胆碱脂酶测定操作规程
胆碱酯酶测定试剂盒(丁酰硫代胆碱底物法)标准化操作规程,SCHE-SOP
胆碱酯酶测定试剂盒(丁酰硫代胆碱底物法)标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的临床检验人员。
3 适用范围本试剂用于体外定量检测人血清或血浆中胆碱酯酶的活力。
4 检验方法本试剂采用丁酰胆碱底物测定胆碱酯酶的活力。
5 检验原理样本中胆碱酯酶水解丁酰硫代胆碱生成硫代胆碱，硫代胆碱与二硫代双硝基苯甲酸反应生成黄色的硫代硝基苯甲酸，通过测定405nm处吸光度值的升高，可以计算出样本中胆碱酯酶的活力。
6 标本要求6.1 样本为血清或血浆。
及时离心分离样本，不得使用溶血或被污染的样本。
血浆样本可采用肝素或EDTA抗凝。
6.2 血清密闭贮存于2℃~8℃可稳定1周，经稀释后，在室温可稳定2小时。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆碱酯酶试剂盒（丁酰硫代胆碱底物）7.2含非反应性保护剂和稳定剂7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
7.4试剂的变质指示：试剂混浊，或以纯水为空白，试剂在405nm处的吸光度大于0.800A（1.0cm光径）时，表明试剂已失效。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1空白吸光度：A≤0.800。
8.2.2空白吸光度变化率：△A/min≤0.020。
8.2.3分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.00005。
8.2.4 线性范围：50U/L～15000U/L；线性相关系数r≥0.9900；[50,2000] U/L 范围内，线性绝对偏差应不超过±500U/L；（2000,15000] U/L范围内，相对偏差不超过±15％。
8.2.5 准确度：80%≤回收率≤120%。
8.2.6 测量精密度重复性：CV≤5.0%。
6,胆碱酯酶活性测定
实习三有机磷经皮染毒对全血胆碱酯酶活性的影响（一）目的和意义1、学习经皮染毒技术，掌握急性经皮毒性试验的方法。
2、观察有机磷经皮肤吸收后对机体的急性毒性作用。
3、掌握全血胆碱酯酶活性的测定方法及原理。
（二）仪器1．解剖剪刀、弯剪、镊子、灌胃针。
2．恒温水箱(37±0.5℃)。
3．离心机。
4．分光光度计，10mm比色皿。
5．血红蛋白吸管（20μl）；刻度吸管（5.0ml，2.0ml，1.0ml）；离心管（10ml）；容量瓶（10ml，100ml）；试管（10ml）、烧杯等。
（三）试剂1．受试物：有机磷（由指导教师自定）；溶剂，根据受试物的理化性质选定。
2．磷酸盐缓冲液(1/15m mol/L，pH7.40)：称取9.07g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解并稀释至1000mL(甲液)；称取23.87g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，用水溶解并稀释至1000mL(乙液)。
取甲液19.2mL与乙液80.8mL混合即得。
3．生理盐水：氯化钠8.5g/L。
4．硫代乙酰胆碱(ASCh)：称取72.3mg ASCh(生物试剂)溶于生理盐水中，并稀释到10mL；置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
5．5，5′－联硫代－双－2－硝基苯甲酸(DTNB)溶液：称取19.8mg DTNB，滴加磷酸盐缓冲液(4.2)，搅拌，直至完全溶解，溶液透明(大约加2mL)，再用生理盐水(4.3)稀释至10mL，置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
出现黄色即弃用。
6．抑制剂毒扁豆碱：取1mg左右柳酸毒扁豆碱，溶于0.5mL生理盐水(4.3)，临用时配制，严防污染其他试剂及器材。
7．1m mol/L谷胱甘肽标准溶液：精确称取3.07mg还原型谷胱甘肽用水溶解，移入10mL容量瓶中，稀释至刻度。
此液1mL相当于1μmol谷胱甘肽。
因其易被氧化，应于用时配制，水必须先经煮沸去氧冷却后使用。
（四）实验步骤1．实验动物的选择实验动物可选择健康豚鼠或家兔，也可用大鼠。
胆碱酯酶活性测定试纸干化学法使用说明书
