生物样本样品前处理ppt
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诺如病毒标本处理和实验室检测技术方案ppt课件
15
1 标本前处理
1.4 食品
1.4.1 贝类 1.4.2 三文鱼
1.4.3 草莓、蓝莓
1.4.4 生菜和苗芽菜
16
1 标本前处理
• 1.4 食品 • 1.4.1 贝类 • 1.4.1.1 设备和材料 诺如病毒质控样（中国食品药品检定研究院）、 高速离心机（可离心15mL~50mL 体积）、台式 离心机、碎花制冰机、生物安全柜、实时荧光定 量PCR 检测系统、眼科剪、眼科镊、一次性无菌 培养皿、恒温摇床、高压灭菌器、电磨均质器 （LX134MO）、一次性研磨杵（上海生工）、 15mL 去RNAase 离心管、1.5mL 去 RNAaseEppendorf 管、20μL、200μL、1000μL 微量移液器、 PBS 溶液 pH7.2 （Gebico）、蛋 白酶K（PCR 级 Roche）。 17
DEPC水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压 灭菌的MiliQ纯水，无色液体。经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质。
1 标本前处理
• • • 氯仿、丁醇。 1.2.2 操作方法 1.2.2.1 过滤装置准备 （1）使用无菌的镊子将滤膜放在滤器架上，滤膜有 三层，型号分别为Millipore HA filter、AP15 和AP20， 放置顺序为Millipore HA filter→AP15 →AP20。 注意：暴露出滤膜表面使其能与水样接触，请将滤 膜光滑表面的那边向下。所有的玻璃器皿应干净无 菌。每批水样使用不同的漏斗。
19
1 标本前处理
20壳撬开，将消化腺用镊子直接 夹下，同时尽量将肠道取下。由于海虹的消化腺 相对牡蛎较小，所以需要增加取样的海虹个体数， 以使得总质量达到2.0g，用于后续的检测。海虹 的解剖结构见下图，图中镊子所指的位置为海虹 的消化腺。
生物样本分析
1、生物样本种类，特点，及前处理方法1）血液。
分为血浆/血清或全血。
测定血浆或血清中的药物浓度能较好的反映体内药物浓度变化。
若专门测定平均分布于血细胞内外的药物浓度，则用全血。
血浆采集应加入抗凝剂。
离心，取上清液，血清静置，移走血饼，离心，取上清液。
处理方法有沉淀蛋白法、液液萃取法、固相萃取法。
2）尿样，用于药物剂量回收研究、药物尿清除率、生物利用度研究。
易收集，但易受生理情况影响。
方法：酸解或酶解可使药物从缀合物中游离出来。
3）唾液：易收集，采集后应立即出去泡沫部分的体积，放置后易分层，离心，取上清液。
4）组织：为药物的吸收、分布、代谢、排泄等体内过程提供重要信息。
组织处理方法：匀浆化法，蛋白沉淀法，酸碱水解，酶水解5）头发：取样方便，无伤害，检样的掺伪可能性低，可测微量元素。
头发采集后需洗涤，处理方法有提取法，有机破坏法。
6）其他：乳汁，精液。
2、生物样品前处理方法及特点1）有机破坏法：包括湿法破坏、干法破坏和氧瓶燃烧法，适合人发样品的破坏破坏能力强，反应激烈。
2）直接沉淀法：将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清液进样。
当样品中待测物浓度较高，所用方法的特异性和灵敏度达到检测要求时可以考虑用直接沉淀法。
注意沉淀剂体积、沉淀剂的选择及对药物稳定性的影响（氧化、酸不稳定）。
可使接合型药物释放出来，缺点容易乳化。
3）液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋，离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。
多数药物亲脂，在适当有机溶剂中溶解度大于水相，而血样或尿样中含有的大多数内源性杂质是强极性水溶性物质，液液萃取可除去大部分杂质，从大量样品中提取药物经浓集后用于分离。
注意水相pH值，提取溶剂以及有机相和水相的体积，优点在于选择性，这依赖于有机溶剂的选择。
