D-D二聚体测定标准操作程序

D-二聚体测定

（分析仪器法）

1实验原理：免疫比浊法

当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。

2标本采集

2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。

2.2

3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。

3标本存放

1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。

4标本运输：低温条件下运输。

5标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。

6. 实验材料:

6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂, 用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶

D二聚体PLUS试剂，室温（15℃~25℃）放置约5分钟，并不时混匀。将试剂放于仪器相应的试剂位置上。未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过2天，室温保存不超过5天。

6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约15分钟，并不时混匀。将

试剂放于仪器相应的试剂位置上。使用前，轻轻振荡试剂。未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过5天。

6.3D-Dimer PLUS复溶液：液体。用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。未开封试剂2～8℃贮存到说明

书上有效期，开瓶后试剂2～8℃保存不超过12周。

6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。复溶后,室温保

存2小时,2～8℃4小时。

7. 仪器设备:

7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪

7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司

7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500

7.4 仪器技术参数:

7.4.1 速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时

7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。

7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加。

7.5 仪器校准程序:

7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂批号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校

准。

7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)

8. 操作步骤:

8.1 检查前准备:

8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。

8.1.2 添加足够反应杯(不能超过警告线)。

8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。

8.2 开机

先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。

8.3 输入工作清单:

从主菜单选,

按相应实验项目名称键并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、

TT）”，可按，选完项目后按

本编号项目。（快速输入可用

8.4 放置样本

按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)

8.5 按.

盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架

样本工作清单,按继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。

8.6 每日维护:（完成每日的测定后,关机前维护。）

8.6.1 冲冼针Rinse Probe

8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯。

8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱。

8.7 关机:先关主机,再关打印机。

9．检验结果的判断与分析:

9.1 仪器测定D-Dimer的线性范围在40-2000ug/L,测定完成后仪器显示D-D含量等参数。若不能对参

数进行正确计算,将出现下列信息:

﹡﹡﹡.﹡出现错误,不能得到分析数据

ˉˉˉ.ˉ不能计算参数

＋＋＋.＋数值超出线性范围.

9.2 仪器设定D-D参考范围在40-2000ug/L,如果得不到一个正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:

﹡出现错误信息

< 数据低于可报告的低限

> 数据高于可报告的高限

10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控

限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。

11 临床意义：检测D二聚体交联降解产物，即可反映纤溶作用。

11.1参考范围：﹤500ug/L

11.2 D二聚体浓度增加见于各种局灶性、弥漫性、年龄性的血栓性疾病。因此，D二聚体浓度基础值

超出健康人群的范围，不能排除血栓性疾病。D二聚体检测结果应结合其他实验室检查结果和临床数据。D二聚体升高提示出现凝块，报告有深静脉血栓，肺栓塞和弥漫性血管内凝血。

11.3若D二聚体结果低于决定水平，可以用阴性预示值排除血栓可能。

12变异的潜在来源

12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查

12.2标本采集处理不当,如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成

结果变异。

12.3纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。

12.4超剂量使用肝素使凝固时间延长。

12.5FDP增加使凝固时间延长。

12.6某些药物，如口服避孕药、雌激素、无门冬跣胺酶、钠络酮等影响测试结果。