紫叶酢浆草DNA的提取方法比较
１ ． ２ 方 法
１ ． ２ ． １ ＤＮＡ提 取 方法 （ １ ） 高盐 低 ｐ Ｈ法 ： 参 考 邵 鹏柱Ｌ ４ ］ 的方法 ， 略有 改 进 ， 将 提取液 中加入 了
３ 可溶 性 Ｐ ＶＰ 和 ２ ％ 巯 基 乙 醇 。 （ ２ ） Ｓ Ｄ Ｓ法 ：
养植 物 ， 也 是城 市 园 林应 用 中一 种 优异 的彩 叶 绿 化植 物 。此外 ， 紫 叶 酢 浆草 中丰 富 的 天然 色 素 极
况 。（ ３ ） Ｄ ＮＡ 的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩 增 检 测 。 利 用 ＲＡ Ｐ Ｄ 扩 增反应 引物 Ｇ （ ＧＴＧ Ｃ Ｃ Ｔ ＡＡＣ Ｃ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩
生 代谢 产物 ， 而且 这 些 物 质在 酢 浆 草 不 同部 位 的
含 量也有 差异 ， 以 至于 难 以获得 高 质 量 的 Ｄ ＮＡ。
１ ． ２ ． ２ ＤＮＡ 质量检 测 （ １ ） 紫外 吸收检 测 ＤＮＡ
的纯度 。将 ＤＮＡ 粗 提 液 适 当稀 释 ， 在核酸蛋 白
质分析仪 上检测 波长 ２ ６ ０和 ２ ８ ０ ｎ ｍ 处 的 吸 收 值（ ０Ｄ 值） ， 计算 Ｏ Ｄ 。 。 ／ ｏＤ 。 。 和 Ｄ ＮＡ 的浓 度 、 得 率， 判 断 ＤＮＡ 的 纯 度 。 （ ２ ） 琼 脂 糖 凝 胶 检 测 Ｄ ＮＡ 的完 整 性 。采 用 １ ％的琼脂 糖凝 胶 电泳 ， Ｅ Ｂ 染色， 在 １ ０ ０ Ｖ 电压 下 电泳 １ ｈ ， 在凝 胶 成 像 系统 下拍照 检测 Ｄ ＮＡ 的 降 解 程 度 和 Ｒ ＮＡ 消 化 情
基 乙醇 浓 度 由 １ 提高到 ２ 。（ ４ ） 核 ＤＮ Ａ法：
参 考李丹 ［ ］ 的方法 。 （ ５ ） Ｃ ＴＡＢ区室法 ： 参考 丁 晓
利用 分子 生物 学方法 开展 紫 叶酢浆 草多样 性
丹Ｉ 。 的方 法 ， 略有改 进 ， 将提取液中 ２ Ｎａ Ｓ ： Ｏ
ｐ Ｈ 法和 Ｃ Ｔ ＡＢ 区 室法 ， 从 酢 浆草 叶 片 中提 取 的 Ｄ ＮＡ 质 量 和得 率优 于从 茎段 中提 取 的 。综 合 分 析 可 知 ， 以 紫
叶酢浆草叶片为材料 ， 采 用核 ＤＮＡ 法提 取 效果 最佳 。
关键词 ： 酢浆 草 ； Ｄ Ｎ Ａ提取 方法； Ｄ ＮＡ 质 量 检 测 中图分类号 ： ￥ ６ ８ ８ ． ４ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ２ — ２ ７ ６ ７ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ７ — ０ ０ １ ８ — ０ ３
黑龙江农业科学 ２ ０ １ ４ （ ７ ） ： １ ８ ～２ ０
Ｈｅ ｉ ｌ ｏ ｎ ｇ ｊ ｉ ａ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ
紫 叶酢浆 草 ＤＮＡ 的提 取 方 法 比较
侯 艳霞 ， 汤浩 茹 。 张 勇 ， 陈 清 ， 吉 丽 （ １ ． 山西林业职 业技 术 学院 园艺 系 ， 山西 太原 ０ ３ ０ ０ ０ ９ ； ２ ． 四川 农业 大 学 园艺学 院， 四川 雅 安
具开 发前 景 ， 而且 全 草 可 入 药ｆ － 。 。 ］ ， 因 而 目前 人 们 对该 植物 的需 求量 日益 增 多 ， 关 于 酢 浆草 的研 究
也 逐渐展 开 。
参 考 董 晓 莉【 朝的 方 法 ， 略 有改 进 ， 将 提 取 液 中
０ ． １ Ｎａ ２ Ｓ Ｏ 用 ２ ｊ ３ 一 巯 基 乙 醇代 替 。（ ３ ） 改 良 Ｃ Ｔ ＡＢ法 ： 参 考甘 玲［ ６ 的方 法 ， 略有改进 ， 将 Ｂ 一 巯
