细菌革兰氏染色技术.ppt
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《革兰氏染色》课件
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该方法基于细菌细胞壁的构造和成分 差异，通过染色剂对细菌细胞壁的吸 附和渗透作用，显示出不同的颜色， 从而进行鉴别。
革兰氏染色中使用的试剂及其作用
结晶紫
用于初步染色，能与细 胞壁结合，形成不溶性
复合物。
碘液
用于加强结晶紫与细胞 壁的结合，使染色更明
显。
酒精
脱色剂，去除染料与细 胞壁结合的复合物，使
染色
结晶紫染色
将结晶紫染液滴加在载玻片上，覆盖 菌体，染色1-2分钟。
冲洗
用吸水纸吸去多余染液，用清水轻轻 冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
水洗和脱色
水洗
用流水冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
脱色
将载玻片放入脱色液中染液滴加在载玻片上，覆盖菌体，复染1-2分钟。
色或粉红色。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片
将待染色的菌体轻轻涂布在载玻 片上，确保菌体均匀分布。
干燥
将涂有菌体的载玻片放在室温下 自然干燥，避免强烈气流或直接 阳光照射。
固定
火焰固定
通过短时间轻触载玻片边缘，用火焰迅速固定菌体，使其与载玻片粘附。
冷却
将固定后的载玻片放在干净的桌面上自然冷却。
染色时间
染色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
脱色时间
脱色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
染色方法
不同的染色方法可能会影响染 色效果和观察结果。
05
革兰氏染色的应用和意 义
在医学诊断中的应用
01
鉴别细菌种类
革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法之一，通过染色结果的不同可以
将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，有助于医生对感染进
该方法基于细菌细胞壁的构造和成分 差异，通过染色剂对细菌细胞壁的吸 附和渗透作用，显示出不同的颜色， 从而进行鉴别。
革兰氏染色中使用的试剂及其作用
结晶紫
用于初步染色，能与细 胞壁结合，形成不溶性
复合物。
碘液
用于加强结晶紫与细胞 壁的结合，使染色更明
显。
酒精
脱色剂，去除染料与细 胞壁结合的复合物，使
染色
结晶紫染色
将结晶紫染液滴加在载玻片上，覆盖 菌体，染色1-2分钟。
冲洗
用吸水纸吸去多余染液，用清水轻轻 冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
水洗和脱色
水洗
用流水冲洗载玻片，洗去未结合的染料。
脱色
将载玻片放入脱色液中染液滴加在载玻片上，覆盖菌体，复染1-2分钟。
色或粉红色。
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片
将待染色的菌体轻轻涂布在载玻 片上，确保菌体均匀分布。
干燥
将涂有菌体的载玻片放在室温下 自然干燥，避免强烈气流或直接 阳光照射。
固定
火焰固定
通过短时间轻触载玻片边缘，用火焰迅速固定菌体，使其与载玻片粘附。
冷却
将固定后的载玻片放在干净的桌面上自然冷却。
染色时间
染色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
脱色时间
脱色时间过长或过短都会影响 染色效果和观察结果。
染色方法
不同的染色方法可能会影响染 色效果和观察结果。
05
革兰氏染色的应用和意 义
在医学诊断中的应用
01
鉴别细菌种类
革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法之一，通过染色结果的不同可以
将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，有助于医生对感染进
细菌的革兰染色法ppt课件
紫色 仍为紫色 脱去紫色 红色
三、实验材料 1.菌种
（1）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） （2）大肠杆菌（Escherichia coli）
培养24h，用于革兰氏染色。 2.染色液和试剂
草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、95%酒精、番红染液、 生理盐水、乙醚-乙醇溶液、香柏油。 3.器材 废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显 微镜等。
实验二、细菌的革兰氏染色
一、实验目的 1. 掌握细菌革兰氏染色原理及方法、巩固油
镜的使用； 2. 初步掌握无菌操作技术。
二、实验原理 革兰氏染色法（Gram, 丹麦，1884年） （1）是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将
细菌分为G+菌和G-菌。 （2）机理
主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。 ➢ G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、
肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色； ➢ G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，
肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。
革兰氏染色程序和结果
步骤 方法
结果 阳性（G+） 阴性（G-）
初染 结晶紫 30s
