实验二 经口急性毒性试验 Acute Oral Toxicity
实验二 经口急性毒性LD50测定
实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。
一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。
根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。
据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。
以次类推，找出Dmin。
2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。
在确定组数后，按下列公式计算r。
1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。
剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。
急性经口毒性试验
二、急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本规范规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals ( No. 401, Feb. 1987 )USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines （Series 870.1100, Aug. 1998 )3 试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其它毒理学试验剂量的依据。
4 定义4.1 急性经口毒性(Acute oral toxicity)：一次或在24h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2 经口LD50（半数致死量，Medium lethal dose）：经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试物的重量(mg/kg或g/kg)来表示。
5 试验的基本原则以管饲法经口给予各试验组动物不同剂量的受试物，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行尸检。
本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。
6 试验方法6.1 受试物受试物应溶解或悬浮于适宜的介质中，建议首选水，其次是植物油(如玉米油)，或考虑使用其它介质（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）。
对非水溶性介质，应了解其毒理特性，否则应在试验前先确定其毒性。
每次经口染毒液体的最大容量取决于实验动物的大小，对啮齿类动物所给液体容量一般为1mL/100g，水溶液可至2mL/100g。
通过调整受试物溶液浓度使各剂量组经口染毒的容量一致。
经口急性毒性试验.
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
急性经口毒性试验 上下增减剂量法
附件12急性经口毒性试验上下增减剂量法Acute Oral Toxicity Test Up-and Down Procedure1 范围本方法规定了急性经口毒性试验上下增减剂量法（上下法）的基本原则、要求和方法。
本方法适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2 试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其他毒理学试验剂量的依据。
3 定义3.1 急性经口毒性acute oral toxicity一次或在24 h内多次经口给予实验动物受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
3.2 经口半数致死量（LD50）oral medium lethal dose经口一次给予受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试物的重量(mg/kg或g/kg)来表示。
3.3 延迟死亡delayed death设定的给药间隔（通常为48 h）内不引起受试动物死亡或出现濒死状态，但在14 d的观察期间内出现死亡。
3.4 剂量级数因子dose progression factor也称为剂量步进因子。
是指主试验中，当前剂量的一只动物存活或死亡时，下一只动物染毒剂量增加或降低倍数。
剂量级数因子建议为1/（估计的剂量-反应曲线斜率）的反对数。
默认的剂量级数因子为3.2，即0.5（1/2）的反对数。
3.5 限值剂量limit dose受试动物进行急性经口毒性试验的上限剂量（2000 mg/kg或5000 mg/kg）。
3.6 逆转reversal是指在某个染毒剂量下观察动物无反应，在下一个染毒剂量下观察动物有反应的现象，反之亦然（也就是前一个动物发生反应，后一个动物无反应）。
因此，一对不同的动物染毒反应情况产生一个逆转。
3.7 名义受试动物量nominal sample size是指受试动物的总数量按下列规则减去一定量动物数：（1）减去染毒序列开始时出现相同反应的最后1只动物之前的受试动物数量，（2）或减去第一次发生逆转的一对动物之前受试动物的数量。
急性经口毒性试验(二)
急性经口毒性试验（二）4.3.1.1 预实验按照受试物的性质和已知资料,选用下述办法：普通多采纳100mg/kg体重，1000mg/kg体重和10000mg/kg体重的剂量,各以2只～3只动物预试。
