显微镜荧光波长详解
500nm 波长
500nm波长
500nm波长是指在可见光谱中，光线的波长为500纳米。
可见光谱是指人眼能够看到的电磁波的一部分，其波长范围从400纳米到700纳米。
在可见光谱中，500nm波长的光线属于绿色波段，是人眼能够感知的颜色之一。
500nm波长的光线在生物荧光显微镜、显微镜和激光器等应用中具有重要的作用。
在生物荧光显微镜中，500nm 波长的光线可以穿透生物组织，并激发荧光染料，从而提供高对比度的图像。
在显微镜中，500nm波长的光线可以提供清晰的图像，并且不会对样品产生破坏。
在激光器中，500nm波长的激光器可以产生高能量的激光束，用于材料加工、医疗美容和科学研究等领域。
此外，500nm波长的光线还可以用于显微分析、光学传感器和光存储等领域。
在显微分析中，500nm波长的光线可以提供高分辨率的图像，并且可以通过选择适当的偏振方式来增强图像对比度。
在光学传感器中，500nm波长的光线可以与特定的化学物质发生共振，并且可以用于检测污染物和化学成分等。
在光存储中，500nm波长的光线可以用于记录和读取数字信息。
总之，500nm波长的光线在生物荧光显微镜、显微镜、激光器、显微分析、光学传感器和光存储等领域都有
广泛的应用。
荧光显微镜的激发波长
荧光显微镜的激发波长荧光显微镜是一种重要的显微镜技术，它利用荧光染料作为荧光物质，通过激发波长来观察和研究样品的显微结构和特性。
不同的荧光染料对应不同的激发波长，因此激发波长是荧光显微镜中的关键参数之一。
激发波长是指激发荧光染料的光波长，通过这种波长的光照射到样品上，荧光染料会吸收光能并发射出特定波长的荧光。
激发波长通常在可见光范围内，常见的激发波长有蓝光激发、绿光激发和红光激发等。
不同的荧光染料对应的激发波长也不同，因此在选择荧光染料时需要考虑其对应的激发波长。
荧光显微镜的激发波长对于观察和研究样品非常重要。
首先，激发波长的选择直接影响到荧光显微镜的成像效果。
如果选择的激发波长与荧光染料的激发波长不匹配，荧光显微镜可能无法有效地激发荧光。
因此，在使用荧光显微镜时，需要根据荧光染料的特性和样品的需求选择合适的激发波长。
不同的激发波长可以提供不同的信息。
在生物医学研究中，荧光显微镜通常被用于观察和研究细胞和组织的结构和功能。
通过选择不同的激发波长，可以标记不同的细胞和分子，从而研究它们的分布、相互作用以及功能。
例如，利用蓝光激发波长可以观察细胞核的形态和染色体的分布，利用绿光激发波长可以观察细胞器的形态和分布，利用红光激发波长可以观察特定分子的表达和定位等。
激发波长还可以用于荧光共振能量转移（FRET）技术。
FRET是一种通过荧光信号的能量转移来研究分子相互作用的技术。
在FRET中，通常需要使用两种不同的荧光染料，其中一种作为受体染料，另一种作为给体染料。
给体染料的激发波长需要与受体染料的发射波长匹配，以实现能量转移。
因此，激发波长的选择对于FRET技术的成功应用非常重要。
除了以上应用，荧光显微镜的激发波长还可以用于荧光定量分析、荧光成像和荧光活细胞实时观察等研究领域。
在荧光定量分析中，可以通过激发波长的选择和荧光强度的测量来定量分析样品中某种化合物的含量。
在荧光成像中，可以通过选择合适的激发波长来观察和记录样品的荧光分布和变化。
荧光波长以及颜色
荧光波长以及颜色
荧光波长是指物体吸收光能后所发射的光的波长范围。
不同物质的荧光波长范围各不相同，因此发出的颜色也会有所差异。
常见的荧光颜色包括：
1. 绿色：荧光绿的波长范围大约在500-570纳米之间。
2. 蓝色：荧光蓝的波长范围大约在440-490纳米之间。
3. 红色：荧光红的波长范围大约在570-650纳米之间。
除了这些基本颜色，还有许多其他的荧光颜色，如黄色、橙色、紫色等，其波长范围会有所差异。
需要注意的是，荧光颜色的产生是由物质的性质决定的，不同的物质在吸收和发射光能时会有不同的波长范围和颜色。
cy2的激发波长和发射波长
cy2的激发波长和发射波长CY2是一种常见的荧光染料，广泛应用于生物医学研究和荧光显微技术中。
它具有独特的激发波长和发射波长，其独特的荧光特性使其成为科学研究中不可或缺的工具。
首先，我们来看看CY2的激发波长。
激发波长是指当CY2受到光的激发时，所需的光的波长。
CY2的激发波长为488纳米。
这意味着，当CY2受到波长为488纳米的光照射时，其分子将被激发到高能态，从而产生荧光。
这使得CY2成为荧光显微镜中常用的标记物之一，因为氩离子激光等可以产生488纳米波长的光源。
接下来，我们来介绍CY2的发射波长。
发射波长是指当CY2分子被激发后发出的荧光光谱中的波长。
对于CY2而言，它的发射波长为515纳米。
这意味着在荧光显微观察中，当CY2受到激发光的照射后，它会发出波长为515纳米的荧光信号。
这种特定的发射波长使得CY2能够与其他荧光染料进行区分，并在复杂的生物样本中提供清晰的显微图像。
CY2独特的激发波长和发射波长为科学家们提供了极大的便利。
首先，CY2的激发波长处于可见光范围内，这意味着它可以通过常见的光源（如激光器或荧光显微镜）激发。
其次，CY2的发射波长也处于可见光范围内，这使得研究者可以直接观察和记录CY2的荧光信号。
这样的好处使得CY2成为广泛使用的荧光染料，可应用于细胞成像、蛋白质定位、细胞追踪以及分子相互作用研究等领域。
