胡萝卜组织培养
胡萝卜组织培养灭菌流程
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1.2 仪器与试剂准备：超净工作台、消毒锅、剪刀、镊子、无菌滤纸、培养皿、无菌水、70%酒精、氯化汞、无菌刀。
胡萝卜组织培养
②外植体接种。 把消毒好的胡萝卜直根放入无菌培养皿中，用消毒好的 小刀沿截面将其横切成厚度1mm 左右的小圆片，然后 将小圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，再将形 成层切成大约长5mm、宽5mm、高1mm 的小长块。具 体操作方法:把消毒好的胡萝卜直根放于无菌培养皿中， 用小刀将其切成2 ～ 3cm 的小段，用灭过菌的打孔器沿 着形成层穿入胡萝卜中，取得一段含有形成层的2 ～ 3cm 的圆柱体，然后用无菌解剖刀片将其切成厚1mm 的小薄片，将切好的胡萝卜外植体接种在MS + 2mg /L 2，4 － D +1. 5mg /L KT 的固体培养基上( 如图1 b) ， 放于黑暗处25℃条件下进行暗培养，50d 后长出淡黄色 愈伤。
组织培养实验室模式布局
三、实验步骤ຫໍສະໝຸດ (1) 胡萝卜愈伤组织的诱导 ①外植体消毒。用清水洗干净胡萝卜直根， 用小刀给其削去表皮，并切成小段放入烧 杯中。先用70% 酒精对胡萝卜直根消毒 5min，用无菌吸水纸吸干，再用10% 的次 氯酸钠溶液消毒10min，放入无菌水中漂洗 2 ～ 3 次，用无菌吸水纸吸干待用。
(2) 胡萝卜愈伤组织悬浮 体系的建立 用镊子夹取在固体培养 基上的胚性愈伤组织即 分散性好、疏松的愈伤 用解剖刀切碎，接种在 MS+ 0. 3mg /L 2，4 － D + 3%蔗糖的液体培 养基( pH5. 8 ) 中，每 100mL 的三角瓶中加 入MS 液体培养基50mL， 摇床转速为110r / min， 温度为25℃，黑暗培 养3 ～ 5d。
(3) 胡萝卜愈伤分化 将胡萝卜悬浮细胞 和愈伤转接在不添 加激素的MS 固体培 养基中，25℃条件 下光培养。30d 左右 愈伤长出胚状体， 40d 后长出小绿芽， 接着生根长出绿叶 片。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计一、背景介绍胡萝卜是一种常见的蔬菜，富含维生素和纤维素，对人体健康有不少好处。
为了提高人们对胡萝卜的认识和培养胡萝卜种植的技能，我们计划开展一项胡萝卜组织培养教学活动。
通过这项活动，学生将了解胡萝卜的生长过程和种植技巧，培养他们对胡萝卜的兴趣和爱护之心。
二、教学目标1. 了解胡萝卜的生长过程和种植要求。
2. 学会胡萝卜的组织培养技术。
3. 培养学生对胡萝卜的兴趣和爱护之心。
4. 培养学生的观察、分析和解决问题的能力。
三、教学内容和步骤1. 胡萝卜的生长过程介绍（30分钟）a. 胡萝卜的种子和幼苗阶段。
b. 胡萝卜的生长环境和生长要求。
c. 胡萝卜的生长周期和生长特点。
2. 胡萝卜的组织培养技术介绍（60分钟）a. 胡萝卜组织培养的原理和方法。
b. 胡萝卜组织培养的材料和设备准备。
c. 胡萝卜组织培养的步骤和注意事项。
d. 实际操作演示和学生亲自尝试。
3. 胡萝卜组织培养实验（120分钟）a. 学生分组进行胡萝卜组织培养实验。
b. 学生观察和记录胡萝卜组织培养的过程和结果。
c. 学生分析实验数据，总结子验结果。
4. 胡萝卜的栽培技巧介绍（30分钟）a. 胡萝卜的播种时间和方法。
b. 胡萝卜的土壤要求和灌溉管理。
c. 胡萝卜的病虫害防治措施。
5. 胡萝卜的品尝和评价（30分钟）a. 学生品尝新鲜的胡萝卜。
b. 学生评价胡萝卜的口感和营养价值。
c. 学生分享种植胡萝卜的心得和体味。
四、教学评估1. 学生的参预度和表现评估。
2. 学生对胡萝卜生长和组织培养的理解评估。
3. 学生对胡萝卜栽培技巧的掌握评估。
4. 学生对胡萝卜品尝和评价的表达评估。
五、教学资源和材料1. 胡萝卜的种子和幼苗。
2. 胡萝卜组织培养的试验器具和培养基。
3. 胡萝卜栽培的工具和土壤。
4. 胡萝卜的相关图片和视频资料。
5. 学生的观察记录表和实验报告模板。
六、教学反思通过这次胡萝卜组织培养教学活动，学生对胡萝卜的生长过程和种植技巧有了更深入的了解，培养了他们对胡萝卜的兴趣和爱护之心。
