细胞工程实验总结
细胞工程重点总结
细胞工程：按照一定的设计方案，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性生物工程。
一、无菌操作1、无菌操作时注意事项：1、点燃酒精灯，所有操作均在火焰近处并经过烧灼进行；2、冷却后才能使用；3、操作时，打开试管盖，进行烧灼灭菌，但是时间要短。
在火焰上烧瓶口。
保证容器倾斜。
4、进行操作时动作要准确敏捷，但是不宜太快，防止空气流动，增加污染的机会；5、超净工作台上的器具和用品要摆放合理。
6、操作时器具不能触及瓶口以防止污染；7、不要说话；8、接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中9、整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速10、防止操作带来的污染接种过程中尽可能达到悬空要求11、接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口12、瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口;13、接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生。
14、种子和分生组织培养时通常将其贴放在培养基表面，，以保证供氧充足。
15、接种植株茎段时注意形态学下端插入培养基内，而形态学上端露于空气中.16.污染材料应及时清除，高压灭菌。
2、无菌室 1.要求：密封、防尘、防菌，2.结构：更衣间、缓冲间、操作间，3.空气消毒：紫外灯或无臭氧紫外线消毒器， 4.操作：在超净工作台上.（超净工作台，侧流式：垂直式，气流由左侧或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧。
有挡板。
外流式：水平式，净化的空气面向操作者流动，多为开放式，没有防护挡板，易污染。
）二、动物细胞工程1.细胞贴壁率：细胞贴壁率又称接种存活率，用于观察贴壁附着生长细胞，主要反映细胞的生存能力和部分底物材料的相容性。
2、细胞周期：也称细胞分裂周期，是指一个细胞经生长、分裂增殖成两个细胞所经历的全过程。
3、细胞系：由原代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群。
4、细胞株：是指从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。
细胞工程实验总结
实验一、细胞培养实验器材和试剂的准备1、哪些物品适合于高压灭菌，并说明理由。
①材料：微孔滤膜(直径25 cm)：孔径为0.22μm、微孔滤膜(直径90 cm)：孔径为0.22 μm、过滤器(直径25 cm)。
②仪器和器材：眼科剪刀和镊子、长镊子、培养皿、培养瓶、试剂瓶（或盐水瓶）、移液枪、10毫升试管、10毫升离心管、巴氏吸管、5毫升（或10毫升）吸量管、不锈钢过滤器、塑料过滤器、注射器、超净工作台、干燥箱、高压灭菌锅、正压泵。
理由：适合于高压灭菌是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些耐高温的塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS等)。
2、细胞培养常用液体如何配制和灭菌？1）PBS ：8.0g NaCl、0.2gKCl、2.2gNa2HPO4、0.12gKH2PO4溶于1000 mL双蒸水，高压灭菌，4℃保存。
（准备试剂瓶）灭菌方法：高压灭菌。
2）干粉培养基过滤除菌（先准备好不锈钢过滤器及滤膜，安装后高压灭菌，适度烘干；铝盒4个，三角瓶2个，容量瓶，不锈钢过滤器一套，酒精灯，酒精棉球3瓶，吸耳球3个，吸量管10毫升和5毫升各5根，分装用瓶，血清，超纯水，抗生素）认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。
配制方法（1L）：1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入大约500mL双蒸水。