按照24h内死亡状况,估量LD50的可能范围，确定正式实验的剂量组。
也可容易地挺直采纳一个剂量，如215mg/kg体重,用5只动物预试。
观看2h内动物的中毒表现。
如中毒体征严峻,估量多数动物可能死亡，即可采纳低于215mg/kg体重的剂量系列进入正式实验;反之中毒体征较轻,则可采纳高于此剂量的剂量系列。
如有相应的文献资料时可不举行预试。
4.3.1.2 正式实验 4.3.1.2.1 动物数普通每组10只动物,雌雄各半。
4.3.1.2.2 常用剂量系列由于剂量间距较为小，所以结果较为精确。
普通实验时，可按照上述剂量系列设计5个组，即较本来的办法在最低剂量组以下或最高剂量组以上各增设一组，这样在查表时简单得出结果。
4.3.1.2.3 观看观看期内记录动物死亡数、死亡时光及中毒表现等,按照每组死亡动物数和所采纳的剂量系列，查表求得LD50。
4.3.2 限量法(Iiinit test) 4.3.2.1 适用范围该办法适用于有关资料显示毒性微小的或未显示毒性的受试物,赋予动物一定剂量的受试物,仍不浮现死亡。
4.3.2.2 动物数普通选20只动物,雌雄各半。
4.3.2.3 剂量普通选用剂量起码应为10.0g/kg体重，如剂量达不到10.0g/kg体重，则赋予动物最大剂量(最大用法浓度和最大灌胃体积)。
4.3.2.4 观看赋予受试物后，观看期内无动物死亡,则认为受试物对某种动物的经口急性毒性耐受剂量大于某一数值,其LD50大于该数值。
假如动物浮现死亡应挑选其他办法。
4.3.3 上-下法(up-down procedure,UDP) 4.3.3.1 适用范围该办法主要适用于纯度较高、毒性较大、摄入量小且在赋予受试物后动物1d～2d内死亡的受试物,对预期赋予受试物后动物在5d及以后死亡的受试物不适用。
(整理)经口毒性实验
急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本方法规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、技术和要求。
本方法适用于评价化学品的急性毒性作用。
2 规范性引用文件OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 401. Feb. 1987 ) OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 425. Feb. 2001 ) USEPA OPPTIS Health Effects Guideline (Series 870.1100 June 1996)3 试验目的3.1 检测化学品对实验动物的急性毒性作用和强度。
3.2 为亚急(慢)性等毒性试验提供剂量选择的依据。
3.3 试验结果可作为化学品急性毒性分级和标签标识。
４定义4.1 急性经口毒性(Acute Oral Toxicity): 一次或在24h内多次经口给予实验动物受试样品后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2 经口半数致死剂量（Oral Median Lethal Dose）: 经口一次或24h内多次经口给予受试样品后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试样品的质量(mg/kg bw或g/kg bw)来表示。
4.3 剂量-反应关系(Dose-response Relationship)：表示化学毒物的剂量与某一群体中质效应的发生率之间的关系。
5 试验基本原则以经口灌胃法给予各试验组动物不同剂量的受试样品，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行大体解剖。
本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。
6 试验方法6.1 受试样品的处理受试样品应溶解或悬浮于适宜的赋形剂中，（不溶性固体或颗粒状物质研磨、过100目筛）建议首选水或食用植物油（如玉米油）作溶剂，也可考虑使用其它赋形剂（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）等配成混悬液；不能配制成混悬液时，可配制成其它形式(如糊状物等)，但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。
实验二 经口急性毒性实验
实验二经口急性毒性实验一、实验目的1、通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。
2、通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。
二、实验原理：化学物经口染毒的方法是毒理学中重要的基本技术之一，经口急性毒性试验是研究化学物毒性效应的基本试验。
通过该实验学习化学物毒性试验的实验设计原则和掌握经口灌胃技术。
三、仪器、试剂与材料1、器材帆布手套、橡胶手套、电子天平、剪刀、大头针、小鼠鼠笼、泡沫塑料板、棉签、纱布、脱脂棉、小鼠灌胃针、1ml注射器、电子天平、动物体重秤等2、试剂敌百虫、苦味酸饱和溶液。
3、实验动物成年、健康的雌、雄小鼠50只。
四、实验内容与步骤1、实验动物的性别鉴定、编号、称重和分组参考实验一中动物性别鉴定、编号和分组方法，50只小鼠，雌雄各半，随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、五组，各小鼠用电子天平称重，以g为单位，小数点后保留一位数字。
2、确定染毒剂量：经预试验获得敌百虫0％～100％的致死剂量范围，由公式计算各组剂量公比值r：1/-r，根据公比值确定各组正式剂=n ab量。
