海带多糖的提取及鉴定
酶法提取纯化海带多糖的工艺
出率也随之升 高 ， 当时 间超 过 ５ｈ时 ， 多糖 的浸 出率开
始 变平缓。 同时 ， 提取时间过长容易导致 多糖 的降解 ，
因此 ， 提取 时间不宜过长 。 ２１ 液固 比的影响 ．４ ．
值对细胞壁产 生一定 的影 响 ， 在一定 ｐ Ｈ值 的作用下 ， 细胞壁疏 松易于多糖 的浸 出，从而提高 了多糖 的浸 出 率 。但是 ｐ Ｈ值太低却容易使部分 多糖 水解 。
摘
要 ： 究从海 带中提取 多糖 的工艺条件 ， 研 探讨 不 同因素对浸 出率 的影 响规律 并在此基础上进行 正交试验选 出优
化 的因素组合 。 试验结果表 明： 浸 出 最佳 条件 为 ｐ Ｈ值 ２ 、 ． 温度 ６ ℃、 固比 ４ ： 提取 时间 ３ ， ０ ５ 液 ０１ 、 在该条件 下粗 多糖 ｈ
Ｆｉ． Ｉ ｌｕ ｎｃ ｆｐ ｏ ａ ｈｎｇｒ ｔ ｆｐ ｌｓ ｃ ｈ ｒｄ ｇ１ ｎｆ ｅ ｅｏ Ｈ ｎｌ ｃ ｉ ａ ｅｏ ｏｙ ａ ｃ ａ ｉ ｅ ｅ
提取时问／ ｝ ｌ
Ｅ ｔａ ｔｏ ｍｅｈ ｘｒ ｃｉｎｔ ／ ｉ
从 图 １中可 以看 出 ：多糖 的浸 出率 随 ｐ Ｈ值 的增 大而上升 ， ｐ 当 Ｈ值达到 ４ ． ， ０时 多糖 的浸 出率达 到最 大值 ， Ｈ值继 续增 大 ，海带多糖 的浸 出率反而下 降 ， ｐ ｐ Ｈ值超过 ８ ． ， ０时 出现平 台并且浸 出率很低 。由于 ｐ Ｈ
鲜见报道 。
海带 ： 自威 海 北部 海 域 。木瓜 蛋 白酶 ： 产 酶活力
１ 万 Ｕ ｇ 广西南 宁 。 ５ ／，
１ 仪器与设备 ． ２
仪器 ： 氏定氮仪 ， 凯 消化仪 ， 紫外可见分光 光度计 ，
精密 ｐ Ｈ计 ， 恒温水浴锅 。 试剂 ： 无水 乙醇 ， 浓硫 酸 ， 氢氧化 钠 ， 酸钾 ， 酸 硫 硫
海带多糖提取工艺的研究及在鹅肉红肠中的应用
５万 Ｕ ｇ ／ 。
（） ３ 仪器 设备 ： 肉机 、 绞 斩拌 机 、 肠机 、 煮 锅 、 灌 蒸 数 显恒 温水 浴 锅 、 光 光 度 计 、 型家 用 粉 碎 机 、 分 小 循 环 水式 真空 泵 、 电子 分 析 天 平 、 级 分 级 筛 、 风 恒 各 电 温 干燥 箱 、 转式 蒸发 器 、 旋 离心机 。
ｔ ｅ ｃ ｎ ｉ ｏ ｆｏ ｔｍｕ ｐ ｒ ｍｅｅ ｓ ｈ ｏ ｄｔ ｎ ｏ ｐ ｉ ｍ ａ ａ ｔ ｒ．Ａｎ ｈ ｒ ｃ ｓ ｉ ｇ ｔｃ ｎ ｌ ｇ ｏ ｏ ｓ ｅ ａ ｓ ｇ ｓｒ ｓ ａ ｃ ｅ ｉ ｄ ｔ ｅ ｐ ｏ ｅ ｓｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｆ ｒｇ ｏ ｅｒ ｄ ｓ ｕ ａ ｅ ｗａ ｅ ｅ ｒ ｈ ｄ ａ ｄ ｔ ｅ ｏ ｔｍａ ｏ ｍｕ ａ ｗａ ：ｆｔｍｅ ｔ７ ３ ｎ ｈ ｐ ｉ ｌｆｒ ｌ ｓ ａ ａ ０： ０，ｓａ ｃ ｏ ａ ｅ ｏ ｔｒ ｈ ｄ ｓ ｇ ｆ７％ ， ｎ ｌ ｏ ｙ ａ ｃ ａ ｉ ｅ ｄ ｓ ｇ ｆ ａ ｄ ｋｅｐ ｐ ｌｓ ｃ ｈ ｒｄ ｏ ａ ｅ ｏ ３％ ．ｔ ｎ ｔ ｅ ｒ ｄ ｓ ｕ ａ ｅ ｗｉｈ ｓ ｃ ａ ａ ｏ ｓｐｒｄｕ ｅ ｈｅ ｈ ｅ ａ ｓ ｇ ｔ ｐｅ ｉｌｆ ｖ ｒｗａ ｏ ｃ ｄ． ｌ
摘
韩 玉 玺 黑龙 江八 一农 垦 大 学 黑龙 江 大 庆 １３ １ ６３ ９
要 以 市 售 海 带 为 原 料 ， 用 热 水 浴 提 取 法研 究 了提 取 温 度 、 取 时 间 、 取 液 ｐ 值 以及 料 液 比等 因 素 采 提 提 Ｈ
