实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二 槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识【实验目的】1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解.2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.【实验原理】采用碱溶酸沉法提取,其原理是芸香苷结构中含有酚羟基,具酸性,能溶于碱水,当加入酸溶液后,则芸香苷沉淀析出.芸香苷的精制是利用其可溶于热水,难溶于冷水的性质与杂质分离.【实验材料】设备:电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品:芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2%硫酸、95%乙醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁【实验步骤】1. 芸香苷的精制:称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70 ℃干燥，得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解:取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识：(1)Molish反应：取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2)酸性实验：取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1 mg，第二组每试管中加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5% 碳酸氢钠溶液、5% 碳酸钠溶液和1% 氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
3、盐酸 镁粉反应： 、盐酸-镁粉反应 镁粉反应： 取芸香苷1 取芸香苷 mg，加乙醇 ml，在水浴上加热 ，加乙醇2 ， 溶解，加镁粉约50 溶解，加镁粉约 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由 ，滴加数滴浓盐酸， 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物 。 以同法试 验槲皮素。 验槲皮素。 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（ 羟基与糖结 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-羟基与糖结 合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类） 合成苷） 仍有作用 ，而槲皮素 （ 黄酮醇类） 不呈 还原显色反应。因此可区别两者。 还原显色反应。因此可区别两者。
思考
1、苷类水解有几种催化方法？ 、苷类水解有几种催化方法？ 2、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷 、黄酮类化合物还有哪些提取方法？ 的提取还可用什么方法？ 的提取还可用什么方法？ 3、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐 、酸水解常用什么酸？ 酸水解后处理更方便？ 酸水解后处理更方便？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
芸香苷的提取
方法Ⅰ 方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 槐花米粗粉20g 20 加10倍量沸水煮沸20min，反复2 10倍量沸水煮沸20min，反复2 倍量沸水煮沸20min 次，趁热脱脂棉滤过
药渣
滤液 静置过夜， 静置过夜，滤过
滤液
芸香苷粗品
粗提） 芸香苷的提取 （粗提）
方法Ⅱ 方法Ⅱ ：碱溶酸沉法
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
4、三氯化铝反应： 、三氯化铝反应： 取样品1 溶于甲醇中， 取样品 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 溶于甲醇中 三氯化铝甲醇溶液 2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 滴 黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应： 、 柠檬酸反应 柠檬酸反应： 取样品1 取样品 mg，加甲醇 ml，在水浴上加热溶解， ，加甲醇2 ，在水浴上加热溶解， 再加2%二氯氧锆甲醇溶液 二氯氧锆甲醇溶液3~4滴 ， 凡有 羟基或 再加 二氯氧锆甲醇溶液 滴 凡有3-羟基或 5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加 羟基的黄酮即呈鲜黄色。 羟基的黄酮即呈鲜黄色 然后加2%柠檬酸甲醇 柠檬酸甲醇 溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香 羟基的黄酮黄色不褪。 溶液 滴 羟基的黄酮黄色不褪 苷和槲皮素的不同。 苷和槲皮素的不同。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
实验三中药化学成分提取槐米
实验三槐米中芸香苷的提取、精制和检识
一、目的要求
掌握芸香苷的主要性质及提取、分离精制和检识方法。
二、实验原理
根据芸香苷可溶于碱水，在酸性条件下又可沉淀析出，采用碱溶酸沉法提取。
根据芸香苷在冷水和热水中溶解度相差较大，以水为溶剂,采用结晶法进行精制。
三、实验方法
（一）芸香苷的提取
1.不锈钢锅中加500毫升水，加热至沸后加入槐米50克，
用石灰乳调pH值8-9，继续加热20分钟，随时补充损失的水分，趁热用纱布过滤，药渣再提取一次，两次滤液合并。
2.用浓盐酸调提取液使pH值2-3，放置过夜。
3.抽滤，将沉淀抽干，置于室温中自然干燥，得芸香苷粗品。
（二）芸香苷的精制
1.取芸香苷粗品2克置800毫升的烧杯中，加水约400毫升，
加热至沸，使芸香苷完全溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶。
2.抽滤，自然干燥，得芸香苷精制品。
（三）芸香苷的检识(要求写出反应现象)
1.氢氧化钠实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml蒸馏水，振摇。
滴加2-3滴氢氧化钠溶液，芸香苷溶解，呈黄色澄明溶液。
再滴加盐酸溶液2-3滴，观察是否有沉淀生成。
2.α-萘酚—浓硫酸实验（Molish反应）
取芸香苷少许置干燥试管中，加2ml无水乙醇，振摇。
再滴加2-3滴α-萘酚溶液，振摇。
将试管倾斜，沿管壁滴加1ml 浓硫酸，观察两液面交界处颜色变化。
3.盐酸-镁粉实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml 50%的乙醇，水浴加热溶解。
加入少许镁粉，再加入盐酸数滴，观察颜色变化。
芸香苷的提取、分离和鉴定
2.色谱鉴定 a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 层析材料：定性滤纸。 点 液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：预饱和后，上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯、 （365nm）下检视色斑的变化。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 b. 芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱 层析材料：聚酰胺薄膜。 样：提取的槲皮素承芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶
四、鉴定 1.呈色反应 取芸香苷及槲皮素精品约10 mg，各用5 ml乙醇溶解，制成样品溶液， 按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 a. Molish反应 取样品溶液l ml，加10％α-萘酚溶液0.5 ml，振摇后斜置 试管，沿管壁滴加0.5 ml硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。 b. 盐酸－镁粉反应 芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属 镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。 c. 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇 溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记 录现象。 d. 三氯化铝纸片反应 在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液 后，各加1%三氯化铝乙醇溶液两滴，观察颜色变化，记录现象。 e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液2 ml，加入2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4 摘，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变 化。
3.芸香苷的水解 芸香苷的水解 取精制芸香苷1g，研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2% 硫酸100ml，加热回流30min，瓶中混浊液逐渐变为澄清的棕 黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤 液（应为澄清无色液体），用做糖的检查，沉淀物为芸香苷 苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称 重。粗制槲皮素再用50%乙醇重结晶得精制的含2分子结晶水 的槲皮素。 取芸香苷水解后的滤液10 ml，加饱和氢氧化钡溶液（或 碳酸钙粉末）中和至中性，滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液水 浴60℃浓缩至2～3 ml，加2～3 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
槐米中芸香苷提讲义取分离及检识-课件PPT(精)
槐米中芸香苷提取分离及检识
与在含水溶剂中，化合物分子结构对氢键缔合的影响有关， 大致如下：
化合物分子中能形成氢键的基团数目越多，被聚酰胺吸 附越强。 形成氢键的基团所处位置不同，被吸附的强度也不同。 分子中芳香核、共轭双键越多，被吸附强度越大。 化合物若能形成分子内氢键，则被吸附强度减小。
槲皮素
OH
鼠李糖
1.盐酸-镁粉反应：黄酮 2.三氯化铝反应 ：黄酮
3.三氯化铁反应：酚羟基
4. Molisch反应：糖、苷类
HO O
OH OH
OH OH O
芸香苷和槲皮素的色谱检识
样品： 自制1%芸香苷乙醇溶液
自制1%槲皮素乙醇溶液
对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液 1%槲皮素对照品乙醇溶液现方式做保护处理对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑并不能对任何下载内容负责
槐米中芸香苷提取分离及检识
OH HO O OH H 2C OH O O O OH OH 槲皮素 OH 葡萄糖 芸香糖 芸香苷 鼠李糖 O OH O OH CH 3
实验原理： 1.芸香苷分子中含具有酚羟基，能与 碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又 可沉淀析出，可用碱溶酸沉法提取芸 香苷。
薄层色谱
play
OH
2.在热水中溶解度大, 冷水中溶解度
小，采用沸水提取法。芸香苷的精制
OH OH
可根据其在冷、热水（或冷、热乙醇）
中溶解度相差悬殊的性质进行。
3.芸香苷可被稀酸水解生成槲皮素及 葡萄糖、鼠李糖，并可通过色谱及化
HO
O OH OH O
实验四--槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。
)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。
临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质：1.芦丁(Rutin)淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度：水：1:100(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:650(冷)，1:60(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素(Quercetin)即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。
溶解度：乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热)可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。
易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。
(1) 白桦脂醇(Betulin)无色针晶，mp.251℃~252℃。
能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。
(2) 槐二醇(Sophoradiol)无色针晶，mp.219℃~220℃或224℃。
能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
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实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识
【实验目的】
1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解•
2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.
【实验原理】
采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性,能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出•芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离•【实验材料】
设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品：芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2僦酸、95聽醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、a -萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁
【实验步骤】
1. 芸香苷的精制：
称一定重量的粗品，按约1 : 200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60T〜70 C干燥，
得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解：
取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2僦酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识:
(1) Molish 反应：
取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%a -萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2) 酸性实验：
取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷 1 mg，第二组每试管中
加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液和1%氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
(3) 镁粉-盐酸反应：
取芸香苷1 mg,加乙醇1〜2 ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg滴加几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。
以同法试验槲皮素。
(4) 三氯化铝反应：
取芸香苷1 mg,加甲醇1〜2 ml在水浴上加热溶解，加入1%三氯化铝甲醇溶液2〜3滴，呈鲜黄色，以同法试验槲皮素。
(5) 醋酸镁反应：
取芸香苷1 mg,加甲醇1〜2 ml水浴中加热溶解，加1%醋酸镁甲醇溶液2〜3
滴，呈黄色荧光反应。
以同法试验槲皮素
实验报告
时间___________________________ 班级 ___________________________________ 姓名学号
【实验目的】
【实验原理】
【实验流程】
【实验装置图】
【实验结论】
【实验注意】。