超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书 可见分光光度法
超氧自由基清除能力测定法-操作图解
超氧自由基（·O2-）的清除能力测定法（连苯三酚自氧化法）（适用于：SOD及各种抗氧化剂）操作图解具体方法1 溶液配制1.1 Tris溶液（0.1mol/L）：1.21 gTris（三羟甲基氨基甲烷，M.W. 121.1）+100 mL蒸馏水。
1.2 HCl溶液（0.1mol/L）：取0.1 mL浓盐酸，加蒸馏水稀释到6 mL。
1.3 Tris-HCl缓冲液（0.05mol/L，pH7.4，含1mmol/L Na2EDTA）40 mL0.1 mol/L Tris溶液+ x mL0.1 mol/L HCl溶液+15.2 mg Na2EDTA，混合，稀释到80 mL。
用pH计测量，pH应为7.4。
用棕色瓶保存在冰箱内(最多保存三天) 。
（以上为一个样品的用量）用前稍热至室温，再测pH值，符合要求即可。
1.4 60 mmol/L连苯三酚溶液（溶于1 mmol/L盐酸中）取0.1mol/L HCl溶液（见1.2项）20μL，用蒸馏水稀释到2 mL，得1 mmol/L盐酸溶液（用pH计测量，pH＝2.5-3.0）。
再往里加连苯三酚14.6 mg (M。
W.126.1 )，即得。
（当天有效,以上为1个样品的用量）。
2 测试液2.1连苯三酚溶液：取2950μL Tris-HCl缓冲液加入到石英比色皿中，再加约50μL连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次A值（325nm），至300秒（5min）时为止。
（空白参比：Tris-HCl 缓冲液）ΔA＝A325nm,300s - A325nm,30s。
由于ΔA值反映了生成·O2的初始浓度，所以，对于同一批实验而言，此时的ΔA值必须相等。
此时的ΔA为ΔA0。
3.2 样品溶液：取xμL样品溶液加入到大石英比色皿中，再加（2950-x）μL Tris-HCl缓冲液，再加50μL 连苯三酚溶液，迅速混合(颠覆式)，开始计时,每隔30秒读数一次（A值，325nm），至300秒时为止。
超氧阴离子清除实验
·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。
·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。
(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。
实际配制500mL。
高压灭菌，室温保存。
PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。
NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。
食物总抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量检测试剂盒
9． 可以使用比色皿检测 10．如果样品抗氧化剂浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品容量或浓度 11．如果测试样品很多，建议使用排枪移液 12．本公司提供系列抗氧化分析试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定检测敏感
4
2、液态食品处理 1． 移取 5 毫升待测液态食品到 15 毫升锥形离心管 2． 放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g 3． 移取上清液到新的 15 毫升锥形离心管 4． （选择步骤）可以加入适量的清理液（Reagent A） 5． （选择步骤）过滤纸过滤（如果离心处理，样品仍然不清澈） 6． 置于冰槽里备用或放进-20 冰箱里保存
二、标准液准备
1． 准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管 2． 移取 xx 微升标准液（Reagent D）到 1 号管 3． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）和 xx 微升标准液（Reagent D）到 2 号管，混匀 4． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）和 xx 微升标准液（Reagent D）到 3 号管，混匀 5． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）和 xx 微升标准液（Reagent D）到 4 号管，混匀 6． 小心移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）到 5 号管 7． 将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
实验开始前，将－20 冰箱里的试剂置于室温下融化，实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化， 移取 xx 毫升染色液 B（Reagent C2）到 xx 瓶染色液 A（Reagent C1）里，混匀，置于暗室里，标记为染 色工作液，避免光照。然后进行下列操作。
1． 准备 1 个 96 孔板，做好标记：空白对照孔、标准对照孔、样品孔 2． 分别移取 xx 微升缓冲液（Reagent B）到 96 孔板里的每个孔里 3． 分别加入 xx 微升染色工作液 4． 加入 xx 微升缓冲液（Reagent B）到空白对照孔 5． 加入 xx 微升上述配制的标准液（Reagent D）到相应标准对照孔里 6． 加入 20 微升裂解样品（100 微克食品总量）到样品孔里 7． 轻轻摇动 96 孔板，使其混匀 8． 室温下孵育 15 分钟 9． 即刻放进酶标仪里测读：515nm 波长 10． 分析结果：
