抗生素效价微生物测定技术
抗生素效价的测定方法
抗生素效价的测定方法1. 磁敏感性法：该方法是将细菌和抗生素共同培养在琼脂平板上，然后在琼脂平板的一侧放置磁性探针，通过磁力对菌落的影响，测定抗生素效价。
这种方法操作简单，结果可重复性好。
2. 微量滴定法：该方法是将不同浓度的抗生素加入含有微生物的培养基中，控制每次加量相同，直至培养基中出现明显的抑菌圈，然后根据最小抑菌浓度来测定抗生素的效价。
这种方法对药物浓度的变化比较敏感，但误差较大。
3. 黏度测定法：该方法是根据细菌代谢后产生的黏性物质的变化，来测定抗生素的效价。
该方法操作简单，但对试验条件较为严格。
4. 限制性酶切割法：该方法是将抗生素和细菌混合后，通过限制性酶将其切割成小片段，进而测定抗生素的效价。
这种方法需使用限制性酶切割试剂和设备，相对较为复杂。
5. 形态学观察法：该方法是观察抗生素对细菌的形态和结构的影响，来判断抗生素的效价。
这种方法适用于细菌的菌落比较大的情况，但操作比较繁琐。
6. 代谢产物测定法：该方法是根据细菌代谢产物的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法操作比较简单，但对试验条件较为严格。
7. 荧光标记法：该方法是将抗生素用荧光标记，然后与细菌共同培养，通过荧光强度的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件要求比较高，但结果可靠性较高。
8. 酶联免疫吸附测定法：该方法是将抗生素用于特定的抗体结合，然后通过检测抗体与细菌结合的情况，来测定抗生素的效价。
这种方法的优点是灵敏度高，同时避免了细菌对抗生素的耐药性。
9. 质谱法：该方法是使用质谱仪分析样品中的分子质量的变化，来测定抗生素的效价。
这种方法可分析多种抗生素，但设备价格昂贵。
10. 核磁共振法：该方法是使用核磁共振仪测定样品中的氢、碳、氮等原子的共振频率和空间结构，来测定抗生素的效价。
这种方法对试验条件的要求非常高，且设备也价格昂贵。
测定抗生素效价的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，应根据具体情况选择合适的方法，以确保测定结果的准确性和可靠性。
抗生素的效价测定方法
抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。
为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。
本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。
二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。
通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。
2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。
通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。
三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。
（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。
2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。
② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。
③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。
（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
第四章抗生素效价的微生物检定法
４、特定单位 以特定的抗生素样品的某一质 量定为一单位。
复习旧课:
1、抗生素是指主要由_____生成的———————— ________________________一类________化合物 称之。
2、作为医疗用抗生素应具有————、————、— ———、————特点。
第四章： 抗生素效价的微生物检定法
教学目标：
１.解释抗生素概念、叙述医疗用抗生素特点、 了解抗生素的主要作用机制
２.叙述抗生素的效价和单位及其表示方法 ３.熟知抗生素效价检定操作流程与基本要求 ４.述说测定原理。 教学重点： 抗生素概念、医疗用抗生素特点、抗生素的效价 和单位及其表示方法 抗生素效价检定操作方法与基本要求
