实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量
实验四斐林试剂法法测定还原糖含量
实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量一、实验目的：掌握园艺产品中糖的测定方法。
二、实验原理利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。
非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。
三、试剂与材料1、斐林试剂甲：加水溶解并定容至1000ml；乙：346g酒石酸钾钠+100gNaOH加水溶解并定容至1000ml；2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100ml，棕色瓶保存；3、%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000ml；4、碱式滴定管；5、电炉，各种玻璃器皿。
四、操作方法1、斐林试剂标定取甲液5ml加入5ml乙液中，置于250ml三角瓶中，加入水10ml，从滴定管中加入%的标准葡萄糖若干毫升（约23ml）。
（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在－。
电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。
记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1min内完成。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）2、样品滴定预备试验同上法取斐林试剂，加10ml样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用%葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录耗用的葡萄糖量为V1。
3、样品滴定同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释)，补加（V0-V1）ml水，并从滴定管中预先加入（V1-1）ml %葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。
斐林试剂实验报告
一、实验目的1. 了解斐林试剂的配制方法及原理。
2. 掌握斐林试剂鉴定还原糖的实验操作步骤。
3. 熟悉还原糖鉴定实验的结果观察与分析。
二、实验原理斐林试剂是一种用于鉴定还原糖的化学试剂，由硫酸铜溶液和氢氧化钠溶液混合而成。
还原糖含有醛基，具有还原性，可以还原斐林试剂中的铜离子（Cu2+）为亚铜离子（Cu+），生成砖红色沉淀。
本实验以葡萄糖为还原糖，观察其与斐林试剂反应生成的沉淀，从而鉴定还原糖的存在。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：试管、试管架、烧杯、酒精灯、滴管、水浴锅、温度计2. 试剂：斐林试剂A（硫酸铜溶液）、斐林试剂B（氢氧化钠溶液）、葡萄糖溶液、蒸馏水四、实验步骤1. 准备斐林试剂：取等体积的斐林试剂A和B混合，配制成斐林试剂。
2. 样品处理：取一定量的葡萄糖溶液，加入试管中。
3. 加入斐林试剂：向葡萄糖溶液中加入等体积的斐林试剂，摇匀。
4. 水浴加热：将试管放入水浴锅中，加热至50-60℃，保持5-10分钟。
5. 观察结果：观察溶液颜色变化，记录沉淀生成情况。
五、实验结果与分析1. 实验现象：葡萄糖溶液加入斐林试剂后，加热过程中溶液颜色由浅蓝色变为棕色，最终生成砖红色沉淀。
2. 结果分析：葡萄糖溶液与斐林试剂反应生成砖红色沉淀，说明葡萄糖中含有醛基，具有还原性，属于还原糖。
六、实验结论通过本实验，我们成功掌握了斐林试剂鉴定还原糖的实验操作步骤和结果观察方法。
实验结果表明，葡萄糖溶液与斐林试剂反应生成砖红色沉淀，证实了葡萄糖是一种还原糖。
七、实验注意事项1. 斐林试剂应现配现用，避免长时间放置导致试剂失效。
2. 加热过程中注意控制温度，避免过高温度导致沉淀生成过快，影响实验结果。
3. 实验过程中，操作要规范，避免污染试剂。
八、实验拓展1. 探究其他还原糖（如果糖、麦芽糖）与斐林试剂的反应现象。
2. 比较不同浓度还原糖与斐林试剂反应的结果。
3. 研究斐林试剂在不同实验条件下的灵敏度。
食品中还原糖含量的测定-直接滴定法
• 3.试剂：
– 硫酸铜（CuSO4 · 5H2O） – 次甲基蓝 -碱性酒石酸铜甲液（费林试剂甲液） – 酒石酸钾钠 – 亚铁氰化钾 -碱性酒石酸铜乙液（费林试剂乙液） – 乙酸锌 – 冰乙酸 -乙酸锌溶液 – 葡萄糖 -葡萄糖标准溶液（1mg/ mL） – 氢氧化钠 -氢氧化钠溶液 – 盐酸
四、实验步骤
• 2. 碱性酒石酸铜溶液的标定 – 吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置 于150mL锥形瓶中（甲液、乙液混合后生成氧 化亚铜沉淀，因此，应将甲液加入到乙液，使 生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10mL、玻璃 珠2粒，从滴定管中滴加9mL葡萄糖标准溶液， 控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速 度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚 好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总 体积。同法平行操作三份，取其平均值，计算 每10mL（甲液、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶 液相当于葡萄糖的质量（mg）。
