.1mg)，用无水乙醇溶解定容至50mL，溶解每毫升相当于1mg胆固醇，放置4℃密封可贮藏半年标准工作溶液：分别吸取标准贮备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml，用无水乙醇定容至10ml，配置相当于0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.5mg/ml浓度标准溶液仪器和设备：高效液相色谱仪，具有紫外检测器或相当的检测器分析天平，感量0.1mg色谱柱，C18反相色谱柱（4.6mm*150mm,5um）分析步骤1.样品处理1.1皂化称取粉碎均匀的样品0.25-10g（胆固醇含量约为0.5mg-5mg,精确至0.1mg)，于250ml平底烧瓶中，加入30ml无水乙醇，10ml60%氢氧化钾溶液（4.7），混匀，将试样在100℃磁力搅拌加热套皂化回流1h，不时震荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，用5毫升无水乙醇（4.2）自冷凝管顶端冲洗其内部，取下圆底烧瓶，冷却至室温1.2提取定量转移全部皂化液于250ml分液漏斗中，用30ml水分2-3次冲洗圆底烧瓶，洗液并入分液漏斗，再用40ml石油醚和乙醚混合液(1+1,体积比）分2-3次冲洗平底烧瓶并入分液漏斗，振摇2min，静置，分层，转移水相于第二个分液漏斗，再用30ml石油醚和乙醚混合液（1+1，体积比）重复提取两次，弃去水相，合并三次有机相，用蒸馏水每次100ml，洗涤提取液至中性，初次水洗时轻轻振摇，防止乳化，提取液通过约10g无水硫酸钠（4.5）脱水，转移到150ml平底烧瓶中1.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干，用无水乙醇溶解定容至5ml，溶液通过0.45um过滤膜过滤，收集清液于进样瓶中，待色谱仪测定2.测定2.1色谱参考条件色谱柱：C18反相色谱住柱温：38℃流动相：甲醇流速：1ml/min测定波长：205nm进样量：10ul标准曲线检测分别取10ul标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰面积），以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，检测标准曲线2.3样品中胆固醇的测定取10ul样液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰面积），由标准曲线上差得样液中胆固醇的含量，或利用回归方程式计算样液中胆固醇含量3.结果计算样品中胆固醇的含量（x）以毫克每百克（mg/100g)表示，按下式计算：x=（c×V）÷m×100式中：x-----样品中胆固醇的含量，单位为毫克每百克（mg/100g)c-----样液中胆固醇的含量，单位为毫克每毫升（mg/ml)V-----容体积，单位为毫升（ml)m----样品质量，单位为克（g)平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。
高效液相色谱法测定鸭蛋蛋黄粉中胆固醇含量【开题报告】
毕业设计开题报告应用化学高效液相色谱法测定鸭蛋蛋黄粉中胆固醇含量一、选题的背景和意义随着人民生活水平的提高，作为一种可能危害人体健康的食品组分—胆固醇已逐渐成为国内外食品医学界辩论的热门话题。
胆固醇—学名：5-胆烯-3-β-醇。
在类固醇核的C-3上连接一羟基，而在C-17位上接有一条八碳或更多碳原子的脂族侧链。
是由乙酰辅酶A通过异戊二烯单位的缩合反应而合成,可作为胆酸和类固醇激素的前体。
动物组织中含有大量胆固醇，又以肾上腺、神经组织与胆汁最为富集。
血浆中胆固醇水平过高，是引起动脉粥样硬化的危险因子。
胆固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织中最为丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。
其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等溶剂。
胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质，它不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸，维生素D以及甾体激素的原料。
胆固醇一般分为两类：低密度脂蛋白胆固醇(简称LDL-C)，能对动脉造成损害；而高密度脂蛋白胆固醇（简称HDL-C），则具有清洁疏通动脉的功能。
目前, 对食品中胆固醇的测定方法主要包括: 比色法、气相色谱法、高效液相色谱法及其它方法。
由于胆固醇不溶于水, 在食物中又常伴有共存脂质, 因而对其测定非常复杂。
在所报道的这些方法中, 样品的处理不可避免地要经过皂化-萃取步骤, 并以多步溶剂萃取进行纯化和浓缩。
尤其是样品的皂化过程, 往往是造成测量误差和操作不便的最主要的原因。
本项工作旨在建立一种测定蛋黄胆固醇的相对简单的高效液相色谱分析方法。
二、研究目标与主要内容（含论文提纲）本实验选择高效液相色谱分析法。
与其他测定方法相比，此法操作高效、高灵敏度、分析速度快,可广泛用于胆固醇含量的测定。
三、拟采取的研究方法、研究手段及技术路线、实验方案等本实验采用液相色谱法对鸭蛋蛋黄中胆固醇的含量进行测定，主要涉及实验所需溶液的制备，实验步骤，数据处理三个方面的问题。
实验方案：1.仪器（1）高效液相色谱系统（2）流动相：乙腈-异丙醇（4∶1, V/ V）2.试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，均为蒸馏水。
胆固醇含量测定方法的研究进展_葛军营_宋从从_郑颖