药物能与多数内源性物质分离，缺点在于乳化现象的产生：有机溶剂易挥散、有毒性、对环保不利及不能自动化。
4）固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到吸附或分配或离子交换或其它亲和力作用时，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂洗出杂质，再用适当溶剂洗脱药物。
微生物标本的采集方法(共52张PPT)
室内面积＞30㎡设4角及中央5点均距墙壁1米
用2%碘酒从穿能刺点。向外除画圆非消无毒，法至消作毒区静域直脉径达穿5cm刺以上取，涂血擦穿，刺否皮肤则2遍，不待干应从留置导管内取血。
1、采样时间：消毒处理后4小时内进行采样
1◎、经日人常工记气录道：吸使引⑤用分后泌抽进物血行消前毒时应间累将积，标使签用超贴过1于000小血时培的应养加强瓶监测颈或更上换，建立标紫外签线消内毒使容用包登记括本，病每周人用7基5%本酒精信擦拭息灯管、并记录 其他使用中消采毒液血染菌时量：间≤1、00cf采u／m血l 部位。注意不要把标签贴在培养瓶条形码上，否则
无1、关采物样品时不间得段进：入在手消术毒室处，理洁后净，区操的作物前品进需行经采清样洁消毒处理方可进入
※ 抽血后未及时混匀血液凝固 不得检出致病性微生物
☂ Ⅰ类环境：洁净手术室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ级：
手术用房各种物体表面在每日术前和术后湿式擦拭清洁、消毒；
☂手术器械、穿刺针等：无菌生长 ☂血培养次数和采血时间 四、对可疑中心静脉导管相关血流感染 经支气管镜直接吸引 无痰可用3%---5%NaCI 5ml雾吸约5min导痰
※ 储存环境标本来源4℃冰箱----痰、尿液、粪便、活检组织、 气枪冲洗物、导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等
※ 室温（25℃）---血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、眼、耳、 鼻、喉、血管导管尖、体液、厌氧菌培养标本。
美国的理念
1970年以前，美国的医院定期对空气和环境表面（如地面、墙壁、台
面）进行培养。到了1970年，CDC和美国医院协会（AHA）主张 停止对环境的常规培养，因为医院感染发生率与空气或环境表 面中总的微生物污染水平不相关。且环境表面或空气中微生物 含量的允许水平也没有有意义的标准。1970---1975年，美国有 25%的医院减少了这种常规的环境培养工作--------一个已经持续 的趋势。
用2%碘酒从穿能刺点。向外除画圆非消无毒，法至消作毒区静域直脉径达穿5cm刺以上取，涂血擦穿，刺否皮肤则2遍，不待干应从留置导管内取血。
1、采样时间：消毒处理后4小时内进行采样
1◎、经日人常工记气录道：吸使引⑤用分后泌抽进物血行消前毒时应间累将积，标使签用超贴过1于000小血时培的应养加强瓶监测颈或更上换，建立标紫外签线消内毒使容用包登记括本，病每周人用7基5%本酒精信擦拭息灯管、并记录 其他使用中消采毒液血染菌时量：间≤1、00cf采u／m血l 部位。注意不要把标签贴在培养瓶条形码上，否则
无1、关采物样品时不间得段进：入在手消术毒室处，理洁后净，区操的作物前品进需行经采清样洁消毒处理方可进入
※ 抽血后未及时混匀血液凝固 不得检出致病性微生物
☂ Ⅰ类环境：洁净手术室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ级：
手术用房各种物体表面在每日术前和术后湿式擦拭清洁、消毒；
☂手术器械、穿刺针等：无菌生长 ☂血培养次数和采血时间 四、对可疑中心静脉导管相关血流感染 经支气管镜直接吸引 无痰可用3%---5%NaCI 5ml雾吸约5min导痰
※ 储存环境标本来源4℃冰箱----痰、尿液、粪便、活检组织、 气枪冲洗物、导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等
