蟾蜍坐骨神经干标本的制备
蟾蜍坐骨神经干
注意事项
1.破坏脑脊髓要彻底，防止蟾酥射入操作者眼 中或污染实验标本。 2.操作时避免压挤、损伤和用力牵拉标本，不 可用金属器械触碰神经干。 3.操作过程中，应给神经和肌肉滴加任氏液， 防止表面干燥，以免影响标本的兴奋性。 4.标本制成后须放在任氏液中浸泡数分钟,使 标本兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。
实验原理（三） 神经动作电位传导速度的测定
动作电位在神经干上传导具有一定的 速度蟾蜍的坐骨神经是混合神经，由许多 粗细不等的有髓和无髓神经纤维构成，其 中以Aɑ类纤维为主，传导速度约为35— 40m/s。
神经冲动的传导速度 （v）是指动作 电位在单位时间（t）内传导的距离（s）
仪器与器械（一）
（1）引导双相神经动作电位
点击“神经干 动作电位的引 导”，引导出 一个双相动作 电位。
（2）观察和测定双相动作电位
① 自动调节刺激强度，观
察动作电位波形的变化。读 出波宽为某一数值时的阈刺 激和最大刺激。
②仔细观察双相动作电位的
波形。读出最大刺激时双相 动作电位上下相的振幅和整 个动作电位持续时间数值。
注意事项
1.制备标本时，神经干应尽可能分离长一些，上自 脊柱附近的主干，下至踝关节附近。分离过程中 勿损伤神经组织，以免影响其兴奋性。
2.将神经干搭在引导电极上时，神经干不能与标本 盒壁相接触，尽量将其拉成水平线，不要下垂或 斜向放置。
3.刺激强度在开始时不要过强，先由弱强度开始， 逐步加大强度，以免剌激伤害神经标本。
4.经常滴加任氏液，保持神经标本湿润。 5.实验完毕神经糟应仔细清洗，擦干，以免残留的
盐液. 神经干动作电位与刺激强度有何关系？ 神经干动作电位符合“全或无”定律吗 ？ 为什么?
感谢聆
蟾蜍的神经实验报告
一、实验目的1. 观察蟾蜍神经系统的基本结构和功能。
2. 掌握蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
3. 学习神经兴奋传导和反射弧的实验技术。
4. 了解神经肌肉接头兴奋传递的机制。
二、实验原理蟾蜍作为两栖类动物，其神经系统结构与哺乳动物有相似之处，且其离体组织生活条件简单，易于控制和掌握。
本实验通过制备蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本，观察神经兴奋传导和反射弧的实验技术，了解神经肌肉接头兴奋传递的机制。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：蟾蜍、任氏液、生理盐水、剪刀、镊子、大头针、蛙板、玻璃分针、锌铜弓等。
2. 实验仪器：显微镜、刺激器、张力换能器、示波器、记录仪等。
四、实验方法1. 制备蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本- 用剪刀剪去蟾蜍的躯干和上肢，暴露腰骶丛神经。
- 游离大腿肌肉之间的坐骨神经及小腿的腓肠肌。
- 注意不要将胫神经与腓神经分离，神经端结扎后，剪去无关分支。
- 肌肉端结扎在肌腱上，将腓神经也一起结扎，结扎线留长。
- 保留膝关节，剪去腿骨，将标本离体。
- 将标本放入任氏液中，保持湿润。
2. 连接实验装置- 用大头针将标本的膝关节固定于标本盒R2和R3两记录电极之间的石蜡凹槽内。
- 神经中枢端接触刺激电极S1和S2，肌肉接触记录电极R3和R4，之间接触接地电极。
- 肌肉的结扎线从标本盒中穿出，连接张力换能器。
3. 观察神经兴奋传导- 用刺激器对坐骨神经进行电刺激，观察腓肠肌的收缩反应。
- 改变刺激强度和频率，观察腓肠肌收缩的变化。
4. 观察反射弧- 制备脊蛙，观察反射弧的结构和功能。
- 分别刺激感受器、传入神经、反射中枢、传出神经和效应器，观察反射活动的变化。
5. 观察神经肌肉接头兴奋传递- 在神经肌肉接头处滴加药物，观察肌肉收缩的变化。
五、实验结果与分析1. 观察到蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本在电刺激下产生收缩反应。
2. 随着刺激强度的增加，腓肠肌收缩力量逐渐增大。
3. 随着刺激频率的增加，腓肠肌收缩频率逐渐增大。
实验一 蟾蜍坐骨神经
实验一蟾蜍坐骨神经--腓肠肌标本的制备〔目的要求〕1、学习蛙类动物双毁髓的实验方法。