胆碱酯酶活性测定试纸（干化学法）使用说明书【产品名称】通用名：胆碱酯酶活性测定试纸（干化学法）【包装规格】1人份/袋、10-100袋/盒；25人份/筒、50人份/筒、1-20筒/盒。
【预期用途】用于体外定性检测人血清、血浆中胆碱酯酶活性。
【检验原理】胆碱酯酶催化水解乙酰胆碱（Ach）生成乙酸和胆碱，乙酸能使指示剂溴百里香酚蓝（BTB）发生颜色变化，通过颜色的改变反映生成乙酸的量，乙酸量的多少即可表示酶活力的高低；反应结果可与胆碱酯酶活性测定比色表直接进行比色测定。
【主要组成成份】本产品系由20%乙酰胆碱(Ach)、3%溴百里香酚蓝等试剂固定在通过双面胶粘贴有中速滤纸的PVC板上，干燥后裁切成胆碱酯酶活性测定试纸。
【储存条件及有效期】在2-30℃干燥、阴凉、无酸碱腐蚀的条件下密封保存，有效期二年。
试纸开封铝箔袋后在无酸碱腐蚀的条件下可保存3小时，有酸碱腐蚀的条件下开封即用。
【样本要求】1、在无菌条件下采集静脉血样本，尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2、检测时应使用新鲜标本。
3、常规抗凝剂不影响检测结果。
【检验方法】在进行测试前必须先完整阅读使用说明书。
1、取测定试纸一片，放在培养皿中，向反应纸片中央加上8～10μl待测新鲜血清或血浆，盖上培养皿盖保持密封（保持一定的湿度以防血清蒸发，同时防外界酸碱影响），放置37℃水浴箱中并开始记时。
2、11分30秒后取出，所呈现色泽与胆碱酯酶活力比色表(见图一)比较，即得胆碱酯酶活力单位。
3、如无水浴箱，根据测定时室温，查附表确定反应所需时间，在到达反应所需时间后立即比色。
4、正常值30-80单位，如低于30单位的标本，欲求得较精确的结果，可将时间延长一倍，再观察结果。
附表：20～40℃内反应终点时间表温度(℃) 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 时间22′15″21′19′45″18′45″17′45″16′45″16′15″15′45″15′15″14′45″14′15″温度(℃) 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40时间14′13′30″13′12′30″12′15″12′11′30″11′15″10′45″10′30″【检验结果的解释】阳性：胆碱酯酶活力单位小于30。
胆碱酯酶的测定
胆碱酯酶（CHE）的测定
一、原理：血清及组织中CHE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，未被水解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺，再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物，根据颜色深浅推算出酶的活力。
二、试剂：
1、试剂一：溶液60ml×1瓶，室温保存。
2、试剂二：乙酰胆碱粉剂×1支，-20℃保存，稀释液5ml×1瓶，4℃保存。
80μmol/ml 乙酰胆碱底物贮备液的配制：将一支乙酰胆碱碱粉剂倒入5ml稀释液中即成，4℃。
8μmol/ml 乙酰胆碱应用液的配制：贮备液：试剂=1：9稀释。
3、试剂三：甲粉剂×1支；乙液30ml×1瓶；丙液30ml×1瓶；室温保存。
试剂三应用液的配制：每次测试前将甲粉倒入乙液中，充分摇匀，根据需要量将甲乙混合液与丙液等量混合，充分混匀，配成试剂三应用液，现用现配。
4、试剂四：溶液30ml×1瓶，室温保存。
5、试剂五：溶液20ml×1瓶，室温保存。
6、试剂六：粉剂×1瓶，稀释液30ml×1瓶，测试前将稀释液倒入粉剂中，充分混匀，避光
4℃冷藏。
测各管吸光度值。
四、计算：
1、定义：血清中CHE的计算：每毫升血清在37℃和底物作用20分钟，分解1μmol乙酰胆
碱为1个活力单位。
2、计算公式：
血清中CHE活力。
全血胆碱酯酶活性测定
注意事项
• 本法检测限为2.4μmol/L，线性范围为2.4～ 1000.0μmol/L。 水冲洗干净后，再用蒸馏水洗三次， 干燥后备用。 • 取血时不应过度挤压耳垂，如果采血时过度挤 压耳垂，采得的血液中血清和组织液所占比例 过多，会使结果偏低。 • 加碱性羟胺和盐酸(1＋2)时，必须严格掌握振 摇时间，使其充分反应，否则会影响结果。
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc
• 式中：Y—酶活性的相对值，%；
• Xs—被测血样中酶活性的绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)；