2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基。
3）水洗袋内残留培养基，全部转移到容器内，轻轻搅拌，不要加热。
4）完全溶解之后，1袋1L粉状DMEM加3.7g NaHCO3，1mmoL∕L丙酮酸钠，即0.11g/L，添加双抗。
5）用双蒸水定容到1L，搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值培养基在过滤前要保持密封。
细胞合成工程实验报告
实验日期： 2023年11月15日实验地点：生物技术实验室实验目的：1. 掌握细胞合成工程的基本原理和操作技术。
2. 学习如何利用基因工程技术改造细胞，使其能够合成特定的化合物。
3. 通过实验验证改造细胞的合成能力。
实验原理：细胞合成工程是利用基因工程技术，将具有特定功能的基因导入细胞中，使细胞能够合成特定的化合物。
通过调节基因表达，可以控制细胞合成产物的产量和质量。
实验材料：1. 实验细胞：大肠杆菌（E. coli）2. 基因构建工具：DNA连接酶、限制性内切酶、质粒载体等3. 实验试剂：DNA模板、引物、PCR试剂、抗生素等4. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、离心机、培养箱等实验步骤：一、基因克隆与构建1. 设计并合成引物，用于扩增目的基因。
2. 使用PCR技术扩增目的基因。
3. 使用限制性内切酶切割目的基因和质粒载体。
4. 将目的基因与质粒载体连接，形成重组质粒。
5. 将重组质粒转化大肠杆菌，筛选阳性克隆。
二、细胞培养与转化1. 将阳性克隆接种于含有抗生素的培养基中，培养过夜。
2. 收集菌液，制备感受态细胞。
3. 将重组质粒与感受态细胞混合，进行电转化或化学转化。
4. 在含有抗生素的培养基中培养转化细胞，筛选阳性克隆。
三、基因表达与产物检测1. 将阳性克隆接种于含有诱导剂的培养基中，诱导基因表达。
2. 收集培养液，进行蛋白质检测。
3. 使用SDS-PAGE电泳分析蛋白质条带，确定目标蛋白的表达。
四、产物纯化与鉴定1. 对目标蛋白进行纯化，去除杂质。
2. 使用Western blot等方法鉴定纯化蛋白。
实验结果：1. 成功构建了重组质粒，并转化大肠杆菌。
2. 通过PCR和测序验证了重组质粒的正确性。
3. 通过SDS-PAGE电泳和Western blot检测，成功表达了目标蛋白。
4. 对目标蛋白进行纯化，并鉴定了其特性。
实验讨论：本次实验成功实现了细胞合成工程的基本操作，从基因克隆、细胞转化到基因表达和产物检测，均取得了预期的结果。
细胞工程总结
一、名词解释：细胞工程(cell engineering)是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或组织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。
1．脱分化：脱分化：具有特异结构和功能的细胞转化成没有特异结构和功能的细胞的过程称为脱分化。
（如根、茎、叶）2.饲喂培养：将饲喂的细胞用培养基作平板，此平板称饲喂层，用X射线或紫外线照射，使核失活但细胞存活，然后将原生质体以液体浅层培养或平板技术铺在饲喂层上。
3.核重编成：使在体细胞中被关闭，而在正常胚胎发育中表达的基因重新被激活的过程。
4.细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株（Cell Strain5.热力灭菌：主要是利用高温使菌体变性或凝固，酶失去活性，而使细菌死亡。
6.人工种子：是将植物立体培养产生的体细胚包埋在含有营养成分和保护功能的物质中，在适宜的条件下发芽出苗7.植板率：每个平板接种细胞总数中形成细胞团的百分率。
植板率=每平板形成的细胞团数/每平板接种的细胞总数8.胚胎移植: 是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