胡萝卜的组织培养
胡萝卜的组织培养（一）组织培养1．准备（1）器具准备：①高压蒸汽灭菌锅：培养基，接种工具，蒸馏水的消毒。
手持喷雾器：装70%的酒精，用于外植体，接种工具，操作人员的消毒。
②超净工作台：用于无菌操作。
③设备：培养架，温度控制器，摇床，光照培养箱，烘干器，蒸馏水器，冰箱，电炉，天平，温度计，酸度计，显微镜，分注器，移液器，磁力搅拌器，④常用玻璃器具：量筒，培养皿，烧杯，50ml锥形瓶，容量瓶，广口瓶，滴管，移液管，试管，酒精灯，玻璃棒，⑤常用金属仪器：镊子，剪刀，解剖刀，解剖针，接种针，刀架⑥其他用品：滤纸，标签，消毒酒精棉球，封口用品（2）试剂：MS基本培养基2,4-D：生长素类似物NAA：生长素类似物6-BA：细胞分裂素类似物酒精（体积分数70%）：消毒次氯酸钠（体积分数20%）：消毒无菌水A.MS基本培养基配方：上述4种储备液+30g蔗糖+8g琼脂+蒸馏水定容至1000mL（pH5.6~5.8）B.分别向MS基本培养基中加入植物激素：（pH5.6~5.8）诱导愈伤组织形成培养基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D诱导分化芽的培养基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA诱导生根的培养基：MS+0.1 mg/L NAA3.灭菌：灭菌后冷却置于常温下观察3天，检查灭菌是否彻底。
4.取材接种：a．将萝卜洗净削皮切段，擦手消毒。
b．在超净工作台上将萝卜用酒精消毒30秒，用无菌水清洗两到三次，用次氯酸钠溶液处理30min，用无菌水清洗两到三次。
c．用无菌滤纸吸取水分，在培养皿上用无菌刀将萝卜切成1cm厚的横切片，选取有形成层的部位，切取1cm2的小块。
d．将组织块接种到培养基上，封口。
贴上标签，写明材料、日期、编号。
e．将培养基放在23-26°C的恒温箱培养。
4天后观察材料污染情况，14天后，观察愈伤组织生长情况。
5观察记录：每天观察外植体的生长情况，记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计
引言概述：
胡萝卜组织培养是生物学实验中常见的实验项目之一，通过培养胡萝卜组织，
可以观察细胞的生长和分化过程，为学生深入了解植物细胞生物学提供了实践机会。
本文将介绍胡萝卜组织培养教学设计的相关内容，包括实验目的、实验材料、实验步骤、实验结果分析和实验注意事项。
一、实验目的
1.1 观察植物细胞的生长和分化过程。
1.2 理解植物细胞培养的原理和方法。
1.3 学习细胞培养技术的操作步骤。
二、实验材料
2.1 需要准备的材料包括：胡萝卜、琼脂培养基、生长激素等。
2.2 实验器材包括培养皿、移液器、显微镜等。
2.3 实验环境要求无菌条件，确保实验结果的准确性。
三、实验步骤
3.1 从胡萝卜中取出组织样本，进行消毒处理。
3.2 将组织样本切割成小块，放入含有生长激素的琼脂培养基中。
3.3 将培养皿放置在恒温箱中，定期观察组织的生长情况。
四、实验结果分析
4.1 观察胡萝卜组织在培养基中的生长情况。
4.2 分析细胞的分化和增殖情况。
4.3 结合显微镜观察细胞的形态和结构，进行实验结果的定量分析。
五、实验注意事项
5.1 实验过程中要注意无菌操作，避免细菌污染。
5.2 实验结束后要及时清理实验器材，保持实验室整洁。
5.3 学生在进行实验时要注意安全，避免发生意外情况。
结语：
通过胡萝卜组织培养教学设计，学生可以深入了解植物细胞的生长和分化过程，提高实验操作能力和科学素养。
希望本文的介绍可以帮助教师更好地设计和开展胡萝卜组织培养实验，为学生的学习提供更多的实践机会。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计引言概述：胡萝卜是一种常见的蔬菜，富含维生素和纤维，对人体健康非常有益。
为了更好地了解胡萝卜的组织培养方法，本文将介绍一种胡萝卜组织培养的教学设计。
通过这个教学设计，学生将学习到如何培养胡萝卜的组织，培养技巧以及相关的实验操作。
一、培养基的准备1.1 了解培养基的组成胡萝卜组织培养所需的培养基是由多种营养物质组成的。