• 4. 样品溶液的测定
– 吸取5.0mL碱性酒石酸铜溶液甲液及5.0mL乙 液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL、玻璃 珠2粒，从滴定管中滴加比预测体积少1mL的 样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸以以每 两秒1滴的速度滴定至终点。记录样液消耗的 体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。
• 1. 样品处理
– 汽水等含CO2的饮料-雪碧
• 吸取10mL样品置于蒸发皿中，在水浴上除去CO2后， 移入250mL容量瓶，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入 容量瓶中，加水至刻度，混匀后备用。
– 酒精饮料-啤酒
• 吸取10mL样品，置于蒸发皿中，用1mol/L氢氧化钠 溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积的1/4后， 移入100 mL容量瓶中，加入50 mL水，摇匀后慢慢 加入5 mL乙酸锌溶液和5 mL 10.6%亚铁氰化钾溶液， 加水至刻度，摇匀。静置30min，用干燥滤纸过滤， 滤液备用。
斐林试剂鉴定还原糖
斐林试剂鉴定还原糖概述还原糖是一类具有还原性的糖类物质，它们能够将还原剂还原成相应的醇。
斐林试剂是一种常用于鉴定还原糖的试剂，通过与还原糖发生化学反应，产生深红色沉淀来进行鉴定。
本文将介绍斐林试剂的制备方法以及鉴定还原糖的步骤。
斐林试剂的制备方法材料：•斐林试剂A：0.5%苯腈甲醇溶液•斐林试剂B：40%次氯酸钠溶液•斐林试剂C：20%三氯乙酸溶液•斐林试剂D：5%硫酸溶液步骤：1.取0.5克苯腈加入100毫升甲醇中，搅拌溶解得到斐林试剂A。
2.将40克次氯酸钠溶解在100毫升水中，得到斐林试剂B。
3.取20克三氯乙酸加入到100毫升水中，得到斐林试剂C。
4.取5克硫酸加入到100毫升水中，得到斐林试剂D。
5.将制备好的斐林试剂A、斐林试剂B、斐林试剂C、斐林试剂D按照1:1:1:1的体积比例混合，得到斐林试剂。
鉴定还原糖的步骤步骤1：制备样品溶液将待测的还原糖样品加入适量的蒸馏水中，充分溶解得到样品溶液。
步骤2：加入斐林试剂取一定量的样品溶液，加入适量的斐林试剂，充分混合。
步骤3：观察反应结果观察反应体系中是否出现深红色沉淀。
如果出现深红色沉淀，则说明样品中存在还原糖。
步骤4：对照实验同时进行对照实验，不加入还原糖样品，其他步骤与待测样品相同，用以确认实验结果的准确性。
注意事项1.使用斐林试剂时需注意安全，避免接触皮肤和眼睛，避免吸入其蒸气。
2.实验器材应干净无杂质，以免干扰实验结果。
3.实验过程需严格按照步骤操作，避免误差的发生。
结论斐林试剂是一种常用的鉴定还原糖的试剂，通过与还原糖发生化学反应，产生深红色沉淀来进行鉴定。
制备斐林试剂需将斐林试剂A、斐林试剂B、斐林试剂C、斐林试剂D按照1:1:1:1的体积比例混合。
通过对样品溶液加入斐林试剂并观察是否产生深红色沉淀，可以判断样品中是否存在还原糖。
实验过程中需注意安全，并且进行对照实验以确保结果的准确性。
实验四斐林试剂法法测定还原糖含量
实验四斐林试剂法测定果品蔬菜中还原糖含量一、实验目的：掌握园艺产品中糖的测定方法。
二、实验原理利用糖的还原性，与斐林试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价铜，进行氧化还原反应，而进行测定。
非还原糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量，计算出样品还原糖量。
三、试剂与材料1、斐林试剂甲：69.3g 4.5H2O加水溶解并定容至1000；乙：346g酒石酸钾钠+100加水溶解并定容至1000；2、1%次甲基蓝，1g次甲基蓝加水溶解并定容至100，棕色瓶保存；3、0.2%标准葡萄糖，2g 105℃烘干到恒重的葡萄糖加水定容到1000；4、碱式滴定管；5、电炉，各种玻璃器皿。
四、操作方法1、斐林试剂标定取甲液5加入5乙液中，置于250三角瓶中，加入水10，从滴定管中加入0.2%的标准葡萄糖若干毫升（约23）。
（量控制在后滴定时消耗葡萄糖在0.5－1.0)。
电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，用0.2%标准葡萄糖滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀，溶液清亮为终点止。
记录耗用的葡萄糖量为V0，必须在1内完成。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）2、样品滴定预备试验同上法取斐林试剂，加10样品液，摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录耗用的葡萄糖量为V1。
