人脂联素(ADPN)
脂联素和2型糖尿病血管病变
脂联素和2型糖尿病血管病变摘要 2型糖尿病是一种以血糖升高为特征的代谢性疾病，其血管并发症是导致患者致残和致死的主要原因，包括大血管病变和微血管病变。
脂联素(adiponectin ADPN)是一种脂肪细胞分泌的特异蛋白质，通过多种生物学效应，阻遏糖尿病患者血管并发症的发生和发展，目前已经通过实验室和临床研究得到广泛证实。
关键词脂联素 2型糖尿病病变现将研究概况综述如下：1. 脂联素概述一般认为,脂联素主要由白色脂肪组织中的脂肪细胞合成和分泌，近来Viengchareun[1]等发现脂联素在棕色脂肪组织如T37i细胞中也能够表达。
脂联素参与多种生理和病理生理现象的调节,尤其是影响代谢性疾病、心血管疾病、肿瘤等的发生和发展。
一般认为，脂联素含量减低与肥胖、胰岛素抵抗、缺血性心脏病密切相关，而脂联素含量的增加见于某些严重疾病,如终末期肾脏病和严重的心衰,其机制还不甚明了。
在机体中，脂联素以低分子量、中分子量和高分子量3种多聚体形式存在于血浆或细胞中。
研究表明，脂联素的功能及作用与其含量和多聚体的分布有重要关系，尤其是高分子量多聚体所占的比例决定其功能。
Kadowaki[2]实验室最先报告了2个脂联素受体，它们属于跨膜蛋白，AdipoR1存在于多种组织和细胞中,尤其在骨骼肌中表达较强。
AdipoR2则主要在肝脏表达。
Kubota[3]最近的一项动物试验显示，adipoR1和adipoR2也在下丘脑表达。
脑脊液内也发现了微量的脂联素,并提示脂联素可能通过刺激下丘脑adipoR1及其下游的信号来促进食物的摄取。
2. 脂联素与2型糖尿病2型糖尿病的特征性病理生理改变是胰岛素抵抗与ß细胞功能缺陷，而目前认为胰岛素抵抗是2型糖尿病的始动因素，因此如何改善胰岛素抵抗对2型糖尿病的防治具有重要的意义。
Kadowaki[2] 通过ob/ob小鼠实验发现脂联素可能通过信号分子将肝脏、骨骼肌的三酰甘油转运至脂肪组织, 从而降低外周组织中的脂质浓度，也使得通过肝门的游离脂肪酸及甘油三酯含量相应降低，从而增加这些组织对胰岛素的敏感性。
脂联素医学课件
详细描述
脂联素可以与其他减肥药物或饮食疗法联合 使用，以增强减肥效果，改善肥胖症患者的 健康状况。此外，脂联素还可以通过调节脂 肪组织和肌肉组织的代谢，减少脂肪堆积和 肌肉萎缩，有助于预防和治疗肥胖症的并发 症。
脂联素在心血管疾病预防和治疗中的应用
总结词
脂联素有助于预防和治疗心血管疾病
详细描述
心血管疾病是一种常见的慢性疾病，与肥胖、糖尿病等代谢性疾病密切相关。脂联素可 以调节血脂代谢，降低低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯水平，同时提高高密度脂蛋白胆
脂联素对肥胖的治疗意义
通过提高肥胖患者的脂联素水平或增 强其活性，有助于改善肥胖相关的代 谢紊乱，减轻体重并降低心血管疾病 的风险。
脂联素与心血管疾病
脂联素与心血管疾病的关系
脂联素具有抗炎、抗氧化和抗动脉粥样硬化的作用，可以保护心血管系统。研究表明，脂 联素水平低下与心血管疾病的发生和发展有关。
脂联素对心血管疾病的治疗意义
03
脂联素与糖尿病并发症
脂联素还可能对糖尿病并发症具有保护作用。研究表明，脂联素可以减
轻糖尿病患者的血管病变和神经病变，降低心血管疾病的风险。
脂联素与肥胖症
脂联素与肥胖的关系
脂联素与肥胖并发症
肥胖患者通常存在脂联素水平下降的 情况，这与其脂肪组织功能障碍和胰 岛素抵抗有关。
脂联素还可能对肥胖患者的并发症具 有保护作用，如改善血脂异常、减少 泌的蛋白质，具有调节血糖和胰岛素敏感性的作用。研究表明，脂联素可以增加胰岛 素的敏感性，减少胰岛素抵抗，从而有助于改善糖尿病患者的血糖控制。
脂联素在糖尿病治疗中的应用
总结词
脂联素可以作为糖尿病辅助治疗手段
详细描述
脂联素可以与其他降糖药物联合使用，以增强降糖效果，改善糖尿病患者的血糖控制。此外，脂联素 还可以通过调节脂肪组织和肌肉组织的代谢，减少脂肪堆积和肌肉萎缩，有助于预防和治疗糖尿病的 并发症。
脂联素的主要功能
脂联素的主要功能
脂联素（Adiponectin）是一种主要由脂肪细胞分泌的蛋白质激素，它在调节糖代谢、脂肪酸氧化和炎症反应中起到重要作用。
以下是脂联素的主要功能：
1.调节糖代谢：脂联素可以增加肌肉对葡萄糖的摄取和使用，从而降低血糖水平。
它通过激活AMP活化蛋白激酶（AMPK）途径来实现这一作用。
2.促进脂肪酸氧化：脂联素增加肌肉中脂肪酸的氧化，从而减少血浆中的游离脂肪
酸水平。
3.抗炎作用：脂联素具有抗炎作用，可以减少肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和其他炎
症因子的产生。
4.抗动脉粥样硬化作用：脂联素可以减少内皮细胞的炎症反应，从而降低动脉粥样