对 多糖 提 取 量 的 影 响 。通 过 正 交试 验 得 出海 带 多糖 提 取 工 艺及 对 鹅 肉红 肠 的 加 工 工 艺进 行 了研 究 。 结 果 表 明在 料 液比 ｌ ４ ｍ ｇ：０ Ｌ的条 件 下 的 最佳 参 数 为 ： 取 温 度 ９ ￣ 提 取 时 间 ４ ５ （ 取 ２次 ） 提 取 液 ｐ 值 ８Ｏ 提 ０Ｃ， ．ｈ 提 ， Ｈ ． 。在 最佳 参
海带中多糖的提取及其综合利用的开题报告
海带中多糖的提取及其综合利用的开题报告
一、研究背景和意义
海带是一种常见的大型褐藻类海藻，在我国被广泛栽培和野生存在于海域中。
其富含蛋白质、矿物质、维生素等多种营养成分，而且特别是富含多糖，具有多种生物
活性，如抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等。
因此，海带多糖成为近年来研究的热点之一。
多糖是复杂的生物大分子，其结构和性质决定了其生物活性及功能。
海带中的多糖主要是海藻酸钠、多糖硫酸酯等。
目前，海带多糖的提取方法主要有水提法、酸提法、酶法等，其中水提法是最常用、简单、经济的方法。
多糖的应用也非常广泛，例
如食品、保健品、药品等。
海带多糖的提取及其综合利用研究，不仅可以更好地开发海带资源，促进海洋生物产业的发展，同时也可以为人类健康事业做出贡献。
二、研究内容和方法
本研究将以海带为材料，通过水提法和酸提法分别提取海带多糖。
分析比较两种提取方法的优缺点，并对多糖进行成分分析和理化性质测试。
同时对多糖的生物活性
进行评价和比较研究，包括抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等。
在此基础上，本研究将进一步探讨海带多糖的综合利用，包括开发多糖的保健功效、作为食品添加剂的应用等。
具体方法包括多糖的制备、结构特性分析、形态结构
观察、理化特性测试、生物活性评价等。
三、预期结果
本研究将深入探讨海带多糖的提取及其综合利用，比较不同提取方法的优缺点和多糖的生物活性。
同时，通过多种测试手段分析多糖的理化特性和结构特性，为多糖
的应用提供科学依据。
最终实现海带多糖的综合利用，为海洋资源开发和人类健康事
业做出贡献。
海带多糖及其提取方法
ｈ ｐｃ ｆｍ ｎ ｊ ｔ ｔ ｎ ｉ ｒ ｅ ｃ ｇｂ ｏ ａ ａｄｆ ，ａｉ ａ ｕ ｎ，ａ ｉ ｉ ｎ，ａｄ ｈ ｔｅ ｓｅｔｏ ｉ ｍｕ ｅ ｄ ｓ ｎ，ａｔ ｍｏ，ｒ ｕｉ ｏｄｓｇｒ ｎ ｔ ｎｔ ｏｇｌ ｔ ｎｄａｔ ｘ ａｔ ｎ ｅ ａ ｓ ａ ｕ ｍｅ ｔ ｕ ｄ ｎ ｌ ｕ ａ ｃ ａ ｎｏ ｄ ｔｎ
Ｓｇ 肠 道 菌群 的影 响 。结 果显 示５ ０ １０ ｇｇ ＩＡ及 ０ 、００ ｕ／
多方 面 的生 物 活 性 ，如 免 疫 调 节 、抗 肿 瘤 、抗 凝 成 ，长链上有少量 Ｂ １ 链间糖苷键存在 ，物功能，如免疫 调节、抗肿瘤、降血糖 、改善血流变及循环 、调血 海带中含有丰富的海带多糖 ，迄今已经发现其 脂 、抗辐射、抗氧化、抗疲劳、抗炎及保护肝脏等 中含有三种多糖 ，它们分别是褐藻胶、褐藻糖胶及 作用。
褐藻淀粉。褐藻胶包括水不溶性的褐藻酸及各种水
溶性和水不溶性 的褐藻酸盐类，如褐藻酸钠、褐藻 酸铵、褐藻酸钙 ，是褐藻共有的一种细胞间多糖 ， 由ａ １ 一一 一， Ｌ古罗糖醛酸和 １ １ ． ． ４ ３ ， Ｄ 甘露糖醛酸为单 ．４
１ ． １免疫调节作用 海带 多糖 是一 种免 疫 调节 剂 ，可对 巨噬 细 胞 、Ｔ 细胞直接进行免疫调节。岳真等口 将海带粗 多糖经离子交换纤维素分离纯化 ，得到３ 种纯化 的 海带硫 酸多糖 ，Ｌ Ｓ １ Ｐ ．、Ｌ Ｓ３ Ｐ 一 、Ｌ Ｓ２ Ｐ ．，并采用