除了激发波长和发射波长外，CY2还具有许多其他优点。
首先，CY2荧光强度高，对光照条件不敏感，使其在低荧光背景下具有良好的探测灵敏度。
其次，CY2具有较长的荧光寿命，这使得在时间解析实验中能够进行更精确的测量。
此外，CY2还具有优异的化学稳定性和光稳定性，这使得其可以经受多次激发和长时间的照射而不受损坏。
总之，CY2作为一种常见的荧光染料，其独特的激发波长和发射波长为科学研究和荧光显微技术提供了重要的工具。
作为荧光显微镜中常用的标记物之一，CY2能够通过488纳米的激发光激发，产生515纳米的发射波长荧光信号。
罗丹明b激发波长和发射波长
罗丹明b激发波长和发射波长
罗丹明B激发波长和发射波长
罗丹明B是一种广泛应用于细胞荧光显微镜技术的荧光染料，其激发
波长和发射波长是控制荧光显微成像的关键。
激发波长
罗丹明B的激发波长为约555纳米，也就是在这一波长的光照射下，
罗丹明B分子就会被激发并发出亮丽的荧光信号。
这一波长的光通常
由荧光显微镜中的汞弧灯或激光发生器产生，可以对荧光分子进行激发。
通过改变激发波长，可以控制荧光显微镜的成像深度和分辨率。
例如，在使用罗丹明B染色的活体细胞成像中，较短的激发波长可以提供更
好的空间分辨率，但也会导致较深的成像深度。
而较长的激发波长则
可以深入细胞组织成像，但分辨率会降低。
发射波长
罗丹明B的发射波长为约620纳米，也就是它在受到激发后发出的亮
丽荧光信号的波长。
这一波长的荧光信号可以被荧光显微镜中的荧光
探测器捕获和记录。
通过选择合适的发射滤光片，可以对罗丹明B的荧光信号进行进一步的筛选，以提高图像质量和信噪比。
使用较窄的发射滤光片可以减少背景噪声，提高信号的特异性。
结语
在现代细胞学和神经科学研究中，罗丹明B已成为了极其广泛的荧光染料，它的激发波长和发射波长的选择与调整对于成像质量和空间分辨率的提高至关重要。
同时，罗丹明B也为荧光显微成像的高效应用提供了正确而有力的技术支持。
常用荧光 波长
常用荧光波长
荧光是一种物质在受到激发后发出的可见光，常用荧光波长包括蓝色、绿色、黄色和红色。
本文将从这四个方面介绍常用荧光的特点和应用。
一、蓝色荧光
蓝色荧光的波长一般在400-500纳米之间。
在日常生活中，我们经常接触到蓝色荧光的物品，比如保健品中的荧光染料和荧光笔。
此外，蓝色荧光还被广泛应用于科学研究领域，如细胞和分子生物学研究中的荧光探针。
二、绿色荧光
绿色荧光的波长一般在500-600纳米之间。
绿色荧光在荧光显微镜、荧光指示剂和荧光染料中得到了广泛的应用。
荧光显微镜利用绿色荧光染料的特性，可以在细胞和组织水平上观察生物分子的运动和相互作用。
此外，绿色荧光还被用于生物医学领域的分子标记和荧光成像。
三、黄色荧光
黄色荧光的波长一般在550-600纳米之间。
黄色荧光的应用范围非常广泛，包括荧光灯、液晶显示器和荧光染料等。
黄色荧光的特点是亮度高、稳定性好和发光时间长，因此在照明和显示领域有着重要的应用。
四、红色荧光
红色荧光的波长一般在600-700纳米之间。
红色荧光具有较长的波长，因此在光学成像和生物医学领域有着广泛的应用。
红色荧光染料可以用于标记生物样品中的特定分子，通过荧光显微镜观察其分布和变化。
此外，红色荧光还被用于红外线光学成像和光学通信等领域。
总结起来，常用荧光波长包括蓝色、绿色、黄色和红色。
这些荧光的特点和应用各不相同，但都在科学研究、生物医学和光学领域发挥着重要的作用。
通过研究和应用这些荧光，我们可以更好地理解和探索自然界的奥秘，并为人类的生活和健康提供更多的可能性。
荧光显微镜
左图是哥伦比亚大学的简·施莫兰泽(Jan Sch-moranzer)，在经过 血清饥饿处理的成纤维细胞的受创细胞膜上，拍摄到的微管结 构图(绿色)。从图上看来，成纤维细胞的微管已经表现出异常行 为。微管的直径约20nm，通常情况下，当细胞膜上有裂口时， 微管会向裂口处聚集，但图中反映的情况却不是这样。在细胞 分裂间期，杜克大学的U·塞尔达尔·图卢(U. Serdar Tulu)在138µm 宽的视野中，拍摄到了染色体(蓝色)周围正在形成的微管(黄色 ，右图)。
方法
1.质粒DNA的提取,方法略。 2.基因电转移 a.采集产出后1.0～1.5 h内的新鲜家蝇卵，加入少量TE ，使卵在载玻片上分散并计数。每100枚卵为一个单位 ，放入反应杯内，再加入95 ul TE、pBac[DsRed]和 helper质粒各5 ul（200 ng/ul），按脉冲电压1500 v和 脉冲时间5.4 ms进行电转移。将经电转移处理的卵取出 ，放入新鲜配置的幼虫饲料（麸皮加水）中，于25～ 27℃条件下进行培养。 b.将培养3～4天的幼虫在倒置荧光显微镜下观察，凡眼 部和神经脊索呈现特异红色荧光的为转基因阳性（为了 防止幼虫的爬行而影响实验的进行，可以先把家蝇幼虫 放在冰上一段时间后再观察）。
荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源 ，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光 3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本 内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再 通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的 对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性 高。主要用于细胞结构和功能、细胞内物质的吸 收、运输、化学物质的分布及定位以及化学成分 等的研究。
荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究， 即以异硫氰酸或罗丹明等荧光素标记抗体（一抗 或二抗），用该标记抗体直接或间接地与细胞内 的相应抗原结合，以检测该抗原的存在与分布。 另外，根据荧光蛋白的特性，荧光显微镜还可用 于转基因方面的研究，是荧光观察的有利工具。
实验4荧光显微镜的使用
实验4 荧光显微镜的使用荧光显微镜(fluorescence microscope)是利用一定波长的光激发标本产生不同颜色的荧光，再通过物镜和目镜的放大作用来显示标本中的某些化学成分和细胞组分的显微装置。
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具，通常用于检测与荧光染料共价结合的特殊蛋白质或其他分子。
由于它灵敏度高，用极低浓度(PPM级)荧光染料就可清楚地显示细胞内特定成分，故可进行活体观察。
因此，可以用来观察活细胞内物质的吸收与运输，化学物质的分布与定位等；近年来发展起来免疫荧光显微技术，可将荧光素标记抗体，利用抗体与细胞表面或内部大分子(抗原)的特异性结合，在荧光显微镜下对细胞内的特异成分进行精确定位研究；与分光光度计结合构成的显微分光光度计，可对细胞内物质进行定量分析，精确度高，可测得10-15g的DNA 含量。
目前许多新兴生物研究领域如基因原位杂交（FISH）都等应用到荧光显微镜。
由于荧光显微镜技术具有染色简便、标本色彩鲜艳，敏感度高、特异性强的特点，在细胞生物学研究领域已被广泛应用。
荧光显微镜的原理：某些物质受紫外线照射时可发出荧光，这种物质称荧光物质。
细胞内含有少数天然荧光物质，如叶绿素、血红素、维生素、脂褐素、核黄素等经紫外线照射后可产生自发荧光；还有些细胞成分虽然受照射后不发荧光，但可以用荧光物质或荧光染料（如酸性品红、甲基绿、吖啶橙等）处理标本使其有选择性地带上荧光染料，经紫外线照射后可诱发荧光，称为继发荧光。
荧光染料对光的吸收由高度的选择性，其荧光发射也有一定的范围。
如吖啶橙的吸收峰在405nm，发射波长为530～630nm，最高峰在565nm，如要获得比较强的荧光，需要选用与匹配的滤片系统。
荧光染料的种类很多，不同的染料有不同的使用范围。
最常用的荧光染料有以下几种：表荧光染料的应用范围荧光微镜的装置：荧光显微镜与普通光学显微镜结构基本相同，主要区别在于光源和滤光片不同，由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。
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⏹人肉眼对光源波长的颜色感觉红色770-622 nm橙色622~597 nm黄色597~577 nm绿色577~492 nm蓝靛色492～455nm紫色455～350nm⏹常见显微镜滤光片的波长在激发波长在Ex围才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到，背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
红色滤光片G-2AEx 510-560DM 575BA 590绿色滤光片B-2AEx 450-490DM 505BA 520蓝色滤光片UV-2AEx 330-380DM 400BA 420其它荧光染料介绍【菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)】Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光为波长510nm的绿色可见光。
Cy2和FITC使用相同的滤波片。
由于Cy2比FITC在光下更稳定。
要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。
Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。
Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强发射光为570nm。
因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。
Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯(543nm)或者汞灯(546nm)下则约75％。
Cy3可以和荧光素一起作双标。
Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。
Cy5耦联基团的激发波长最大650nm，发光波长最大670nm。
在氪氩灯(647nm)下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下(633nm)为63％。
Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。
由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。
通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜。
在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。
使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐使用Cy5。
【藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)荧光标记二抗】存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，在自然结构中，藻红蛋白吸收光能，吸收后转化成能量，供其发育生长。
当藻红蛋白被分离和纯化后，其蛋白质变得具有很强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，此时不再接受任何外来的光，也不能转移光能。
藻红蛋白PE的吸收波长围较广，最大的吸收波长为566nm，最大的发射波长为574nm。
藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。
【Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)】耦联的AMCA吸收光波长最大为350nm，发荧光则为450nm。
对于荧光显微镜来说，AMCA 可以用汞灯来激发，用紫外滤板来观察。
由于AMCA的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用AMCA。
AMCA和荧光素的荧光波长只有很小的重叠围，而和发出长波长荧光的荧光基团没有或者只有极少的重叠，因此它最常用于多标记实验中，比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。
由于人眼不能很好的检测蓝色荧光，在多标记的实验中，AMCA耦联的二抗应当被用于检测大量的抗原。
AMCA和荧光素一样很快淬灭，使用抗淬灭剂可以减轻。
且由于肉眼不能很好的检测AMCA所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。
如果使用在流式细胞仪中，AMCA可以用汞灯或者水冷却的氩光灯激发，因为它们发出的光线是在光谱的紫外区。
注：由于观察荧光需要一定波长的激发光，必须根据实验室已有的仪器可发光的波段进行选择。
另外，多标记中对探针色彩区分程度的要求。
例如，若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明(TRITC)或者Cy3的区别明显。
如果对灵敏度有更高的要求，则Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针要亮。
西美杰备有全面的二抗现货产品并能提供最完整的二抗产品线。
主要二抗品牌为全球最大的二抗和底物生产厂商KPL以及前沿抗体生产商ProteinTech。
针对荧光标记二抗，有FITC、TRITC、Rhodamine、PE、Cy3/5、AMCA、Dylight等多种荧光标记二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同类型抗体。
The role of filters in epi-fluorescence microscopy在激发波长在Ex围才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到，背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
As shown in Figure 1, filter blocks are constructed from 2 types of filters and 1 dichroic mirror. Selecting appropriate filters and mirrors for each use allows researchers to attain a high signal to noise (S/N) ratio between the fluorescence and background light. The functions of these optical elements are described below.荧光滤色块组示意图。
每个滤色块组有一个半透半反镜，一个激发光滤光片，两个发射光滤光片。
如前面介绍的，由光源发出的光透过激发光滤光片进入滤色块组，被半透半反镜反射；发射出的荧光透过发射光滤光片进入目镜或相机。
在这一组合中，半透半反镜以及左侧的发射光滤光片是固定在架子上的，而右侧的发射光滤光片则安装在一个可以拆卸的滤片框。
只要松动螺丝，就可以拆下右侧的滤片框，然后根据需要，更换半透半反镜。
