酸乳的制作和乳酸菌的分离
乳酸菌的分离及酸奶的制作
乳酸菌的分离及酸奶的制作一、乳酸细菌简介广义的乳酸菌是指一类能利用可发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。
乳酸细菌不是一个分类学名称，在分类上乳酸细菌涉及的有关属在二十个属以上，常见的有：属于革兰氏阳性无芽孢杆菌的乳杆菌属（如德氏乳杆菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌）；属于革兰氏阳性球菌的链球菌属（如嗜热链球菌）、乳球菌属（如乳酸乳球菌）、肠球菌属（如粪肠球菌【粪链球菌】）、明串珠菌属（如肠膜明串珠菌）；属于不规则形的革兰氏阳性专性厌氧的双歧杆菌属（如两歧双歧杆菌）；属于能形成内生孢子的芽孢杆菌属（如凝结芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌）等。
随着对细菌分类研究的不断深入，乳酸细菌的属种变动较大，而且新属、新种也不断涌现。
乳酸细菌分布广泛，在土壤、水体、植物（根际、果蔬表面等）、人和动物（肠道、口腔、呼吸道、生殖道等）、食品（乳品、发酵食品等）、动物饲料、粪便、污泥、临床样品中都有存在。
乳酸细菌与工业、农业、医药等领域关系密切，许多种类对人体和动物的健康有益，但也有相当一部分乳酸菌能使人畜致病。
二、制作酸奶中常用的乳酸菌及其生物学特性乳酸菌在食品工业中被广泛应用，使用的乳酸菌均对人体有益，常用于发酵乳制品、果蔬汁乳酸菌发酵饮料、泡菜和酸菜、微生态制剂（益生菌剂）等生产。
制作酸奶中常用的乳酸菌有保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、两歧双歧杆菌等。
多数为同型乳酸发酵，少数为异型乳酸发酵（如两歧双歧杆菌）。
1、双歧杆菌(Bifidobacterium)细胞呈Y字形、v字形、弯曲状、勺形等多样形态，典形形态为分叉杆菌，革兰氏染色阳性，亚甲基蓝染色菌体着色不规则，无芽孢和鞭毛，不运动。
化能异养型，对营养要求苛刻，生长繁殖需要多种双歧因子，能利用葡萄糖、果糖、乳糖和半乳糖，通过果糖-6-磷酸支路生成摩尔比2：3的乳酸和乙酸及少量的甲酸和琥珀酸，蛋白质分解力微弱，能利用铵盐作为氮源，不还原硝酸盐，不水解精氨酸，不液化明胶，不产生吲哚，联苯胺反应阴性。
酸乳中乳酸菌的分离
实验十微生物菌种分离及初步鉴定一、实验目的二、实验内容三、实验原理乳酸菌是指以糖为原料，发酵产生大量乳酸的一类细胞。
乳酸菌属于真细菌纲真细菌目中的乳酸细菌科。
乳酸细菌科根据细胞呈球状或呈杆状，又分成乳酸杆菌族和链球菌族。
有九个属：其中五个属呈球状，如乳酸球菌、迷走球菌、链球菌、明串珠菌和片球菌；四个属呈杆状，如肉食杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌和孢子乳酸菌。
在BCG 牛乳培养基琼脂平板上，乳酸菌菌落大约1-3 mm，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色；在产酸菌落周围还能产生CaCO3的溶解圈。
乳酸菌革兰氏染色呈阳性，涂片镜检细胞杆状或链球状。
乳酸杆菌呈杆状，成单杆、双杆或长丝状；乳酸杆菌，呈球状，成对或短链或长链状。
乳酸菌革兰氏染色后呈蓝紫色。
BCG牛乳培养基(A)溶液：脱脂乳粉100g，水500mL，加入1.6%溴甲酚绿(B.C.G)乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min。
(B)溶液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g, pH6.8, 121℃湿热灭菌20min。
以无菌操作趁热将(A)、(B)溶液混合均匀后倒平板。