用 ２ Ｊ ３ 一 巯 基 乙醇 代替 ， 可溶 性 Ｐ ＶＰ用 量 由 １ ０
减 少到 ３Байду номын сангаас 。
研究 ， 可 为进 一 步选 育 优 良种 质 资 源 提供 依 据 。 但 基 因组 ＤＮＡ 的分离 及其 提 取质 量 是 进行 基 因
组 多样性 分析 的关 键 。由于紫 叶酢浆 草植 物组 织 细胞 内含 有较 多 的多糖 、 色素 、 蛋 白质及 未知 的次
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ４ － ０ ３ — １ ９ 基 金项 目： 山西 省 基 础研 究 “ 青 年科 技 研 究 基金 ” 资 助 项 目（ ２ ０ １ ３ ０ ２ １ ０ ２ ６ — ２ ） ； 山 西林 业 职业 技 术 学 院 院 级 科 研 教 改 资 助 项 目（ ２ Ｏ １ ３ １ ４ ） 第 一作 者 简介 ： 侯艳霞 （ １ ９ ８ ｌ － ） ， 女， 山 西 省 交 城 县人 ， 博士 ，
６ ２ ５ ０ １ ４ ）
摘要 ： 为 了提 取 高 质量 的 紫 叶 酢浆 草 Ｄ ＮＡ， 以 紫叶 酢浆 草 茎段 及 叶 片为 材 料 ， 比较 了 ５种 方 法 对 其 ＤＮ Ａ 提 取 的影响。结果表明 ： 用ｓ Ｄ ｓ法 、 改良ｃ ＴＡＢ法和 核 ＤＮ Ａ 法 提 取 出的 酢 浆 草 Ｄ ＮＡ 质 量 和 得 率 都 优 于 高 盐 低
１ ． １ 材 料
供试 材 料为盆 栽紫 叶酢 浆草 的茎段 和 叶片 。
增， 体系为 ２ ０“ Ｌ 。其 反 应 程 序 为 ： ９ ４ Ｃ预 变 性
５ ｍｉ ｎ ， ９ ４ ℃变 性 １ ｍｉ ｎ ， ３ ６ ℃退火 １ ｍｉ ｎ ， ７ ２ ℃ 延
伸２ ｍｉ ｎ ， 共４ ０个 循环 ， ７ ２ ℃后延 伸 １ ０ ｍｉ ｎ ， ４ ℃保
紫叶 酢浆草 （ Ｏ ｘ ａ ｌ ｉ ｓ ｔ ｒ ｉ ａ ｎ ｇ ｕ ｌ ａ ｒ ｉ ｓ ） ， 又称 红 叶 酢浆 草 、 三 角紫 叶酢 浆草 ］ ， 为 多年生 宿根草 本 花 卉 。 由于 其植 株姿 态俊美 ， 叶形 奇特 ， 且 叶色 和花 色 的色彩 对 比感 强 ， 成 为深 受 人 们 喜爱 的室 内盆
该 研 究 采 用 ５种 方 法 提 取 了 紫 叶 酢 浆 草 叶 片 和 茎
段 中的 ＤＮＡ， 旨在 寻 找 适 合 紫 叶 酢 浆 草 基 因 组 Ｄ ＮＡ 高质 量高 效 率 的 提 取方 法 ， 为该 植 物 Ｄ ＮＡ 分 子标记 和遗 传多 样性研 究 奠定基 础 。
１ 材 料 与方 法
植物DNA的提取
植物DNA的提取（SDS法）
1．将离心管中加入提取缓冲液
2．将研钵洗净灭菌，将-80度存放的植物材料在液氮中迅速研磨成粉末；
3．将粉末放入已有提取缓冲液的离心管中，摇匀；
4．加入60ul（1/10体积）的20%SDS溶液，充分混匀；
5．65度保温30分钟；
6．冷至室温后加入220ul（1/3体积）的5M KAc溶液，充分混匀，冰上放置30分钟以沉淀蛋白和多糖；
7．室温，13,200rpm离心20分钟，取上清750ul；
8．离心管中加入750ul氯仿，充分混匀，离心12,000rpm，10分钟；
9．取600ul上清加入600ul氯仿，充分混匀，离心12,000rpm，10分钟；
10．取500ul上清，加入1ml（2倍体积）无水乙醇沉淀核酸，混匀至于-20度放置30分钟；11．低速（8000rpm）离心10分钟收集沉淀，用70%乙醇洗涤沉淀，洗3次；
12．真空抽干3分钟，溶于100ul灭过菌的去离子水中；
13．可以再用无DNase的RNase到1mg/ml，37度保温30分钟消化RNA。
拟南芥基因组的ＰＣＲ直接鉴定法
试剂：NaOH0.5M
Tris 100mM
5-10mg叶片加入到100ul NaOH，研磨，