※ 室温（25℃）---血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、眼、耳、 鼻、喉、血管导管尖、体液、厌氧菌培养标本。
美国的理念
1970年以前，美国的医院定期对空气和环境表面（如地面、墙壁、台
面）进行培养。到了1970年，CDC和美国医院协会（AHA）主张 停止对环境的常规培养，因为医院感染发生率与空气或环境表 面中总的微生物污染水平不相关。且环境表面或空气中微生物 含量的允许水平也没有有意义的标准。1970---1975年，美国有 25%的医院减少了这种常规的环境培养工作--------一个已经持续 的趋势。
标本采集PPT课件
非越多越好，超过一定的采血量会稀释培养瓶内 的肉汤，影响检测结果。
温即可，温度过低会导致对温度敏感的细菌死亡。
培
血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、
凝血等其它标本要高，所以要最先采集血培养
标本
1、成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每
养
血培养瓶（厌氧优先） 凝血试管（蓝色） 其 它有抗凝剂管（黑-绿-紫） 无添加剂管（红色，
处理程序
1、护士发现采集标本错误，立即停 止送检，重新采集标本，并做好解释。 2、发现标本有误或检验结果有质疑， 立即核查，通知医生，做好解释，重 新采集标本。 各类标本在采集、暂存与运送过程中 发生标本撒漏、标本容器破损等紧急 意外事件时，立即按医疗垃圾处理标 本，重新采集标本。
谢谢
苏朦朦 2017/11/26
22
2024/5/22
要看懂胸水的报告，首先要分清是漏出液还是渗出液
成功项胸目水展示
漏出液可见于：充血性心力衰竭、上腔静脉阻塞、缩窄性 心包炎、肝硬化、肾病综合征、急性肾小球肾炎、腹膜透 析、粘液性水肿、药物过敏和放射反应等。
渗出液又可分： 1.浆液性：①感染性疾病：结核性胸膜炎，肺炎、病毒、真菌和寄生 虫感染；②恶性肿瘤；③肺栓塞；④结缔组织疾病；⑤Meigs综合征 等。 2.脓胸：①结核性脓胸；②肺部感染引起脓胸；③外伤、食管穿孔、 气胸、胸腔穿刺或术后继发化脓性感染等。 3.血胸：①恶性肿瘤；②外伤；③血气胸；④胸主动脉瘤破裂；⑤肺 栓塞等。 4.乳糜胸：①外伤致胸导管破裂；②丝虫病；③肿瘤致胸导管阻塞等。
血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集
后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报
告阴性，则继续采集2套血培养。
年度工血作液概述
温即可，温度过低会导致对温度敏感的细菌死亡。
培
血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、
凝血等其它标本要高，所以要最先采集血培养
标本
1、成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每
养
血培养瓶（厌氧优先） 凝血试管（蓝色） 其 它有抗凝剂管（黑-绿-紫） 无添加剂管（红色，
处理程序
1、护士发现采集标本错误，立即停 止送检，重新采集标本，并做好解释。 2、发现标本有误或检验结果有质疑， 立即核查，通知医生，做好解释，重 新采集标本。 各类标本在采集、暂存与运送过程中 发生标本撒漏、标本容器破损等紧急 意外事件时，立即按医疗垃圾处理标 本，重新采集标本。
谢谢
苏朦朦 2017/11/26
22
2024/5/22
要看懂胸水的报告，首先要分清是漏出液还是渗出液
成功项胸目水展示
漏出液可见于：充血性心力衰竭、上腔静脉阻塞、缩窄性 心包炎、肝硬化、肾病综合征、急性肾小球肾炎、腹膜透 析、粘液性水肿、药物过敏和放射反应等。
渗出液又可分： 1.浆液性：①感染性疾病：结核性胸膜炎，肺炎、病毒、真菌和寄生 虫感染；②恶性肿瘤；③肺栓塞；④结缔组织疾病；⑤Meigs综合征 等。 2.脓胸：①结核性脓胸；②肺部感染引起脓胸；③外伤、食管穿孔、 气胸、胸腔穿刺或术后继发化脓性感染等。 3.血胸：①恶性肿瘤；②外伤；③血气胸；④胸主动脉瘤破裂；⑤肺 栓塞等。 4.乳糜胸：①外伤致胸导管破裂；②丝虫病；③肿瘤致胸导管阻塞等。