紫色
媒染剂 碘液 30s
仍为紫色
脱色 95％乙醇 30s
保持紫色
复染 番红（或复红）30～60s 仍显紫色
四、实验方法
1.革兰氏染色 （1）步骤
取一干净载玻片→→在两端各加一滴生理盐水→→无 菌操作取菌种→→涂于生理盐水中（成菌膜） →→自 然干燥→→火焰固定→→初染（结晶紫，1min） →→水洗→→媒染（碘液，1min） →→水洗→→脱 色（乙醇，20-30s） →→水洗→→复染（蕃红， 2min） →→水洗→→自然干燥→→观察。
三、实验材料 1.菌种
（1）枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis） （2）大肠杆菌（Escherichia coli）
培养24h，用于革兰氏染色。 2.染色液和试剂
草酸铵结晶紫染液、卢革氏碘液、95%酒精、番红染液、 生理盐水、乙醚-乙醇溶液、香柏油。 3.器材 废液缸、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显 微镜等。
实验二、细菌的革兰氏染色
一、实验目的 1. 掌握细菌革兰氏染色原理及方法、巩固油
镜的使用； 2. 初步掌握无菌操作技术。
二、实验原理 革兰氏染色法（Gram, 丹麦，1884年） （1）是细菌学上最常用的鉴别染色法，染色后，可将
细菌分为G+菌和G-菌。 （2）机理
主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。 ➢ G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、
肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色； ➢ G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，
肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。
革兰氏染色程序和结果
步骤 方法
结果 阳性（G+） 阴性（G-）
初染 结晶紫 30s
紫色
媒染剂 碘液 30s
仍为紫色
脱色 95％乙醇 30s
保持紫色
复染 番红（或复红）30～60s 仍显紫色
四、实验方法
1.革兰氏染色 （1）步骤
取一干净载玻片→→在两端各加一滴生理盐水→→无 菌操作取菌种→→涂于生理盐水中（成菌膜） →→自 然干燥→→火焰固定→→初染（结晶紫，1min） →→水洗→→媒染（碘液，1min） →→水洗→→脱 色（乙醇，20-30s） →→水洗→→复染（蕃红， 2min） →→水洗→→自然干燥→→观察。
《革兰氏染色法》课件
快速鉴定
可以快速鉴定临床样本中细菌 的种类，帮助医生开出正确的 用药方案。
菌落鉴定
对于未知菌落的鉴定，革兰氏 染色法是最常用的分类方法之 一。
监测传染病
在监测传染病方面，革兰氏染 色法可以定位不同类型的病原 细菌，并帮助实现区域或全球 性疫情监测。
革兰氏染色法的优缺点
优点
快速1、简单方便2、准确性高3
《革兰氏染色法》PPT课 件
本课程将深入介绍革兰氏染色法，并探讨其在现代细菌学中的应用。您将会 了解到该技术的历史、原理以及与其他检测方法的比较。
革兰氏染色蒂安·革兰于1884年 发明。
2 改进
3 应用
后来，该方法被不断改进， 特别是发展了一种逆转染 色的方法，可以检测兼性 杆菌等细菌。
缺点
一次只能染色一种菌2、对某些细菌检测效果差 3、需要显微镜等专业处理设备1
革兰氏染色法与其他细菌检测方法的比 较
1
PCR法
可以检测DNA序列比革兰氏染色法更具特异性1，但需要高昂的设备和消耗品，以及专 业的操作技能3。
2
荧光显微镜观察法
可用于活菌的鉴定3，但不能谈及细胞壁结构，也较为耗时2。
3
革兰氏染色法成为一项必 备技术，并促进了细菌检 测、临床诊断和医学研究 的发展。
革兰氏染色法的原理和步骤
原理 步骤
基于细胞壁的结构差异，将菌落分为革兰阳性和 革兰阴性两类。
准备细菌涂片，使用紫色染料固定，用酒精漂洗 去除过量染料，再用红色染料染色。经过显微镜 观察，可以分辨细菌类型。
革兰氏染色法在细菌检测中的应用
ELISA法
对于临床诊断中需要检测抗原和抗体的病种2，效果较好。但由于存在假阳性和假阴性 结果，不能作为最终的诊断依据1。
《革兰氏染色法》课件
将脱色后的涂片用番红染液复染，时间约为1-2分钟。番红是 一种酸性染料，可以和蛋白质结合，使菌体或细胞呈现红色 。
番红复染的作用是使菌体或细胞呈现红色，使其更加明显， 有助于观察和鉴别。同时，番红还可以与结晶紫形成鲜明的 对比，使观察更加准确。
冲洗与干燥
• 将染色完成的涂片用清水冲洗干净，然后晾干或用吸水纸吸干 水分。冲洗的目的是去除染色过程中残留的染料和媒染剂等物 质，以免对观察造成干扰。干燥的目的是使涂片固定，以便于 保存和观察。
背景
革兰氏染色法的发明对于细菌学的发展起到了重要的推动作 用，为后续的细菌分类、疾病诊断和治疗提供了有力支持。
染色原理
原理
革兰氏染色法的染色原理主要是通过 一系列的脱色处理和复染，使细菌着 色，从而根据颜色差异将细菌分为革 兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
操作流程
革兰氏染色法通常包括涂片、脱色、 媒染、染色和复染等步骤，通过这些 步骤的组合和调整，可以实现对不同 类型细菌的准确鉴别。
革兰氏染色法的结
03
果与意义
革兰氏阳性菌与阴性菌的染色特性
革兰氏阳性菌
被染成紫色或蓝紫色，不易被酒 精脱色，有厚重的革兰氏染色反 应。
革兰氏阴性菌
被染成红色或淡红色，易被酒精 脱色，有较弱的革兰氏染色反应 。
染色结果的分析与解读
根据染色结果判断细菌的种类和特性，有助于临床诊断和 治疗。
通过观察染色后细菌的形态和排列，可以初步判断细菌的 致病性。
重要性
革兰氏染色法对于临床医学、生物技术和食品工业等领域具有重要意义，能够 帮助科学家和医生快速准确地鉴别不同类型的细菌，从而采取相应的治疗和预 防措施。
发展历程与背景
发展历程
