土壤微生物测定方法
土壤微生物生物量碳测定方法
土壤微生物生物量碳测定方法一、呼吸法通过测定土壤中微生物呼吸释放的CO2量来间接估算土壤微生物生物量碳。
该方法的原理基于微生物在代谢过程中产生的CO2量与其生物量碳之间的正相关关系。
常用的测定方法包括静态方法和动态方法。
1.静态方法：在采样后立即封闭土壤样品容器，然后测定一定时间内容器内CO2的累积释放量，并利用其中一种模型计算微生物生物量碳。
例如，利用静态方法可以测定土壤有机碳浓度和总CO2浓度，通过两者的比值计算微生物生物量碳。
2.动态方法：将土壤样品装入氧气通气的大容器中，测定一定时间内容器中CO2的连续释放量，并通过外推法计算微生物生物量碳。
例如，可以通过监测土壤样品容器中CO2的连续释放曲线，然后利用微生物呼吸速率和微生物生物量碳之间的关系计算微生物生物量碳。
二、估算法利用土壤中微生物生物量碳与其中一种土壤性质之间的相关性来估算土壤微生物生物量碳。
常用的估算法包括土壤学习法、土壤酶学法和土壤微生物生态法。
1.土壤学习法：根据不同土壤类型的土壤微生物生物量碳数据进行学习建模，然后根据土壤性质数据进行预测。
常用的学习方法包括主成分分析、判别分析和回归分析等。
2.土壤酶学法：通过测定土壤中一些酶活性与微生物生物量碳之间的相关性来预测微生物生物量碳。
常用的酶活性指标包括脲酶、蔗糖酶和脱氢气酶等。
3.土壤微生物生态法：通过测定土壤微生物多样性和群落结构与微生物生物量碳之间的相关性来估算微生物生物量碳。
常用的方法包括16SrRNA和ITS基因测序、脂肪酸指纹技术和磷脂脂肪酸分析等。
三、标记法通过标记的同位素技术测定土壤微生物生物量碳。
其中，最常用的标记同位素是^13C和^14C。
通过给土壤样品添加同位素标记物并追踪其在土壤中的分布和转化，可以计算微生物生物量碳。
总结起来，土壤微生物生物量碳的测定方法主要包括呼吸法、估算法和标记法等。
不同的方法适用于不同的土壤类型和测定目的，综合运用多种方法可以更准确地评估土壤微生物生物量碳。
土壤微生物量碳测定方法
土壤微生物量碳测定方法：1、试剂配制：1、0.5M K2SO4溶液：称取K2SO4 87.165g溶液于蒸馏水中，搅拌溶解，（可加热）定容至1 L。
2、去乙醇氯仿的配制：在通风柜中，量取100毫升氯仿至500毫升的分液漏斗中，加入200毫升的蒸馏水，加塞，上下振荡10下，打开塞子放气，而后加塞再振荡10下，反复3次，将分液漏斗置于铁架台上，静止溶液分层，打开分液漏斗下端的阀，将下层溶液（氯仿）放入200毫升的烧杯中，将剩余的溶液倒入水槽，用自来水冲洗。
再将烧杯中的氯仿倒入分液漏斗中，反复3次，将精制后的氯仿倒入棕色瓶中，加入无水分析纯的CaCl2 10g，置于暗处保存。
3、0.8000 mol.L-1 1/6 K2Cr2O7 标准溶液；称取39.2245g重铬酸钾（K2Cr2O7分纯）加400 ml蒸馏水加热溶解，冷却定容1L4、02 mol.L-1 FeSO4 溶液，56.0g硫酸亚铁【FeSO1.7H2O】溶解蒸馏水中，加15ml浓硫酸，用蒸馏水定容至1L5、邻啡罗啉指示剂：1.485g邻啡罗啉（C2H8N2.H2O）及0.695g硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）溶于100ml 蒸馏水，形成红棕色络合物【（FeC12H8.N2）8 2+】,贮存于棕色瓶中2、试验步骤：1、制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%的水在25℃下培养7~15d【day】，取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，精制5分钟，再抽滤5分钟，同样操作重复三次。
干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。
按照土：0.5M K2SO4=1:4（烘干土算，一般就是湿土；0.5M K2SO4=1:2），加入0.5M K2SO4溶液（空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。
土壤微生物量测定方法
土壤微生物量测定方法常规培养法是最早也是最常用的土壤微生物量测定方法之一、该方法是将土壤样品经过稀释后接种到含有特定培养基的培养皿中，经过一段时间的培养，根据培养皿上的菌落数量计算土壤中微生物的数量。
常用的培养基有营养琼脂培养基、土壤细菌培养基和土壤真菌培养基等。