平板涂布法平板涂布法是将样品经稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单个细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个但菌落代表原样品中的一个单细胞。
生理盐水：称取9g氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到1000毫升。
四、实验器材含乳酸菌的酸奶、BCG牛乳培养基、结晶紫、卢哥氏碘液、95%乙醇、蕃红溶液、灭菌CaCO3粉末、NaCl；1000ml烧瓶一个, 无菌培养皿9个, 500ml容量三角瓶2个，25ml无菌移液管1只，20ml 无菌试管7只，1ml无菌移液管6只，培养基分装器一个，玻棒2根, 无菌涂布器3只，酒精灯一盏，接种环一个，天平，牛角匙，漏斗，漏斗架，载玻片，盖玻片，pH试纸若干，液体石蜡，棉塞，吸管，牛皮纸，线绳、标签等。
酸乳中乳酸菌的测定
实验乳及乳制品中乳酸菌的测定一、目的1、解酸乳中乳酸菌分离原理2、学习并掌握酸乳中乳酸菌菌数的检测方法。
二、原理活性酸奶需要控制各种乳酸菌的比例，有些国家将乳酸菌的活菌数含量作为区分产品品种和质量的依据。
由于乳酸菌对营养有复杂的要求，生长需要碳水化合物、氨基酸、肽类、脂肪酸、酯类、核酸衍生物、维生素和矿物质等，一般的肉汤培养基难以满足其要求。
测定乳酸菌时必须尽量将试样中所有活的乳酸菌检测出来。
要提高检出率，关键是选用特定良好的培养基。
采用稀释平板菌落计数法，检测酸奶中的各种乳酸菌可获得满意的结果。
三、材料1、培养基改良MC培养基（MRS培养基，改良CHALMERS培养基，M17培养基）。
2、仪器和器具无菌移液管（25ml,1ml），无菌水（225ml带玻璃珠三角瓶，9ml试管），无菌培养皿，旋涡均匀器，恒温培养箱。
四、流程酸奶→稀释→制平板→培养→检查计数五、方法1、样品稀释先将酸奶样品搅拌均匀，用无菌移液管吸取样品25ml加入盛有225ml无菌水的三角瓶中，在旋涡均匀器上充分振摇，务必使样品均匀分散，即为10-1的样品稀释液，然后根据对样品含菌量的估计，将样品稀释至适当的稀释度。
2、制平板选用2~3个适合的稀释度，培养皿贴上相应的标签，分别吸取不同稀释度的稀释液1ml 置于平皿内，每个稀释度作2个重复。
然后用溶化冷却至45℃左右的MC培养基倒平皿，迅速转动平皿使之混合均匀，冷却成平板。
3、培养和计数将平皿倒置于37℃恒温箱内培养72h，观察长出的细小菌落，计菌落数目，按常规方法选择30~300个菌落平皿进行计算。
六、结果1、指示剂显色反应乳酸菌的菌落很小，1~3mm，圆形隆起，表面光滑或稍粗糙，呈乳白色、灰白色或暗黄色。
由于产酸菌落周围能使CaCO3产生溶解圈，酸碱指示剂呈酸性显色反应。
2、镜检形态必要时，可挑取不同形态菌落制片镜检确定是乳杆菌或乳链球菌。
保加利亚乳杆菌呈杆状，成单杆、或双杆菌或长丝状。
酸奶中乳酸菌的微生物学检验与酸奶的制作_2
酸奶中乳酸菌的检测与酸奶的制作综合性实验报告组员：摘要：以奶粉为原料，蒙牛酸奶为接种剂自制酸奶并进行感官评价。
用稀释倒平皿法和划线分离法分离出蒙牛酸奶中的乳酸菌。
分别用改良MC培养基和改良TJA培养基培养一段时间后观察菌落形态并进行菌落计数。
再挑取少许不同培养基上的菌落用革兰氏染色法染色，观察乳酸菌的个体形态。
关键词：酸奶制作、乳酸菌菌落形态及总数、MC培养基、TJA培养基、革兰氏染色、乳酸菌个体形态1 前言酸奶是以新鲜的牛奶为原料经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌（发酵剂），经发醇后，再冷却灌装的一种牛奶制品。
按是否加糖，酸奶可分为淡酸奶和加糖酸奶两种，我国常见的酸奶制品是加糖酸奶，即在制作酸奶的原料乳中加入一定量的白糖进行发酵得到的酸奶产品。
酸奶营养丰富，其蛋白质和钙质较鲜乳更易消化吸收，抑制腐败细菌的繁殖，降低肠道内毒素浓度。
