肠杆菌科细菌替加环素耐药机制研究
替加环素对不同耐药基因型耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的敏感性研究
替加环素对不同耐药基因型耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的敏感性研究刘立荣;李向阳;瞿玲娜;唐玉霞;曹景宏;颜小萍【摘要】目的：探讨替加环素对不同耐药基因型耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）的敏感性。
方法采用改良Hodge试验（MHT）筛查厄它培南耐药的肠杆菌科细菌，采用纸片扩散法检测替加环素的抑菌环直径，采用聚合酶链反应（PCR）测定CRE的β-内酰胺酶基因种类。
结果68株CRE中有48株（70.6%）MHT初筛阳性，其中40株（83.3%）携带能水解碳青霉烯类抗菌药物的超广谱β-内酰胺酶基因（KPC、NDM-1、IMP-8、IMP-4，以KPC为最多，占67.5%）。
68株菌株中有54株对替加环素敏感，12株中介，2株耐药，总敏感性为97%。
MHT 筛查试验阳性和阴性菌株对替加环素的敏感性差异无统计学意义（χ2=3.599，P>0.05）。
结论替加环素对CRE显示出优异的抗菌活性，其抗菌作用不受β-内酰胺酶的影响。
%ObjectiveTo investigate the sensitivity of carbapenem-resistantEnterobacteriaceae(CRE)with different resistant genotypes against tigecycline.MethodsThe isolates ofEnterobacteriaceae against ertapenem were screened by modified Hodge test(MHT),the diameters of tigecycline inhibition zones were determined by K-B method, and beta-lactamase gene of CRE was determined by polymerase chain reaction(PCR).ResultsA total of 68 isolates of CRE were screened by MHT,and there were 48 positive isolates,accounting for 70.6%. In the 48 positive isolates, there were 40 isolates(83.3%) carrying hydrolyzed carbapenem antibiotics extended-spectrum beta-lactamase gene, includingKPC,NDM-1,IMP-8 andIMP-4.KPC was the most,accounting for 67.5%. In the 68 isolates ofCRE,54 isolates were sensitive,12 isolates were intermediary,2 isolates were resistant,and the total sensitivity was 97%. There was no statistical significance for the sensitivity of positive and negative isolates in the 68 isolates of CRE by MHT(χ2=3.599,P>0.05).ConclusionsTigecycline for CRE exhibits excellent antibacterial activity. Antibacterial effect of tigecycline is not influenced by enzyme activity.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2016(031)005【总页数】4页(P383-386)【关键词】耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌;替加环素;敏感性【作者】刘立荣;李向阳;瞿玲娜;唐玉霞;曹景宏;颜小萍【作者单位】台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523;温州医科大学附属第二医院检验科，浙江温州 325027;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州317523;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523【正文语种】中文【中图分类】R378.2近年来，产超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科细菌所占的感染比例逐年增高［1］。