9．体细胞无性系：以单体细胞为材料，采用无性繁殖法繁殖的品种（品系）称无性系品种（品系），简称无性系10.过滤灭菌：过滤灭菌法,即用筛除或滤材吸附等物理方式除去微生物仓鼠细胞Hamster cells 白细胞抑制因子leukocyte inhibitory factor, LIF 干细胞Stem cells二、简答1.细胞活力鉴定方法：取纯化后的植物原生质体悬浮液0.5ml置于小试管中，加入含2mg/L 的FDA的丙酮溶液，使最终浓度为0.01％，混匀，放置5分钟，荧光显微镜观察（激发光滤光片QB-24，压制滤光片JB-8），有活力原生质体发绿色荧光，不产生荧光为无活力。
陕师大细胞工程实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞工程的基本原理和实验技术。
2. 学习细胞培养、细胞融合、基因工程等细胞工程技术的操作方法。
3. 培养学生的实验操作能力和科学思维。
二、实验原理细胞工程是利用现代生物技术手段，对细胞进行改造、培养和应用的一门新兴学科。
本实验主要涉及以下原理：1. 细胞培养：在适宜的培养条件下，使细胞在体外生长、繁殖，为后续实验提供细胞材料。
2. 细胞融合：将两个或多个细胞合并成一个细胞的过程，可用于基因转移、细胞治疗等。
3. 基因工程：通过分子生物学技术对基因进行改造，实现特定性状的表达。
三、实验材料、试剂和仪器设备1. 实验材料：人胚胎肾细胞（HEK293）、小鼠成纤维细胞（NIH3T3）、小鼠血清、胰蛋白酶、DMSO等。
2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、Hoechst 33342染料等。
3. 仪器设备：细胞培养箱、倒置显微镜、离心机、PCR仪、凝胶成像系统等。
四、实验步骤1. 细胞培养（1）将HEK293和NIH3T3细胞分别接种于培养瓶中，置于细胞培养箱中培养。
（2）待细胞长满瓶底后，用胰蛋白酶消化细胞，按1:1的比例将两种细胞混合。
（3）将混合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
2. 细胞融合（1）将混合细胞培养至对数生长期，加入适量的聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合。
（2）将融合细胞接种于新的培养瓶中，继续培养。
（3）用Hoechst 33342染料检测融合细胞。
3. 基因工程（1）设计并合成目的基因的引物，进行PCR扩增。
（2）将扩增的目的基因克隆到载体上。
（3）将重组质粒转化到HEK293细胞中。
（4）用荧光素酶报告基因检测目的基因的表达。
五、实验结果与分析1. 细胞培养HEK293和NIH3T3细胞在培养过程中生长良好，细胞形态规则，细胞活力较高。
2. 细胞融合Hoechst 33342染料检测结果显示，部分细胞核融合，表明细胞融合实验成功。
3. 基因工程荧光素酶报告基因检测结果显示，目的基因在HEK293细胞中成功表达。
细胞实验报告反思总结(3篇)
第1篇一、前言细胞实验作为生物学研究的重要手段，在揭示生命现象、探索疾病机制、开发新型药物等方面发挥着至关重要的作用。
本次实验报告针对我所参与的细胞实验进行反思总结，旨在提高实验技能、优化实验设计、提升实验结果的可信度。
二、实验目的本次实验旨在：1. 掌握细胞培养的基本操作技能，包括细胞传代、细胞接种、细胞计数等。
2. 熟悉细胞实验所需的器材和试剂，了解其作用和用途。
3. 分析实验结果，探讨实验现象背后的生物学机制。
三、实验过程1. 细胞传代：在实验过程中，我们严格按照细胞传代操作规程进行，确保细胞在适宜的培养条件下生长。
通过观察细胞生长状态、调整传代比例，保证了细胞的活力和数量。
2. 细胞接种：在细胞接种过程中，我们遵循无菌操作原则，确保细胞在无菌条件下生长。
同时，根据实验需求调整接种密度，为后续实验提供充足细胞资源。
3. 细胞计数：在细胞计数实验中，我们熟练运用血球计数板进行细胞计数，并对计数结果进行统计分析。
通过对比不同处理组的细胞数量，分析实验现象背后的生物学机制。
4. 实验数据分析：在实验数据分析过程中，我们运用统计学方法对实验数据进行分析，探讨实验现象背后的生物学机制。