学生需要了解培养基中的主要成分，如无机盐、有机物质、植物激素等。
同时，还需要了解培养基的pH值和浓度等参数对培养效果的影响。
1.2 制备培养基学生需要学习如何准备胡萝卜组织培养所需的培养基。
制备培养基的过程包括称量和溶解培养基的各种成分，调节pH值和浓度，最终得到适合胡萝卜组织培养的培养基。
1.3 灭菌和保存在进行组织培养实验之前，培养基需要进行灭菌处理，以避免细菌和真菌的污染。
学生需要学习灭菌的方法，如高温灭菌和化学灭菌。
此外，学生还需要学习如何保存培养基，以便后续的实验使用。
二、胡萝卜种子的处理2.1 种子的消毒在进行组织培养之前，胡萝卜种子需要进行消毒处理，以杀灭种子表面的细菌和真菌。
学生需要学习消毒的方法，如用酒精或漂白粉处理种子。
2.2 种子的激素处理为了促进种子的萌发和胡萝卜组织的生长，学生需要学习如何使用植物激素处理种子。
植物激素的浓度和处理时间对种子的生长和组织的培养有重要影响，学生需要学会合理调节激素的浓度和处理时间。
2.3 种子的萌发和筛选经过激素处理后，胡萝卜种子将在培养基上迅速萌发。
学生需要学习如何观察和筛选萌发的种子，选择生长良好的幼苗作为后续组织培养的材料。
三、组织的切割和培养3.1 组织的切割学生需要学习如何从胡萝卜幼苗中切割出适合组织培养的部分。
切割时需要注意操作的卫生和准确性，以避免细菌和真菌的污染。
3.2 组织的培养切割下来的胡萝卜组织需要在培养基上进行培养。
学生需要学习如何将组织放置在培养基上，以及如何调节培养基的条件，如温度、光照和湿度等。
胡萝卜组织培养教学设计
胡萝卜组织培养教学设计引言概述：胡萝卜是一种常见的蔬菜，其组织培养在生物学教学中具有重要意义。
通过胡萝卜组织培养实验，学生可以了解植物生长发育的基本原理，培养实验操作能力和科学研究精神。
因此，设计一套科学合理的胡萝卜组织培养教学方案至关重要。
一、实验目的1.1 匡助学生了解植物细胞培养的基本原理和技术。
1.2 培养学生的实验操作能力和观察分析能力。
1.3 培养学生的科学研究意识和团队协作能力。
二、实验材料和仪器2.1 胡萝卜组织样本：新鲜胡萝卜块或者悬浮液。
2.2 培养基：含有适当营养物质和植物激素的培养基。
2.3 实验器材：培养皿、移液器、显微镜等。
三、实验步骤3.1 准备工作：将胡萝卜组织样本切割成小块，消毒处理。
3.2 培养基配置：根据实验要求配置含有适当植物激素的培养基。
3.3 培养操作：将胡萝卜组织样本置于培养基中，定期观察生长情况。
四、实验观察和分析4.1 观察胡萝卜组织的生长情况：记录组织的颜色、形态和大小变化。
4.2 分析培养结果：根据观察结果分析植物细胞的分化和增殖情况。
4.3 讨论实验意义：与学生一起讨论实验结果，引导学生总结子验经验。
五、实验总结与展望5.1 总结子验成果：总结子验过程中遇到的问题和解决方法，总结子验结果。
5.2 展望未来研究：探讨胡萝卜组织培养在生物学研究中的应用前景。
5.3 提出改进建议：根据实验过程中的经验，提出改进教学设计的建议。
通过以上胡萝卜组织培养教学设计方案，可以匡助学生深入了解植物细胞培养的原理和技术，培养他们的实验操作能力和科学研究意识，为未来的科学研究打下坚实基础。
同时，教师在实施教学过程中也要根据学生的实际情况进行调整和改进，不断提高教学质量和教学效果。
胡萝卜组织培养
六、常见错误举例
• 材料切得过小。 • 材料消毒时间过长。 • 切材料时下面没垫滤纸。 • 镊子、刀在酒精灯上烧过立即放到盛酒精的烧杯里。 • 操作时，手、三角烧瓶在盛材料的培养皿上方活动，
容易把菌带到材料上。 • 把接种的切块压入培养基里面。 • 接种时瓶口垂直向上，手、镊子上的脏物掉到瓶里。 • 升汞回收倒入酒精桶里。
七、课后作业及预习
• 课后作业
有几种常用的外植体消毒液？主要原理是什 么？效果如何？
• 预习
根癌农杆菌转化的原理及方法。
实验步骤
• 材料处理
安全第一
1）配75%酒精，倒升汞；
2）把胡萝卜切成约440×20×10 mm方块，4条。
• 消毒和清洗
4）把切好的材料，放在100 mL的烧杯里，加入75％酒精，浸
8）用烧过的镊子将外植体放到培养基上，3块/瓶；
9） 盖好封口膜和牛皮纸，放回316，23~28℃，避光培养。