常规培养法的优点是简单易行，可以同时测定不同类型微生物的数量，但该方法有一些局限性，如只能测定能够在培养基上生长的微生物，不能测定需异养条件才能生长的微生物，而且该方法容易低估土壤中微生物的真实数量。
生物量测定法是一种利用土壤微生物的生物学过程测定微生物量的方法。
该方法一般分为碳饥饿法和氮饥饿法两种。
碳饥饿法是将土壤样品暴露在低碳条件下（如0.01%葡萄糖溶液中）一段时间后，测定土壤中的微生物的生物量。
氮饥饿法是将土壤样品暴露在低氮条件下（如0.01%硝酸铵溶液中）一段时间后，测定土壤中的微生物的生物量。
这两种方法都是利用微生物的生物学特性，通过测定微生物对不同养分的响应来估计微生物的数量。
生物量测定法的优点是准确度较高，可以测定土壤中广泛类型的微生物，但该方法也有一些局限性，如需要较长的试验周期，测定过程中需要严格控制温度、湿度等环境条件，且操作较为繁琐。
生物学特征法是一种通过测定土壤微生物的生物学特征来评估微生物群体数量的方法。
该方法常用的特征包括土壤酶活性、呼吸作用速率、微生物生长速率和微生物群体的磷脂脂肪酸组成等。
这些特征的测定可以通过色谱、酶反应和分子生物学技术等手段进行。
生物学特征法的优点是操作简便，消耗土壤样品较少，时间短，结果可靠。
但该方法也有一些问题，如不同微生物对环境的响应不同，结果受环境因素影响较大。
综上所述，土壤微生物量的测定方法有常规培养法、生物量测定法和生物学特征法等。
不同的测定方法各有优缺点，使用时可以根据具体的研究目的和所需数据的准确度进行选择。
此外，单一的方法往往无法全面准确地评估土壤微生物量，因此常采用多种方法综合分析，以得到更准确的结果。
土壤微生物数量测定方法
土壤微生物数量测定方法土壤微生物是指生活在土壤中的微小生物，包括细菌、真菌、放线菌、古菌等。
土壤微生物在土壤的生物地球化学循环、有机质分解、养分转换和植物健康等过程中起着重要的作用。
因此，对土壤微生物数量的准确测定具有重要意义。
本文将介绍一些常用的土壤微生物数量测定方法。
1.瓶培法：将适量的土壤样品与适量的培养基混合，在37°C下培养约24小时，然后通过平板计数法或最凼稀释法进行测定。
2.膜过滤法：将土壤提取液通过特定孔径的膜过滤器滤过，然后将膜放置在培养基上进行细菌的生长，最后进行计数。
3.间接法：通过测定土壤样品的可培养细菌指标，如氧化还原酶、脱氢酶等的活性，从而推算出土壤中的细菌数量。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的细菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行细菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的真菌，通过计数来估算真菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使真菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌数量测定相似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行真菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的真菌基因，如18SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行真菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的放线菌，通过计数来估算放线菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使放线菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌和真菌数量测定类似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行放线菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的放线菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行放线菌数量的测定。
通过上述方法测定土壤中微生物的数量，可以了解土壤微生物对土壤生态系统功能的影响，并为土壤质量评价和科学合理利用提供依据。
土壤微生物测定方法
土壤微生物测定方法
目前常用的土壤微生物测定方法主要包括直接计数法、培养法、DNA
分析法和生化方法等。
1.直接计数法：直接计数法是指通过显微镜观察和计数土壤中微生物
的数量。