同时，对实验结果进行合理的解释和推断。
四、实验反思1. 实验操作方面：（1）在细胞传代过程中，我们应严格按照操作规程进行，避免细胞污染和传代失败。
（2）在细胞接种过程中，应注意无菌操作，防止细胞污染。
（3）在细胞计数过程中，应保证计数准确，避免人为误差。
2. 实验设计方面：（1）在实验设计过程中，应充分考虑实验目的和实验条件，确保实验结果具有可重复性和可靠性。
（2）在实验过程中，应密切关注实验现象，及时调整实验参数，优化实验设计。
（3）在实验结果分析过程中，应运用多种统计学方法，提高实验结果的可信度。
3. 实验结果分析方面：（1）在实验结果分析过程中，应充分挖掘实验数据，探讨实验现象背后的生物学机制。
（2）在实验结果解释过程中，应结合相关文献，对实验结果进行合理的解释和推断。
细胞工程实验小结
细胞工程实验小结本页仅作为文档页封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March细胞工程实验小结专业：生物技术班级：0801 姓名：励丹学号：在本次暑期短学期的细胞工程实验课上，我们做了细胞工程中基础的几个实验——饲养层细胞的制备、动物细胞的原代培养（组织块法培养小鼠肝脏细胞，消化法培养小鼠肾脏细胞）、免疫脾细胞的制备、免疫脾细胞与骨髓瘤细胞的融合、细胞的超低温冻存与复苏及活性测定（MTT法检测）、抗体IgG的检测（ELISA法），让我受益菲浅。
其中很多知识在平时的学习中都是无法学习到的，其中很多实验都开阔了我们的视野，让我们获得了许多平时课堂上得不到的知识。
在细胞工程实验课即将结束的时候，我对这个短学期的学习进行总结，总结细胞工程课程试验来的收获与不足。
这次的实验分成了8个小组，因为细胞工程的实验都须在无菌室内进行，而无菌室较小，所以各小组轮流进无菌室进行实验操作，故没轮到进无菌室的小组在外面的实验室进行简单的操练，所以较为轻松。
我们中的大多数人都是第一次进无菌室，对无菌室充满了好奇。
而进无菌室也需要一重重地灭菌，以确保无菌室内的安全。
首先需要用新吉尔灭溶液对需要带进无菌室的物品及我们的手进行消毒灭菌，然后进入缓冲间穿戴无菌服、帽、手套及口罩。
在进入无菌室后还需要用酒精棉擦拭手、超净台以及一些物品。
在无菌室内的操作都需在超净台上进行，而且需要在酒精灯边上进行，不可以远离超净台，否则可能使培养的细胞或培养液等受到污染，从而造成实验失败。
我们小组在细胞培养的实验中较为成功，细胞生长状态良好，没有出现染菌现象。
在进行细胞超低温冻存于复苏实验时，我们组将两只小鼠的细胞混在一起，是的细胞数增加，相对的在冻存中损伤的细胞数也增多，这个实验应该算不成功的。
通过9天的细胞工程实验，我发现实验是细胞工程学学的实践，我们学到的许多理论都会最终作用于实验，也学到了许多其他专业课上没有教到的理论。
细胞工程学习总结
主要学习内容1 植物细胞工程?是在植物细胞全能性的基础上，以植物细胞为基本单位，在体外条件下进行培养、繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学特性按照人们的意愿发生改变，从而改良品种或创制新种，或加速繁殖植物个体，或获得有用产物的过程。
2 植物细胞的全能性?生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。
3植物细胞的全能性原理 ?生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。
4 植物组织与器官培养?是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞（体细胞、生殖细胞等）、胚胎、原生质体等培养在人工配置的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤组织、潜伏芽，或者长成新的完整植株的一种实验技术。
5 愈伤组织?是指由外植体组织增生的细胞产生的一团不定型的疏散排列的薄壁细胞。
6 脱分化?一个已经停止分裂的成熟细胞转变为分生状态，并形成未分化的细胞团或愈伤组织的现象。