血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集
后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报
告阴性，则继续采集2套血培养。
年度工血作液概述
生物样本库的建立与管理PPT课件
生物标本库 (biological specimen bank, BSB):
是指标准化地收集、保存用于各种研究的正常 或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、 血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、 RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临 床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其 质量控制、信息管理与应用系统。
政策法规
ISO标准 实验室安全 临床实验室 伦理 运输
生 物 样 技术标准 本 库
标准操作规范 （SOPs）
质量控制标准
知情同意书
伦理规范
伦理委员会 伦理审查
质量审查
样本运输
样本采集 样本处理 样本质量检验 样本储存 样本运输
DNA质量鉴定、RNA质量 鉴定、蛋白质质量鉴定
样本转移协议
ISO标准
公众对于肿瘤组织库建立的认知程度
有调查显示，多数公众对于利用外科手术切除组织进行肿瘤发病 机制或分子标志物的研究持肯定态度，并认为这是对手术切除组 织的最好利用。在一项对住院、门诊、急诊5 000例患者的随机调 查中发现，89.3％的患者同意将其样本的遗传信息用于研究，但 要求采用匿名形式。美国的Vanderbilt大学医学中心2005年启动了 一项旨在将准备丢弃的患者血样再收集以建立DNA数据库计划。 该计划估计，未来5年内可收到30万份以上的患者血样，以进行 疾病的基因型与表型相关性分析。越是大规模的人群遗传学研究 越是需要大样本的生物资源，故得到社会公众的认可很有必要。 目前，许多国家的大型医疗机构已建立组织样本库与数据库，但 因遗传信息属个人隐私，应当受到保护，也招致不少担忧。1998 至2002年间就曾有8个国际机构提出建立以群体为基础的遗传资 源库计划，主要内容是收集与储存血液及组织等生物样本，并收 集与这些样本相关联的医学与生活方式等信息。该计划的共同目 标是通过此项计划的实施，阐明某些疾病的遗传易感性和基因的 复杂性，从而达到改善人类健康与医学诊疗水平的目的。但由于 伦理学、涉及个人隐私等原因，该计划在一些国家搁浅。
是指标准化地收集、保存用于各种研究的正常 或病理标本，包括人体器官组织、全血、血浆、 血清、生物体液或经处理过的生物样本（DNA、 RNA、蛋白等）以及与这些生物样本相关的临 床、病理、治疗、随访、知情同意等资料及其 质量控制、信息管理与应用系统。
政策法规
ISO标准 实验室安全 临床实验室 伦理 运输
生 物 样 技术标准 本 库
标准操作规范 （SOPs）
质量控制标准
知情同意书
伦理规范
伦理委员会 伦理审查
质量审查
样本运输
样本采集 样本处理 样本质量检验 样本储存 样本运输
DNA质量鉴定、RNA质量 鉴定、蛋白质质量鉴定
样本转移协议
ISO标准
公众对于肿瘤组织库建立的认知程度
有调查显示，多数公众对于利用外科手术切除组织进行肿瘤发病 机制或分子标志物的研究持肯定态度，并认为这是对手术切除组 织的最好利用。在一项对住院、门诊、急诊5 000例患者的随机调 查中发现，89.3％的患者同意将其样本的遗传信息用于研究，但 要求采用匿名形式。美国的Vanderbilt大学医学中心2005年启动了 一项旨在将准备丢弃的患者血样再收集以建立DNA数据库计划。 该计划估计，未来5年内可收到30万份以上的患者血样，以进行 疾病的基因型与表型相关性分析。越是大规模的人群遗传学研究 越是需要大样本的生物资源，故得到社会公众的认可很有必要。 目前，许多国家的大型医疗机构已建立组织样本库与数据库，但 因遗传信息属个人隐私，应当受到保护，也招致不少担忧。1998 至2002年间就曾有8个国际机构提出建立以群体为基础的遗传资 源库计划，主要内容是收集与储存血液及组织等生物样本，并收 集与这些样本相关联的医学与生活方式等信息。该计划的共同目 标是通过此项计划的实施，阐明某些疾病的遗传易感性和基因的 复杂性，从而达到改善人类健康与医学诊疗水平的目的。但由于 伦理学、涉及个人隐私等原因，该计划在一些国家搁浅。