硬化的风险。
5.与肥胖和2型糖尿病的关系：低脂联素水平与肥胖、胰岛素抵抗和2型糖尿病有
关。
增加脂联素水平可能是治疗这些疾病的潜在策略。
6.其他作用：脂联素还与其他多种生理和病理过程有关，如骨代谢、生殖功能和某
些癌症的发展。
总之，脂联素是一个多功能的激素，对于维持能量和糖代谢平
衡以及预防慢性疾病具有重要作用。
总之，脂联素作为一种多功能激素，在维持糖脂代谢平衡、减轻炎症反应和保护心血管系统等方面发挥了关键作用。
然而，肥胖人群通常表现出脂联素水平下降的现象，这也是他们更容易患上代谢综合征和心血管疾病的重要原因之一。
运动对血清脂联素的相关影响研究进展28
运动对血清脂联素的相关影响研究进展摘要】脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽的细胞因子即脂联素（Adiponectin,AdipoQ），其具有抗炎作用,并且随着含量的提升其拮抗作用也会加强,这可使之成为一种能改善胰岛素抵抗状态的胰岛素增敏激素。
AdipoQ水平能预示2型糖尿病和冠心病的发展,其在临床试验中也表现出了抗糖尿病、抗动脉粥样硬化及炎症改变的潜力。
有研究表明,血清内脂素水平的变化对内分泌或代谢性紊乱的病人的运动干预极为敏感,使得运动可通过改变内脂素的分泌来参与机体适应性调节这一相关话题逐渐成为运动医学的研究热点[1]。
本文总结其中可能存在差异的原因，为揭示 Adipo Q 在运动改善机体组织细胞和胰岛素信号活性中的作用机制提供思路和方向，并为临床能够合理设计个性化运动干预方案提供可靠依据。
【关键词】运动、脂联素、细胞因子、运动形式[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165（2019）06-0230-021.关于运动的理论研究1.1运动的基本定义一种涉及体力与技巧的有一套规则或习惯所约束的活动，通常具有竞争性。
二是指在学校教育环境中，指导学生学习和掌握体育的基本知识与技能，使他们形成体育锻炼意识，提高体育活动能力，增进健康的教育活动。
1.2运动强度的定义小强度的运动（保持心在110~130 次·min-1）。
中等强度的运动（保持心率在150~170 次·min-1 ）。
高强度的运动（保持心率在170次·min-1~180次·min-1或者180次·min-1以上）。
1.3运动的形式1.3.1有氧运动(耐力运动)强度低且富韵律性的运动，其运动时间较长（约30分钟或以上），运动强度在中等或中上的程度(最大心率值的60%至80%)强度低、有节奏、持续时间较长。
要求每次锻炼的时间不少于30分钟，每周坚持3到5次。
氧气能充分燃烧（即氧化）体内的糖分，还可消耗体内脂肪，增强和改善心肺功能，预防骨质疏松，调节心理和精神状态,例如：步行、快走、慢跑等。
脂联素医学课件
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脂联素与神经系统疾病
帕金森病是一种常见的神经系统疾病，表现为肌肉僵硬、震颤和运动障碍等症状。脂联素可以减轻帕金森病的症状，改善神经细胞的生存和功能。
研究发现，脂联素可以激活脑内多巴胺能神经元及其通路，从而增加多巴胺的合成和释放，缓解帕金森病患者的症状。
脂联素与帕金森病
阿尔茨海默病是一种以认知障碍为特征的神经系统退行性疾病。脂联素可以减轻阿尔茨海默病的症状，并参与调节脑内炎症和氧化应激反应。
脂联素与其他神经系统疾病
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脂联素的临床应用与展望
总结词
脂联素与心血管疾病
脂联素与糖尿病
脂联素基因检测
脂联素的临床检测与应用
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04
脂联素可以与其他生物标志物联合应用，如BMI、腰围、血压、血糖和血脂等指标，共同评估个体的健康风险。
总结词
脂联素与其他生物标志物的联合应用
BMI（体重指数）和腰围是评估肥胖和中心型肥胖的重要指标，与脂联素水平密切相关。联合检测BMI和腰围可以更全面地评估个体的代谢状况和心血管疾病风险。
脂联素与糖尿病并发症
脂联素水平下降可导致微血管病变、神经病变等多种糖尿病并发症的发生。
脂联素与糖尿病
脂联素与血管内皮功能
脂联素对血管内皮功能具有保护作用，可减轻内皮损伤，抑制炎症反应，从而降低高血压的发病风险。
脂联素与高血压的关联
脂联素水平与高血压的发生呈负相关，低脂联素水平可能导致高血压的发生。
研究发现，脂联素可以抑制小胶质细胞的活化和炎症反应，从而减轻阿尔茨海默病的症状。此外，脂联素还可以抑制脑内氧化应激反应，保护神经细胞免受损伤。
脂联素与阿尔茨海默病
研究还发现，脂联素可能参与调节其他神经系统疾病的发病和进展，包括癫痫、多发性硬化和肌萎缩性侧索硬化症等。