7 再分化?指原已分化的细胞过脱分化后再次分化的现象，最终可进一步形成完整的小植株。
8继代培养 ?是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上进行培养的方式。
9 植物细胞培养?是指在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行振荡培养，得到悬浮细胞，再通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的技术。
它是在组培基础上发展起来的。
10 动物细胞培养?动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。
11细胞系? 由初代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群称细胞系.12干细胞?是指具有无限或较长期的自我更新能力，并能产生至少一种高度分化子代细胞的细胞。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验一、细胞培养实验器材和试剂的准备1、哪些物品适合于高压灭菌，并说明理由。
①材料：微孔滤膜(直径25 cm)：孔径为0.22μm、微孔滤膜(直径90 cm)：孔径为0.22 μm、过滤器(直径25 cm)。
②仪器和器材：眼科剪刀和镊子、长镊子、培养皿、培养瓶、试剂瓶（或盐水瓶）、移液枪、10毫升试管、10毫升离心管、巴氏吸管、5毫升（或10毫升）吸量管、不锈钢过滤器、塑料过滤器、注射器、超净工作台、干燥箱、高压灭菌锅、正压泵。
理由：适合于高压灭菌是布类、橡胶制品(如胶塞)、金属器械、玻璃器皿、某些耐高温的塑料制品以及加热后不发生沉淀的无机溶液(如Hanks液、PBS等)。
2、细胞培养常用液体如何配制和灭菌？1）PBS ：8.0g NaCl、0.2gKCl、2.2gNa2HPO4、0.12gKH2PO4溶于1000 mL双蒸水，高压灭菌，4℃保存。
（准备试剂瓶）灭菌方法：高压灭菌。
2）干粉培养基过滤除菌（先准备好不锈钢过滤器及滤膜，安装后高压灭菌，适度烘干；铝盒4个，三角瓶2个，容量瓶，不锈钢过滤器一套，酒精灯，酒精棉球3瓶，吸耳球3个，吸量管10毫升和5毫升各5根，分装用瓶，血清，超纯水，抗生素）认真阅读说明书。
说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。
这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。
配制方法（1L）：1）在一个尽可能接近总体积的容器中加入大约500mL双蒸水。
2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基。
3）水洗袋内残留培养基，全部转移到容器内，轻轻搅拌，不要加热。
4）完全溶解之后，1袋1L粉状DMEM加3.7g NaHCO3，1mmoL∕L丙酮酸钠，即0.11g/L，添加双抗。
5）用双蒸水定容到1L，搅拌溶解。
注意不要过分搅拌。
6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值培养基在过滤前要保持密封。
7）立刻不锈钢过滤器过滤除菌，贴上标签，4℃保存备用。
灭菌方法：高压灭菌。
3）胰蛋白酶-EDTA消化液①胰蛋白酶溶液配制：称取胰蛋白酶（1:250）粉末0.25g置烧杯中，溶于100mL PBS，搅拌混匀，置室温4 小时并不断搅拌振荡，过滤除菌。
（若配制400 mL则应称取1g胰蛋白酶）灭菌方法：过滤除菌。
②EDTA 溶液配制：0.2g EDTA用400mL PBS溶解后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，4℃冰箱保存。
灭菌方法：高压蒸汽灭菌。
胰蛋白酶与EDTA 按1：1混合后分装，4℃冰箱保存。
4）抗生素液双抗（青霉素、链霉素）各1克，溶于100mL纯水，过滤除菌，分装，4℃冰箱保存。
使用前1：100稀释。
灭菌方法：过滤除菌。