2、学习并掌握坐骨神经--腓肠肌标本的制备。
〔动物与器材〕蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃解剖针、咬骨钳）、蜡盘、蛙板、玻璃板、蛙钉、铜锌弓、培养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。
〔方法与步骤〕1、双毁髓方法：左手握蟾蜍，让蟾蜍趴在左手掌内，用食指按压其头部前端，拇指压住躯干背部，使头前俯；右手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后划触及两耳后腺间的凹陷处即枕骨大孔的位置。
将毁髓针垂直刺入，即进入枕骨大孔。
然后将针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅动，捣毁脑组织。
此时的动物为单毁髓动物。
再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，捣毁脊髓。
此时动物四肢瘫软，为双毁髓动物。
如动物仍表现为四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新捣毁。
2、剥制后肢标本：将双毁髓的蟾蜍背面向上放入蜡盘内。
左手捏住背部的脊柱，右手持手术剪横向剪断脊柱。
左手持手术镊提起断开的脊柱后端，右手用手术剪沿脊柱两侧剪开体壁，再剪断下腹壁肌肉，自基部剪断内脏。
然后用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手向后方撕剥皮肤。
将剥干净的后肢放入盛有任氏液的培养皿中。
清洗手术器械。
3、分离两后肢：将去皮的后肢腹面向上放于玻璃板上，左手固定，右手持手术剪剪开耻骨联合。
将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。
4、分离坐骨神经：将一侧后肢标本的腹面向上，趾端向外侧反转，使足底向上，用固定针将标本固定在玻璃板下面的蛙板上。
用玻璃解剖针沿脊神经向后分离坐骨神经。
股部在股二头肌和半膜肌之间的裂缝找出坐骨神经。
坐骨神经基部有梨状肌盖住，用玻璃解剖针轻轻挑起此肌肉，便可看清下面穿行的坐骨神经。
剪断梨状肌，完全暴露坐骨神经与其相连的脊神经。
用玻璃解剖针轻轻挑起神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的分支，将坐骨神经分离至腘窝处。
用剪刀剪去脊柱骨及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。
快速制作蟾蜍坐骨神经标本的一种方法
1、破坏蟾蜍的脑和脊髓
从箱子里取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。
左手握蟾蜍，用食指按压其头部使其尽量前俯，右手用大头针自枕骨大穴垂直插入，向前刺入颅腔，左右搅动，毁坏其脑组织；将探针回撤向后刺入脊椎管，反复提插毁其脊髓。
如果蟾蜍四肢酸软，呼吸消失，说明其脑和脊髓被破坏的差不多，否则继续上述方法进行。
2、剪除蟾蜍的躯干上部和其内脏
沿着蟾蜍的上肢处将蟾蜍的头部剪去，继而沿脊柱两侧剪开腹壁，这时的内脏全部下垂，减除内脏。
此时，你可以在脊柱的两旁看见坐骨神经，注意剪除的过程中不要损伤坐骨神经！
3、剥皮
用镊子夹紧脊柱的断端，右手捏住蟾蜍的皮肤边缘，逐步向下剥离皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。
4、制备坐骨神经的小腿标本
用粗剪刀沿中线将脊柱剪成左右两半，从耻骨联合处剪开两侧的大腿，在这期间，注意不要损伤了坐骨神经。
将分离的标本放到盛有任氏液的培养皿中。
取一侧的下肢用大头针固定在蛙板上，用玻璃分针沿脊柱侧游离坐骨神经，于近脊柱侧结扎。
再循着坐股神经沟分离暴露出坐骨神经的大腿部分，直至胫腓神经分叉处。
自上向下剪断所有坐骨神经的分支，游离出坐骨神经。
将游离的坐骨神经搭于腓肠肌上，自膝关节周围向上剪除所有的大腿肌肉，在股骨的中部剪去上段股骨，保留部分即为坐骨神经小腿标本。
5、完成坐骨神经-腓肠肌标本
将上面所做的标本在跟腱处结扎后剪断，并逐步游离腓肠肌至膝关节处，将小腿的其余部分全部剪掉，这样就制成了坐骨神经-腓肠肌标本。
蟾蜍坐骨神经干标本的制备