a：最低组剂量，mg/kgb：最高组剂量，mg/kg3、配制毒物溶液准确称取敌百虫2024mg，溶解并稀释至10 mL，取5 mL置于容器中，供第五组染毒；加入5 mL溶剂，稀释后取出5 mL供第四组动物染毒；再加入5 mL溶剂，稀释后取出5 mL供第三组动物染毒用，依此类推，可配制成按1:0.5递减的各剂量组不同浓度的溶液。
4、计算每只动物实际灌胃体积每只小鼠实际灌胃量＝0.02 mL/g ×该小鼠体重g5、染毒（1）动物的禁食和复食：试验前，实验动物禁食过夜，不限制饮水，灌胃后2-3h后复食（2）灌胃操作技术：同实验一小鼠灌胃染毒法。
6、中毒体征和死亡情况观察染毒后观察和记录中毒体征及出现的时间、死亡数量和时间及死亡前的特征。
高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观察。
根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。
急性经口毒性实验
（2）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； （3）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼吸
深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； （4）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房
2020/4/24
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（二）剂量选择：
首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似 的化学物的LD50，以此值作为受试化学物的预期 毒性中值，即中间剂量组，再上下各推1-2 个
剂量组，进行预实验。
各剂量组的间距可根据LD50 计算方法要求按等 比级数或等差级数安排。
本实验用机率单位法计算LD50，要求按等比级数 排列，常用1：0.8，如敌敌畏的最高剂量为125 mg/kg，其次剂量组为125 mg/kg *0.8=100 mg/kg ，依次类推为80 、64 和51.2 mg/kg五 个剂量组。
各剂量组小鼠灌胃容量计算:
小鼠灌胃容量V ml=体重（g）×10ml/1000g
各剂量组小鼠染毒剂量:
小鼠染毒剂量= V ml ×各组的受试物浓度（mg/10ml)
2020/4/24
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（四）灌胃方法：
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后 皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹 部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化 道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器， 将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓 缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一 旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小 鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣 扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入， 以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。
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实习内容
试验动物的选择和性别鉴定。
试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。
急性毒性反应的观察和LD50计算。
实验材料
(一) 实验动物：健康成年小鼠或大鼠若干只。
(二) 器材 注射器(O.25，1，2，5ml)、吸管(0.1，0.2，0.5，1，2，
n—为设计的剂量组数；
求得值后以最低剂量组的剂量值加上一个即是第二个剂 量组的对数剂量，依次推至最高剂量组，查各自反对数 及得出各组剂量的真实值。
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
啮齿类动物急性毒性中毒主要观察内容 （1）
系统器官 中枢神经系统及神经肌肉系统 观察及检查项目 行为 动作 对各种刺激的反应 大脑及脊髓反射 肌肉紧张力 瞳孔大小 分泌 呼吸系统 鼻孔 呼吸性质和速率 流鼻涕 弛缓、困难、潮式呼吸 中毒后一般表现 改变姿态、叫声异常、不安、安静 震颤、运动失调、麻痹、惊撅、强制性动作 易兴奋、被动、缺乏知觉、知觉过敏 减弱、缺乏 强直、弛缓 扩大或缩小 流泪、出汗
规定：
余数：1、2、3、4、5、6分别对应A、B、C、D、E、F 组
实验动物调配
按上法分组后，A组有动物7只，B组7只，C组6只，D组与E组各2只，F 组6只。为了使每组动物数均为5只，需要根据随机分配的原则再选出2
只A组和1只C组动物给D组。B组选出2只，F组选出1只给E组。
表2 初步分组结果
小鼠（Mouse）
大鼠（Rat）
实验动物的称重
大、小鼠秤的感应量需在0.1g以下。 同一组内、同性别动物体重差异应
小于平均体重的10%。
不同组间同性别动物体重均值差异
应小于5%。
急性毒性实验一般使用体重为18-