革兰氏染色法由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884 年发明，至今已有百余年历史。随着科学技术的不断进步， 该方法在操作流程和染料选择等方面不断得到优化和改进。
微生物实验二细菌的简单染色和革兰氏染色_图文_图文
染色结果
金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果
染色结果
大肠杆菌革兰氏染色结果
染色结果
金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果
四、实验结果
显微镜放大倍数＝物镜放大倍数×目镜放大倍数
绘图记录观察结果
思考题
1、在制作涂片中，为什么要进行固定这 一步？
2、革兰氏染色中哪一步关键，为什么？
革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳 性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁 的结构和组成不同决定的。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂 结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用 乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红 )复染。经此方法染色后，细胞保留初染剂 蓝紫色的细菌为革兰氏阳性菌；如果细胞 中初染剂被脱色剂洗脱而使细菌染上复染 剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌 。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。 3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。 4、染色：待玻片泠却后加结晶紫1-2滴于涂片上，覆盖涂
面染色1-2分钟。 5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的
水变无色为止（注：勿冲去菌体）。 6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。 7、镜检：油镜观察并绘图。
二、实验原理---简单染色
染色前必须固定细菌。其目的有二：一是 杀死细菌并使菌体粘附于玻片上；二是增 加其对染料的亲和力。常用的有加热和化 学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形。
二、实验原理---革兰氏染色
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家 ChristainGram氏创立的，革兰氏染色法可 将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。革兰氏染 色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
革兰氏染色课件PPT
复染
复染：将脱色后的涂片用复染液进行复染处理，以便更好地观察菌体或组织的形态和结构。
复染时应注意控制复染时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
冲洗和干燥
冲洗
将染色和脱色处理后的涂片用清 水冲洗干净，以便观察菌体或组 织的染色效果。
干燥
将冲洗干净的涂片放在干净的纸 巾上自然干燥，以便后续观察。
Part
固定时应注意控制火焰温度，避免过高或过低，以免影响 染色效果。
染色
染色：将涂片浸入革兰氏染色液中， 染色一定时间后取出晾干。
染色时应注意控制染色时间，避免过 长或过短，以免影响染色效果。
脱色
脱色：将染色后的涂片用脱色液进行脱色处理，以去除菌体或组织表面的色素。
脱色时应注意控制脱色时间，避免过长或过短，以免影响染色效果。
复染与初次染色要匹配
复染的颜色要与初次染色相匹配，以 便更好地观察染色效果。
其他注意事项
染色液要新鲜
染色液使用前要确保新鲜，过期 或变质的染色液会影响染色效果
。
避免交叉污染
在染色过程中要避免不同染色液之 间的交叉污染，以免影响染色结果 。
注意安全
染色过程中要注意安全，避免染色 液溅到皮肤或眼睛上，如不慎溅到 应立即用大量清水冲洗并及时就医 。
革兰氏染色还可以用于研究细菌的生 物学特性和分类学研究，有助于深入 了解细菌的生态学和进化关系。
Part
03
革兰氏染色的操作步骤
涂片
涂片：将待染色的菌体或组织薄而均匀地涂在洁净的玻片上，然后晾干或烘干， 以便后续染色。
涂片时应注意避免涂层过厚，以免影响染色效果。
固定
固定：将涂片在火焰上快速通过两次，使菌体或组织固定 在玻片上，以便后续染色。
细菌革兰氏染色PPT课件
6
• 实验原理
革兰氏阴性菌细胞壁结构图
2021/3/12
而革兰氏染色阴性 细菌肽聚糖层很薄，含 量少，脂肪含量高，经 乙醇处理后部分细胞壁 脂类可能被溶解并改变 其组织状态，细胞壁孔 径变大或通透性增加， 不能阻止溶剂透入，酒 精将结晶紫与碘的复合 物洗脱，细菌被脱色， 经复染后染成红色，
7
• 实验原理
3
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定
的重要性状。它是1884年由丹麦医师 Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且 还可将所有细菌区分为两大类：染色反 应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用 G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏 阴性细菌，用G-表示。革兰氏染色是细 菌学上最常用的鉴别染色法。
8
• 革兰氏染液
1、碱性染料 （美蓝、碱性复红、结晶紫 ） 2、媒染剂 （碘液 ） 3、脱色剂 （95%的乙醇） 4、复染液 （复红溶液、番红溶液、沙 黄溶液）