3、简单介绍动物细胞培养实验室常用仪器的操作方法及注意事项。
操作方法：2清洗1）新玻璃器皿的清洗2）使用过的玻璃器皿的清洗3）胶塞的处理3 消毒1）物理消毒法(2)干热灭菌(4) 过滤除菌（5）煮沸消毒急2）化学消毒法常用的消毒液有如下几种：(1) 70％(或75％)酒精(2) 0.1％新洁尔灭(3) 来苏儿水(煤酚皂溶液) (4) 0.5%过氧乙酸(5) 乳酸蒸气(6) 37%甲醛加高锰酸钾(7)甲醛消毒方法注意事项1、清洗玻璃制品时，浸酸之后一定要用自来水冲洗10-15次。
清洗塑料制品时要用棉花或柔软纱布擦洗。
枪头和试管一定要用超声清洗处理后逐个清洗。
2、干热灭菌时，应在白天使用烤箱，并不断观察，以免发生意外。
当温度超过100℃时，不能再打开烤箱门。
器皿烤完后，待温度降至100℃之下才能开烤箱门。
金属器械和橡胶、塑料制品不能使用干热灭菌方法。
3、高压灭菌后器皿务必晾干或烘干。
4、牛血清、大部分培养基、胰酶和一些生物制剂均不能高压。
需要长期保存的血清必须储存于-20℃—-80℃低温冰箱中。
4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。
血清在冻入低温冰箱前，不要装得太满，必须预留一定体积空间，（其他溶液冻存也是如此）。
一般厂商提供的血清无需再过滤除菌。
如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤。
血清解冻需采用逐步解冻法，切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻。
在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀，使温度与成分均一，待全部溶解后再分装。
5、滤过除菌时，滤器在使用前先装好滤膜，包好，经高压灭菌后才能使用。
过滤前可用压进空气的办法测试过滤器是否完好，去除压力后针筒会反弹即为完好无损。
滤过酶类制剂时应待滤器温度降至室温下再进行。
过滤时压力不宜过。
装滤膜时位置要准确。
另外滤器包装时，螺钉不要拧得太紧待高压灭菌之后，再拧紧使用。
6、使用化学消毒法时，配制75%酒精应用卫生级，不要用化学纯、分析纯和优质纯酒精。
来苏儿水不能用于皮肤消毒。
空气消毒时，所有的物品要事先准备齐全并使消毒者有较方便的退出途径。
7、培养基过滤器过滤除菌注意事项：(1) 细胞培养用水一般为三蒸水或超纯水，医药生产上一般为注射用水。
(2) 建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用。
(3) 溶解干粉培养基时先加入终体积90%－95%的培养用水，添加剂加完后再定容。
(4) 如需添加的组分较多时，某一组分完全溶解后，再添加另一组分。
(5) 待培养基完全溶解后再加入碳酸氢钠。
(6) 所有成分完全溶解后，培养基应立即过滤或高压除菌。
(7)在过滤前，可将pH调至比所需值低0.1-0.2个单位。
(8) 在细胞培养过程中，建议不加或加少量的抗生素，如血清的浓度较低则所加抗生素的量也要相应降低一些。
(9) 建议用1N HCl或1N NaOH来调节培养基的pH。
8、物品放进饭盒后要贴好标签，还需要用棉布或牛皮纸包好再贴上标签。
在标签处包扎好。
容器，包括装PBS的玻璃瓶，瓶口要拧松，不能紧，瓶口包扎牛皮纸，灭菌后立刻拧紧瓶盖，然后再取出，冷却后放入冰箱。
注意检测标签是否脱落。
9、根据每个实验的要求，准备好所需物品，一并放入超净台内。
实验器材准备的数量要大于实际使用数，瓶盖要大于瓶数。
要配备至少三套器械（一套使用，一套备用，一套清洗灭菌），循环使用。
10、玻璃瓶、移液管要封闭包扎使用端，标记手持端。
实验二鸡胚胎成纤维细胞的原代培养1、如何进行鸡胚胎成纤维细胞的原代培养。
实验进行前，准备好相关器材，无菌室及超净工作台以紫外灯照射灭菌30-60 分钟（溶液同时37℃预热），然后开启通风10 分钟后，才开始实验操作。
实验用品以75% 酒精擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在中央无菌区域酒精灯火焰旁进行。