酸奶内含乳酸菌并在发酵过程中产生乳酸及族维生素等,能增强消化，促进肠道蠕动和机体物质的代谢，提高人的免疫力, 长期饮用即可保证钙质的需求, 又可健肠胃, 是一种对人体肠胃非常有益的保健食品。
2 材料与方法2.1 仪器与器材温箱：47℃、冰箱： 4℃、电磁炉、锅吸管：容量为1，10和25mL、广口瓶或三角瓶：容量为500mL、平皿：直径为9cm、试管（带试管塞）：18×180mm、显微镜、带玻璃珠的三角瓶、移液枪、移液管、恒温箱、电磁炉、平底锅、2个奶瓶、保鲜膜、接种环、酒精灯。
2.2 培养基和试剂培养基：改良MC 培养基,改良TJA培养基。
材料：番茄汁、革兰氏染色液、蒙牛酸奶、脱脂奶粉、白砂糖。
2.3 方法2.3.1 无菌水和培养基的制备(1)无菌水：将20支试管分别用移液枪注入9ml的自来水，塞上试管塞，分10支捆成一扎并用牛皮纸包好。
将2个三角瓶分别注入150ml的自来水，塞上瓶塞，分别用牛皮纸封好。
将上述的试管以及三角瓶一起高压蒸汽灭菌。
(2)培养基：MC培养基:称取16g改良MC培养基粉末加200mL水置于电炉上小火加热溶解；TJA培养基:称取12g改良TJA培养基粉末加10mL茄汁和200mL水置于电炉上小火加热溶解，分别制得。
乳酸乳杆菌的分离
乳酸乳杆菌的分离
一、实验原理
以脱脂乳粉，蔗糖以及琼脂，酵母膏制作培养基，将新鲜酸乳分离、纯化、扩培，分离乳酸乳杆菌。
二、仪器和试剂
市售新鲜酸乳；
A液（BCG培养基）：脱脂乳粉100g，去离子水500mL，加入1.6%溴甲酚绿（BCG）乙醇溶液1mL，80℃灭菌20min；
B液：酵母膏10g，水500mL，琼脂20g，pH6.8，121℃灭菌20min；
灭菌锅，培养皿，移液管等
三、实验步骤
1、配置培养基，分装包扎灭菌备用。
2、以无菌手段取10mL新鲜酸乳，放入90mL无菌水，摇匀。
3、十倍稀释：将充分摇匀后的样品按十倍稀释法稀释成1/10、1/100、1/1000、
1/10000、1/100000的各种稀释度。
4、以无菌操作趁热将AB溶液混匀后倒平板。
5、加样涂布：自1/1000、1/10000、1/100000三个稀释度的试管中各取mL
样液，用无菌涂布器涂布均匀，每个稀释度做成三个皿。
6、培养：置40℃培养箱中培养48小时。
四、观察结果
在平板上如出现圆形稍扁平的黄色菌落及周围培养基变为黄色者初步定为乳酸菌。
附1：培养基的制备过程
称量→溶化→调pH→过滤→分装→加棉塞→包扎→灭菌→搁置斜面→无菌检查。
乳酸菌的分离及酸奶的制作
乳酸菌的分离及酸奶的制作乳酸菌是一类广泛存在于自然界中的微生物，常见于发酵食品中，特别是酸奶中。
乳酸菌通过产酸作用，可以改变食品的酸碱度，增强味道和保存食品的能力。
因此乳酸菌的分离和酸奶的制作具有重要的实际意义。
1.选择合适的发酵食品作为样品，如酸奶或发酵乳。
2.将样品进行稀释，然后分别接种在适宜的培养基上，如牛乳琼脂培养基或MRS培养基。
3.培养基应保持在适宜的温度，通常是37°C，促使细菌的生长。
4.观察培养基上的菌落形态，标记明显异于其他菌落的菌落。
5.使用无菌技术，将单独的菌落分离到新的培养基上。
6.对新培养的乳酸菌菌株进行纯化和鉴定，如形态学观察、生理生化特性检测等。
酸奶的制作主要是通过乳酸菌进行发酵来实现的，以下是一种常见的酸奶制作方法：1.选择新鲜的牛乳作为原料，最好使用全脂牛乳，因为全脂牛乳中的脂肪能够提供乳酸菌生长所需的营养。
2.将牛乳煮沸并冷却至40-45°C，这是乳酸菌生长的最适温度。
3.加入适量的酸奶发酵剂，这可以是商业化的酸奶菌干粉或者是之前分离得到的纯化乳酸菌菌株。
4.用搅拌器均匀地搅拌牛乳，以确保发酵剂充分混合。
5.将搅拌均匀的牛乳倒入适宜的容器中，并加盖保温。
可以使用保温箱或温暖的地方来保持发酵温度。
6.将容器放置在温暖的地方，保持温度在37-43°C之间，使乳酸菌进行发酵。