脂联素医学课件
评估治疗效果
脂联素水平与心血管疾病的发生风险 密切相关，可用于预测心血管风险。
通过监测脂联素水平的变化，有助于 评估心血管疾病治疗效果。
指导生活方式干预
通过监测脂联素水平，有助于为患者 制定针对性的生活方式干预方案。
05
脂联素的研究展望
脂联素与疾病发生发展的关系
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脂联素与糖尿病
脂联素水平异常与糖尿病的发生、发展密切相关 ，可能涉及胰岛素抵抗、β细胞功能失调等方面 。
详细描述
脂联素是一种脂肪因子，具有调节脂肪代谢和糖代谢的作用。多项研究表明， 脂联素水平降低与糖尿病风险增加相关，而提高脂联素水平则有助于改善胰岛 素抵抗和减少糖尿病并发症。
脂联素与肥胖症
总结词
脂联素可调节脂肪代谢，脂联素水平降低与肥胖症风险增加相关。
详细描述
脂联素在脂肪代谢中发挥重要作用，可促进脂肪分解和氧化。肥胖症患者通常存 在脂联素水平降低的情况，这可能与肥胖症患者体内脂肪堆积和胰岛素抵抗有关 。
脂联素与细胞信号转导
研究脂联素在细胞信号转导中的作用，寻找潜在的药物作用靶点。
脂联素与免疫调节
脂联素具有免疫调节作用，可能为自身免疫性疾病、炎症性疾病等 的治疗提供新思路。
脂联素相关药物研发进展
靶向脂联素的抗体药物
研发针对脂联素的抗体药物，以阻断 或增强其生物活性，治疗相关疾病。
脂联素受体激动剂
研发脂联素受体激动剂，激活脂联素 信号转导途径，以改善糖尿病、心血 管疾病等的症状。
脂联素与心血管疾病
总结词
脂联素可保护心血管系统，降低心血管疾病风险，与动脉粥 样硬化、心肌梗死等疾病的发生发展密切相关。
详细描述
脂联素具有抗炎、抗氧化、抗动脉粥样硬化等作用，可保护 心血管系统。研究表明，脂联素水平降低与动脉粥样硬化、 心肌梗死等疾病的发生发展密切相关，提高脂联素水平可能 有助于降低心血管疾病风险。
脂联素的检测意义
脂联素的检测意义:脂肪组织（adipose tissue）主要由大量聚集成团的脂肪细胞构成，脂联素(Adiponectin/ADPN) 是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质。
脂联素是一种胰岛素增敏激素(An Insulin-sensitizing Hormone)，能改善小鼠的胰岛素抗性(Insulin resistance)和动脉硬化症；对人体的研究发现，脂联素水平能预示II 型糖尿病和冠心病的发展，并在临床试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。
概述:研究人员发现了一种调节脂联素的新化合物，从而为研究脂联素功能和胰岛素敏感性机制提出了一种新途径。
胰岛素是由胰脏β细胞分泌出来的激素，主要功能是促进血液中的葡萄糖进入肌肉或脂肪组织，提供人体所需的能量。
当胰岛素不能发挥作用时，血液中的葡萄糖便无法转化为人体所需的能量，导致血糖升高，糖尿病由此发生。
而胰岛素抗阻是指细胞不能有效利用胰岛素甚至对胰岛素的反应不再敏锐，这是造成糖尿病的最主要原因。
科学家们相信游离脂肪酸和某些脂肪所释放的分子是引发胰岛素抗阻现象的罪魁祸首。
Lily Dong和合作者一直在寻找与脂联素受体相关的蜂窝状蛋白质，以期发现调节脂联素激素功能的新靶标。
他们鉴别出一种多域蛋白质，它能调节脂联素在脂肪酸氧化和葡萄糖吸收中的功能，并将这种新蛋白质命名为APPL1。
他们的研究并进一步表明，在肌肉细胞中，APPL1通过激酶通道来调节脂联素的胰岛素敏感效应。
脂肪因子是由脂肪组织分泌的具有生物活性的细胞因子及激素,与胰岛素抵抗冠状动脉粥样硬化等代谢过程密切相关。
其中,脂联素是外周血中含量最高的脂肪因子,在健康人中血浆脂联素水平为5~30μg/mL。
脂联素与其受体结合后,通过激活腺苷酸活化蛋白激酶(adenosinemonophos-phate-activatedproteinkinase,AMPK)、p38丝裂原活化蛋白激酶和过氧物酶体增殖物激活受体(peroxidaseproliferationactivatedreceptor,PPAR)等信号分子发挥抗炎、抗糖尿病、抗动脉粥样硬化等多种生物学作用。
人脂联素原核表达载体PQE30ADPN的构建及在大肠杆菌中的表达
天津医药２００８年１１月第３６卷第１Ｉ期人脂联素原核表达载体ＰＱＥ３０／ＡＤＰＮ的构建及在大肠杆菌中的表达幸史晓文刘德敏孙颖张捷８４３摘要目的：构建人脂联素重组表达载体ＰＱＥ３０／ＡＤＰＮ，并在大肠杆菌宿主系统中表达出脂联素蛋白。
对表达产物进行鉴定。
方法：将构建好的人脂联素克隆载体ＰＵＣ５７／ＡＤＰＮ与原核表达载体ＰＱＥ３０通过双酶切方法位点特异地连接在一起，再转化人大肠杆菌ＪＭｌ０９感受态细胞中。