某院2017—2018年替加环素的临床应用调查及用药合理性评价
中国乡村医药·药物与临床·某院2017—2018年替加环素的临床应用调查及用药合理性评价吴积升 阮璐雅 苏银法 杨秀斐 林宝丽 祝尔乐 林冬冬替加环素是一种新的甘氨酰环素类抗菌药物。
随着近几年替加环素在临床广泛使用，出现超说明书应用甚至滥用等现象，导致肠杆菌科细菌替加环素耐药的报道逐年增多[1]。
国家卫健委于2017—2019年提出要加强抗菌药物临床应用管理，以遏制细菌耐药的发生。
现回顾某院替加环素的临床使用情况，为进一步管理提供参考。
1 资料与方法1.1 资料来源 利用医院逸曜合理用药管理系统2.0版回顾性调取2017年1月至2018年12月某院使用替加环素的出院病历250份，使用嘉和电子病历系统收集所有患者相关资料。
1.2 方法 采用Excel电子表格，记录患者性别、年龄、体重、科室、病原菌、感染相关诊断、用法用量、疗程、用药前后感染指标等信息。
以《替加环素临床应用评价细则》为评价标准[2]对病例进行合理性评价。
2 结果2.1 患者基本情况 250例患者中，男174例，女76例；年龄16～96岁，平均68岁，60岁以上189例（75.6%）。
分布在血液科118例（47.2%），重症监护病房75例（30.0%），化疗科16例（6.4%），呼吸内科8例（3.2%），其他33例（13.2%）。
2.2 临床应用情况 5例在住院期间有两个替加环素使用疗程，故总数为255例次。
给药剂量：100mg，每12小时1次157例次（61.6%）；首剂100mg，维持50mg，每12小时1次96例次（37.6%）；100mg和50mg更换变化，均每12小时1次2例次（0.8%）。
用药疗程：＜7天107例次（42.0%），基金项目：温州市基础性科研项目（R20190026）作者单位：325000 浙江温州市中心医院药剂科（吴积升、苏银法、杨秀斐、林宝丽、祝尔乐、林冬冬）；温州医科大学附属第二医院内分泌科（阮璐雅）通信作者：吴积升，7～14天98例次（38.4%），＞14天50例次（19.6%）。
质粒介导的替加环素耐药机制的研究进展
·综 述·质粒介导的替加环素耐药机制的研究进展王知任， 李荷楠关键词： 替加环素； 耐药机制； 质粒中图分类号：R978.14；R378 文献标识码：A 文章编号：1009-7708 ( 2021) 02-0230-05DOI: 10.16718/j.1009-7708.2021.02.024Recent advances in plasmid-mediated mechanism of tigecycline resistanceWANG Zhiren, LI Henan （Department of Laboratory Medicine, Peking University People ’s Hospital, Beijing 100044, China ）基金项目： 国家自然科学基金（81871693）；北京大学人民医院研究与发展基金（RS2018-03）。
作者单位：北京大学人民医院检验科，北京 100044。
第一作者简介： 王知任（1998—），女，本科，主要从事细菌耐药相关的临床研究。
通信作者：李荷楠，E-mail ：*****************.cn 。
1 概述替加环素（tigecycline ）是四环素类衍生的新型甘氨酰环素类抗菌药物，其在米诺环素的中心构架上增加了9-叔丁基-甘氨酰胺基侧链修饰结构[1]。
替加环素进入细菌后可逆地结合于核糖体30S 亚单位中的16S rRNA ，阻断tRNA 进入A 位点从而抑制蛋白质转录翻译过程。
通过结构研究发现，替加环素与核糖体30S 亚基结合的同时，也与核糖体亚基H34残基相互作用，所以两者的结合比其他四环素类药物更牢固，抑制细菌蛋白合成的能力是四环素的20倍[2]。
替加环素对除变形杆菌属和假单胞菌属外大多数革兰阳性和革兰阴性菌都有较强的抗菌活性，包括肠杆菌科、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌属、肺炎链球菌等[3]。
替加环素介绍
替加环素：第一个甘氨酰环素类抗生素
甘氨酰环素是四环素类抗生素（米诺环素）的半合成 衍生物，该类药物在D环的第9位置上连接了一个甘 氨酰氨基 此种修饰既可维持四环素类的抗菌作用，又能对抗四 环素类药物的耐药性机制
3
化学结构式
在9 位上增加甘氨酰 氨基
特点：
•
不受常见耐药机制的影响
抗生素作用靶位改变
如青霉素结合蛋白的修饰与β-内酰胺类抗生素耐药相关(包 括碳青霉烯类等)
抗生素酶的降解
•
与β-内酰胺类抗生素耐药相关
与其他四环素类或 其他抗菌药物不易 产生交叉耐药
DNA解旋酶突变 • 与喹诺酮类的耐药相关