发酵时间通常为6-8小时，但可以根据个人口味和偏好进行调整。
7.发酵完成后，将酸奶放入冰箱冷藏，以停止乳酸菌的发酵过程。
8.酸奶制作完成后，可以根据个人口味添加适量的糖、水果、坚果等作为调味品。
通过乳酸菌的分离和酸奶的制作，我们可以获得高质量的酸奶产品，并且能够自己调整酸奶口味和营养成分。
此外，乳酸菌的分离和酸奶制作对于学术研究和食品工业也具有重要意义，可以深入了解乳酸菌的功能和应用，以及改善食品的质量和口感。
鲜奶的乳酸发酵及乳酸杆菌的分离纯化
实验四鲜奶的乳酸发酵及乳酸杆菌的分离纯化一、实验目的1.掌握酸奶的制作工艺;2.掌握乳酸杆菌发酵鲜奶的原理;3.掌握分离纯化乳酸杆菌的方法.二、实验原理无氧，菌乳酸菌糖乳酸酸奶酸奶发酵过程是双菌或多菌的混合培养实现的。
酪蛋白小肽或氨基酸促进球菌生长、甲酸促进杆菌产生中间有大量的乳酸、乙醛、双乙酰产生乳酸菌发酵过程是双菌或多菌的混合培养实现的，酪蛋白分离成小肽或氨基酸，促进球菌的生长，产生大量的乳酸、乙醛、双乙酰。
乳酸菌利用牛奶为底物进行厌氧发酵，得到主要发酵产物乳酸。
三、实验材料与仪器材料：纯牛奶，乳酸菌（益力多），白砂糖；仪器：高压灭菌锅、恒温培养箱。
四、实验步骤（一）酸奶的制作1、配奶：150mL的纯牛奶加15~20g白砂糖，搅拌好，砂糖需完全溶解；2、接种：按总体150mL鲜奶加15mL益力多，桌面上水平摇匀10min；3、装瓶4、保温：40~42度，3~4h，常观察，整瓶上下层均出现凝乳时停止培养，转至4~5度低温下冷藏1~2h。
5、加热：低温后加热6、品尝：口感与风味接种剂品牌PH 凝结程度口感香味异味品评益力多 6.0 无凝结甜，无酸味奶香无太甜（二）乳酸杆菌的分离纯化益力多中乳酸菌的分离，按10倍稀释法，原液大约为109/mL编号 1 2 3 4 5 6 7 810倍108/mL 107/mL 106/mL 105/mL 104/mL 103/mL 102/mL 10/mL 划线法每组做四种浓度，每种浓度2个平行，划八个皿，37度倒置培养。
纯化：划线，染色（划一个单菌落在载玻片，用10uL的水涂匀，烤干，加一滴美篮染色，烤干，加香柏油，在油镜下观察）分离：取以上培养的两个浓度，分别取一个单菌落接到一个新的培养皿上，同样条件继续培养。
五、结果与讨论1、鲜奶的乳酸发酵图一图二图一图二便是我做的乳酸发酵结果，从图中可以明显的看到奶瓶中并未出现凝结情况，牛奶还是呈现液状，开启品尝后发现口味很甜，似乎乳酸菌并未利用糖进行发酵或者是因为我们使用的从超市买回来的罐装鲜奶中含有较高浓度的防腐剂，从而抑制乳酸菌的生长，导致乳酸菌的发酵能力大打折扣，因此鲜奶并未如预期那样成功发酵成酸奶。
乳酸菌的分离与酸奶的发酵及检测
乳酸菌的分离鉴定与酸奶的发酵及检测陈园园（中北生物技术1803108）摘要：乳酸菌：一群或几种能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。
如保加利亚乳杆菌、嗜热乳链球菌、嗜酸乳杆菌。
酸奶发酵基本原理是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸。
乳酸使牛奶中酪蛋白（约占全乳的2.9%，占乳蛋白的85%）变性凝固而是整个奶液呈凝乳状态。
同时，通过发酵还可形成酸奶特有的香味和风味。
按凝固状态可将酸奶分为凝固型酸奶和搅拌型酸奶，二者基本工艺过程相似。
发酵剂的制备分三个阶段，即乳酸菌纯培养物、母发酵剂和生产发酵剂。
实验分离得到的嗜热乳酸链球菌(Streptococcus thermophilus)，培养基使用脱脂乳粉或全脂乳粉、鲜牛奶、蔗糖。
关键词：乳酸菌、酪蛋白前言：乳酸菌是指一群通过发酵糖类，产生大量乳酸的细菌总称。
乳酸从形态上可分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。