浊度法：系利用抗生素在液体培养基中对试验菌生 长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度值的大小， 比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，以 测定供试品效价的种方法。
管碟法：是利用抗生素在含敏感试验菌的琼脂培养 基中的球面扩散渗透作用，从而形成一定的抑菌圈。 通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。 在一定的抗生素浓度范围内，对数剂量(浓度)与抑 菌圈的表面积或直径成正比。
② 高、低剂量所形成的抑菌圈之差最好大于 2 mm，有些抗生素的差数可较小；
③ 高、低剂量之比一般用2:1，当高、低剂量 所致的抑菌圈差别较小时，可用高低剂量之 比为4:1的比率。
操作步骤： 1. 称量 2. 稀释 3. 双碟的制备 4. 放置钢管 5. 滴加抗生素溶液 6. 抑菌圈测量
图4－6：钢管放置器 （北京先驱威锋技术开 发公司生产开发）
教学难点： 抗生素效价检定操作方法 二剂量法效价计算公式 抗生素的主要作用机制
抗生素微生物效价测量实验的研究
抗生素微生物效价测量实验的研究抗生素微生物效价测量实验的研究一、实验简介：抗生素微生物效价检定法是以抗菌活性为指标来衡量抗生素中有效成分效力的一种方法。
此方法恰好与临床应用的要求相符合，能够确定抗生素的医疗价值，虽然随着仪器分析的发展，部分抗生素含量测定被物理、化学方法所代替，但微生物效价检定法仍然作为抗生素含量测定的经典方法之一被各国药典所采用。
抗生素微生物效价测定法可分为稀释法、比浊法和渗透法三类[1]，通常稀释法用于测定药物的MIC，各国药典均未收载该方法。
除中国药典外，《USP》23 版第六增补版，《BP》1998，《EP》1997第三版，《日抗基》1998均收载了比浊法，其优点是采用液体培养基，无扩散因素的影响。
试验过程短于渗透法。
轩书堂[2]也曾用比浊法测定过泰乐星效价，但该法要求仪器设备较高，且菌种容易污染，故一直未被中国药典所采用。
《日本药局方》虽然收载了该方法，但几乎没有机构使用。
渗透法也称扩散法，其中管碟扩散法即管碟法是国内外最常用的方法。
中、美、英、日和欧洲药典均收载了该方法。
管碟法是利用抗生素在培养基内的扩散渗透作用，将抗生素稀释液加入已放置含有高度敏感性的试验菌培养基的小管内，经培养后，在抗生素扩散到达的适当范围内，形成一定浓度的球型区，产生透明的抑菌圈。
通过测量抑菌圈的大小可进行效价计算。
管碟法分为一剂量法，二剂量法，三剂量法三种。
一剂量法是用已知效价的标准品溶液制备出标准曲线，并在同样条件下测出供试品溶液所致抑菌圈直径的平均值后，再求出其与标准品溶液所致抑菌圈直径平均值之差，以换算出效价。
该方法较为繁琐，目前除《日抗基》1998及《USP》23 版收载外，其他药典均未收载，而《中国药典》自1997年版后已经淘汰了该方法。
基于抗生素对微生物作用所产生的抑菌圈的大小是随着抗生素剂量的变化而变化，是可以测量的，二剂量法采用标准品与供试品对比试验的平行线原理，实验设计出其浓度与反应的直线关系。
抗生素效价测定实验报告
抗生素效价测定实验报告抗生素效价测定实验报告引言：抗生素是一类能够抑制或杀灭细菌生长的药物，广泛应用于医疗领域。
然而，由于抗生素的滥用和不当使用，导致了细菌的耐药性问题日益严重。
为了更好地控制抗生素的使用和开发新的抗生素药物，了解抗生素的效价是非常重要的。
本实验旨在通过测定抗生素的效价，为抗生素研发和临床应用提供参考。
材料与方法：1. 实验菌株：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 抗生素：选择一种常见的抗生素，如青霉素。
3. 培养基：选择适合实验菌株生长的培养基。
4. 细菌培养器：提供适合细菌生长的环境条件。
5. 稀释液：用于制备不同浓度的抗生素溶液。
6. 培养皿：用于培养细菌和抗生素溶液的混合物。
7. 灭菌器：用于灭菌培养皿和其他实验用具。
8. 显微镜：用于观察细菌生长情况。
实验步骤：1. 准备工作：将培养皿和其他实验用具放入灭菌器中进行灭菌处理，以防止实验中的污染。
2. 制备抗生素溶液：根据实验要求，将抗生素溶解在稀释液中，制备不同浓度的抗生素溶液。
3. 制备菌液：将实验菌株接种到含有适合其生长的培养基中，培养至合适的生长期。
4. 稀释菌液：将培养好的菌液按照一定比例稀释，以获得一定浓度的菌液。
5. 实验操作：在灭菌的培养皿中加入一定量的抗生素溶液和稀释后的菌液，使其均匀混合。
6. 培养细菌：将培养皿放入细菌培养器中，提供适合细菌生长的条件，培养一定时间。
7. 观察结果：使用显微镜观察培养皿中细菌的生长情况，记录下不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