3、样品滴定同上法吸取斐林试剂加10样品液(预先稀释)，补加（V01）水，并从滴定管中预先加入（V1-1）0.2%葡萄糖，摇匀至电炉上加热至沸，保持2微沸，加入2滴1%次甲基蓝，继续用葡萄糖滴定至蓝色消失。
记录消耗的标准葡萄糖体积为V毫升。
还原糖实验报告
一、实验目的1. 掌握还原糖的化学性质及其鉴定方法。
2. 熟悉还原糖检测的实验原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解还原糖在生物体内的作用和重要性。
二、实验原理还原糖是一类具有游离醛基或酮基的糖类，如葡萄糖、果糖等。
在碱性条件下，还原糖可以与斐林试剂发生反应，生成砖红色的沉淀。
斐林试剂由氢氧化钠和硫酸铜溶液组成，其中氢氧化钠提供碱性环境，硫酸铜与还原糖反应生成氧化亚铜，氧化亚铜在还原糖的作用下被还原成砖红色的沉淀。
三、实验材料1. 样品：苹果汁、梨汁、葡萄糖标准溶液、蔗糖标准溶液。
2. 试剂：斐林试剂（甲液：质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液，乙液：质量浓度为0.05g/ml的CuSO4溶液）、蒸馏水、滴管、试管、试管架、酒精灯、石棉网、火柴。
四、实验步骤1. 样品处理：取一定量的苹果汁、梨汁，分别用蒸馏水稀释至适当的浓度。
2. 配制斐林试剂：将甲液和乙液按1:1的比例混合均匀。
3. 检测还原糖：a. 取三支试管，分别加入1mL稀释后的苹果汁、梨汁和葡萄糖标准溶液。
b. 向每支试管中加入1mL斐林试剂，充分混合。
c. 将试管放入水浴锅中加热2分钟，观察颜色变化。
4. 结果判断：a. 若出现砖红色沉淀，则说明样品中含有还原糖。
b. 比较不同样品的颜色深浅，可大致判断还原糖的含量。
五、实验结果与分析1. 苹果汁、梨汁和葡萄糖标准溶液均出现砖红色沉淀，说明这三种样品均含有还原糖。
2. 苹果汁的颜色最深，梨汁次之，葡萄糖标准溶液颜色最浅。
根据颜色深浅，可判断苹果汁中还原糖含量最高，梨汁次之，葡萄糖标准溶液含量最低。
六、实验讨论1. 还原糖在生物体内具有重要的生理作用，如提供能量、参与细胞信号传导等。
2. 本实验采用斐林试剂检测还原糖，操作简单，结果直观。
但斐林试剂对样品的浓度要求较高，需预先进行稀释。
3. 在实验过程中，应严格控制水浴加热的温度和时间，以确保实验结果的准确性。
七、实验结论1. 本实验成功检测了苹果汁、梨汁和葡萄糖标准溶液中的还原糖。
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备1)斐林试剂甲液称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42滤2)斐林实际乙液分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤B斐林试剂标定精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，mlG——葡萄糖的质量，gV——葡萄糖定容体积，250mlC测定步骤称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算还原糖含量按下式计算还原糖(%)=100RV/WG式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;G——样品质量，g;V——葡萄糖定容体积，250ml。
还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]
![还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]](https://img.taocdn.com/s3/m/73e5e828cec789eb172ded630b1c59eef8c79ab9.png)
还原糖的测定实验报告[生物化学实验报告]实验一糖类的性质实验〔一〕糖类的颜色反响一、实验目的1、了解糖类某些颜色反响的原理。
2、学习应用糖的颜色反响鉴别糖类的方法。
二、颜色反响〔一〕α-萘酚反响1、原理糖在浓无机酸〔硫酸、盐酸〕作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反响均呈阳性，故此反响不是糖类的特异反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100mL，贮于棕色瓶内。
用前配制。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL1％淀粉溶液100mL0.1％糠醛溶液100mL浓硫酸500mL4、实验操作取5支试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1mL。
再向5支试管中各参加2滴莫氏试剂，充分混合。
倾斜试管，小心地沿试管壁参加浓硫酸1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。
观察记录各管颜色。
〔二〕间苯二酚反响1、原理在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反响是酮醣的特异反响。
醛糖在同样条件下呈色反响缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反响。
实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反响。