目前，对乳酸菌的应用研究，着重于食品（如发酵乳制品、发酵肉制品和泡菜）和医药工业等人类生活密切相关的领域。
近几年由于广谱和强力的抗菌素的广泛应用，使人体肠道内以乳酸菌为主的益生菌遭受到严重破坏，抵抗力逐步下降，导致疾病越治越多，健康受到极大的威胁。
所以，有意增加人体肠道内乳酸菌的数量就显得非常重要。
随着人们生活水平的提高和消费观念的转变，在我国生产销售的酸乳及酸乳饮品数量直线上升, 品种花样繁多, 很受消费者的青睐。
酸奶是以新鲜牛乳经有效杀菌, 用不同乳酸菌发酵剂制成的乳制品, 味酸甜细腻, 营养丰富, 深受人们喜爱, 专家称它是“21 世纪的绿色食品”, 是一种“功能独特的营养品”。
它对人体有较多的好处, 可以维持肠道正常菌群平衡, 调节肠道有益菌群到正常水平等。
因此，从发酵乳制品中分离性能优良的乳酸菌，制作真正的健康、绿色的食品，对促进我国发酵乳制品工业的发展具有重要的意义。
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因此，酸乳不仅是一种具有很 高吸收率和消化率的乳制品， 而且还是一种对某些疾病具有 治疗效果的乳制品。
自制酸乳的原理
市售的酸乳中含有活性的保加利亚乳杆菌与嗜 热链球菌，从中取样后在无菌条件下接种到鲜 乳中，在42℃的条件下培养4小时，依靠上述 两种微生物的协同发酵作用发生一系列生化反 应，冷藏考题
为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才倒平板？ 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什 么？ 试比较平板菌落计数法和显微镜下直接计数法的优缺 点及应用。 当你的平板上长出的菌落不是均匀分散的而是集中在 一起时，你认为问题出在哪里？ 用倒平板法和涂布计数法，其平板上长出的菌落有何 不同？为什么要培养较长时间（48h）后观察结果？
课外阅读材料：酸乳的发酵过程
实验器材
仪器：玻璃杯，铝箔，10ml移液管，高 压蒸汽灭菌锅，恒温水浴锅，恒温培养 箱，冰箱 材料：鲜乳200ml，酸乳、白砂糖各少 许
实验步骤
1.准备工作：
实验前，准备一个洁净的玻璃 杯与一支10ml移液管，玻璃杯 盖上铝箔，移液管加过滤嘴后 装入金属桶中，对其进行灭菌 处理。
实验器材
仪器：试管、温箱、培养皿、涂布棒、 移液管、石棉网、三角架、煤气 灯、记号笔等 材料：乳糖牛肉膏蛋白胨培养基、 市售酸乳样品（含保加利亚乳杆 菌和嗜热链球菌两种活性菌）
实验步骤
1.熔化培养基
将事先制备于三角瓶中已灭菌的培养基置于电炉上加热 使其熔化，加热时必须不时摇动三角瓶，以免受热不均 而引起瓶底爆裂。待培养基完全熔化后，置一旁冷却至 55－60 ℃。
实验器材
菌种： 市售酸乳样品（含保加利亚乳杆 菌和嗜热链球菌两种活性菌） 培养基： 乳糖牛肉膏蛋白胨培养基 实验仪器：温箱、接种环、培养皿、煤气灯、 显微镜、试管等
实验步骤
1.平板划线分离
a.连续划线
b.分区划线 其他划线分离方法
划线方法
接种工具
a.连续划线
右手持接种环，在火焰上灭菌，待稍冷却后挑取一环 酸乳样品，左手拿皿底，右手控制接种环以一定倾角 与培养基接触，连续地在培养基上来回划线，从培养 基的一端到另一端。在末端处划线时可将平皿作一定 角度的倾斜，使接种环接触到培养基。
倍比稀释图解
→
1.取移液管 2.吸酸乳原液
→
3.注入第一支试管
↓
←
6.注入第二支试管 5.吸取1ml10-1稀释液
←
4.吹吸混匀,成10-1稀释液
4.涂布
取6块乳糖牛肉膏蛋 白胨平板，每2块一 组，分别在皿底边 缘以10-4、10-5、 10-6做标记。
取出一支1ml移液管，吸取0.2ml相应浓度的菌 悬液，左手将皿盖在火焰旁打开一缝，然后将 菌液滴在平板中央。