海带褐藻糖胶
制备的褐藻糖胶
三.鉴定
红外光谱法 将固体样品与KBr在玛瑙研钵中混合研细， 并压成透明片状，然后放到红外光谱仪上进 行分析
红外光谱图
红外光谱图
1点波数3404.0cm-1峰值63.3表明样品中含有氢原子官能团， 2点波数1630.0cm-1峰值68.8表明样品中含有双键化合物， 3点波数1403.0cm-1峰值70.2表明样品中有甲基， 4点波数1094.0cm-1峰值71.0表明样品中含有硫酸基
四.测定（硫酸—蒽酮比色法）
1.实验原理
糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱 水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮脱水缩 合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色。该物质在 620nm处有最大吸收，在150μg/ml范围 内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
2.试剂
（1）配制硫酸—蒽酮试剂：称取0.1g蒽酮， 加80%100ml浓硫酸溶解，摇匀，当日配置 使用
吸光 度A
0 0.024 0.109 0.238 0.453 0.593 0.731 0.280 0.312
样品平均糖含量42.9μg/ml
葡萄糖标准曲线
吸光度
0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0 0
-0.1
葡萄糖标准曲线
y = 0.0077x - 0.0345 R2 = 0.9926
利用碱提醇沉法。
2.实验仪器设备和试剂
1.基本仪器：分光光度计，离心机，水浴锅
2.实验材料及试剂：干海带，1%碳酸钠溶 液：称取15g无水碳酸钠加入150ml蒸馏水， 95%乙醇溶液，氯化钙溶液（2g/100ml）
3.实验步骤
1.海带多糖的提取：
（1）海带用自来水将其洗净，烘干，研磨备 用，称取制备好的10g海带粉，置于烧杯中， 加入150ml刚配好的碳酸钠溶液。
多糖提取——精选推荐
传统的海带多糖的提取方法包括:热水提取法、酶提取法、碱提取法，度是而这些提取方法都存在一定的缺陷。
热水提取的方法采用的温70^-80'}C耗能多，提取时间长.工业生产需要使用的酶量大，不经济。
酶提取的方法提取的时间长，碱提取法是现在工业提取海带多糖的主要方法，但是碱提取方法会造成多糖生物活性的降低。
因此寻找合适的提取方法来降低能耗，提高海带多糖的提取率以及活性变得越来越重要。
为达到这一目的，我们现采用超声波方法来提取海带多糖，随后对其理化性质和生物学活性进行检侧，并与传统方法进行比较，以期得到海带多糖提取的最佳方法。
配制1%的碳酸钠溶液:称取15g无水碳酸钠加入1500mL水称取制备好的200g海带粉，置于不锈钢桶中，加入配好的碳酸钠溶液2. 8L,在50℃水浴5h，趁热用棉纶网进行吊滤，并不断用热冲洗保持温度，获得的吊滤液于5000r/min离心15min，保留上清液。
按体积比平均分成两份，一份上清液经减压浓缩(40 ℃)后，加入三倍体积95%乙醇，沉淀过夜。
离心后获得海带粗多糖 E.另一份上清液中加入氛化钙( 2g/1OOmL)，静置，5000r/min离心去除揭藻酸钙。
上清液经减压浓缩(40 ℃)后，加入三倍体积95%乙醉，沉淀过夜.离心后获得海带硫酸多糖F.将以上所得沉淀E, F各重新溶于水，离心除去不溶物。