通过筛选得到含有人脂联素基因的重组载体ＰＱＥ３０／ＡＤＰＮ，并用ＩＰＴＧ在大肠杆菌Ｍ１５中诱导表达。
结果：ＰＣＲ获得长度为７５３ｂｐ目的片段，经ＰＱＥ３０原核表达载体连接、筛选及序列分析后，证实所插入的目的片段与Ｃ，ｅｎＢａｎｋ检索的人脂联素ｅＤＮＡ序列（ＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮＭ一００４７９７）１００％匹配；含重组Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ质粒的大肠杆菌经０．４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＩＰＴＧ诱导６ｈ后有表达。
结论：应用并成功构建了人脂联素原核表达载体ＰＱＥ３０／ＡＤＰＮ，且在大肠杆菌中获得有效表达。
关键词胞间信号肽类和蛋白质类基因表达大肠杆菌遗传载体脂联素ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＰｒｏｋａｒｙｏｔｉＰＱＥ３０／ＡｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒａｎｄＩｔｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＣｏｌｉＳＨＩＸｉａｏｗｅｎ，ＬＩＵＤｅｔａｉｎ，ＳＵＮＹｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＪｉｅＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｅＭｅｔａｂｏｌｉｃＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７０，ＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅＰＱＥ３０／ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ（ＡＤＰＮ）ｖｅｃｔｏｒａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（Ｅ．）ｃｏｌｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：．ｎｌｅｅｎｃｏｄｉｎｇｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎＡＤＰＮｇｅｎｅＷａＳｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄＰＵＣ５７／ＡＤＰＮ．Ｕｓｉｎｇｅｎｚｙｍｅｓｔｏｄｉｇｅｓｔｐｌａｓｍｉｄｓ，ｔｈｅｅｎｃｏｄｉｎｇｆｒａｇｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎＡＤＰＮｇｅｎｅＷ＊ｔ８ｌｉｇａｔｅｄｉｎｔｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒＰＱＥ３０．Ａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ，ｉｔｗａ￥ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉＪＭｌ０９ｃｏｍｐｅｔｅｎｔｃｅｌｌｓ．Ａｆｔｅｒｃｈｏｏｓｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖｅｃｔｏｒＰＱＥ３０／ＡＤＰＮｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＬＰＴＧ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ａ７５３ｂｐｆｒａｇｍｅｎｔｗａｇｏｂｔａｉｎｅｄｂｙＰＣＲｃｌｏｎｅ．Ａｆｔｅｒｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｍａｔｃｈｅｄｔｏｔｈｅｅＤＮＡｏｆｈｕｍａｎＡＤＰＮ，ｗｈｉｃｈａｃｃｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅＧｅｎＢａｎｋＷａＳＮＭＪＩ叫１７９７．ＡｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＷ８８ｏｂｔａｉｎｅｄｂｙ０．４ｍｍｏｌ／ＬＩＰＩ．ＧｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｉｎＥｃｏｌｉＭ１５．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉＰＱＥ３０／ＡＤＰＮｖｅｃｔｏｒｗａｓｆｉｒｓｔｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌｉｌｌｇｐｅｐｔｉｄｅｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｉｌｇｅｎｅｔｉｃｖｅｃｔｏｒａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ脂联素（ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ，ＡＤＰＮ）是脂肪细胞特异性分泌的一种血浆激素蛋白，在循环血液中大量存在，约占人体血浆总蛋白含量的０．０１％ｔ１Ｉ。
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人脂联素（ADPN)酶联免疫检测
试剂盒使用说明书
使用前仔细阅读本说明书。
本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人脂联素（ADPN)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中脂联素（ADPN)的测定。
工作原理
本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人脂联素（ADPN)的水平。
向预先包被了人脂联素（ADPN)单克隆抗体的酶标孔中加入脂联素（ADPN)，温育；洗涤后，加入HRP标记过的脂联素（ADPN)抗体。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅与样品中人脂联素（ADPN)的浓度呈正相关。
试剂盒组成
需要而未提供的试剂和器材
1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．精密移液器及一次性吸头
4．蒸馏水，
5．一次性试管
6．吸水纸
注意事项
1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
3．建议所有标准品、样本都做双份检测。
如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释
液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
4．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
5．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
6．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
7．底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
标本要求
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作程序
1．标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比
2
测样品孔。
在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。
3．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。
如此重复5次，拍干。
4．每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。
5．弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。
如此重复5次，拍干。
6．每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
7．取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8．测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
9．根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。
也可以使用各种应用软件来计算。
应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。
操作程序总结：
检测范围：30μg/L→1000μg/L 规格：48T/盒
保存：2-8℃
有效期： 6个月（2-8℃）。