生物样本样品前处理
4
常用液液提取溶剂
溶剂名称 二氯甲烷 乙酸乙酯 氯代正丁烷
乙醚 戊烷 环己烷 正己烷 甲苯 异丙醇* 四氢呋喃* 乙腈* 正丁醇* 水*
分子量 84.9 88.1 92.6 74.1 72.2 84.2 86.2 92.2 60.1 72.1 41.1 74.1 18.0
注：“*”表示与水互溶
沸点（℃） 40
5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富
集与净化；但成本较高
3
液液提取法
利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配 系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。
➢两相的分离需借助两相的密度差来实现
➢原理：相似相溶
➢分配系数：kA=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率
常见表面活性剂：Triton-X-100，吐温等
Tips
1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。 2、样本已经采集，考虑将待测物从容器中解离出来。
14
讨论和问题
Thank you!
15
0.08 0.36 1.66 1.63 3.92 1.50 1.84
5
固相提取法
◇HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance Copolymer)材料的优点
△水可浸润 △反相保留 △PH1-14范围内稳定 △没有裸露硅羟基
6
固相提取法
7
固相提取法
8
固相提取法
改变化合物PH，酸性 保留，碱性洗脱
77.1 77
34.5 36.1 80.7
69 110.6 82.4
66 81.6 117 100
密度（g/mL) 1.33 0.90 0.89 0.71 0.63 0.78 0.66 0.87 0.79 0.89 0.78 1.00 1.00
《生物样本分析》PPT课件
通过安装在线稀释旁通流路，可大量注入血浆（血清） 样品。
这便是Co-Sense的关键技术！
●
●
在线稀释流路
导入泵
●
●
自动进样器
在线稀释流程图
前处理柱
样品处理柱的容量
• 进样体积对色谱图的影响 • 当进样体积加大的时候，由于样品处理柱子容量
的限制会发生峰展宽的现象.
100 uL 50 uL 10 uL
背景
样品前处理是目前分析化学的瓶颈，是分析化学研究的难点和 热点问题之一。由于样品数量极多，且分析物含量越来越低、 基体越来越复杂，迫切要求发展高通量、高选择性、高效率的 在线样品前处理技术。因此，开展这方面的研究具有极为重要 的意义。
HPLC/LC-MS广泛应用于血浆或血清的代谢物分析和 原药分析，一般的血浆和血清分析，需要对样本进行 预处理，以除去蛋白质，这样会降低精确度和工作效 率。引入了具有限制性通路媒介（restricted access media -RAM）的预柱，可对血浆样本进行直 接分析，而不必进行预处理。这样，可提高精确度、 简化操作和提高工作效率 。但是，使用限制性通路 媒介柱，也存在一些问题，需解决的问题：回收率、 灵敏度、耐用性。
97
98
98
96
95
96
100mM phosphate (Na) buffer <pH=6.9>