2021/3/12
9
• 染色程序
大肠 涂片: 液体培养基、固体培养基
金葡
干燥：自然干燥。
干燥
固定：酒精灯下固定3-4次。 （杀死细菌、粘附、改变通透性）
2021/3/12
4
• 实验材料
1.活材料：培养18-24h的大肠杆菌
2.染色液和试剂：结晶紫、卢哥氏碘液、 95%酒精、复红、二甲苯、香柏油。
2021/3/12
3.器材：无菌水、废液缸、洗瓶、载 玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、 显微镜。
5
• 实验原理
革兰氏阳性菌细胞壁结构图
2021/3/12
革兰氏染色阳性 细菌肽聚糖层厚， 含量多，经乙醇处 理后使之发生脱水 作用而使孔径缩小， 结晶紫与碘的复合 物保留在细胞内而 不被脱色，复染后 不着色，不留结晶 紫的颜色；
• 实验原理
革兰氏阴性菌细胞壁结构图
2021/3/12
而革兰氏染色阴性 细菌肽聚糖层很薄，含 量少，脂肪含量高，经 乙醇处理后部分细胞壁 脂类可能被溶解并改变 其组织状态，细胞壁孔 径变大或通透性增加， 不能阻止溶剂透入，酒 精将结晶紫与碘的复合 物洗脱，细菌被脱色， 经复染后染成红色，
7
• 实验原理
3
革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定
的重要性状。它是1884年由丹麦医师 Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态，而且 还可将所有细菌区分为两大类：染色反 应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用 G+表示；染色反应呈红色的称为革兰氏 阴性细菌，用G-表示。革兰氏染色是细 菌学上最常用的鉴别染色法。
8
• 革兰氏染液
1、碱性染料 （美蓝、碱性复红、结晶紫 ） 2、媒染剂 （碘液 ） 3、脱色剂 （95%的乙醇） 4、复染液 （复红溶液、番红溶液、沙 黄溶液）
2021/3/12
9
• 染色程序
大肠 涂片: 液体培养基、固体培养基
金葡
干燥：自然干燥。
干燥
固定：酒精灯下固定3-4次。 （杀死细菌、粘附、改变通透性）
2021/3/12
4
• 实验材料
1.活材料：培养18-24h的大肠杆菌
2.染色液和试剂：结晶紫、卢哥氏碘液、 95%酒精、复红、二甲苯、香柏油。
2021/3/12
3.器材：无菌水、废液缸、洗瓶、载 玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、 显微镜。
5
• 实验原理
革兰氏阳性菌细胞壁结构图
2021/3/12
革兰氏染色阳性 细菌肽聚糖层厚， 含量多，经乙醇处 理后使之发生脱水 作用而使孔径缩小， 结晶紫与碘的复合 物保留在细胞内而 不被脱色，复染后 不着色，不留结晶 紫的颜色；
实验二细菌革兰氏染色ppt课件
兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。 （3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。
五、思考题
1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰 氏阳性或阴性？
2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性 染料？
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色 成败的关键一步是什么？
crystal violet stain
wash with water
Counterstain wi在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱 色
时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足， 革
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
Heat fixing
Staining
实验二 细菌革兰氏染色
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色 技术和结果的正确性？
五、思考题
1、讲述革兰氏染色的原理并指出E.C和B.S分别属于革兰 氏阳性或阴性？
2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性 染料？
3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色 成败的关键一步是什么？
crystal violet stain
wash with water
Counterstain wi在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱 色
时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足， 革
占细胞壁干重的%
革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等
Heat fixing
Staining
实验二 细菌革兰氏染色
一、实验目的
学习微生物制片、染色的基本技术 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术 进一步观察细菌的基本形态
二、实验原理
C.Gram（革兰）于1884年 发明的一种鉴别不同类型 细菌的染色方法。
革兰氏染色
1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行初染
2、用碘溶液进行媒染，其作用是提高染料和细 胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。
4、当对未知菌进行革兰氏染色时，怎样能证明你的染色 技术和结果的正确性？