［３］ 曹 劲 松 ． 两 种 测 定 鸡 蛋 胆 固 醇 方 法 的 比 较 ［Ｊ］． 食 品 科 学 ， １９９６，１７（９）：４８－５１．
［４］ 张佳程，骆承痒．直接皂化—比色法测定食品中胆固醇的研 究［Ｊ］．食品与发酵工业，２０００，２６（３）：３５－３８．
［８］ 万 莉，赵常志，徐华筠，等．基于蛋白质直接电子转移的全 胆固醇传感器［Ｊ］．高等学校化学学报，２００９，３０ （４）：６７０－６７４．
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Research progress of detemrination methods of cholesterol
ＧＥ Ｊｕｎｙｉｎｇ， ＳＯＮＧ Ｃｏｎｇｃｏｎｇ，ＺＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ
( College of Applied Chemistry and Bioengineering, Weifang Engineering Vocational College, Qingzhou 262500,China ) Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｃｌｕｄｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ｅｎｚｙｍｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｔｃ．． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｄｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈ Ｒａｍａｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｓｅｎｓｏｒ ｗａｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｉｔ ｉｓ ｐｏｉｎｔｅｄ ｏｕｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ； ｄｅｔｅｍｒｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ； ｆｏｏｄ； ｓｅｒｕｍ
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究吴超;李润航;于中英;娄玉杰【摘要】试验随机选取了中华绿蛋鸡产的绿壳蛋和依莎褐蛋鸡产的褐壳鸡蛋各20枚,采用邻苯二甲醛分光光度计比色法和气相色谱法,测定鸡蛋中胆固醇的含量,比较两种方法在测定鸡蛋胆固醇含量上的差异.结果表明,用邻苯二甲醛比色法测得褐壳蛋蛋黄胆固醇含量176.79 mg/枚,浓度为13.35mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量142.74 mg/枚,浓度为9.69mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).用邻苯二甲醛比色法测得绿壳蛋蛋黄胆固醇含量158.12mg/枚,浓度为10.65 mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量128.70 mg/枚,浓度为8.54 mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P57-60)【关键词】胆固醇;比色法;气相色谱;鸡蛋【作者】吴超;李润航;于中英;娄玉杰【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S811.6在人们健康意识不断增强的今天，胆固醇往往片面的被认为是对人体有害的物质，但实际上，胆固醇是动物细胞各种膜结构及神经髓鞘的重要组成部分，可调节肠胃消化道中膳食脂肪的吸收，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能[7]，但如果摄入量过多，可形成高血脂症，引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病[1-4]。
研究表明，来源于鸡蛋中的胆固醇与来源于其他原料的胆固醇相比更易导致人体血清胆固醇水平的提高[5-6]。
鸡蛋中的胆固醇总量在100～270 mg范围内变动[7]，为满足不同人群的需要，低胆固醇鸡蛋备受人们的关注，因而鸡蛋中胆固醇含量测定的方法及准确性是评定其营养价值的重要参数。
HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量
HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【摘要】应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对不同种类鸡蛋中胆固醇的含量进行测定.采用C18色谱柱为固定相,以甲醇为流动相,流速为1 mL·min-1,柱温为25℃;蒸发光散射检测器的氮气流速为2 L·min-1,漂移管温度为85℃.结果表明,胆固醇进样量在4.008～40.080 μg范围内,其对数与峰面积的对数呈良好的线性关系,相关系数R=0.9991,低、中、高三个浓度回收率为95.4%～99.1%.该方法操作简便、快速,精密度好,结果准确可靠.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)003【总页数】3页(P76-78)【关键词】高效液相色谱-蒸发光散射检测器;鸡蛋;胆固醇;含量测定【作者】王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【作者单位】广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006【正文语种】中文【中图分类】O657.72胆固醇是环戊烷骈多氢菲的衍生物，亦称“胆甾醇”，是动物体内维持正常生理活动所必需的最重要的固醇，通常以游离状态或酯化状态存在于动物组织中[1]。