超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)
超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)简介：超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。
Leagene 超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)又称超氧阴离子清除能力检测试剂盒，其检测原理是利用羟胺氧化的方法可以检测生物体系中超氧阴离子自由基(O 2-)，即超氧阴离子自由基(O 2-)与羟胺反应生成NO 2-，在一定范围内颜色深浅与超氧阴离子自由基(O 2-)成正比，根据NO 2-反应的标准曲线将A 530换算成NO 2-浓度，再依据上述关系式即可计算出O 2-浓度。
该试剂盒主要用于测定植物组织中的超氧阴离子自由基含量或超氧阴离子清除能力。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 实验材料：植物组织(大豆、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等3、 研钵或匀浆器4、 离心管或试管5、 低温离心机6、 恒温箱或水浴锅7、 比色杯8、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号 名称TO1123 50T Storage试剂(A): NO 2-标准(1mM) 1ml RT 试剂(B): O 2- Lysis buffer 125ml RT 试剂(C): 羟胺溶液30ml RT 试剂(D): 氨基苯磺酸显色液 30ml 4℃ 避光 试剂(E): 萘胺显色液 30ml4℃ 避光 使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取预冷的O2-Lysis buffer后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃离心，上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于超氧阴离子自由基的检测。
超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-5053
2超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-5053规格：50T/48S可见分光光度法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体3mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体15mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前每瓶加6mL 蒸馏水充分溶解。
2-8℃保存4周。
产品说明：生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
AP-TEMED 系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO －与对氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm 处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm 的吸光值呈负相关。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g ）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃，离心10min ，取上清，置于冰上待测。
2、液体：直接检测。
若有浑浊则离心后取上清待测。
3、细胞样本：收集细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细胞（功率200w ，超声3s ，间隔10s ，重复30次），然后10000g ，4℃，离心10min ，取上清，置冰上待测。
中药对超氧阴离子自由基清除率的测定
第１ 期
林祥 潮等 ：中药对 超氧 阴 离子 自由基 清 除率 的测 定
３ ３
在表 ｌ 示 的光度 法 中，羟 胺氧 化法 由于 甲萘 胺溶 液不 稳定 ，因而 线性相 关性较 差 ；氯 所 化硝 基 四氮 唑蓝还 原法 和 四 甲基 偶氮 唑盐还 原法 都 需要 昂贵 的氮 唑类 化合 物 ； 照核黄 素法 光 中硫 代碳 酰腙 类化 合物 需要 合成 ；酶催 化法 需要 昂贵 的酶试 剂且 测定 条件 苛刻 ；而本 方法 只 需 用天 青 Ｉ 为指 示物 质 ，指示 反应简 单直 接 ，且指 示物质 易得 价廉 ，体 系稳 定性好 ，能快 作
液后 ， 向其 中一 支加 入 ０８ ０ｍｍｏ Ｌ的邻 苯三 酚溶 液 ，另一支 不加 。分 别用水 稀释 至 ．０ ３ ｍＬ ｌ ／
刻度 ，在 室温 下反应 １ ｎ ５ ｍｉ，以水 为参 比，用 １ ｍ 比色皿在 ６ ２ ｌ 波长 处测 定体 系 的吸光 ｃ ０ Ｙ ｎｌ
度 。设不加 邻苯 三酚 时体 系 的吸光度 为 ｏ ，加 入邻 苯三 酚后 体系 的吸光 度 为 １ ，则超氧 自
超氧 阴离 子 自由基 （ ２・ ０ 。）作 为生物 体所产 生 的一种 自由基 ，大 量研 究证 明 ， 自由基 的
作用 与 生物 衰老 、某些 疾病 的发病 机制 密切相 关 。关 于它 的清 除方法 ，光度 测 定 已有 一些报 道 【 ］ 以天青 Ｉ为指示 物质 ，褪 色光 度法 测定 中药 清 除超氧 阴 离子 自由基 未见 报 道 。本 １ ，但 文研 究发现 ，在一 定条 件下 ，天 青 Ｉ 能被超 氧 阴离子 自由基氧 化而褪 色 ，中药提 取物 可 以清