2、器材试管及试管架，滴管3、试剂塞氏试剂：0.05％间苯二酚－盐酸溶液1000mL，称取间苯二酚0.05g 溶于30mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000mL。
1％葡萄糖溶液100mL1％果糖溶液100mL1％蔗糖溶液100mL4、实验操作取3试管，分别参加1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5mL。
再向3支试管中各参加塞氏试剂5mL，充分混合。
将试管同时放入沸水浴中，观察记录各管颜色。
(二)糖类的复原作用一、实验目的1、理解并掌握糖类的复原性质；2、学习常用的鉴定糖类复原性的方法。
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B 电炉上加热至沸，并保持微沸2分钟，加 2滴1%次甲基蓝溶液，趁沸以每两秒1滴 的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用0.2% 标准G滴定至蓝色消失，有红棕色沉淀， 溶液清亮为终点止。记录耗用的G量为V0, 必须在1min内完成。
注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢 复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶 液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
3、0.2%标准G 2gG105℃烘干到恒重加水到 1000ml 2000ml/班
4、碱式滴定管
5、样品溶液：待测G液
样品1：稀释20倍，1000ml /班 样品2：稀释50倍，1000ml /班
6、电炉
三、操作方法
1、斐林试剂标定
A 取甲液5ml+乙液5ml，（注意：甲液与乙液混 合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液， 使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶）置于250ml 三角瓶中，加入10ml水，并从滴定管中加入 0.2%的标准G若干毫升（约23ml） 。（量控 制在后滴定时消耗G在0.5－1.0ml)
* n
五、注意事项
本方法测定的是一类具有还原性质的糖，包 括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结 果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示，所以 不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如 果已知样品中只含有某一种糖，如乳制品中 的乳糖，则可以认为还原糖=某糖。
分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制 标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液，所消 耗标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原 糖，在物化性质上仍有所差别，所以还原糖的结 果只是反映样品整体情况，并不完全等于各还原 糖含量之和。如果已知样品只含有某种还原糖， 则应以该还原糖做标准品，结果为该还原糖的含 量。如果样品中还原糖的成分未知，或为多种还 原糖的混合物，则以某种还原糖做标准品，结果 以该还原糖计，但不代表该糖的真实含量。
剂，反应的终点可用次甲基蓝作指示
剂，在碱性、沸腾环境下还原呈无色。
根据斐林试剂完全还原所需的还原糖
量，计算出样品还原糖量。
二、试剂与材料
1、斐林试剂
甲 69.3g CuSO4.5H2O 1000ml 50ml/组
乙
346g 酒石酸钾钠+100gNaOH 1000ml 50ml/组
2、1%次甲基蓝 1g次甲基蓝+100ml水/班 棕色瓶保存
四、结果计算
还原糖含量(以G计) （ g/ml) =（Vo-V) *0.002 *1/10 式中Vo-------- 斐林试剂标定值，ml V--------- 样品糖液测定值，ml 0.002----- 标准GS液浓度，g/ml 10-------- 样品糖液体积，ml n--------- 样品稀释倍数
五、分析讨论
六、思考题： 1、查阅资料还原糖测定检测方 法有哪些？其原理是什么？ 2、总结本实验方法检测还原糖 应注意加10ml样品液， 摇匀于电炉上加热至沸，保持微沸2分 钟，加2滴1%次甲基蓝，用0.2%G滴定至 蓝色消失。记录耗用的G量为V1
3、样品中还原糖测定
同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预 先稀释)，补加（V0—V1）ml水，并从滴定管 中预先加入（V1-1）ml 0.2%G，摇匀至电炉 上加热至沸，保持2min微沸，加入2滴1%次 甲基蓝，继续用G滴定至蓝色消失。记录消 耗的标准G体积为V毫升。
实验一 斐林试剂置换法测定还原糖的
含量
一、实验原理
糖类包括多糖、双糖和单糖，其中单糖和某 些双糖具有游离的羰基，称为还原糖，多糖 和蔗糖无还原性。利用糖的还原性，与斐林 试剂（氧化剂）中的二价铜离子还原为一价 铜，进行氧化还原反应，而进行测定.非还原 糖必须转化为还原糖，再进行测定。
斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化