为了获得单菌落，实验室常用的方法是平板划线分离 法。平板划线分离法可分为连续划线和分区划线，但 两种方法的主导思想都是将样品由浓变稀，从多组分 的混合样品最后得到较纯的单菌落。 将平板划线分离得到的单菌落接种到斜面上，可进一 步观察其生长特征。微生物在斜面培养基上生长，可 以呈丝线状、刺毛状、念珠状、舒展状、树枝状、或 假根状。培养特征可以作为微生物分类鉴定的指征之 一，并能为识别纯培养是否被污染作为参考。
第二部分：平板菌落计数法
实验目的
掌握微生物实验中的几项基本操作技术： 倒平板、倍比稀释、平板涂布和菌落计数。 了解平板菌落计数法在微生物活体计数中 的意义。
实验原理
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的 微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布 到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉 眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单 细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可 换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不宜 完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能 来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的 结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果， 现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
实验5 酸乳的制作和乳酸菌的分离
本次实验内容包括:
酸乳的制作 平板菌落计数法 平板划线分离与斜面接种技术
第一部分:酸乳的制作
酸乳的营养价值
酸乳能在肠道内抑制有害微生物的生长，经常饮用酸乳，其中含有的活性 乳酸菌在肠道内繁殖，产生的乳酸能抑制其他有害微生物的生长，避免人体产 生毒素，保证人体健康。 乳酸菌在人体肠道的发酵过程中亦促进了酒精发酵，酒精发酵的产物能使 人体消化腺机能增强，促进食欲，并能增加肠蠕动和机体的物质代谢。 有些乳酸链球菌能分泌一种抗菌素，抑制乳房炎、白喉、肺炎、结核等病 原体，此外，某些乳酸菌还能形成对炎症有特殊作用的B族维生素。
第三部分： 平板划线分离法与斜面接种
实验目的
学习通过平板划线分离得到单菌落的 方法。 观察几种微生物在斜面上的生长特征。 熟练掌握平板划线分离技术等微生物 实验基本操作。
实验原理
自然界中各种微生物混杂生活在一起，即使取很少 量的样品也是许多微生物共存的群体。人们要研究 各种微生物的特性，首先需使该微生物处于纯培养 状态。也就是说培养物中所有细胞只是微生物的某 一种或株，他们有着共同的来源，是同一细胞的后 代。
b.分区划线
用接种环以无菌操作挑取酸乳一环，先在平板培养基 的一边作第一次平行划线3～4条，再转动平皿约70° 角，并将接种环上剩余物烧掉。待冷却后，通过第一 次划线的末端引出作第二次平行划线，再以同样的方 法通过第二次划线部分划线作第三次划线和通过第三 次划线部分划线作第四次划线。划线完毕后，盖上培 养皿皿盖，倒置于温室培养。
倒平板： 每组倒平板 10块。 在无菌培养 皿底部注明 分离菌名、 稀释度、组 别、班级。
2.倒平板
当培养基冷却至60 ℃左右时，在火焰旁打开灭 菌培养皿的包装，准备倒平板。
倒平板的方法如下:
揭下瓶口的铝箔，右手持三角瓶于火焰旁边，瓶口要保持对着火 焰，左手将皿盖打开，迅速倒入培养基，以液体刚好盖满平皿底 部为宜（20ml左右的培养基制成的9cm平板厚度约4mm），合上 皿盖后，置于水平桌面上略加转动，等待其凝固。
2.加样