约有59%*通过胆 汁/粪便排泄消除
*：8%经其他途径排泄
33%*经尿液排泄
老年患者无需调整剂量
药代动力学特性—分布
• • 替加环素的稳定状态分布容积约为500-700升(7至9 L/kg)，且其分布范围要超过血浆的分布 容积，可广泛分布到全身各个组织 根据临床研究观察(0.1至1.0 μg/mL)，替加环素的体外血浆蛋白结合率约为71%至89%
广谱覆盖 G+菌、G-菌、厌氧菌和非典型病原体
广谱覆盖G+菌、G-菌、厌氧菌和非典型病原体# ，涵盖碳青霉烯和糖肽类不能 覆盖的致病菌
14
2011 CHINET 耐药监测前6位革兰阴性菌菌种分布
细菌
大肠埃希菌
株数
替加环素用药时机与方法(刘进)
Listeria Corynebacterium
Atypicals
- Legionella - Mycoplasma - Chlamidia - M. fortuitum
Enterobacteriaceae
(incl. ESBL, AmpC, MBL)
Acinetobacter
危重的医院获得性腹腔内感染
推荐的抗菌治疗
阿莫西林/克拉维酸，或环丙沙星+甲硝唑 厄他培南或替加环素 哌拉西林/他唑巴坦 亚胺培南或美罗培南+/-氟喹诺酮类 阿莫西林/克拉维酸，或环丙沙星+甲硝唑 替加环素 哌拉西林/他唑巴坦 亚胺培南或美罗培南+/-氟喹诺酮类 哌拉西林+替加环素+氟喹诺酮类 亚胺培南或多利培南+替考拉宁+棘白菌素 哌拉西林+替加环素+棘白菌素
40版《热病》
• 推荐替加环素治疗以下感染性疾病 – 疾病：轻中度住院治疗的憩室炎，直肠周围脓肿，腹膜炎，四肢、非糖
尿病性蜂窝组炎的起始经验性治疗
–高度耐药菌：耐药肠球菌、金黄色葡萄球菌
南非《替加环素合 理用药指南》
2011年欧洲专家对 IDSA 指南的评论 和补充
推荐替加环素治疗成人cSSSIs和cIAIs
2
A
2
A
2
A
2
A
4
B
4
B
见耐药菌推荐意见
见真菌推荐意见
Eckmann C et al. Eur J Med Res.2011;16:115-126.
腹腔内感染治疗指南
患者情况
CA, 胆道外, 稳定, 无 ESBL（+）菌感染的危险因素 CA, 胆道外, 稳定, 存在 ESBL（+）菌感染的危险因素 CA, 胆道外, 危重,无 ESBL（+）菌感染的危险因素 CA,胆道外, 危重,存在 ESBL（+）菌感染的危险因素 CA, 胆道,稳定, 无 ESBL（+）菌感染的危险因素 CA,胆道,稳定, 存在 ESBL（+）菌感染的危险因素 CA,胆道,危重, 无 ESBL（+）菌感染的危险因素 CA,胆道,危重, 存在 ESBL（+）菌感染的危险因素 稳定的医院获得性腹腔内感染
替加环素-重症感染副本
亚胺培南
美罗培南
头孢哌酮/舒巴坦
哌拉西林/他唑巴坦
替加环素
大肠埃希菌
0.2%
0.2%
14.5%
6.7%
0.0%
鲍曼不动杆菌
72.3%
71.6%
35.5%
73.0%
2.1%
MRSA
—
—
—
—
0.0%
肺炎克雷伯菌
2.9%
4.7%
12.3%
8.7%
2.9%
铜绿假单胞菌
29.3%
金黄色葡萄球菌
82
13.44
肺炎克雷伯杆菌
59
9.67
前四位的是鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、以及以肺炎克雷伯杆菌
数据来源：刘又宁 等 中华结核和呼吸杂志2012年10月第35卷第10期
腹部感染主要致病原 替加环素VS碳青霉烯
金葡菌中MRSA比例为87.76%；替加环素敏感率100%VS碳青霉烯天然耐药 鲍曼不动杆菌对替加环素敏感率约为95.77%VS碳青酶烯敏感率约为22.13% 肠杆菌科对替加环素敏感性97.92%VS碳青霉烯敏感性91.67% 铜绿假单胞菌对替加环素天然耐药VS碳青霉烯敏感性25.61%
从2008年-2011年进行的前瞻性、双盲、随机对照研究，共纳入患者274例，观察多利培南7天疗法（1g ，每8小时静注4个小时）和亚胺培南10天疗法（1g，每8小时静注1个小时）在革兰阴性杆菌引起的机械通气相关性肺炎（VAP）中的疗效。
仅约一半比例患者达到临床治愈，细菌清除率同样不超过50%
MITT人群(改良的意向治疗人群)在EOT时(治疗结束时)的临床治愈率
数据来源：2011年CARES数据分析
替加环素研究新进展_钟雪 (1)
收稿日期：2015-01-08基金项目：国家科技部十二五重大新药创制-心脑血管疾病新药临床评价技术平台研究课题(No. 2012ZX09303-008-002)。
作者简介：钟雪，女，生于1988年，在读博士研究生，主要研究抗菌药物耐药机制。
E-mail: bhdxzhongxue@*通迅作者，胡欣，E-mail: huxinbjyy@ ；程刚，E-mail: chenggang63@文章编号：1001-8689(2015)11-0870-06替加环素研究新进展钟雪1,2 陈东科2 许宏涛2 程刚1,* 胡欣2,*(1 沈阳药科大学药学院， 沈阳 110016；2 北京医院药学部，北京 100730)摘要: 近年来随着广谱抗生素、免疫抑制剂、侵入性治疗的广泛应用，多重耐药菌、甚至泛耐药菌比例不断上升，给临床抗感染治疗带来了巨大困难。