这种方法简单直观，可以快速测定土壤中微生物的数量。
但是，
由于土壤微生物数量庞大，直接计数方法需要大量的样品和时间，且对操
作者的要求较高。
2.培养法：培养法是指通过将土壤样品接种在富含营养物质的培养基上，并在一定温度和湿度下培养一段时间，通过观察和计数可见的菌落来
测定土壤中微生物的数量和种类。
这种方法可以有效地测定土壤中常见的
细菌和真菌等，但是对于无法培养的微生物种类相对有限。
3.DNA分析法：DNA分析法是指通过提取土壤中微生物的DNA，并通
过PCR扩增和DNA测序等技术来测定土壤中微生物的种类和多样性。
这种
方法可以检测到所有存在的微生物，无论是否可以培养。
因此，DNA分析
法可以更全面地测定土壤中微生物的多样性和种类。
但是，这种方法对实
验条件和技术要求较高。
4.生化方法：生化方法是指通过测定土壤中微生物代谢产物的含量或
活性来测定土壤中微生物的数量。
例如，通过测定脲酶、葡萄糖酶、氧化
还原酶等土壤微生物常见的酶活性来评估微生物的活性和数量。
生化方法
可以快速测定土壤微生物的数量和活性，但是受土壤理化性质的影响较大。
总之，以上所述的方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方
法或多种方法相结合来测定土壤微生物的数量和多样性。
此外，测定方法
的选择还要考虑实验所需的样品数量、可行性和经济性等因素。
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量测定方法
土壤微生物生物量的测定方法有很多种，一般可以分为直接和间接测定方法。
直接测定方法包括：
1. 水解法：将土壤样品经过水解处理，然后通过高密度离心和显微镜观察计数获得微生物生物量。
2. 利用滴定法：通过向土壤中添加抑制剂或适宜的滴定液，测定细菌和真菌的数量以确定生物量。
3. 融解法：将土壤样品与溶解剂混合，在特定温度下溶解土壤中的微生物，然后通过测定溶液中的生物量来计算土壤中的微生物生物量。
间接测定方法包括：
1. 培养基测定法：将土壤样品接种到特定的培养基中，利用培养基中微生物生长所需的营养物质来测定微生物生物量。
2. 脂肪酸测定法：通过提取土壤样品中的脂肪酸，并利用气相色谱仪测定来确定微生物的生物量。
3. 磷脂酸测定法：通过提取土壤中的磷脂酸，并利用色谱或质谱仪测定磷脂酸来估计微生物生物量。
这些方法各有优缺点，选择适合的方法需要考虑实验条件、样品处理的方便程度
和测定结果的准确性。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。
它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。
土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。
2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。
2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。
2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。
根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。
表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。
表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。
土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
土壤微生物量测定方法
土壤微生物量测定方法一、土壤微生物生物量碳（氯仿熏蒸－K2SO4提取-碳分析仪器法）1、试剂（1）去乙醇氯仿制备：在通风橱中，将分析纯氯仿与蒸馏水按1 2（v : v）加入分液漏斗中，充分摇动1 min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。
得到的无乙醇氯仿中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。
纯化后的氯仿置于试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存。
（2）氢氧化钠溶液[c（NaOH）= 1 mol L-1]：通常分析纯固体氢氧化钠中含有碳酸钠，与酸作用时生成二氧化碳，从而影响滴定终点判断和测定的准确度。