上清液再加三倍体积95%乙醇，静置沉淀.生成沉淀经无水乙醇、乙醚洗涤，重新溶于蒸馏水，置于一20℃冰箱冷冻过夜，冷冻干燥得到海带杂多糖E,以及海带硫酸多糖粗品F1可溶性大豆多糖是一种从大豆中提取的多糖类化合物，主要由膳食纤维组成，而膳食纤维对治疗高血压、高血脂、心血管疾病和肥胖病等具有积极作用[1-3]。
可溶性大豆多糖还具有分散稳定性、乳化性，所以常用于酸性饮料中[4-5]。
其属于酸性多糖，结构类似于果胶，多数类型由半乳糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸，也包括鼠李糖、海藻糖、木糖、葡萄糖等。
海带中主要成分提取
甘露醇提取及检测方法一、实验原理甘露醇在海带中的含量较高，海带洗涤液中甘露醇的含量为15g/L，是提取甘露醇的中药资源D-甘露醇化学稳定性好，有甜味又不吸湿，具有重要而广泛的生理作用。
甘露醇为单糖，在体内不被代谢，经肾小球滤过后在肾小管内甚少被重吸收，起到渗透利尿作用；提高血浆渗透压，导致组织内（包括眼、脑、脑脊液等）水分进入血管内，从而减轻组织水肿，降低眼内压、颅内压和脑脊液容量及其压力。
二、实验器材1、材料：海带2、药品：浓盐酸、95%乙醇、浓硫酸、氢氧化、氢氧化钙、D-甘露醇、高碘酸钠（以上均为分析纯度）3、仪器：精密pH试纸（PH 1-3 和PH 11-13 ）、恒温水浴锅、离心机、布氏漏斗、滴定管等三、实验步骤1、浸泡提取将海带洗干净，剪碎，称取50g左右剪碎后的海带，加入1000ml蒸馏水，室温下浸泡2-3h，取浸泡液用30%NaOH溶液，调PH为11-12，静置30min-1h，凝聚沉淀多糖类黏性物质，过滤除去胶状物质，滤液用50%的H₂SO₄中和PH6-7，进一步除去胶状物，得中性提取液。
2、浓缩和沉淀沸腾浓缩中性提取液，除去胶状物，将清液浓缩至原体积的1/4后，冷却至60-70℃，趁热加入2倍量95%乙醇，搅拌均匀，冷却至室温，离心收集灰白色松散沉淀物。
3、精制沉淀物悬浮液于8倍量950mL/L的乙醇中，搅拌回流30min，出料，冷却过滤，离心得粗品甘露醇，含量70%-80%，重复操作一次，经乙醇重结晶后，含量大于90%，氯化物含量小于5g/kg。
取此样品重溶于2倍量蒸馏水中，加入1/8-1/10活性炭，80℃保温30min，过滤至滤液澄清，溶液冷却至室温，结晶，抽滤，洗涤即可得到精品甘露醇。
4、干燥将结晶甘露醇置于105-110℃烘箱内烘干，称重，计算收率。
5、测定甘露醇含量（1）高碘酸钠法测定方法：用电子天平准确称取提取的甘露醇样品0．2g，置于250mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀；用吸管吸取10mL溶液，置碘瓶中，准确加入高碘酸钠溶液50mL，置水浴上加热15min，放置冷却；加碘化钾试液1Oml，塞紧瓶塞，放置5min，用硫代硫酸钠滴定液(O．05mol／L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液1ml，继续滴定至蓝色消失，记录所消耗的碘化钾试液的量。
海带硫酸化多糖的提取及纯化
海带硫酸化多糖的提取及纯化
海带硫酸化多糖的提取及纯化
对海带硫酸化多糖的水提法与酶解法进行比较,发现酶提法效果较好,粗提得率较水提法提高了85.9%,纯化后得率提高了43.6%.纯化过程中,通过正交实验得出CTAB沉淀LPS的最佳最佳优化条件为1%粗糖液:5%CTAB(V/V)为3:2,沉淀时间6 h,离心时间12 min.经单因素实验确定了树脂D315的脱色条件为:1%多糖液与树脂的体积质量比为为100:1(V/W),脱色时间6 h,pH值5.0,温度40℃.