5ul上清加入到50ul Tris中，混匀，
取1ul做ＰＣＲ
但整个流程最好在冰上操作。
不同物种的DNA提取方法
不同物种的DNA提取方法摘要DNA作为遗传微粒，为生物体的遗传信息复制和传递做出了巨大的贡献，而1953年J.Watson和F.Crick提出的双螺旋结构模型不仅解释了有关DNA 的性质，而且也清楚地解释了DNA的各种生物功能，进而使DNA的研究进入到了分子水平。
然而DNA是如何具体在生物体内发挥其作用的，到现在还是一个热门课题，为了研究其作用，就需要从各种物种中提取DNA，由于不同物种结构的复杂性不同，导致提取DNA的方法也是各不相同，为此，我整理了一些物种的DNA提取方法。
关键词：物种、DNA提取1、月季DNA的提取方法：之所以提取高质量的月季DNA有难度，是因为其体内富含多糖及多酚类的物质，在一般的DNA提取方法中，很难被分离，这就严重干扰了提取月季DNA的纯度以及完整性。
为了解决这个问题，北京市园林科学研究所采取五种提取方法，在其最后的实验结果表明：Draper法提取月季DNA的纯度最高，完整性最好。
2、大麦小孢子DNA的提取方法：要想分离提取小孢子的DNA，就需要降解小孢子壁，而小孢子壁由外壁和内壁组成，内壁主要由纤维素和果胶组成，这类物质能够被相应的酶所水解，而外壁的主要成分是类胡萝卜素和类胡萝卜酯的氧化多聚化的衍生物，化学物质非常稳定，到目前为止，还没有相应的酶可以水解。
因此外壁便成为提取高质量的大麦小孢子DNA的一个“拦路虎”。
对此，莱阳农学院展开了研究，他们通过“收集大麦的花药”、“分离小孢子”、“分离小孢子”。
最后“DNA的提取”等一系列的步骤，在最后的统计结果中，发现CTAB法和微量快速提取法取得不错的效果，而且DNA的得率和质量几乎一样。
这也证明了上述两种方法是有效而可行的，当然在这个研究过程，首次采用超声波法进行破壁，收到出乎意料的效果，也为CTAB法和微量快速提取法提供了必要的条件。
所谓的CTAB，其中文名是十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
植物叶片DNA抽提法
植物叶片DNA抽提法A．准备的试剂和材料：1．液氮2．抽提缓冲液：500mM NaCl, 100mM Tris-HCl pH 8.0, 50Mm EDTA pH 8.0, 10mM 巯基乙醇（使用前加入）上述溶液均以浓缩液的形式配置保存，使用前混合；配置100ml抽提缓冲液的配方为：5 M NaCl 10ml1M Tris-HCl pH 8.0 10ml0.5 M EDTA 10ml巯基乙醇70ul无菌水70ml3．需配制的溶液：20% SDS, 5M KAc（醋酸钾），3M NaAc（醋酸钠）, RNase A(200U/ml),50 TERNase A储存液的配置方法：取25mg的RNase A，在25ml的缓冲液中（1M Tris-HCl 250 ul, 5M NaCl 75 ul, ddH2O 25 ml）溶解—100度煮沸15分钟—缓慢冷却至室温—分装为100ul／管，－20度冻存。
50TE配方: 50 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA pH 8.0, (在93ml的无菌水中加入1M Tris-HCl 5ml, 0.5 M EDTA 2ml)4．其他材料及设备：碾钵，灭菌的擦镜纸(事先剪成小块)，保温杯（盛液氮），水浴锅（37℃、65℃），台式冷冻高速离心机（1.5--2.0ml），1.5ml离心管（每个样品精细提取需要3支，粗提需要2支），冰盒，异丙醇，无水乙醇（或新近配制的70%乙醇）B 实验步骤（前面的数据为小量提取法，括号里的斜体划线数据是大量提取法）1．a): 打开水浴锅，调整温度到65℃，并将20％SDS放在里面预热；b):准备好要用的各种溶液，液氮，擦镜纸，适量的碾钵，离心管架，大冰盒（装满冰），1.5ml 离心管。