但是人体内过多的胆固醇将引起高血脂，进而引发动脉粥样硬化、高血压、冠心病等一系列心血管疾病[2]，因此控制饮食中胆固醇摄入量非常必要。
鸡蛋中含有大量的胆固醇，是人体摄入胆固醇的重要途径。
对于鸡蛋中胆固醇含量的测定，文献报道多以在208 nm波长处紫外检测为主，对流动相的要求高，且样品中高紫外吸收物质的干扰大，易造成基线不稳，如果梯度洗脱则会引起基线漂移，使得胆固醇定量难度较大[3]。
测定鸡蛋胆固醇的高效液相色谱新方法
准确称取胆固醇
又常伴有共存脂质 因而对其测定非常复杂 ∀在所报 道的这些方法中 样品的处理不可避免地要经过皂 化 萃取步骤 并以多步溶剂萃取进行纯化和浓缩 ∀ 尤其是样品的皂化过程 往往是造成测量误差和操 作不便的最主要的原因 ∀ 本项工作旨在建立一种测定蛋黄胆固醇的相对 简单的高效液相色谱分析方法 ∀蛋黄以水稀释后 无 须皂化直接以乙醚和石油醚抽提 有机相抽空干燥 至
∀ 且测定方法更为简便 快速 并具有良好
的重现性 ∀ 该方法能有效地用于蛋黄中胆固醇的分 离和测定 对大批样品的测定效果尤其显著 ∀
参
考
文献 源自色 谱
卷
Αν Ι
ροϖεδ Μ ετηοδ οφ Χηολ εστερολ ∆ ετερ ινατιον ιν Ε γ γ Ψολ κ βψ Η ιγ η Περφορ ανχε Λιθυιδ Χηρο ατογ ρα ηψ
ε
谱
卷
而这些小峰在经皂化后萃取的样品色谱图 图 于 中几乎消失 ∀ 显然 在所选择的色谱条件下 包括脂 肪在内的其它组分能与胆固醇有效的分离 ∀ 由此可 见 采用反相高效液相色谱法测定蛋黄胆固醇含量 时可以有效地避免脂肪等其它组分的干扰 ∀ 我们的 实验也表明 采用不同前处理方法的同一样品 色谱 分离后胆固醇的峰高基本一致 ∀ 这表明皂化与否不 会对样品中胆固醇的测定带来影响 ∀很显然 在鸡蛋 蛋黄胆固醇的测定中 我们所采用的色谱条件可直 于 接用于不经皂化处理的样品的测定 并得到胆固醇 含量的可靠结果 ∀ 乙醇和
表
为皂化后萃取样品的
方法和比色法 方法直接萃取样品 胆固醇 Ù 个 蛋 法两种
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高效液相色谱法测定鸡蛋中胆固醇研究(一)
【关键词】色谱
近年来，随着人们生活水平的不断提高，人们对膳食组成中胆固醇的含量越来越引起重视。
胆固醇可在胆道中沉积形成胆石，在血管中的沉积是动脉粥样硬化的重要原因之一。
鉴于胆固醇对人体的影响，人们不断地采取各种各样的措施来减少食物中的胆固醇含量，这就要求分析工作者建立一种快速、简便而又重现性好的测定胆固醇的方法。
鸡蛋是自然界中营养最为丰富的食品之一，但是蛋黄中的高胆固醇也引起人们的高度关注。
目前胆固醇的测定一般都要求萃取总脂质、移去溶剂、在碱性介质中热皂化、萃取出非皂化物质、洗涤及浓缩等〔1，2〕，这些步骤费时、费力又费材料，并因其繁琐的操作预处理，大大增加了实验结果的可变性，本文采用 2.0mol/L的KOH-乙醇溶液直接皂化，石油醚萃取，以乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10）作流动相、C18反相色谱柱分离，UV208nm检测，高效液相色谱法测定，简化了操作步骤，降低了操作强度，减少了试剂使用，并且大大节约了分析时间，整个分析过程仅需1.5h。
本方法用于实际样品的测定，结果满意。
1材料与方法
1.1仪器与试剂Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器G1314A，Agilent1100化学工作站，甲醇、乙腈、异丙醇（均为HPLC级），胆固醇（进口分装），石油醚（重蒸馏，30℃～60℃），无水乙醇、氢氧化钾、氯化钠（均为AR）。
胆固醇标准溶液（1.0mg/ml）:准确称取胆固醇100mg于100ml容量瓶中，用少量甲醇溶解后，用甲醇稀至刻度。
1.2色谱条件分析柱为μBondapakC18TM（30cm×3.9mm），流动相为乙腈-甲醇-异丙醇（10∶80∶10），流速为1.0ml/min，柱温为30℃，紫外检测波长208nm。
1.3样品处理及测定准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于50ml具塞比色管中，加入
2.0mol/L 的KOH-乙醇液5.0ml，振荡混匀，置65℃水浴中皂化30min（每隔5min振摇1次）后取出，经流水冷却，加入饱和氯化钠溶液2.0ml后再加入石油醚20.0ml，旋涡混匀后离心分离，吸取上清液10.0ml于10ml刻度比色管中，通氮气吹干，再用1.0ml甲醇溶解残渣，过0.45μm 滤膜后，吸取10.0μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，外标法定量。
1.4标准曲线绘制用胆固醇标准贮备液配成0.050、0.010、0.200、0.400、0.600mg/ml的胆固醇标准使用液，分别取10.0μl进行色谱测定，以峰面积（A）为纵坐标，胆固醇浓度为横坐标（C，mg/ml）绘制标准曲线，得线性方程为A=556.13C+8.003，r=0.9993。
2结果与讨论
2.1皂化条件试验与萃取条件的选择见马建明等报道〔3〕。
2.2分析波长的选择选择较高灵敏度的检测波长可以提高分析数据的精密度，同时也可以降低检出限。
笔者对以流动相为溶剂的胆固醇标准液进行了扫描，结果发现胆固醇在205nm 处具有最大吸收峰，考虑到紫外区的影响，本方法选用208nm为检测波长。