• Xc—正常人血中酶活性绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)。 Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃· 30min)
四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20μL，注入比色 管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立 即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入 玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。 于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保 存一周。
五、分析步骤
管号 乙酰胆碱标准 应用液(ml) 磷酸盐缓冲液 乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml
水浴 37℃ 5 分钟 乙酰胆碱 0.5ml 37℃30 分钟 羟胺 2 ml 羟胺 2ml 振摇 3 分钟 乙酰胆碱 0.5 ml 37℃30 分钟
碱性羟胺 1：2 HCl 100g/L FeCl3
2 ml
胆碱酯酶测定方法
胆碱酯酶测定方法
胆碱酯酶测定方法一般分为以下几种：
1.电化学法：该方法利用电化学传感器测定胆碱酯酶在体外水溶液中所釋放出的胆碱量。
2.比色法：该方法使用乙酰胆碱（ACh）作为底物，使其在胆碱酯酶作用下分解为胆碱和乙酸。
其中生成的乙酸与酶促色反应物（Ellman's reagent）发生反应，并生成黄色的苯硫酚盐（thioamato compounds），在一定波长下可测定其吸光度。
3.放射性测定法：该方法使用放射性标记的底物，如3H-ACh或14C-ACh作为标记，使其在胆碱酯酶的作用下分解，再通过放射计测量放射性底物和产生的放射性胆碱数目的差别，得出胆碱酯酶的活性。
4.光学测定法：该方法利用胆碱酯酶和重组胆碱酯酶能够在基质中催化反应，并通过检测基质中的光学旋光度或发光度来测定胆碱酯酶的活性。
总之，胆碱酯酶测定方法根据测量原理和技术手段的不同，应用范围和测量精度也会有所区别。
具体选择何种方法应根据实际需要和实验条件来选择。
胆碱脂酶(CHE)测定试剂盒标准操作程序
胆碱酯酶（CHE ）测定标准操作程序1. 摘要血清拟胆碱酯酶是在肝脏中生成然后分泌到血液中的酶，可将胆碱酯水解成胆碱和有机酸。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清中胆碱酯酶（CHE ）的活力3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定胆碱酯酶（CHE ）活力的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的胆碱酯酶（CHE ）试剂盒采用的是丁酰硫代胆碱-铁氰化钾法。
5. 原理丁酰硫代胆碱-铁氰化钾法（DGKC1994new ）[1]---++−→−+++−−−→−+462362])([2)(2])([2CN Fe O H OH CN Fe O H 胆碱双二硫代硫代胆碱硫代胆碱丁酸丁酰硫代胆碱胆碱酯酶底物碘化丁酰硫代在血清中拟胆碱酯酶的作用下水解为丁酸和硫代胆碱，然后试剂中的铁氰化钾被硫代胆碱还原为亚铁氰化钾，引起在波长405 nm 处吸光度下降，下降速率与血清中CHE 活力成正比6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：R1：焦磷酸盐缓冲液（PH7.6）、铁氰化钾、稳定剂；R2：碘化丁酰硫代胆碱、稳定剂7.3 试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可失效期，测定液打开后冷藏于分析仪中2-8℃避光可以保存42天，本试剂有效期为12个月，试剂不可冰冻。
7.4 试剂准备：试剂为即用式。
8. 标准品和质量控制8.1 校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
有机磷农药中毒胆碱酯酶测定
实习报告
• 本次实验的名称、方法、原理 • 实验测定的结果 • 实验结果的计算和评价
• 本次实验操作采用某生物工程公司生产 的“血清胆碱酯酶测定试剂盒”测定。