629其中酸性化合物145碱性化合物675两性化合物180分子量一般离子化质谱分析编辑ppt血浆样品的特点基质复杂选择性强待测物含量低灵敏度高浓度差异大线性范围宽编辑ppt除蛋白质分离纯化浓缩液液萃取法固相萃取法规模缩小的柱色谱法直接沉淀法超滤法编辑ppt血浆样品加入提取溶媒酸化或碱化涡旋离心取上清液吹氮气浓缩残渣溶解过滤进样色谱分析编辑ppt药代动力学研究面临的挑战高效液相色谱法hplc的特点和局限
生化检验常见问题及处理方法课件
处理方法：应在2h内分离血清/血浆，尽量缩短时间；离心 时间一般5-10分钟/3000转；新采集标本 应室温（22～25℃）放置30～60分钟，使其自行 凝集后离心。不能及时做的标本分离出血清，室 温放置不超过4小时，2-4℃保存不超过8小时，在 -20℃条件下可保存较长时间。
二、检验过程常见问题及处理
（2）检验项目间的交叉污染
相邻检验项目的干扰，A项目试剂或产物中含有B项目 的测定物质或影响B项目反应，而导致B试验结果的改变。 如：Mg放在ALP项目后面测定，可能会使检测结果偏高或重 复性差。因ALP试剂中含有Mgcl2，使测定结果偏高等。
处理方法：
① 调整实验的前后顺序来消除这种影响； ② 在两个项目之间设定其他项目或设置清洗剂并设定清洗 次数。
基本概念
检测系统：一个检验项目所涉的仪器、试剂、校准品、 测量程序（操作程序、质控程序、维护保养程序、检测 用水）、操作人员、消耗品、质控品等组合。
➢ 量值溯源：是通过一条具有规定不确定度的不间断的 比较链，使测量结果能够与规定的参考标准联系起来 的一种特性。（通常是国家计量基准或国际计量基准）
检验前的质量管理是检验质量管理中最薄弱、 最易出现问题、最难控制的环节，标本质量不符合 要求占60%-80% 。
按时间顺序包括： 检验申请 患者准备和识别 原始样本采集、运送和实验室内传递。
检验前常见问题及处理
1、患者的准备的常见问题及处理: （1）饮食：餐后、饮料、烟酒等，影响患者的检测 结果。 处理方法：患者空腹（8-12小时）。 （2）药物等其他因素的影响:如含VC、抗肿瘤药物、 降脂药物、输液等。 处理方法：尽量停止使用药物。超过药物的半衰期。
1、患者的准备问题； 2、标本的采集、运输、验收等问题。
二、检验过程常见问题及处理
（2）检验项目间的交叉污染
相邻检验项目的干扰，A项目试剂或产物中含有B项目 的测定物质或影响B项目反应，而导致B试验结果的改变。 如：Mg放在ALP项目后面测定，可能会使检测结果偏高或重 复性差。因ALP试剂中含有Mgcl2，使测定结果偏高等。
处理方法：
① 调整实验的前后顺序来消除这种影响； ② 在两个项目之间设定其他项目或设置清洗剂并设定清洗 次数。
基本概念
检测系统：一个检验项目所涉的仪器、试剂、校准品、 测量程序（操作程序、质控程序、维护保养程序、检测 用水）、操作人员、消耗品、质控品等组合。
➢ 量值溯源：是通过一条具有规定不确定度的不间断的 比较链，使测量结果能够与规定的参考标准联系起来 的一种特性。（通常是国家计量基准或国际计量基准）
检验前的质量管理是检验质量管理中最薄弱、 最易出现问题、最难控制的环节，标本质量不符合 要求占60%-80% 。
按时间顺序包括： 检验申请 患者准备和识别 原始样本采集、运送和实验室内传递。
检验前常见问题及处理
1、患者的准备的常见问题及处理: （1）饮食：餐后、饮料、烟酒等，影响患者的检测 结果。 处理方法：患者空腹（8-12小时）。 （2）药物等其他因素的影响:如含VC、抗肿瘤药物、 降脂药物、输液等。 处理方法：尽量停止使用药物。超过药物的半衰期。
1、患者的准备问题； 2、标本的采集、运输、验收等问题。
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常见表面活性剂：Triton-X-100，吐温等
Tips
1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。 2、样本已经采集，考虑将待测物从容器中解离出来。
SUCCESS
THANK YOU
2020/1/8
生物基质中的磷脂化合物易导致基质效应，大多数表现为基质抑制。 建议：LC-MS-MS方法时监测 m/z184 → m/z184离子对。
LC-MS-MS方法需考虑的问题
◇非特异性吸附