在火焰旁打开玻璃杯口的铝箔，倒入200ml左右 的鲜乳，并加入12 g白砂糖，重新封口。
3.消毒
置于90℃恒温水浴锅中消毒10min， 在加热时需不时用灭菌的玻棒搅动 鲜乳，使糖充分溶解。消毒完成后， 将鲜乳从水浴锅中取出，使之冷却 至室温。
玻棒的灭菌方法：将玻棒蘸取少量酒精， 然后迅速通过火焰。
吸取菌悬液
滴加菌液
右手持金属涂棒，将其在酒精中蘸一下后接触火焰，待火焰熄 灭后即完成涂棒的灭菌。涂布前，先将涂棒在皿盖内侧的冷凝 水中冷却，然后将平板中央的菌悬液分散开，最后，将涂棒紧 贴于平皿边缘，左手以同方向转动平皿，使菌液均匀地分散在 培养基上。
涂棒灭菌
冷却涂棒
均匀涂布
5.培养
涂布后，静置5～10min，使菌液完全吸附到培 养基内，将培养皿倒置于37℃温箱内培养48h。
2.挑单菌落、镜检
培养2d后，通常在连续划线平皿的末端和分区划线最 后一区的末端可见单菌落。用接种环在无菌条件下挑 取单菌落在载玻片上的一滴生理盐水中分散均匀，经 固定、染色、水洗、干燥后用油镜镜检，验证是否只 有一种形态特征的微生物。
3.斜面接种
斜面接种方法如下：先在火焰旁挑取单菌落，然后 左手持斜面试管，右手拔出试管帽后迅速烧灼管口。 试管帽夹于右手手心，将已挑菌的接种环伸入斜面 试管，用环在斜面上自试管底部向上端轻轻地划一 直线。若用于菌种培养，划线为自试管底部向上的 “锯齿形”，使更多细菌在斜面上生长。接种环退出 试管后，再用火焰烧灼管口并在火焰旁将试管塞塞 上。之后，烧掉接种环上的剩余物。
6.计数
将培养后的平板取出，挑选菌落数在30～300之 间的平板，从培养皿底部数出菌落数，并根据其 稀释度推出样品中的活菌数量。 每毫升中菌落形成单位（cfu/ml） ＝同一稀释度的平均菌落数×稀释倍数×5
实验结果
10－4 10－5
1 2 3 平均 1
10－6
2 3 平均
稀释度
cfu数/平板
每毫升中的cfu数
4.接种
在火焰旁，用移液管吸取鲜乳体积1/10左右的酸乳接种，吹吸 混匀后用铝箔封口。
5.发酵与冷藏
将已接种的鲜乳放入42℃温箱中发酵培养4h，转入10 ℃ 冰箱冷藏过夜后，即成可食用的酸乳。
思考题
在90℃消毒完成后，为什么要等冷却至室温后才能将 酸乳接种入鲜乳中？ 鲜乳经过接种，在42 ℃发酵4h之后能否直接饮用？在 10 ℃的冰箱中冷藏过夜的目的是什么？
斜面接种图解
4.培养和观察
将斜面试管置37°温室中培养2d。以直线划线的斜面 为准，观察并描述接种2d后菌落生长的形态。
实验报告
1.保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的形态 2.斜面接种的形态、培养特征
思考题
你所做的划线法是否较好地得到了单菌落？如果不是，请 分析原因。 如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？请写出实验的 主要步骤。 如果要分离得到极端嗜盐细菌，在哪里取样为宜？试说明 理由。 如果一项研究内容需要从自然界中筛选到能产高温蛋白的 菌株，你将如何完成？请写出简明试验方案。 用斜面检测微生物的培养特征接种时，为什么不要划多条 线或蛇形，而只要划一直线？ 接种环接种前后灼烧的目的是什么？为什么在接种前一定 要将其冷却？如何判断灼烧过的接种环已冷却？
3.倍比稀释
Plate 0.2-ml samples
事先准备6支洁净的试管，每支试管内装入9ml 生理盐水，加塞灭菌后待用。实验前，在6支 试管壁上依次用10-1-10-6做标记。
倍比稀释的过程
在火焰旁，取出一支1ml已灭菌的移液管， 吸取1ml酸乳原液沿管壁加入第一支试管中， 然后取出第二支1ml移液管将此悬液吹吸混 匀，此即成原液浓度1/10的稀释液。用第二 支移液管从此悬液中吸取1ml加入第二支试 管中，取出第三支移液管吹吸混匀，制成原 液浓度1/100的稀释液。以此类推，将酸乳 稀释到原始浓度的1/106(百万分之一)。