• 具体的操作步骤按照试剂盒“操作说明 书”进行。
• 酶活性的计算按照“操作说明书”进行
注意事项
• 注意血量、底物浓度、反应温度、保温 时间等；
• 注意个体间胆碱酯酶活性的差异； • 由于实际工作中对比较接触毒物前后酶
活性的改变不易办到，应采用对照和正 常值作参考。
按照测定原理分类
• 测定酶作用产物生成量的方法：主要测 定乙酸，采用溴麝香草酚蓝比色法；
• 测定酶作用后剩余底物的方法：如羟肟 酸铁比色法（羟胺三氯化铁法）；
• 利用特殊底物做测定：如用乙酰硫代胆 碱（DTNB法）或乙酰萘做底物的测定 方法。
按照具体操作可分为：
Байду номын сангаас• 光电比色法 • 纸片法 • 便携式测定仪
胆碱酯酶测定的意义
• 胆碱酯酶分为真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶。 • 真性胆碱酯酶：乙酰胆碱酯酶，主要分布在神
经细胞和红细胞，对于乙酰胆碱有特殊作用，
其主要对神经传导起作用；(有机磷抑制此酶)
• 假性胆碱酯酶：丁酰胆碱酯酶，主要分布于血 清、唾液腺及肝脏，分解丁酰胆碱作用强，也 可以分解丙酰胆碱和乙酰胆碱（作用较弱）。
• 全血胆碱酯酶（特异性胆碱酯酶）降低 主要见于有机磷农药和神经性化学毒剂 中毒。血清胆碱酯酶（非特异性胆碱酯 酶）降低见于有机磷农药中毒及肝细胞 严重损害。
胆碱酯酶测定的意义
• 血液胆碱酯酶活性检验是有机磷农药中 毒早期发现、诊断及治疗的重要指标之 一。
测定方法
• 按照2002年发布的职业病职业性急性有 机磷杀虫剂中毒诊断标准（GBZ82002），胆碱酯酶活性的检验有硫代乙 酰胆碱-二硫双硝基苯甲酸法(GBZ52)、 便携式胆碱酯酶测定仪法和纸片法等,但 是对胆碱酯酶活性测定的方法不作统一 规定。
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湘西州疾控中心/职防所作业指导书文件编号:XXJK/ZY-F013:2009 标题：全血胆碱脂酶活性测定规程第1版第1页共3页
湘西自治州疾病预防控制中心
作业指导书标题：全血胆碱脂酶活性测定规程
修改记录
标题：全血胆碱脂酶活性测定规程第1版第2页共3页
1. 目的
规范全血胆碱脂酶活性测定，正确使用测定方法，保证测定工作顺利进行。
2. 适用范围
适用于全血胆碱脂酶活性测定。
3. 操作程序
3.1 试剂准备：
需准备的试剂包括：磷酸盐缓冲液，碱性羟胺液（使用前用14%盐酸羟胺液和14%氢氧化钠液临时配制），1：2盐酸溶液，10%三氯化铁盐酸液（深棕色瓶储存），0.01%皂素溶液（冰箱保存），氯化乙酰胆碱标准液（包括标准储备液和标准应用液两种）。
3.2 分析：
3.2.1 乙酰胆碱标准曲线制备：将6支具塞比色管中各加水1ml，再分别加入氯化乙酰胆碱标准应用液0ml,0.2ml, 0.4ml, 0.6ml, 0.8ml, 1.0ml，再分别加入磷酸盐缓冲液至2ml，摇匀，然后加入碱性羟胺液4ml，振摇3分钟，再分别加入1：2的盐酸溶液2ml，充分振摇，2分钟后加入10%三氯化铁盐酸液2ml摇匀后过滤，最后于500mm 波长下比色（以试剂空白管调零），按氯化乙酰胆碱不同微克分子数与光密度的相对关系绘制标准曲线。
3.2.2 样品分析：于A管（样品管）和B管（对照管）内各加入0.98ml水，然后加入耳垂血20ul，置于370C水浴箱中5—10分钟后将测定管A系列中每隔半分钟或1分钟依次加入氯化乙酰胆碱标准应用液1.0ml，准确记时后于370C+0.50C水浴中保温30分钟后取出，依次加入碱性羟胺4ml振摇3分钟终止反应；对照管B中先加入碱性羟胺4ml，再加入氯化乙酰胆碱标准应用液1.0ml，振摇3分钟；最后将A、B管分别于500mm波长下比色。
3.3 计算：
3.3.1 被水解的氯化乙酰胆碱的光密度=对照管B的光密度-样品管A光的密度。
3.3.2 用被水解的氯化乙酰胆碱的光密度对照乙酰胆碱标准曲线，可得到相应的被水解的氯化乙酰胆碱量（微克分子），这一数值就是0.02ml血液经过370C30分钟反应条件下的胆碱脂酶活性绝对值。
标题：全血胆碱脂酶活性测定规程第1版第3页共3页
4. 注意事项
4.1 0.01%皂素溶液可用蒸馏水代替，不影响测定结果。
4.2 氯化乙酰胆碱标准储备液放久后会霉变而不能用，使用前应注意检查。
4.3 反应的温度和时间对测定结果有明显影响，必须正确控制。
4.4 加入三氯化铁显色后，其产生的棕红色的络合物易褪色，必须在20分钟内完成比色。
在样品较多时，应分批加入三氯化铁显色。