c):在离心管和碾钵上编号。
2．取0.5-0.8克幼嫩的叶子（2克）在碾钵中，倒入液氮快速碾磨成细粉――加入750ul /（7.5ml）抽提液到碾钵中继续碾磨几下，将匀浆液倒入相同编号的1.5ml / (50ml)离心管中。
植物DNA提取_SDS法
1植物基因组DNA的提取1）取适当新鲜叶片放入2ml离心管中，在液氮中迅速研磨成粉末。
2）加入800µl的DNA提取液和5µl的RNase A（10mg/ml）,振荡混匀。
37℃，水浴30min（水浴过程中上下颠倒混匀）。
3）加入800µl的“三混”溶液，充分混匀。
12000rpm，离心10min。
4）吸取650µl的上清液至一干净的2ml离心管，加入等体积氯仿，充分混匀。
12000rpm，离心10min。
5）吸取450µl的上清液至一干净的1.5ml离心管，加入450µl的异丙醇和45µl的3M醋酸钠（pH=5.2）,轻轻混匀，DNA析出，呈絮状沉淀。
-20℃放置30min。
6）12000rpm，离心10min。
弃上清，加入600µl的75%乙醇溶液，清洗两次。
7）弃上清液，用移液器吸尽残留酒精溶液，超净台中干燥（约5min），加入100µl的1×TE或ddH2O溶解，并置4℃中溶解过夜。
8）采用紫外分光光度计法检测DNA的含量及纯度，1%琼脂糖凝胶检测DNA的质量。
将DNA浓度统一稀释至100ng/µl，-20℃保存。
2试剂配制1）DNA提取液(1L，1%SDS，0.1M Tris，0.1M NaCl，10mM EDTA，pH=8.5)在去离子水中依次加入3.2g Na2EDTA，5.8g NaCl，12.1g Tris base，以及100ml的10%的SDS溶液，搅拌均匀后，用HCl调节pH至8.5，定容至1L。
2）“三混”溶液将Tris平衡酚、氯仿、异戊醇按体积比25：24：1，充分混匀，4℃中静置分层并避光保存。
3）3M醋酸钠(1L)称取408.24g NaAC·3H2O溶解到800ml蒸馏水中，用冰醋酸调pH至5.2，定容至l L，高压灭菌备用。
4）1×TE溶液(1L，10mM Tris，1mM EDTA，pH=8.0)在500ml水中加入1.211g Tris base，0.372g Na2EDTA，用HCl调pH至8.0，定溶至1L，高压灭菌备用。
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法提取植物DNA的方法有许多种，下面将介绍其中几种常用的方法。
1. CTAB法CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide法）是一种经典的植物DNA 提取方法，适用于多种植物样本。
其基本步骤如下：（1）取植物样本，如叶片、茎等，将其研磨成细碎的粉末。
（2）将粉末加入含有CTAB（一种能溶解细胞膜的表面活性剂）的提取缓冲液中，加入蛋白酶K（能降解蛋白质）和β-巯基乙醇（能还原核酸）。
（3）在65下进行细胞破裂和DNA溶解。
（4）通过氯仿/异戊醇提取和乙醇沉淀的方法，将DNA从混合物中分离出来。
（5）最后用纯净水洗涤DNA，使其得以纯化。
2. 高盐法高盐法属于常规的DNA提取方法，适用于大部分的植物样本。
基本步骤如下：（1）取捣碎的植物材料加入含有高盐浓度的提取缓冲液中，并加入蛋白酶K和β-巯基乙醇。
（2）在室温下进行混合，并在高温下（如65）进行DNA的溶解。
（3）通过氯仿/异戊醇提取和乙醇沉淀的方法，将DNA分离和纯化出来。
（4）最后用纯净水洗涤DNA，使其得以纯化。
3. 磁珠法磁珠法是一种相对快速、高效的DNA提取方法，基于磁珠与DNA之间的亲和力。
该方法需要使用一些商业化的提取试剂盒，操作过程相对简单，适用于大规模样本的提取。
基本步骤如下：（1）将植物样本加入含有提取缓冲液和蛋白酶K的试管中，同时加入磁珠试剂。