22g的小鼠或/和180-220g大鼠。
实验动物编号的标记方法
颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）： 红色：0.5%中性红或品红溶液 黄色：3-5%苦味酸溶液（水） 80-90%苦味酸酒精饱和溶液 咖啡色：2%硝酸银
(2)、等容量稀释法
寇氏法
Karber法或平均致死量法，是依据剂量对数与死亡率呈S型
曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量；
此法简单，准确率高，但实验设计要求每个染毒组实验动
物数相同，各计量组距呈等比级数，死亡率呈常态分布，最 低剂量组死亡率<20%，最高剂量组>80%。
预实验
目的是为了确定正式实验的剂量范围。
黑色：煤焦油的酒精溶液
单 色 法
大小鼠标记方法（单色法n<10）
单色法标记原则：单色 法编大于10的号码时，
我们规定顺时针旋转，
后一位必需大于前一位 数，例如：可以编，12，
13，14……19，但不能
编10，11，20，21，22， 30，31，32，33，等， 以此类推。100以内最 大能编89号。
面向自己,沿着门牙左 边滑入
气管
By LASCO
食道
经皮染毒
注射途径染毒
吸收速率：
静脉注射>吸入染毒>肌肉注射>腹腔注射>皮下注射> 经口染毒>皮内注射>其他染毒途径如经皮等
受试物的配制
1、受试化学物的量取
(1)、称量法--固体化学物
(2)、吸量法--液体化学物
2、受试化学物的稀释
(1)、等浓度稀释法
实验二 经口急性毒性试验 Acute Oral Toxicity Test
Dept. of Toxicology School of Public Health Xinjiang Medical University
目的要求
掌握实验动物的常用染毒途径和方法。 掌握半数致死浓度的测定方法和结果评定。
出的各种实验动物灌胃量的极限是：小鼠O.5～1ml，大鼠
4～5m1。
一般是采用少量动物(2~3只为一组)，拉大组距，逐渐
缩小，找出受试物0%和100%死亡剂量。
正式试验
经预试验求出受试化学物的致死剂量范围(即死亡率10%90%的剂量范围)，再以下式求出正式试验的剂量组距(i) 值。
logLD90 - logLD10 i n -1
i—表示相邻的两个剂量组，剂量对数之差或相邻两组剂 量比值的对数值；
毒性分级 剧毒 高毒 中毒 低毒 微毒
1mg/kg < 22.50mg/kg < 50mg/kg 该化合物大鼠急性经口毒性为高毒
注意事项
灌胃染毒时要求动物保持空腹状态，因此染毒前应禁食
（不禁水）6～10小时。灌胃后至少2～3小时后才能喂食。 油剂比水溶液要求限制喂食的时间更长些。 相同剂量的受试物，若以不同浓度给药，死亡情况会有所 不同。常用的方法是将受试物体积固定，根据实验设计的 剂量将受试物配制成不同浓度的溶液进行灌胃。 通常灌胃体积以体重的1%～2%计算，最多不超过3%，即 每100g体重溜胃l～2m1，最多不超过3ml。根据实际经验得
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
3
4 5
21.7
26.1 31.3
1.3361
1.4161 1.4961
10
10 10
5
7 9
0.5
0.7 0.9
0.5
0.3 0.1
0.25
0.21 0.09
i=0.08
Σp=2.3
举例：LD50的计算——寇氏法
lg LD50 1.4961 0.08(2.3 0.5) 1.3521 0.16 0.25 0.21 0.09 S m 0.08 0.0213 10
分组成表3所示。雌性动物也按上法分组，然后将雌、雄动物合组进行试验。
表3 调配后30只动物随机分组
组别 A 1 14 鼠号 17 19 23 组别 D 4 9 鼠号 25 26 27
B
C
5
7
8
16
10
20
13
22
15
29
E
F
2
3
6
11
12
18
24
21
28
30
实验动物染毒途径和方法（示教）
常用的染毒途径： 经口染毒 经呼吸道染毒
m Xk i(p 0.5)
pq Sm i n
Xk ：最大剂量的对数值
举例：LD50的计算——寇氏法
表5 某化学物质小鼠经口染毒死亡情况 组别 1 2 剂量 mg/kg 15 18 对数 1.1761 1.2561 动物数 死亡数 死亡率 存活率 （只） （只） （p） （q） 10 10 0 2 0 0.2 1 0.8 p.q 0 0.16
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
lgLD50 及其95%可信限为1.3521±1.96×0.0213＝1.3521±0.0417 lgLD50 及其95%可信区间范围为22.50mg/kg(20.44~24.76mg/kg)
举例：LD50的计算——寇氏法
外源化学物急性毒性分级（WHO）
6 只大鼠吸入 大鼠一次经口 兔经皮 4hr，死亡 2～ 4 LD50(mg/kg) LD50） （mg/kg） 只的浓度 （ppm） <1 1～ 50～ 500～ 5000～ <10 10～ 100～ 1000～ 10000～ <5 5～ 44～ 350～ 2180～ 对人可能致死的估计量 g/kg <0.05 0.05～ 0.5～ 5～ >15 总量（g/60kg） 0.1 3 30 250 >1000
10m1)、容量瓶(10，25，50ml、烧杯(10，25，50ml)、滴管、
灌胃针(大鼠、小鼠适用)、电子天平(感应量1/10000g)、动物 体重秤、外科剪刀、镊子。
(三) 试剂
受试化学物为氟化钠(NaF，分析纯)，苦味酸酒精饱和液 或其它染色剂。
实验动物的选择(提问)
实验动物的性别鉴定
♀
♂
植物神经系统
小鼠氟化钠经口急性毒性测量
啮齿类动物急性毒性中毒主要观察内容 （ 2）