作者：程斌宋加金赵云峰CHENG Bin SONG Jia-jin ZHAO Yun-feng 作者单位：程斌,赵云峰,CHENG Bin,ZHAO Yun-feng(曲阜师范大学生命科学学院,山东,曲阜,273165)
宋加金,SONG Jia-jin(曲阜师范大学科研处,山东,曲阜,273165)
刊名：聊城大学学报（自然科学版）英文刊名：JOURNAL OF LIAOCHENG UNIVERSITY 年，卷(期)：2009 22(2) 分类号：Q946.3 关键词：海带硫酸多糖提取纯化。
多糖的性质实验报告
一、实验目的1. 了解多糖的基本概念和分类。
2. 掌握多糖的提取、分离和鉴定方法。
3. 研究多糖的性质，如溶解性、熔点、黏度等。
4. 探讨多糖在生物体内的功能及其应用。
二、实验原理多糖是一类由多个单糖分子通过苷键连接而成的碳水化合物，具有高分子量和复杂的结构。
多糖在自然界中分布广泛，如植物细胞壁中的纤维素、动物体内的肝素等。
本实验主要研究多糖的提取、分离、鉴定和性质。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：海带、干果皮、玉米淀粉等。
2. 实验试剂：纤维素酶、氯化钙、硫酸、蒽酮、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、葡萄糖、DE-23、DE-41、Sepharose（2B、4B、6B）等。
3. 仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计等。
四、实验步骤1. 多糖的提取（1）取一定量的海带，用组织匀浆机匀浆。
（2）加入适量的纤维素酶，在37℃下反应一段时间。
（3）加入氯化钙溶液，使海藻酸与Ca2+结合沉淀，去除海藻酸。
（4）加入CTAB溶液，使多糖与CTAB络合，溶解度下降，与其他成分分离。
（5）在盐溶液中回溶多糖，通过乙醇沉淀法获得多糖沉淀。
2. 多糖的分离（1）将多糖沉淀溶解于水中，加入DE-23、DE-41和Sepharose，进行凝胶过滤。
（2）根据分子量大小，将多糖分为不同的组分。
3. 多糖的鉴定（1）采用硫酸蒽酮法测定多糖的含量。
（2）利用红外光谱分析多糖的结构。
4. 多糖的性质研究（1）测定多糖的溶解性，比较不同溶剂对多糖溶解度的影响。
（2）测定多糖的熔点，比较不同多糖的熔点差异。
（3）测定多糖的黏度，比较不同浓度的多糖溶液的黏度变化。
五、实验结果与分析1. 多糖的提取通过纤维素酶处理海带，成功提取出多糖。
实验结果表明，海带中的多糖含量较高，提取效果良好。
2. 多糖的分离通过凝胶过滤，成功将多糖分为不同组分。
实验结果表明，不同组分的多糖具有不同的分子量。
3. 多糖的鉴定采用硫酸蒽酮法测定多糖的含量，结果显示多糖含量较高。
海带硫酸多糖的提取纯化及测定
液减压浓缩 。 后用 ５ 最 ％Ｎａ Ｈ 调 浓 缩 液 至 ｐ ＝ ， 无 水 乙醇 至 ２ ％～ 糖 对 照 品溶 液 。 Ｏ Ｈ ７加 ０ ３ ％沉 淀 。 离心 去 除 沉 淀 ， 清 液 加 无 水 乙 醇 至 ５ ％～ ０ ， 心 得 沉 ０ 上 ０ ６％ 离 标 准 曲 线 的 制 作 ： 分 别 取 ０１ Ｌ 的 葡 聚 糖 溶 液 ．ｕ 淀。 Ｏ１ ，．０ ０ ０ ０ ００８ １ ０Ｔ ．０ ０２ ，． ，． ，． ４ ６ Ｏ，． ＩＬ置 于 试 管 中， 蒸 馏 水 补 到 ２Ｏ ｍＬ； Ｏ ｌ 用 ． Ｏ