（2）在高温下进行DNA的溶解和蛋白质的降解。
（3）将混合物与磁珠结合，并使用磁力架将DNA磁珠复合物分离出来。
（4）对磁珠复合物进行洗涤和溶解，获得纯化的DNA。
4. 二硫苏糖盐法二硫苏糖盐法是一种用于植物材料中DNA提取的改良方法，适用于纤维素含量较高的植物样本。
基本步骤如下：（1）将植物材料加入二硫苏糖盐提取缓冲液中，加入蛋白酶和β-巯基乙醇。
（2）对细胞质进行破裂和溶解，使DNA释放到溶液中。
（3）通过异丙醇的加入，将DNA从混合物中分离和沉淀。
不同植物总DNA的提取及亲缘关系的研究
不同植物总DNA的提取及亲缘关系的研究一、实验目的：核酸的分离纯化是核算制备及分析的前提和基础，通过本实验将学会和掌握核酸制备的一些基本操作和方法，并通过分光光度法和电泳等实验技术研究核算的性质，同时掌握用限制性内切酶酶解技术分析不同材料之间亲缘关系的方法。
二、实验原理DNA是遗传的物质基础，分离纯化DNA是研究基因结构与功能的首要前提。
细胞内DNA是与蛋白质结合存在的。
在提取DNA的过程中必须将其中的蛋白质降解除去，同时需要尽可能保证其DNA分子的完整性，因此，必须在温和的条件下进行提取，注意避免核酸内切菌引起DNA的降解；酸、碱和离子强度等化学因素，以及温度、机械张力、剪切等物理因素引起DNA的降解。
植物组织中制备基因组DNA一般有下列几个策略：(1)细胞壁的破碎。
通常将植物组织放在研钵中与液氯或干冰粉末(用于冰时先将干冰碾成粉末)。
(2)细胞膜的破坏常用去污剂(如SDS或CTAB)。
(3)保护DNA免受内源核随菌的破坏，这包括多方面的措施。
去污剂的加入和EDTA的存在都能破坏或抑制酶的活性，因EDTA是种整合剂，它能结合大多数核酸酶的辅因子Mg2+。
此外，用氮仿和苯酚乳化州A提取液时，同时也使蛋白质变性，分离蛋白质和DNA。
(4)尽量减少DNA的断裂。
即使溶液的振荡也会使DNA断裂，在操作中不特别小心的话，获得的DNA是50一100 kb。
(5)研磨植物组织时尽量保持在冰冻状态(掖氯或于冰中)，直至与提取经冲浪混合，以避免DNA的降解。
(6)高等植物材料往往含有多糖，面多糖常常是某些限制酶或连接菌的抑制剂，所以大多数提取方法还需进一步用既费时又昂贵阳氮化铂密度梯度离心法除去多糖，但对有些种类的植物或有些组织类型来说，用CTAB的核酸提取法也可得到纯的高相对分子质量的DNA，它利用核随和多糖在cTAB存在时溶解度不同面分离。
在用异丙醉或乙醇沉淀植物组织DNA时，能观察到白色的纫纤丝及纤维团，若用钩子将所有的DNA都轻轻绕在钩子上取出并洗涤，这样得到的DNA与用离心沉淀法取得的DNA相比，前者的纯度更高些。
植物叶片中DNA的提取
1. 植物叶子0.1- 0.2g, 剪碎置预冷研钵中
加入1mL提取缓冲 液，研磨成浆
2. 吸入1.5mLeppendorf 管中，摇动混匀
3. 60℃水浴保温30-60min
4. 10000rpm离心5min
5. 吸上清于新的离心管中，加入等体积氯仿，颠倒混匀
6. 再次10000rpm离心5min； 将上清小心吸入新的离心管中；
DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳（例图）
实验注意事项
1. 微量移液枪的使用一定要规范，吸取氯仿 等有机试剂要注意不要将试剂吸入枪中； 2. 提取过程中的机械力可能使大分子 DNA 断 裂成小片段，所以为保证 DNA 的完整性， 各步操作均应较温和，避免剧烈震荡。
思考题:1.为什么构建DNA时, 一定要用大分 子DNA？ 2. 如何检测和保证DNA的质量？
实验一
植物叶片DNA的提取
DNA extraction
实验原理