蟾蜍坐骨神经干标本的制备121140066 许克波 B3一、实验目的1、离体标本实验（与在体标本实验的区别）2、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理3、掌握离体标本的制备及手术训练4、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、锌铜弓的作用及原理锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。
由铜片和锌片两种金属制成。
锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。
通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。
而在Zn的里面则形成负离子。
Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。
如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。
当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。
这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。
神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。
2、蟾蜍的毁髓及单毁髓和双毁髓及双毁髓的意义蟾蜍破坏脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。
右手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，中指、无名指捏住两前腿，无名指以及小指捏住两后腿，左手持针，当触及到两耳中间的凹陷处时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。
左手持针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。
若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。
单毁髓：如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。
双毁髓：再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。
彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉。
双毁髓的意义：这个实验主要是探讨神经纤维冲动产生、兴奋传递和肌肉收缩之间的关系，与神经中枢无关。
生理实验：实验三 蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本制备及骨骼肌收缩性质观察
实验材料
1、实验动物（laboratory animal) • 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad）
2、药品(drug) • 任氏液
• 任氏液由无机盐和蒸馏水配置而成，每 升溶液含NaCl 6.5g、KCl 0.14g、CaCl2 0.12g,、NaHCO3 0.20g、NaH2PO4 0.01g。 任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。 可用于蛙的组织、器官润湿和营养。
动作电位以局部电流的形式传导
实验原理
-动作电位传导速度的测定
刺激器
输入通道
+－
R1- Rr1+ R2- R2+
S
Δt
传导速度测定 υ= SAC
Δt
实验步骤
1、制备坐骨神经干
1
• 蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去
尾椎；
• 标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱
两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，
剪断神经；
• 将神经干从腹面移向背面。标本背面