度值 记为 ２ 。 超氧 自由基清 除率 Ｒ ％ ： 二 × ０ ／ １０ ４
抗超氧阴离子自由基及生产超氧阴离子自由基测试盒
抗超氧阴离子自由基及生产超氧阴离子自由基测试盒说明书修订日期：2015.07.13 Cat number：KGT012Store at4℃for6monthsFor Research Use Only（科研专用）一、测定原理模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，产生超氧阴离子自由基O2—，加入电子传递物质及gress 氏显色剂，使反应体系呈现紫红色，可用分光光度计测其吸光度，当被测样本中含有O2。
抑制剂时，则比色时测定管的吸光度低于对照管的吸光度，而如果被测样本中含有产生O2。
物质时，则比色时测定管的吸光度高于对照管的吸光度，通过以维生素C做标准，可计算出被检物品对O2。
的影响能力。
二、试剂盒组份组份KGT01250assaysBuffer A 5.0mLBuffer B 5.0mLBuffer C 5.0mLBuffer D350μLBuffer D稀释液 5.0mL试剂E1支试剂F1支Vc标准品4支注意事项1．Buffer A室温较低时会有部分结晶析出，溶解后加蒸馏水稀释10倍至1×Buffer A50ml。
2．Buffer D用前用Buffer D稀释液按1︰14稀释至1×Buffer D（不可冷冻，4℃可保存2个月）。
3．试剂E配制：将试剂加入蒸馏水37.5mL中溶解后备用，4℃避光保存。
4．试剂F配制：将试剂加入蒸馏水37.5mL中溶解后备用，4℃避光保存。
5．显色剂配制：试剂E︰试剂F︰冰乙酸＝3︰3︰2的体积比配制，4℃避光保存（冰乙酸自备）。
6．Vc标准贮备液配制：将一支Vc标准品加蒸馏水定容至5ml（Vc标准配制后当天内使用）Vc标准品工作液（0.15mg/ml）配制：取1ml贮备液加4ml蒸馏水，5倍稀释现配现用。
Vc标准品配制后见光极易分解，配制的0.15mg/ml Vc标准品工作液需30分钟内检测。
三、操作步骤试剂测定管对照管标准管1×Buffer A （mL ） 1.01.0 1.0蒸馏水（mL ）0.050.15mg/ml Vc 标准品（mL ）0.05样品（ml ）0.05Buffer B （mL ）0.10.10.1Buffer C （mL ）0.10.10.11×Buffer D （mL ）0.10.10.1用涡旋混匀器充分混匀，置37水浴40分钟显色剂（ml ）2.02.02.010min 后倒入1cm 光径比色杯中，蒸馏水调零，波长550nm 处比色。
超氧阴离子清除实验
·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。
·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。
(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。
实际配制500mL。
高压灭菌，室温保存。
PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。
NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第1页，共2页
超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1410规格:50T/48S 产品内容:
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加8mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
试剂四：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂五：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
产品说明:
超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。
AP-TEMED系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO 2－
，NO 2－
与对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm的吸光值呈负相关。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。
操作步骤:一、样品处理
1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提
取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取
液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
3.培养液或其它液体：直接检测。
4.粉剂药物可配制成相同浓度，比如1mg/mL。
二、测定操作
空白管对照管测定管
试剂一（μL）404040
试剂二（μL）160160
H2O（μL）260100
充分混匀，25℃反应1min
样品（μL）100
试剂三（μL）200200200
充分混匀，37℃反应30min
试剂四（μL）200200200
试剂五（μL）200200200
充分混匀，37℃显色20min，于1ml玻璃比色皿，以空白管调零，在530nm处测定对照管
和测定管的吸光值，分别记为A对照管和A测定管。
注意：空白管只需测定一次。
三、计算公式
超氧阴离子清除率I%=（A对照管-A测定管）/A对照管×100%
注意事项：
1.试剂一4℃可保存2个月，配制好的试剂二4℃可保存一周，建议实验前配制，并尽快使用。
2.样品处理完后立即进行测定，或者低温保存不超过24小时。
第2页，共2页。