结果与讨论：根据实验结果，我们可以得到不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
通常情况下，抗生素浓度越高，细菌的生长受到的抑制作用也越强。
通过对比不同浓度下的细菌生长情况，我们可以确定抗生素的效价。
效价越高的抗生素，其抑菌作用越强，对细菌的杀灭效果也越好。
实验中还可以进行一些控制实验，以确保结果的准确性。
例如，可以设置对照组，即不加入抗生素的培养皿，以观察细菌的正常生长情况。
抗生素效价的测定
微生物发的分类
• 稀释法 • 浊度法 • 双碟法
• 2、浊度法系利用抗生素在液体培养基中对 试验菌生长的抑制作用，通过测定培养后 细菌浊度值的大小，比较标准品与供试品 对试验菌生长抑制的程度，以测定供试品 效价的种方法。
3、管碟法：是利用抗生 素在含敏 感试验菌的 琼脂培养 基中的球面 扩散渗透 作用，从而 形成一定的抑菌圈。 通 过 琼 脂培 养 基 ，可 观 察并测量 出抑菌圈的 大小。
管碟法测定操作
• 1. 试验用菌液 • 金黄色葡萄球菌悬液：取金黄色葡萄球菌 的营养斜面培养物，接种于营养琼脂斜面 上，在35~37℃培养20h到22h，；临用前用 水或者灭菌生理盐水溶液将菌苔洗下，备 用
2 供试品及标准品的配制
• 标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。供 试品应放于干燥器内至少30min方可称取。称量 最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取， 取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。 • 标准品的称量最好用1/100,000克的分析天平， 样品称量不得低于1/10,000克的分析天平。天平 中的干燥加入剂应保持经常注意更换。 • 称量结束后，超声波处理后的磷酸缓冲液， 定容至刻度，过滤并稀释。
（二）抑菌圈的形成
• 在平板底部四边，分别 对角注明“SH”、 “SL” 和“UH”、 “UL”标记 • 将不锈钢小管(俗称为牛 津杯)放置在含敏感试验 菌的琼脂培养基上。
th sl
uh
• 以无菌滴管分别在每个 牛津杯内加入相应的抗 生素溶液至满但不溢出 管外 • 且四杯内液面高度相同， 盖上平皿盖，静置30分 钟。
• 将培养基置入适宜试 验菌生长的培养箱中， 琼脂培养基中的试验 菌开始生长。
• 抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关； • 比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小， 可计算出抗生素的效价。
抗生素效价测定操作规程
1.主题内容和适用范圉本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2.引用标准《中国药典》2010年版二部。
3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微主物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法釆用的是管碟法。
4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明壳，操作间分&一般操作间b半无菌操作间。
室温控制20-25°Co 注意抗生素的污染。
4. 2双蝶：内径90mm高16-17呗用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160°C干热灭菌2小时或高压灭菌121o C30min,备用。
4. 3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4. 4 钢管：内径 6. 0±0. 1mm 高7. 8±0. 1mm 或8. 0±0. 1mm, 10. 0±0. lmm.重量差异不超±0. 05g.用后置1:1000苯扎澳钱溶液内浸泡2h以上，再灭菌洗涤，先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁，水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160°C干热灭菌2小时备用.4. 5钢管放置器4. 6恒温培养箱：隔水式为宜35-37°C4. 7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml）,用后立即置5%石碳酸或1:1000 苯扎漠鞍溶液中消毒后再常规洗涤.150- 160°C干热灭菌2小时备用.4. 8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4. 