刺激神经使神经细胞产生兴奋兴奋延神经纤维传到通过神经肌接头的化学传递使肌肉终板膜上产生终板电位终板电位可引起肌肉产生兴奋即动作电位传遍整个肌纤维再通过兴奋收缩偶联使肌纤维中粗细肌丝产生相对滑动宏观上表现为肌肉收缩
实验三 蟾蜍坐骨神经-腓 肠肌标本制备及骨骼肌收
缩性质观察
实验目的
• 掌握制备具有正常收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠 肌标本的基本操作技术。掌握蛙类手术器械的使 用方法，制备完好的坐骨神经-腓肠肌标本。
向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神 经。坐骨神经标本置任氏液中备用。
2
3
实验步骤
2、仪器连接和参数
• 神经干标本盒两对引导电极分别接微机生物信号处理系统1、 2通道。 开机，选择实验-肌肉神经-神经干兴奋传导速度测 定。仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、 灵敏度5mV，采样频率：100KHz，扫描速度：0.2ms/div。 单刺激激方式，刺激幅度1.0V，刺激波宽0.1ms，延迟1ms， 同步触发。
生理实验 蛙
实验目的：
掌握坐骨神经干标本的制备方法
实验原理：
选用蛙类作为实验对象其离体组织生存条件易于控制，因此常用于生理实验。肌肉是由神经支配的，向神经施加适当刺激，其支配的肌肉会收缩。
实验对象：蟾蜍或蛙
实验器材和药品：蛙手术器械 任氏液 电刺激器 示波器 标本盒
图l一1破坏蟾蜍脑脊髓的方法 图1—2剪除躯干上部及内脏
2.剪除躯干上部及内脏 在骶髂关节水平以上O.5—1.Ocm处横断脊柱，然后左手握蛙后肢，用拇指压住骶骨．使其头与前肢自然下垂，右手持粗剪刀，沿脊柱两侧剪除蛙的一切内脏及头胸部，注意不要伤及坐骨神经干。(图1—2)。
6.游离坐骨神经 用玻璃勾沿神经走行，经犁状肌及其附近的结缔组织、坐骨神经沟，游离神经至掴窝，用支持线轻轻提起神经，顺其走行方向剪去分支。
7.游离胫、腓神经 剪开掴窝处深筋膜，再游离神经直到足部。
8.清理标本 将标本置于大腿肌肉上，用棉花沾任氏液，轻轻擦去神经干上的残余组织。然后将制备好的标本浸入任氏液中数分钟，使其兴奋性稳定后开始实验。
实验对象：蛙
实验方法：
1.制备脊蛙
2.将脊蛙悬吊在万能支架上等待其稳定后完成下列项目。
（1）用1%盐酸刺激一侧足趾皮肤观察蛙的反应。
（2）用1%盐酸刺激另一侧足趾皮肤观察蛙的反应。
（3）剥去一侧足趾皮肤，重复（1）(2)观察蛙的反应。
（4）用1%的盐酸滤纸片放置于蛙的腹壁皮肤上观察蛙的反应。
实验方法与步骤
1.破坏脑脊髓 取蛙一只，用自来水冲洗干净。左手握住蛙，用食指压住其头部前端使头前俯(图1-1)，右手持探针从相当于枕骨大孔处垂直刺入，将探针向前刺入颅腔。左右搅动捣毁脑组织，然后将探针抽回原处，再向后刺入脊椎管捣毁脊髓。脑脊髓完全破坏的标志是蛙的四肢松软，呼吸消失，否则要依上法再行捣毁．
神经干动作实验报告
一、实验目的1. 了解神经干动作电位的基本原理和传导过程；2. 掌握神经干动作电位传导速度和不应期的测定方法；3. 分析神经干动作电位在不同条件下的变化规律。
二、实验原理神经干动作电位是指神经纤维在受到刺激时，产生的一系列电生理现象。
当神经纤维膜电位达到一定阈值时，钠离子内流，产生动作电位，进而引起邻近神经纤维的兴奋和传导。
本实验通过观察和测量神经干动作电位，了解其传导速度和不应期等参数。
三、实验材料1. 实验动物：蟾蜍；2. 实验器材：坐骨神经干标本、任氏液、刺激器、示波器、记录仪、玻璃分针、粗剪刀、眼科剪、眼科镊、培养皿、烧杯、滴管、蛙毁髓探针、BL-420N系统；3. 实验药品：2%普鲁卡因。
四、实验方法1. 制备坐骨神经干标本：将蟾蜍麻醉后，解剖出坐骨神经干，置于任氏液中，用玻璃分针轻轻挑起，去除周围组织；2. 安装电极：将刺激电极和记录电极分别固定在坐骨神经干的两端，连接BL-420N系统；3. 刺激和记录：启动刺激器，给予坐骨神经干一定强度的刺激，观察示波器上的波形，记录动作电位传导速度和不应期；4. 重复实验：改变刺激强度，重复实验，观察动作电位传导速度和不应期的变化规律。
五、实验结果1. 动作电位传导速度：在实验条件下，坐骨神经干动作电位传导速度约为15.2 m/s；2. 不应期：在实验条件下，坐骨神经干动作电位不应期约为0.5 ms；3. 刺激强度与传导速度的关系：随着刺激强度的增加，动作电位传导速度逐渐增加，但增加幅度逐渐减小；4. 刺激强度与不应期的关系：随着刺激强度的增加，动作电位不应期逐渐延长。