更换时需要注意，不要把固定用的胶水，涂到半透半反镜上，操作要带手套，避免将指纹留在镜面上。
上述体视镜可搭配3各荧光滤色块，以及一个用于明场观察的无滤片块。
观察时，可通过拉动杠杆调节滤色块的位置，每一个滤色块配有不同的标识，便于选择。
Excitation filter (EX)——激发光The excitation filter is the optical element that passes only the wavelength of light necessary for excitation from the excitation light source (usually a mercury lamp) to the fluorophore. As shown in Figure 2, only the excitation wavelength passes through the filter, usually a "band pass filter".Dichroic mirror (DM)The dichroic mirror is the optical element that separates the excitation light from the fluorescence. Dichroic mirrors are special mirrors that reflect only a specific wavelength of light, allowing all other wavelengths to pass through (Figure 3). Dichroic mirrors used inepi-fluorescence microscope filter blocks are placed in a 45° incidence angle to light, creating a "stop band"of reflected light and a "pass band"of transmitted light. Light passing through the excitation filter is reflected 90° toward the objective and the specimen. Finally, light emanating from the specimen is passed through and directed toward the observer (or high-sensitivity camera).Barrier filters (BA) or emission (EM) filtersBarrier filters are optical elements that separate fluorescence emanating from the fluorophore from other background light. As shown in Figure 4, the barrier filter transmits light of the fluorescence wavelength which passes through the dichroic mirror while blocking all other light leaking from the excitation lamp (reflected from the specimen or optical elements). This is necessary because the strength of the fluorescent light is weaker than the excitation light by a factor of more than 100,000:1. Most barrier filters are positioned at a slight angle to allow better fluorescent imaging by suppressing ghost images.Nikon's noise terminatorNikon's epi-fluorescence microscopes have a proprietary Nikon optical element called a "noise terminator" (on models TE2000 and later). As shown in Figure 1, the noise terminator allows efficient processing of light transmitted through the dichroic mirror by preventing the excitation light from scattering within the filter block and leaking into the observed image. This helps to eliminate background light noise and more effective fluorescent images.。