１ ． 方 法 ２
以２ ｌ ｍｏ Ｌ的 ＨＣ 溶 解 ， 心 ， 清 液 中加 入 ｌ Ｈ Ｏ ， 加 ２ ｌ ／ Ｉ 离 上 ｍＬ Ｎ 滴 ｍｏ／ Ｌ的 Ｂ Ｃ 液 ，迅 速 产 生 白 色沉 淀 ，说 明 多 糖 灰 化 后 产 生 了无 机 的 硫 酸 ａ １溶
１ ． 海 带 粗多 糖 的提 取 步骤 ．１ ２
要】 乙醇沉淀法提取海 带硫 酸多糖 ， Ａ ８ 用 Ｂ一 Ｏ大孔吸 附树脂柱去除 色素 ， 结果表明经 ＡＢ ８ 一 ０大孔吸附树脂去除 色素后 可得 到较纯
【 键词 ｌ 带； 关 海 多糖 ； 取 ； 定 提 测
海 带 ａ ｉａｉａｏ ｉ ） 为 一种 重 要 的 海 生 资 源 ， 我 国 产 量 极 ２１ Ｐ ｍ ｎｒｊｐ ｎｃ 作 ａ 在 ． ＡＳ法 （ 碘 酸 锡 夫 反 应 ） 过 其 丰 富 。其 药 用 价 值 在 《 草 纲 目》 《 农 本 草 经 》 《 物 本 草 》 本 、神 和 食 等传 按 文 献 ｆ 样 品 用 适 量 蒸 馏 水 溶 解 ， 入 高 碘 酸 。 滴 加 Ｓｈｆ试 将 加 再 ｃｉ 统 医 书 中都 已有 记 载 。现 代 科 学 研 究 证 明 ． 带 具 有 多 方 面 的 保 健 功 剂 ， 液 有 无 色 变 为 紫 色 ． 果 表 明 此 样 品 为 多 糖 。 海 溶 结 能 ， 降血 脂 、 血 糖 、 血 栓 、 肿 瘤 、 辐 射 等 。而 海 带 的 多 种 生 物 ２２ 碘 液 反 应 如 降 抗 抗 抗 ．
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海带多糖的提取及鉴定
1、实验目的及原理
海带是褐藻门植物，海带多糖是海带药用价值的最集中体现，海带多糖的种类很多。
本实验的主要目的是掌握海带多糖的提取及测定方法。
对海带多糖的提取方法有很多，碱提取法是其中重要的一种。
多糖中的己糖能与苯酚硫酸试剂发生显色反应，颜色的深浅与己糖含量成正比。
颜色的深浅可通过分光光度计测定，因此，可建立不同浓度的标准己糖与吸光度间的呈线性关系，绘制标准曲线，测定样品的吸光度值，再从表中曲线中查到样品中多糖的含量。
2、实验基本内容和要求
（1）掌握碱提取法提取海带多糖
（2）掌握利用绘制标准曲线方法测定多糖含量
3、实验所用仪器设备和试剂
（1）基本仪器：分光光度计，离心机
（2）实验材料及试剂：干海带1 %碳酸钠溶液：称取15 g无水碳酸钠加入1500 mL蒸馏水，95%乙醇溶液，氯化钙溶液(2g/100mL)
4、实验步骤
4.1 海带多糖的提取
（1）购买海带后，用自来水将其洗净，晒干，研磨，过60目-80目的筛，收集备用。
称取制备好的2 g海带粉，置于烧杯中，加入28 mL 刚配好的碳酸钠溶液。
（2）在50℃水浴中水浴，趁热用棉纶网进行吊滤，并不断用热水冲
洗保持温度，获得的吊滤液于5000 r/min 离心15 min，保留上清液。
上清液经减压浓缩（40℃）后，加入三倍体积95%乙醇，沉淀过夜。
离心后获得海带粗多糖。
二．鉴定
Molisch反应（α-萘酚反应）此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。
它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。