• 利用基因组 DNA 较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子 DNA 分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤 维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状 沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。在提取过程中,染色体会发 生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA时应尽量在温 和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证 , 否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。而进行 RFLP 和 PCR 分析 , DNA 长度可短至 50kb ，在该长度以上，可保证酶切后产生 RFLP片段(20kb以下)，并可保证包含PCR所扩增的片段 (一般2kb以下)。 • 不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离 方法也有差异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立 相应的提取方法，以获得可用的DNA大分子，尤其是组织中的多糖和酶 类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类 物质的材料提取基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。
紫叶酢浆草DNA的提取方法比较
ＳＤＳ法 改良 ＣＴＡＢ 法
核 ＤＮＡ 法 ＣＴＡＢ 区室法
１．７７ １．７５ １．９６ １．９２ １．９５ １．７２ １．６４ １．９７ １．８９ １．９３
８５ ３２５ ２０５ ２８５ １０５ ４５５ １５５５ １０８５ ９５５ １７０
ＡＣＣ）为引物，对５种方法提取的酢浆 草 ＤＮＡ 进 行扩 增，均 能 获 得 扩 增 带。 但 从 茎 段 中 提 取 的 ＤＮＡ 与叶片中的 ＤＮＡ 相比，ＲＡＰＤ 扩增条带不
图１ 酢浆草 ＤＮＡ 的电泳图谱 泳道１～５为酢 浆 草 茎 段，泳 道 ６～１０ 为 酢 浆 草 叶 片；泳道１、６利用高盐低 ｐＨ 法，泳道２、７利 用 ＳＤＳ法， 泳 道３、８利用改良 ＣＴＡＢ 法，泳道４、９利用核 ＤＮＡ 法， 泳道５、１０利用 ＣＴＡＢ 区室法。下同。 Ｆｉｇ．１ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ ｏｆ Ｏｘａｌｉｓ ｔｒｉａｎｇｕｌａｒｉｓ ＤＮＡ Ｌａｎｅ １～５ ｗｅｒｅ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｏｘａｌｉｓ ｔｒｉａｎｇｕｌａｒｉｓ，ｌａｎｅ ６～１０ｗｅｒｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｏｘａｌｉｓ ｔｒｉａｎｇｕｌａｒｉｓ；ｌａｎｅ １ａｎｄ ６ ｗｅｒｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｈｉｇｈ－ｓａｌｔ－ｌｏｗ ｐＨ，ｌａｎｅ ２ ａｎｄ ７ ｗｅｒｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＳＤＳ，ｌａｎｅ ３ａｎｄ ８ ｗｅｒｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＣＴＡＢ，ｌａｎｅ ４ａｎｄ ９ｗｅｒｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ＤＮＡ，ｌａｎｅ ５ａｎｄ １０ ｗｅｒｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＣＴＡＢ ｓｕｂａｒｅａ．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