9称量瓶:具塞，重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW 冲3次，置洁净的大平皿中.120°C干热3h,待冷到70-60°C时,取出置干燥器中备用.4. 10 毛细滴管：清洁液浸泡，水洗、PW冲3次.120°C干燥3h4.11 天平:分析天平，感量0. lmg4. 12 抑菌圈测量仪（多功能微主物自动测量分析仪）4.13 超净工作台5.菌悬液制备取短小芽泡杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水广2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35〜37°C 培养7天。
抗生素生物效价测定[参考]
![抗生素生物效价测定[参考]](https://img.taocdn.com/s3/m/ed9845a5dc88d0d233d4b14e852458fb770b38f5.png)
抗生素生物效价测定[参考]抗生素生物效价测定是用来测定抗生素杀菌或抑制菌落生长能力的一种方法。
该方法通过对一定菌种进行抗生素浓度递减系列的稀释，然后观察菌落生长情况来测定抗生素的生物效价。
测定结果可以确定出单位药物中所含抗菌物质的含量，并且通过该结果可以明确指导抗生素的使用。
抗生素生物效价测试的操作步骤如下：实验仪器:清洁平板、无菌匙、无菌棉签、培养皿、移液器、蒸气灭菌器、执卡器、点斑枪。
试验材料:抗生素标准品（如青霉素）、待检物（例如新的抗生素类别）、接种菌种、琼脂片。
操作步骤:1.准备琼脂平板，把琼脂熔化后加入相应的接种菌液并充分混合,倒入无菌平板中，等待琼脂凝固。
2.将待检物或标准品分别通过滴定法配制成一系列浓度递减的抗生素溶液,分别置于移液器或执卡器中。
3.在琼脂平板上均匀涂上少量接种菌液,用无菌点斑枪在琼脂平板上进行不同抗生素浓度的斑点法, 每个浓度上进行三个重复点斑法,保证试验的可靠性和精确度,同时在控制组和空板上也进行斑点法，以和实验组对比。
4.在施抗生素后，将琼脂平板放入恒温器中进行培养。
观察24小时后菌落生长的情况并记录下来。
5.统计不同浓度下的抗生素和菌落生长的比率，画出不同浓度与生长抑制之间的关系曲线。
6.计算抗生素的生物效价，通常以最低有效抑制浓度（MIC）为单位。
其计算公式如下：生物效价=标准品浓度/待检样品浓度。
7.将实验结果与临床使用常规剂量比较，如得出实验效价与常剂相近或更高，则证明该抗生素是有效的。
反之，如果效价较低，则应进一步测试，或对该抗生素进行结构修饰或改进。
抗生素生物效价测定是非常重要的实验手段，它可以确定抗生素的药效值并为临床用药提供科学依据。
在新药物的研发和临床实践中，抗生素生物效价测定是不可或缺的方法，也是提高治疗效果和减少药物滥用的重要手段。
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第二节 抗生素的效价和单位
一、效价和单位
什么是效价？ 什么是单位？
二、效价单位的表示方法
1、质量单位 2、类似质量单位 3、质量折算单位 4、特定单位
二、医药用抗生素的特点
医药用的抗生素必须具备以下4个特点才能应 用到临床上： 1、有较大的差异毒力 2、抗菌活性强 3、抗菌谱广 4、不产生副作用和不良反应
抗生素的作用
1、抗生素以前被称为抗菌素，事实上它不仅能杀 灭细菌而且对霉菌、支原体、衣原体、螺旋体、立 克次氏体等其它致病微生物也有良好的抑制和杀灭 作用。 2、近年来通常将抗菌素改称为抗生素。抗生素可 以是某些微生物生长繁殖过程中产生的一种物质， 用于治病的抗生素除由此直接提取外；还有完全用 人工合成或部分人工合成的。通俗地讲，抗生素就 是用于治疗各种非病毒感染的药物。 但是在临床使 用中已经显现了许多副作用
滥用抗生素的危害
三、抗生素效价微生物测定技术
1、效价测定方法：稀释法、浊度法、管碟法、
呼吸度量法、快速法、脱氧法。 2、其中管碟法、浊度法是目前国际通用的方法
管碟法测定原理
浊度法
浊度法是利用抗生素的液体培养基中对试验 菌生长的抑制作用，通过测定培养后细菌浊度 值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长 的抑制的程度，以测定供试品效价的一种方法
抗生素效价微生 物测定技术
第一节
概述
一、抗生素概念
抗生素（antibiotics）是由微生物（活过程中 所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级 代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化 学物质。现临床常用的抗生素有转基因工程菌 [1] 培养液液中提取物以及用化学方法合成或半 合成的化合物。目前已知天然抗生素不下万种。