由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。
α-萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α-萘酚一样。
除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。
三，硫酸-蒽酮法测定海带多糖含量
1.配制硫酸-蒽酮试剂:取2 g蒽酮溶解于1000 mL浓H2SO4中，当日配制使用。
2.绘制葡萄糖标准曲线:准确量取100g/mL葡萄糖标准溶液0，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL，注入糖管中，补充纯水至1.00 mL （下表）。
并分别加入4.00 mL硫酸-蒽酮试剂，盖塞后立即摇匀，迅速浸入冷水浴中，各管加完后一起置于沸水浴中10 min，，封口防蒸发，取出流水冷却，室温放置10分钟，于620 nm处比色，测定吸光度值。
以测得的吸光度为纵坐标，标准葡萄糖含量为横坐标，作出标准曲线。
3．海带多糖含量测定:将海带粗多糖以适量水溶解（约为10-80
μg/mL），并准确量取1.00 mL待测溶液，加入4 mL硫酸-蒽酮试剂，同标准曲线之操作，比色测定。
根据标准曲线计算糖含量。
0.2mL—2mL（10倍）。
0.2 mL—2 mL（10倍）
1 mL—
2 mL（20倍）
1 mL—
2 mL（40倍）
二、实验原理
本实验综合利用细胞匀浆和纤维素酶水解，破碎海带细胞壁，释放细胞内容物，包括多糖、海藻酸以及蛋白、核酸等；随后通过海藻酸与Ca2+的结合沉淀形成不溶性海藻酸钙，以去除其中的海藻酸；继而通过CTAB与多糖络合后溶解度下降的特性，将多糖与其他成份分离；最后在盐溶液中回溶多糖，并通过乙醇沉淀法获得多糖沉淀，即为海带粗多糖。
可采用硫酸－蒽酮法测定多糖的含量。
三、实验材料及试剂
实验材料：干海带
实验试剂：纤维素酶、1 mol/L氯化钙溶液、硫酸、蒽酮、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、葡萄糖等
仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机，分光光度计
四、实验步骤
1．干海带加水浸泡过夜，充分溶胀后，加入1/3体积的水，放入组织匀浆机中，粉碎成海带浆。
取约100 mL海带浆，调PH值为4.5-5.0，加入0.3 g纤维素酶，于50度温浴水解4-6小时，间或搅拌，促进细胞壁水解。
2..在海带浆中加入50 ml水，搅拌均匀，沸水浴5 min，使纤维素酶失活，冷至室温，用6层纱布过滤，收集滤液（注：1.这个时候一定不要混入海带渣，防止对后面测量结果的影响，2.过滤过程中可戴手套挤纱布，但是不要太用力使海带渣意外流出）。
3．向滤液中加入1/4体积1 mol/L氯化钙溶液，搅拌均匀后，4层纱布过滤，去除海藻酸钙（这个时候过滤比较简单，因为海藻酸钙是絮状沉淀，易过滤）。
4．于滤液中加入1/5体积的2%CTAB与海带多糖结合沉淀，12000 rpm 离心5 min收集CTAB-多糖沉淀物（1.要经过离心的两个管一定要配平，平行操作2.两个管相对放置3.离心参数设置4.记忆）。
5．在CTAB-多糖络合沉淀物中加入0.5 mL 2 mol/L氯化钾溶液，通过盐解作用，溶解释放海带多糖，然后加入2倍体积无水乙醇沉淀多糖，12000 rpm离心5 min。