※在低蛋白含量的生物基质（尿液，脑脊液，透析液等）中，化合物在存放/转移 过程中与容器材料发生特异性结合的现象。 ※在相应的生物基质中或水中测试，做转管实验。 ※通常更换储存材料，或者在基质中加入一定量表面活性剂可消除非特异性吸附现象。
注：“*”表示与水互溶
沸点（℃） 40
77.1 77
34.5 36.1 80.7
69 110.6 82.4
66 81.6 117 100
密度（g/mL) 1.33 0.90 0.89 0.71 0.63 0.78 0.66 0.87 0.79 0.89 0.78 1.00 1.00
偶极矩越小，极性越小
耐酸耐碱、抗氧化还原、耐热、无腐蚀。6、安全性好。7、经济性好。
Tips: PH和温度对萃取有一定影响。
常用液液提取溶剂
溶剂名称 二氯甲烷 乙酸乙酯 氯代正丁烷
乙醚 戊烷 环己烷 正己烷 甲苯 异丙醇* 四氢呋喃* 乙腈* 正丁醇* 水*
分子量 84.9 88.1 92.6 74.1 72.2 84.2 86.2 92.2 60.1 72.1 41.1 74.1 18.0
偶极矩（D) 1.60 1.78
1.15 0 0
0.08 0.36 1.66 1.63 3.92 1.50 1.84
固相提取法
◇HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance Copolymer)材料的优点
△水可浸润 △反相保留 △PH1-14范围内稳定 △没有裸露硅羟基
固相提取法
范亚新
简介
富集样品，提高检测方法灵敏度
最终进样提取物与流动相及色谱柱兼容
生物基质样品太“脏”：各类生物基质中存在大量蛋白、盐 分和磷脂类化合物等，可能干扰目标化合物的测定
前处理技术
1、直接稀释法：简单、回收率高、成本低，但选择性差，应用有限 2、超滤法：多用于测定游离药物浓度 3、蛋白沉淀法：几乎适用于所有小分子化合物，简单快速，回收率
高，但选择性差，基质效应严重
4、液液提取法：基质效应降低，低成本，重复性好；但难以自动化，
不适用于水溶性化合物的提取，极性相差较大的化合物同时提取困难
5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富
集与净化；但成本较高
液液提取法
利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配 系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。
两相的分离需借助两相的密度差来实现
原理：相似相溶分配系数：源自A=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率
选择性系数（分离系数）：β=kA/kB=
yA / yB x /x
A
B
萃取剂的选择：
1、选择性好：表现为选择性系数大。2、萃取容量大：表现为分配系数大。3、
萃取剂与原溶剂的互溶度。4、萃取剂和原溶剂有较大的密度差。5、化学稳定性
固相提取法
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2020/1/8
固相提取法
改变化合物PH，酸性 保留，碱性洗脱
固相提取法
改变化合物PH，碱性 保留，酸性洗脱
固相提取法
改变吸附剂PH，碱性 保留，酸性洗脱
固相提取法
改变吸附剂PH，酸性 保留，碱性洗脱
LC-MS-MS方法需考虑的问题
◇基质效应
※样品中除被检测化合物外的成分，对化合物测定造成影响的效应。 ※两种方式检测基质效应：柱后灌流法（定性），样品处理比较法（定量）。 ※解决方案： 1、改变样品前处理方法。（液液提取和固相提取法可降低基质效应） 2、优化色谱条件。（将干扰物和待测物分离） 3、优化质谱条件。（更换离子源，APCI源优于ESI源） 4、同位素内标。（终极办法，最有效）
Tips
1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。 2、样本已经采集，考虑将待测物从容器中解离出来。
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2020/1/8