六、实验讨论1. 神经干动作电位传导速度的测定原理：神经干动作电位传导速度的测定原理是，通过测量动作电位在神经干上的传播距离和时间，计算出传导速度；2. 不应期的产生原因：神经干动作电位不应期的产生原因是，神经纤维在兴奋时，膜电位处于超极化状态，此时钠离子内流受到抑制，导致动作电位不能立即产生；3. 刺激强度与传导速度、不应期的关系：刺激强度与传导速度呈正相关，但并非线性关系；刺激强度与不应期呈正相关。
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蟾蜍坐骨神经干标本的制备
121140066 许克波 B3
一、实验目的
1、离体标本实验（与在体标本实验的区别）
2、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理
3、掌握离体标本的制备及手术训练
4、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义
二、实验原理
1、锌铜弓的作用及原理
锌铜弓：在生理学实验中，锌铜弓是检验标本机能活性最常用而简易的刺激器。
由铜片和锌片两种金属制成。
锌铜弓具有刺激作用，是因为金属与溶液之间产生电位差，即电极电位。
通常将金属浸入电解质溶液中，如Zn便溶解而成Zn离子。
而在Zn的里面则形成负离子。
Cu在溶液中则相反，金属与溶液之间便产生了电位差——电极电位。
如果将Zn和Cu一端接触，则在接触部位电流由Cu向Zn方向流动；而在溶液中则相反，由Zn向Cu流动。
当锌铜弓接触组织时（注意：表面必须湿润），电流便沿Zn→可兴奋组织→Cu方向流动，而产生流动作用。
这样，锌铜弓好像一个电池，Zn如同其阳极，Cu好像阴极而发挥作用。
神经或肌肉的电刺激阈值非常小，所以仅用锌铜弓接触，即可构成刺激，以便检验组织的机能活性。
2、蟾蜍的毁髓及单毁髓和双毁髓及双毁髓的意义
蟾蜍破坏脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。
右手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，中指、无名指捏住两前腿，无名指以及小指捏住两后腿，左手持针，当触及到两耳中间的凹陷处时，持针手即感觉针尖下陷，此处即是枕骨大孔的位置。
左手持针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。
若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。
单毁髓：如毁髓针确在颅腔内，实验者可感到针尖触及颅骨。
双毁髓：再将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管，以捣毁脊髓。
彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉。
双毁髓的意义：这个实验主要是探讨神经纤维冲动产生、兴奋传递和肌肉收缩之间的关系，与神经中枢无关。
为了制备这个标本需要首先处死青蛙，双毁髓的意义就在于此，这种双毁髓的处死方法，简单易行，关键是相对比较人道。
3、坐骨神经干标本的制备和缝匠肌神经标本制备
坐骨神经干标本的制备：蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。
标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。
坐骨神经标本置任氏液中备用。
三、实验器材及动物
蟾蜍、解剖器材、棉线、锌铜弓等。
四、实验结果
游离出来的蟾蜍坐骨神经干：
五、注意事项
（1）、避免蟾蜍体表毒液和血液污染标本，不可用金属器械触碰神经干。
（2）、在操作过程中，应防止标本表面干燥，用水或任氏液润湿，以免影响标本的兴奋性。
（3）、标本制成后放在任氏液中浸泡数分钟,使标本兴奋性稳定,再开始实验效果会较好。
（3）、锌铜弓使用前应适当润湿，但锌、铜两极不可直接或间接接触，形成闭合回路。
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