配制时应先除去碳酸钠，根据碳酸钠不溶于浓碱，可先将氢氧化钠配成50%（w : v）的浓氧溶液，密闭放置3～4 d。
待碳酸钠沉降后，取56 ml 50%氢氧化钠上清液（约19 mol L-1），用新煮沸冷却的除去二氧化碳的蒸馏水释稀到1 L，即为浓度1 mol L-1 NaOH溶液，用橡皮塞密闭保存。
（3）硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5 mol L-1]：取1742.5 g分析纯硫酸钾，用研钵磨成粉末状，倒于25 L塑料桶中，加蒸馏水至20 L，盖紧螺旋盖置于摇床（150 r min-1）上溶解24 h即可。
（4）六偏磷酸钠溶液[ρ（Na）= 5 g 100 ml-1，pH 2.0]：称取50.0 g分析纯六偏磷酸钠溶于800 ml高纯度去离子水中，用分析纯浓磷酸调节至pH 2.0，用高纯度去离子水定容至1 L。
要注意的是六偏磷酸钠溶解速度很慢应提前配制；由于其易粘于烧杯底部，若加热常因受热不均使烧杯破裂。
（5）过硫酸钾溶液[ρ（K2S2O8）= 2 g 100 ml-1]：称取20.0 g分析纯过硫酸钾，溶于高纯度去离子水中，定容至1 L。
值得注意过硫酸钾溶液易被氧化，应避光存放且最多使用7 d。
（6）磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100 ml-1]：量取37 ml 分析纯浓磷酸（85%），慢慢加入到188 ml高纯度去离子水中即可。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
土壤微生物测定
土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中得一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统得微小变化。
土壤微生物活性得表征量有：微生物量、C／Ｎ、土壤呼吸强度与纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。
测定指标:
１、土壤微生物量(Mierｏbia lＢiｏmass,ＭB）
能代表参与调控土壤能量与养分循环以及有机物质转化相对应微生物得数量,一般指土壤中体积小于5Χ103um3得生物总量。
它与土壤有机质含量密切相关。
目前,熏蒸法就是使用最广泛得一种测定土壤微生物量得方法阎,它就是将待测土壤经药剂熏蒸后,土壤中微生物被杀死,被杀死得微生物体被新加人原土样得微生物分解(矿化)而放出ＣＯ２,根据释放出得CO２:得量与微生物体矿化率常数Kｃ可计算出该土样微生物中得碳量。
因此碳量得大小就反映了微生物量得大小。
此外,还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中得微生物量—碳。
受土壤水分状况影响较大,不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥得土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。
熏蒸提取-容量分析法
操作步骤:
(1）土壤前处理与熏蒸
(2)提取
将熏蒸土壤无损地转移到２00mL聚乙烯塑料瓶中,加入10０mL0、5mｏl·Ｌ-１K2SO４（图水比为1:4；w：ｖ),振荡30ｍin(３00rev·miｎ-１),用中速定量滤纸过滤于１25mL塑料瓶中。
熏蒸开始得同时,另称取等量得３份土壤于2０0mL聚乙烯塑料瓶中,直接加入１00ml Ｌ０、5mol·Ｌ-1 K２ＳＯ4提取；另作3个无土壤空白。
提取液应立即分析。
(3)测定
吸取10ｍL上述土壤提取液于１50ｍL消化管(２4mｍх295mm)中,准确加入1０ｍL0、018mol·L-1K2Ｃr2O7—1２mol·L-1H2SO4溶液,加入2～3玻璃珠或瓷片,混匀后置于175±1℃磷酸浴中煮沸10min（放入消化管前,磷酸浴温度应调至179℃，放入后温度恰好为175℃)。
冷却后无损地转移至150mL三角瓶中,用去离子水洗涤消化管3~５次使溶液体积约为80ｍＬ,加入一滴邻菲罗啉指示剂,用0、05 mol·Ｌ-１硫酸亚铁标准溶液滴定,溶液颜色由橙黄色变为蓝色,再变为红棕色,即为滴定终点。
（4)结果计算
有机碳量(mg·C·kg-1）
式中M为FeSO4溶液浓度；Ｖ0、Ｖ分别为空白与样品消耗得FeSＯ4溶液得体积(ｍＬ)，ｆ为稀释倍数;Ｗ为烘干土质量(g）;
土壤微生物生物量碳：Bc=Eｃ/kＥC