替加环素这一具有对抗多种耐药机制的新型抗生素于2011年进入我国市场，为临床有效抗感染治疗带来了新的希望，也被誉为抗感染的最后一道防线。
随着国内外科研人员及临床医生不断探索，近些年对替加环素的认识又有了新的突破。
我们综述了近年来替加环素的研究进展，包括体外抗菌活性测定，耐药机制及应对措施，超适应症用药及使用剂量。
关键词： 替加环素；体外抗菌活性；耐药机制；适应症；剂量中图分类号：R978.1 文献标志码：A New advance in the study of tigecyclineZhong Xue 1,2, Chen Dong-ke 2, Xu Hong-tao 2, Cheng Gang 1 and Hu Xin 2(1 Department of Pharmaceutics, School of Pharmcy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016;2 Department of Pharmacy, Beijing Hospital, Beijing 100730)Abstract There is a huge challenge for clinical anti-infection treatment due to the increasing proportion of multidrug-resistant pathogens and pan drug-resistant pathogens caused by wide application of broad spectrum antibiotics, immunosuppressants and invasive treatment in recent years. Tigecycline, a new antimicrobial agent which can overcome multiple resistance mechanisms, was launched in China in 2011. It has brought new hope for clinical effective anti-infection treatment, and it has been known as the last line for anti-infection treatment. We have a new breakthrough understanding of tigecycline with continuously exploring by the domestic and foreign researchers and clinicians in recent years. In this article we reviewed advance of tigecycline in recent years, including antibacterial activity test in vitro , resistance mechanism and solutions, super indication and dosage.Key words Tigecycline; Susceptibility testing; Drug-resistance mechanism; Indication; Dosage 近年来耐药菌的检出率逐年增高，尤其是产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)和AmpC 酶肠杆菌属及泛耐药的肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的抗生素选择已成为世界抗感染治疗面临的严峻挑战。
四环素类的耐药机制与新药_替加环素的研究进展
膜结合,影响蛋白、DNA及RNA合成,使细胞膜破裂而导致细菌死亡。
对金葡菌包括M RSA、链球菌属、粪肠球菌具良好抗菌活性。
本品4mg/kg,每日一次,静滴7日后稳态血药浓度为57. 8m g/L,蛋白结合率为92%,消除半衰期为8.1h。
主要用于复杂性皮肤软组织感染。
常见不良反应为注射部位疼痛、恶心、呕吐、便秘、腹泻及头痛,少数患者可有肌酸磷酸激酶增高及肾功能异常。
推荐给药方案为4mg/kg、每日1次、静滴30m i n以上。
2.替加环素(ti g ecyc line,GAR-936) 属甘氨酰环素类(g l y cy lcy-cli ne),对革兰阳性菌包括M RSA、VRE及PRSP均具抗菌作用,对肠杆菌科细菌等革兰阴性杆菌亦具良好抗菌活性,对厌氧菌也有抗菌作用。
期临床试验表明,本品25m g或50m g,q12h (首剂加倍)静滴7-14日治疗复杂性皮肤软组织感染及腹腔感染,取得满意疗效。