植物叶片DNA提取步骤
植物叶片DNA提取方案
CTAB 法
基本步骤如下：①取鲜样0．2 g 左右置研钵中，加2％不溶性PVP、液氮研磨至粉末状，转入2 mL 离心管；②加入0．7 mL 65℃预热的CTAB 提取液，混匀，65℃水浴30 min；③加入等体积酚／氯仿／异戊醇（25∶24∶1），混匀，室温10 000 r／min离心10 min；④取上清液，重复步骤③1～2 次；⑤取上清液，加1／2 体积的5 mol／L NaCl，加2／3体积的异丙醇，置－20℃冰箱2 h，沉淀DNA；4℃、10 000 r ／ min 离心10min；⑥弃上清，用70％乙醇溶液洗沉淀2 次，风干，用50 μL TE溶解；⑦加入无DNase 的RNase 至终浓度为10 μg／μL，37℃保温30 min，－20℃保存备用。
(8)加入终浓度5099／ml的RNase，37℃保温1h；
(9)用等体积的氯仿／异戊醇抽提1次，12000rpm，离心10min；(10)上清液中加入O．1倍体积的Nacl，2倍体积的无水乙醇，冰箱中-20℃放置0．5h，12000rpm，离心10min，去上清液；(11)用70％的无水乙醇洗涤沉淀2次，自然干燥后溶于50plTE；）
2%CTAB提取液：100 mmol／L Tris－HCl（pH8.0），1.4 mol／L NaCl，20 g／L CTAB，20 mmol／L EDTA，1％β－巯基乙醇（用前加）。
几种药用植物DNA提取与纯化方法的比较
6.Worthington —K irsch RL ,Popky G L ,Hutchins FL J r.Uterinearterial embloization for the mangement of leiomy 2omas :quality —of —life assessment and clinical response.Radi 2ology ,1998,208:625—6297.Stancato —Pasik A ,Mitty HA ,Richard HM ,et al.obstetricembolotherapy :effect on menses and pregnancy.Ra 2diology ,1997,204:791—793.8.陈君辉,胡大武,段天红,等.子宫肌瘤介入治疗临床疗效观察.中华放射学杂志,2001,35(5):334—336.9.Ravina J H ,Bouret J M ,Ciraru —Vigneron N ,et al.Re 2course to particular arterial embolization in the treatment of some uterine leiomyoma.Bull Acad Natl Med (French ),1997,181:233—246.(收稿日期2002-05-21)几种药用植物DNA 提取与纯化方法的比较李 军 陕西中医学院生化教研室 (712083)郭晏海 第四军医大学全军基因诊断技术研究所 (710032)党 琳 陕西中医学院生化教研室 (712083)提 要 目的:优化适于中医学院实验室条件下开展药用植物DNA 提取与纯化的实验方法。
方法:①标准操作,②优化简易操作,③wizad TM clean -up system 试剂盒方法。
结果与讨论:优化简易操作省时、经济、易操作。
关键词 DNA 提取;纯化;实验方法中图分类号:R446 R281.4 文献标识码:B DNA 的分离纯化是分子生物学操作中的重要步骤,同样也是药用动植物分子诊断技术中的关键环节。