生物基质中的磷脂化合物易导致基质效应，大多数表现为基质抑制。 建议：LC-MS-MS方法时监测 m/z184 → m/z184离子对。
LC-MS-MS方法需考虑的问题
◇非特异性吸附
※在低蛋白含量的生物基质（尿液，脑脊液，透析液等）中，化合物在存放/转移 过程中与容器材料发生特异性结合的现象。 ※在相应的生物基质中或水中测试，做转管实验。 ※通常更换储存材料，或者在基质中加入一定量表面活性剂可消除非特异性吸附现象。
注：“*”表示与水互溶
沸点（℃） 40
77.1 77
34.5 36.1 80.7
69 110.6 82.4
66 81.6 117 100
密度（g/mL) 1.33 0.90 0.89 0.71 0.63 0.78 0.66 0.87 0.79 0.89 0.78 1.00 1.00
偶极矩越小，极性越小
耐酸耐碱、抗氧化还原、耐热、无腐蚀。6、安全性好。7、经济性好。
Tips: PH和温度对萃取有一定影响。
常用液液提取溶剂
溶剂名称 二氯甲烷 乙酸乙酯 氯代正丁烷
乙醚 戊烷 环己烷 正己烷 甲苯 异丙醇* 四氢呋喃* 乙腈* 正丁醇* 水*
分子量 84.9 88.1 92.6 74.1 72.2 84.2 86.2 92.2 60.1 72.1 41.1 74.1 18.0
偶极矩（D) 1.60 1.78
1.15 0 0
0.08 0.36 1.66 1.63 3.92 1.50 1.84
固相提取法
◇HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance Copolymer)材料的优点
△水可浸润 △反相保留 △PH1-14范围内稳定 △没有裸露硅羟基
固相提取法
范亚新
简介
富集样品，提高检测方法灵敏度
最终进样提取物与流动相及色谱柱兼容
生物基质样品太“脏”：各类生物基质中存在大量蛋白、盐 分和磷脂类化合物等，可能干扰目标化合物的测定
前处理技术
1、直接稀释法：简单、回收率高、成本低，但选择性差，应用有限 2、超滤法：多用于测定游离药物浓度 3、蛋白沉淀法：几乎适用于所有小分子化合物，简单快速，回收率
高，但选择性差，基质效应严重
4、液液提取法：基质效应降低，低成本，重复性好；但难以自动化，
不适用于水溶性化合物的提取，极性相差较大的化合物同时提取困难
5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富
集与净化；但成本较高
液液提取法
利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配 系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。
两相的分离需借助两相的密度差来实现
原理：相似相溶分配系数：源自A=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率
选择性系数（分离系数）：β=kA/kB=
yA / yB x /x
A
B
萃取剂的选择：
1、选择性好：表现为选择性系数大。2、萃取容量大：表现为分配系数大。3、
萃取剂与原溶剂的互溶度。4、萃取剂和原溶剂有较大的密度差。5、化学稳定性
固相提取法
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固相提取法
改变化合物PH，酸性 保留，碱性洗脱
固相提取法
改变化合物PH，碱性 保留，酸性洗脱
固相提取法
改变吸附剂PH，碱性 保留，酸性洗脱
固相提取法
改变吸附剂PH，酸性 保留，碱性洗脱
LC-MS-MS方法需考虑的问题
◇基质效应
※样品中除被检测化合物外的成分，对化合物测定造成影响的效应。 ※两种方式检测基质效应：柱后灌流法（定性），样品处理比较法（定量）。 ※解决方案： 1、改变样品前处理方法。（液液提取和固相提取法可降低基质效应） 2、优化色谱条件。（将干扰物和待测物分离） 3、优化质谱条件。（更换离子源，APCI源优于ESI源） 4、同位素内标。（终极办法，最有效）