主要不良反应为恶心、呕吐、腹痛及肝功能异常。
目前正进行 期临床试验。
四环素类的耐药机制与新药-替加环素的研究进展周黎明,赵妍妍(四川大学华西医学中心基础药理教研室,四川成都 610041)四环素类是由链霉菌产生或经半合成制取的一类碱性广谱抗生素。
1948年发现第一种四环素类--金霉素(aureo m yc i n)至今,其家族成员还包括天然品:土霉素、地美环素等,和半合成品:多西环素、米诺环素、美他环素等。
该类抗生素具有共同的氢化骈四苯的基本母核,仅在5、6、7位上的取代基不同。
其抗菌机制是通过阻止氨基酰t RNA进入核糖体A位而抑制细菌蛋白质合成。
四环素类抗生素的抗菌谱广,能抑制包括G+和G-菌,还有如衣原体、支原体、立克次体及原虫(原生性寄生虫)等非典型性微生物的生长。
这类药物有良好的抗微生物特性以及不出现严重不良反应,使其被广泛用于人感染性疾病的治疗。
然而,随着临床上四环素类耐药菌的大量产生,目前这类药物的使用逐渐减少。
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肠杆菌科细菌替加环素耐药机制研究
肠杆菌科细菌,包括肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,是当今世界范围内出现的引起院内感染的重要病原体。
替加环素因其良好的抗菌活性和临床使用的安全性,是目前国内外用于应对碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的首选抗菌药物。
近年来随着替加环素的广泛使用,关于肠杆菌科细菌替加环素耐药的报道逐年增多,尤其是肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对替加环素的耐药率也呈逐年上升趋势,而现有的研究并不能合理解释肠杆菌科细菌对替加环素耐药的原因。
本研究通过两部分内容,探讨了肠杆菌科细菌对替加环素耐药的主要机制,并深入探索了肠杆菌科细菌替加环素耐药的新机制。
第一部分,主要研究产KPC肺炎克雷伯菌临床菌株对替加环素的敏感性以及探索RND型外排泵在肺炎克雷伯菌替加环素耐药中所起的作用。
我们共收集了215株产KPC肺炎克雷伯菌临床菌株,通过微量肉汤稀释法测定这些菌株的替加环素最低抑菌浓度(MIC);挑选替加环素耐药菌株,使用外排泵抑制剂探讨外排泵在这些菌株替加环素耐药中所起的作用;通过荧光定量PCR检测RND型外排泵基因acrB和oqxB以及它们的转录调节因子(ramA、marA、soxS和rarA)的表达并分析这些基因与替加环素MIC的相关性。
结果显示:215株产KPC肺炎克雷伯菌中有24株对替加环素耐药(MIC≥
4mg/L,EUCAST标准),耐药率为11.2%。
而外排泵抑制剂NMP可有效恢复上述菌株对替加环素的敏感性(91.7%的菌株恢复敏感)。
荧光定量PCR结果显示外排泵基因acrB的表达量与替加环素的MIC呈正相关关系(P<0.05)。
此外,我们还在3株耐药菌株中发现ramA高表达现象,进一步研究发现这些菌株均存在ramR突变。
对其中一株ramR突变引起基因表达终止的菌株进行野生型ramR回补,回补后的菌株恢复对替加环素的敏感性,同时ramA和acrB的表达均受到抑制。
本研究结果表明:RND型外排泵AcrAB-TolC在肺炎克雷伯菌临床菌株替加环素耐药中起着关键的作用,它的表达量和细菌替加环素MIC呈正相关关系(P<0.05);同时我们发现ramR基因的突变进而引起ramA基因和外排泵AcrAB的高表达是肺炎克雷伯菌临床菌株替加环素耐药的主要机制之一。
第二部分,通过基因敲除、体外诱导等技术探索了大肠埃希菌替加环素耐药的新机制。
我们利用Red重组系统,进行基因敲除。
以标准菌株大肠埃希菌ATCC 25922为亲本菌株,构建了大肠埃希菌外排泵AcrAB敲除株25922△acrAB,然后以ATCC 25922和25922△acrAB为亲本菌株进行替加环素体外诱导实验,获得耐药菌株25922△acrAB-TGC8和25922-TGC8。
对耐药菌株和亲本菌株进行全基因组测序,并通过比较基因组学数据分析方法寻找突变基因,发现在25922△acrAB-TGC8和25922-TGC8中均存在mlaA基因突变,而随后的基因敲除和回补实验亦证明mlaA基因的突变可以导致大肠埃希菌替加环素的MIC升高8倍。
进一步研究表明,在菌株25922-TGC8中该细菌对替加环素耐药是Mla系统、外排泵AcrAB和核糖体蛋白变异三种机制共同作用的结果,最终使菌株对替加环素的MIC从0.125mg/L上升到8mg/L(FDA耐药标准)。
因为Mla系统、外排泵AcrAB 和核糖体蛋白均由细菌染色体编码,当细菌在替加环素药物选择压力的作用下,上述基因易发生突变,进而导致替加环素耐药的发生,可能是对肠杆菌科细菌在替加环素治疗过程中容易从敏感发展成为耐药较为合理的解释。