• 在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养 基上，每瓶接种2~4个，防止交叉污染。
• 接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿 用无菌胶带封口。
三、无菌操作步骤
• 接种3天前用甲醛熏蒸接种室，并于接种前3小时打开紫外线 灯进行杀菌；
• 接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯； • 接种员洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，换穿拖鞋等； • 上工作台后，用酒精棉球搽拭双手（特别是指甲处）和工作
泡30秒；
5）然后将外植体转入0.2％升汞中，浸泡25~30分钟，不能超
过30分钟；
6）把带有升汞和组织材料的烧杯拿到超净工作台，取出材料，
放入培养皿，用灭菌水洗4~5分钟，重复3次，用滤纸吸干。
• 接种与培养
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. 研究背景
1.1 胡萝卜
胡萝卜(Daucus carota L．)为伞形科植物，是世界上最重要的蔬菜作物之一，占蔬菜生产总量的3％，达13．5百万吨(Hole，1996)。
胡萝卜块根营养丰富，约含有88％的水、6％～8％糖、1％～2％植物纤维，0．7％～1．2％蛋白质、1％灰份及0～3％脂肪[1] 。
由于其富含维生素A前体类胡萝b素和植物纤维，因而是一种重要的营养保健品。
其适于生食、加工、烹调等多种用途。
中国是农业大国，胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用。
因此继续深入研究胡萝卜细胞培养还是很有必要的。
1.2 组织培养
植物组织培养是在含有营养物质及植物生长物质的培养基中，培养离体植物组织（器官或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术[2]。
其理论基础是植物细胞具有全能性，即一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，具有发育成完整植株的潜能，在适宜的条件下能够发育成一个完整的植株。
进行离体培养时，植物的组织或器官通过脱分化形成愈伤组织。
胡萝卜价格比较便宜，材料易得，而且在组织培养方面容易诱导发生，我们可以通过这个实验熟悉植物组培。
2. 材料与方法
2.1 材料
培养皿、锥形瓶、无菌纸、镊子、解剖刀、烧杯、量筒、玻璃棒、酒精灯、无菌操作台、高压灭菌锅、微波炉、PH试纸。
MS培养基、2,4-D、6-BA、活性炭、无菌水、蔗糖、琼脂粉、75%酒精、1% (体积比)浓度的次氯酸钙溶液、胡萝卜块根（2012-2-21-怡购，2012-2-24-水果摊，2012-3-13-水果摊，2012-3-21-珠影，2012-3-29-荣一）
2.2 方法
2.2.1 MS培养基的配制200ml
◆用大烧杯取无菌水100-120ml
◆依次用移液管量取加入母液：20ml大量（10x）、2ml微量（100x）、
2ml铁盐（100x）、4ml有机（50x）、2mg/L2,4-D。
◆称取6g蔗糖加入，搅拌直至全部溶解。
◆用量筒定容至20ml。
◆用pH试纸调pH至6.0-6.2
◆称取1.6g琼脂加入，搅拌。
◆放入微波炉内加热直至清澈无沉淀。
◆分装后高压灭菌3h。
探究实验1激素为1.0mg/L2,4-D，1.0mg/L6-BA[3]
探究实验2激素为2.2mg/L2,4-D[3 4]
2.2.2 培养条件
◆接种环境
1先用75%酒精擦拭无菌操作台的内部6个面。
2将现配的75%的酒精、1%次氯酸钠、刀、镊子、无菌纸、无菌水、小烧杯、培养皿、废液缸、试管架、打火机等操作用的工具放置到相应位置。
3将酒精灯添加适当的酒精（不超过容积的2/3），并检查是否可以点燃。
4先开紫外灯40min，后再通风20min。
5进入操作台的物品都要经酒精消毒。
◆操作过程及有关条件
1在无菌操作台上操作。
2点燃酒精灯，倒平板。
3消毒外植体。
把清洗好的胡萝卜块根放入无菌操作台，消毒先用75%酒精