1、取9-10日龄的鸡胚，用酒精消毒，在超净工作台内，小心取出鸡胚，放在无菌培养皿中，除去头尾、四肢及内脏；2、胚体用含双抗PBS冲洗2-3次，切成1-2mm3的小块，然后转入容积适量大小的离心管；3、按每个鸡胚加入大约5mL的胰酶消化液，在室温（或37℃）下消化10 min，吸管（或枪头）不停吹打；4、加入含小牛血清培养液终止消化，收集细胞悬液，没有消化完全的组织块可再消化一次；5、收集到的细胞悬液经100目过滤筛过滤，1200转离心5 min；离心管用酒精擦拭后拿进超净台，拧开盖子后，管口过火焰两次，倒出上清，保存管口向下蘸一下干的酒精棉球，再保存管口向下过火焰两次；6、细胞沉淀用含10%小牛血清的DMEM培养液重新悬浮；7、以5×105个/mL的密度溶液3.4ml接种到培养瓶中（大约20-30mL细胞液/鸡胚0.6ml），观察细胞形态37℃、5% CO2浓度、饱和湿度条件下培养。
8、经过1天的培养。
2、原代培养时如何从组织分离细胞?收集到的细胞悬液经100目过滤筛过滤，1200转离心5 min；离心管用酒精擦拭后拿进超净台，拧开盖子后，管口过火焰两次，倒出上清，保存管口向下蘸一下干的酒精棉球，再保存管口向下过火焰两次；6、细胞沉淀用含10%小牛血清的DMEM培养液重新悬浮；3、绘图展示自己的实验结果、谈谈你的实验感想。
实验三：培养细胞的形态观察及活率检测1简述培养细胞的形态观察方法及注意事项。
(一)培养细胞的形态观察1、将细胞培养瓶从二氧化碳培养箱中取出，注意观察细胞培养液的颜色和清澈度。
然后，将细胞培养瓶平稳地放在倒置显微镜载物台上，此时应注意不要将瓶翻转，也不要让瓶内的液体接触瓶塞或流出瓶口。
2、打开倒置镜光源，通过双筒目镜将视野调到合适的亮度。
3、调节载物台的高度进行对焦，在看到细胞层之后，再用细调节器将物像调清楚，注意观察细胞的轮廓、形状和内部结构。
在观察时，最经常使用的是20X(二) 观察细胞体外培养状况细胞培养24h后，即可进行观察，观察的重点如下：A．首先要观察培养细胞是否污染（观察阳性对照样品）。
主要观察培养液颜色的变化及混浊度。
B．观察培养基颜色变化及细胞是否生长。
C．如细胞已生长，则要观察细胞的形态特征并判断其所处的生长阶段。
D．观察完毕，可用台盼蓝染液对细胞进行染色。
以确定死、活细胞的比例。
2、简述台盼兰染色和伊红染色检测细胞活率的原理及操作方法。
台盼兰染色原理：由于培养基内有pH指示剂的存在，因此它的颜色往往可以间接地表明细胞的生长状态。
呈橙黄色时，细胞一般生长状态较好；呈淡黄色时，则可能是培养时问过长，营养不足，死亡细胞过多；如呈紫红色，则可能是细胞生长状态不好，或已死亡。
实际上，一种细胞在培养中的形态并不是永恒不变的，它随营养、pH、生长周期而改变，但在比较稳定的条件下形态基本是一致的。
在贴壁细胞培养中，镜下折光率高，圆而发亮的一般被认为是分裂期细胞。
伊红染色检测细胞活率的原理：贴壁细胞在生长状态良好时，细胞内颗粒少，看不到有空泡，细胞边缘清楚，培养基内看不到悬浮的细胞和碎片，培养液清澈透明，而当细胞内颗粒较多，透明差，空泡多时，表明生长较差。
当瓶内培养基混浊时，应想到细菌真菌污染的可能。
操作方法：（四）台盼兰染色1）配制0.2％(W/V)台盼兰水溶液（溶于PBS，加热使之完全溶解，用滤纸或纱布过滤除渣，装入瓶内室温保存），及4.25 %(W/V) Nacl溶液；2）测定前，取4份0.2％台盼兰与1份盐水混合；3）取台盼兰溶液，另入到等量细胞悬中(细胞浓度2-5×106细胞/ mL)混匀；4）将细胞悬液加入血球计数板中，使液体自然充满计数板小室。
注意不要使小室内有气泡产生，否则要重新滴加。
分别计数末染色的细胞数(活细胞)及染色的(死细胞)细胞数。
细胞计数2005）计算细胞活率：活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100 %。
（五）伊红Y染色1）配制0.2％(W/V，溶于PBS)伊红Y水溶液；2）取0.1mL细胞液悬(细胞浓度2-5×106细胞/ mL)，加入等量伊红Y溶液混匀；3）2 min后将细胞悬液加入血球计数板中，镜检、计数。