式中Ec为熏蒸与未熏蒸土壤得差值;ｋＥＣ为转换系数,取值０、３8
２、菌种测定
土壤微生物种类丰富,主要有细菌、真菌及放线菌等。
各菌种在细胞代谢中起着特殊得重要作用。
细菌用牛肉汁蛋白陈琼脂培养基平板混菌法培养测定;真菌用马丁氏琼脂培养基平板混菌法培养测定;放线菌用高氏１号琼脂培养基平板混菌法或淀粉按培养基稀释平板法培养测定。
3、土壤呼吸强度与纤维分解强度
土壤呼吸强度与纤维分解强度就是土壤微生物活性得重要标志,反映了土壤中微生物活性及对有机质残体分解得速度与强度。
纤维素分解强度采用埋片法；呼吸强度采用碱吸收滴定法。
土壤微生物活性用土壤呼吸CO2测定法(5g鲜土于310ｍＬ试剂瓶中，22℃24h测CO2释放量（用eｘＨ23oｓ红外ＣO:分析仪测定))。
直接测定土壤呼吸得方法基本可分为静态气室法、动态气室法与微气象法三种。
密闭静置培养法
原理：
CO2 + KOH K2CO3+H2O
K2CO3 +KOＨKHCＯ3＋KCl＋H2O
KHＣO３+ ＨCｌKCl +H２CO3
操作步骤:
称取20g新鲜土(为了增强呼吸作用,土壤中可加入葡萄糖，6mg·g-１)于5０0mL得广口瓶中,将土壤加水润湿到最大持水量得70%,用50mＬ小烧杯,注入2０mL0.1Ｍ得KOH溶液,然后密闭广口瓶，于28℃恒温培养24ｈ。
然后取出,以酚酞为指示剂,用0．1M得ＨCl溶液滴定。
领取同样容积得广口瓶，同上处理,不加土壤作为对照。
根据两者之差,求出消耗用于吸收ＣO2得KＯH量。
4、酶活性测定
土壤酶大多数来自土壤微生物,在土壤中已发现5０—60种酶,它们参与并催化土壤中发生得一系列复杂得生物化学反应。
如水解酶与转化酶对土壤有机质得形成与养分循环具有重要得作用。
已有研究表明,土壤酶活性与土壤结构参数有很好得相关性。
土壤微生物酶主要有脱氢酶、磷酸酶、精氨酸酶及芳基硫酸酯酶等。
4、1脱氢酶活性得测定
通过测定呼吸链脱氢酶活性可表征微生物代谢活力大小。
郑志永等通过对氯化碘硝基四氮哇(INT)比色法反应条件得研究,确定了呼吸链脱氢酶活性得测定方法。
4、2过氧化氢酶活性得测定(本部做,需要冰箱)
土壤过氧化氢酶采用高锰酸钾容量法,以２0mｉn后1g土壤消耗KMnO4(0、11~lｍol·Ｌ-1)得量
表示,或运用注入土壤中得过氧化氢在反应后剩余量得方法测定。
操作步骤:
称取５ｇ新鲜土壤样品于100mL三角瓶中。
加入甲苯0、５mL,摇匀，与０～4℃冰箱中放置半小时。
取出,立刻加入25mＬ冰箱贮存得含３%H２O2得水溶液。
充分摇匀后,再放冰箱中半小时。
取出,迅速加入2NH2SO44ｍＬ,用０、１NKMnO4溶液滴定。
根据对照与试样消耗高锰酸钾得差，求出相当于分解得Ｈ２Ｏ２得量,酶活性以1g土壤、1h内消耗KMnＯ4得量计算。
4.3尿酶活性得测定
尿酶采用钠氏比色法,常用1ｇ土,在3７℃培养24h后释放出得氨态氮得含量（mg)表示;
操作步骤:
(1)标准曲线得绘制:
分别取0,0、５，1、0,１、5,2、0，２、5mL５０ug／mＬ得氮标准溶液于25mＬ容量瓶中。
用水稀释至10ｍL,摇匀,加入１mL酒石酸钾钠,0、8mL钠氏剂，摇匀。
慢慢加入4mＬ1MNa ＯＨ溶液,稀释至刻度,显色1０min后,测定吸光度值。
(2）称取５g土壤，置于100mL三角瓶中。
加入10mＬpH6、7磷酸缓冲溶液及0、5mL甲苯,混合处理1５min后,加入1０mＬ１0%尿素溶液(对照以水代替）,置于37℃恒温箱中,培养４8h。
（３)培养结束后,取出,加入2０ｍＬ1MKＣl溶液,充分摇匀10min。
将悬浊液用滤纸过滤,吸取经过稀释得滤液1ｍＬ，按绘制标准曲线得操作,加入酒石酸钾钠,钠氏剂等进行显色,根据标准曲线查出氨氮含量。
计算土壤尿酶得活性。
４、4蛋白酶活性得测定
蛋白酶活性用明胶在磷酸盐缓冲液(pＨ=7、4)中水解生成甘氨酸得方法测定;
铜盐比色法
方法原理：
本法以精胶为基质,酶解后所释放出得氨基酸使其与铜盐反应形成蓝色复合物。
用比色法测定颜色深度。
操作步骤:
(１)标准曲线得绘制
取0~２０mL50ug／mL甘氨酸标准溶液,用蒸馏水加之20mL,然后加入20mL新配制得铜—磷酸盐溶液，显色后于65０nm处，测定吸光度。
(2)测定操作
称取5g土壤置于100ｍL三角瓶中。
加入甲苯2ｍL,放置15min。
计入20mL1%精胶溶
液。
于3７℃恒温箱中,培养24h。
与此同时,以水代替基质作为对照。
培养结束后,将悬液过滤,取10mL滤液,加水10ｍL,铜-磷酸盐溶液20mL，显色后，测定吸光度，根据标准曲线法计算NＨ2-N(甘氨酸？)得含量。
５、微生物功能多样性
用bｉolｏｇ碳素分析法测定。