对胡萝卜直根消毒10s 再用1%的次氯酸钙溶液消毒7~8min，用无菌水冲
洗3次，放入成有无菌水的烧杯中待用。
4拆刀镊，并消毒。
5切外植体。
用消毒好的小刀沿截面将其横切成厚度3~5mm左右的小圆片，然后如图所示切，将韧皮部和木质部切去，留下形成层。
6 接种外植体，4~5个/培养皿。
7 封口。
◆培养环境
25℃暗处理
3．结果与分析
3.1 实验数据统计
实验周期：实验当日
第一次观察时间 6天后
结果统计 12~14天后
表1 五次实验记录统计表
日期激素类型及浓度(mg/L) 培养盘数正常盘数
A 2-21 2,4-D 2.0 3 0
B 2-24 2,4-D 2.0 8 2
C 3-13 2,4-
D 2.0 4 2
D 3-21 2,4-D 1.0，6-BA 1.0 4 2
2,4-D 2.0 4 1
E 3-29 2,4-D 2.2 13 6
3.2 实验结果说明及表格
●A中3盘 2盘染菌 1盘干枯
●B中8盘 1盘染菌 5盘玻璃化2盘正常40%愈伤
●C中4盘 2盘染菌 2盘褐化----移盘后 1盘染菌 1盘60%遇上
●D中4盘 2盘褐化 2盘愈伤70%
4盘 1盘染菌 1盘玻璃化 1盘培养皿损坏 1盘愈伤50%
●E中13盘2盘染菌2盘褐化 3盘玻璃化 6盘愈伤70%
表2 五次实验结果统计表
激素及浓度(mg/L) 异常盘数异常原因正常盘数诱导率
A 2,4-D 2.0 3 染菌干枯
B 2,4-D 2.0 6 染菌玻璃化 2 40%
C 2,4-
D 2.0 2 染菌褐化 2 60%
D 2,4-D 1.0，6-BA 1.0 2 褐化 2 65% 2,4-D 2.0 3 染菌玻璃化 1 60%
E 2,4-D 2.2 7 染菌褐化玻璃化 6 70%
3.3 不同激素对胡萝卜愈伤诱导的影响
表3 不同激素愈伤组织诱导率
激素类型及浓度(mg/L) 诱导质量诱导率
2,4-D 2.0 + 53.4% 图1
2,4-D 2.2 ++ 70% 图2
2,4-D 1.0，6-BA 1.0 ++ 65% 图3
图1 图2 图3
4. 讨论
通过组织培养建立植物再生系统时，基本培养基附加激素的种类和浓度、操作手法等因素都会对再生植株的分化率产生很大的影响，从而影响遗传转化的成败。
激素的种类和浓度在建立再生系统中起很重要的作用。
在实验过程中发现当使用单种激素2,4-D时，浓度增大会更容易诱导愈伤组织。
但因实验次数有限，无法多次实验检验实验结果；因设计浓度梯度有限，未能确定最佳浓度配比。
2,4-D与其他激素混合使用时，愈伤诱导情况要好于使用单种激素，但诱导率仍不理想。
预计生长素与细胞分裂素的配比不同，胡萝卜块根诱导质量也不同，应进一步实验，得出最佳配比度。
对于在探究学习阶段的我们，我认为实验操作手法对植物再生系统的建立成功与否也起到很大影响。
根据几次实验总结失败原因：
◆染菌：零星分布在培养基中----操作问题；沿外植体生----灭菌，工
具问题；数天后沿外植体生长----外植体本身问题。
◆褐化：切割机械损伤；品种本身；激素母液浓度；温度光照。
可添加
0.1~0.5%活性炭。
◆玻璃化：激素浓度；琼脂用量；切割机械损伤；温度过低光照时间通
风条件。
◆无变化：激素种类或浓度配比。
◆愈伤组织紧密：细胞分裂素过高，激素浓度不当。
试验中应积极尝试，从不足中找到问题，及时思考并改正，这样才能取得进步。
5. 主要参考文献：
[1]颜昌敬著．植物组织培养手册[M]．上海：上海科学技术出版社，1989．451—453．
[2]安利国主编. 细胞工程[M]. 科学出版社，2011,7
[3郑回勇，郑金贵，许明，刘峰，赵伊英.胡萝卜再生体系及高效遗传转化体系的建立 [J].福建农业科学院，2002(5):273-241.
[4]高金秋,于丽杰.胡萝卜体细胞胚再生系统的建立[J].北方园艺,2009(8):73-77.
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胡
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化学与生物学院
生物11级二班
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