人尿脱落细胞FISH、细胞学检测和膀胱镜检在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用

人尿脱落细胞FISH、细胞学检测和膀胱镜检在膀胱尿路上
皮癌诊断中的应用
【摘要】目的：比较膀胱尿路上皮癌诊断中应用的三种检查方法，即，尿脱落细胞荧光原位杂交（fish）检测、细胞学分析和膀胱镜检查诊断的临床有效性；方法：选取我院2009年3月至2011年4月间泌尿外科诊断为膀胱尿路上皮癌的86例患者进行回顾性分析，其中男性63例，女性24例，对所有患者均行fish检测、尿细胞学检查和膀胱镜检查，针对患者的诊断检测结果，进行三种诊断方法敏感性与特异性的比较；结果：fish检测、尿细胞学检查及膀胱镜检查对膀胱尿路上皮癌的总的敏感性分别为83.6%、
20.3%、93.6%fish检测和膀胱镜检查结果比较p>0.05，无统计学意义；fish检测与尿细胞学检测结果比较p0.05，无统计学意义。

结论：fish检测在膀胱尿路上皮癌诊断中的敏感性与膀胱镜检查相当，而明显高于尿细胞学检查，三者在特异性上无明显差别。

fish 对膀胱尿路上皮癌的早期诊断和术后监测有重要意义，可作为一种重要的辅助手段应用于临床。

【关键词】膀胱尿路上皮癌；恶性血尿；荧光原位杂交技术；尿脱落细胞学
1 资料
选取2009年3月～2011年4月间我院泌尿外科诊断为膀胱尿路上皮癌的患者86例，其中男性为63例，女性为24例，年龄33～87岁，平均年龄62.7岁。

2 方法
86例患者同时行fish检查、尿细胞学检查和膀胱镜检查，确定检测结果并比较三种诊断方法的敏感性和特异性。

所有病例在尿细胞学检查和膀胱镜检查结果前进行fish检测，在计数过程中首选大的、细胞核不规则或不典型的细胞进行计数。

细胞核增大，轮廓不规则，dapi染色不均匀视为细胞不典型。

86例患者与阈值相比较判断染色体的异常情况。

fish阳性判读标准为3、7号染色体均异常或者一种染色体的复杂异常。

86例患者在进行膀胱镜检查前，应进行留取清晨初次尿液进行尿检，尿液标本要在膀胱镜检查前取，尿量不宜过少，以免影响细胞计数。

尿样分三份进行检测。

一份用于fish检测，另一份行尿细胞学检测（连续送检3d），尿细胞学检测结果由我院病理科进行判断；86例患者在取尿液标本后进行膀胱镜的检测，分为阳性、阴性结果，对于检测的阳性结果病例取活检进行病理检查，当患者检测的膀胱镜病理结果与手术切除后额病理检查不一致时，以手术切除后的病理结果为依据。

3 结果
3.1 建立正常阈值
通过我院公开征集志愿者采集到20例的正常人的尿液样本，进行fish实验，统计不同类型异常情况细胞数目的百分比，建立相应阈值。

当染色体核型分析不成功或不明确时，通过fish检测弥补不足，并可发现复杂易位。

每个探针检测镜下分析200个细胞核。

20例没有造血系统疾病且核型正常的细胞标本作为正常对照，以此计算分裂信号的平均数和标准差。

如果有异常杂交信号的细胞百分比超过正常标准差的3倍，结果将被认为异常。

3.2 三种检测结果比较
对我院86例患者经常规检查后，临床决定对进行膀胱镜的血尿患者行3、7号染色体的fish检测和尿细胞学检测，所有患者样本采集后均再行膀胱镜检查。

按照fish异常的判定标准对不同类型的异常细胞进行计数，以手术切除后病理结果为分期依据，对膀胱癌的不同分期分别计数fish、膀胱镜及尿细胞学的阳性例数，并用统计学方法比较三种方法的总的敏感性以及不同肿瘤分期的敏感性。

fish检测、尿细胞学检查及膀胱镜检查对膀胱移行细胞癌的总的敏感性分别为86.6%、17.3%、92.6%。

fish和膀胱镜比较p>0.05，无统计学意义；fish与尿细胞学比较p0.05，无统计学意义。

4 讨论
膀胱尿路上皮癌是一种常见的恶性肿瘤。

膀胱镜检查和活检是诊断膀胱癌最可靠的方法。

通过膀胱镜检查可以明确膀胱肿瘤的数目、大小、形态（乳头状的或广基的）的异常情况，但其存在一定的局限性，不建议对非肌层浸润性膀胱癌的正常膀胱粘膜实行常规的随机活检或选择性活检，因为发现原位癌的可能性很低（小于2%），特别是对于那些低风险的膀胱癌。

但当尿脱落细胞学检查阳性或膀胱粘膜表现异常时，建议行选择性活检（selected biopsy），以明确诊断和了解肿瘤范围。

在尿细胞学检查阳性而膀胱粘膜表现
为正常、怀疑有原位癌存在时，应考虑行随机活检。

如果膀胱肿瘤为原位癌、多发性癌或者肿瘤位于膀胱三角区或颈部时，并发前列腺部尿道癌的危险性增加，建议行前列腺部尿道活检，此外，尿细胞学阳性或前列腺部尿道粘膜表现异常时，也应行该部位的活检。

膀胱镜检查的有创和尿细胞学检测的低效要求我们探索一种新的
检测手段，其具有膀胱镜检查和尿细胞学检查的双重优点：无创、简便、高敏感性、高特异性。

fish检测技术作为当前膀胱癌临床应用中的新兴分子遗传学技术，通过采用荧光标记的dna探针，利用探针与检测样本中dna碱基对的互补性，在探针与标本的dna杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果，从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。

fish检测技术从遗传学角度检测染色体和基因的异常辅助血液疾病的诊断，判断预后，疗效检测及微小残留检测，可分析间期细胞，不需培养；操作简单、检测快速重复性好、空间定位精确；灵敏性和特异性高，当染色体核型分析不成功或不明确时，可利用fish检测弥补不足，并可发现复杂易位。

5 结论
综上所述，由于fish检测的敏感性与膀胱镜检查结果近似，但其敏感性要明显高于尿细胞学检查。

但三者从特异性来看无明显的差别。

fish检测在tl、t2期的敏感性明显高于尿细胞学，而早期诊断又是膀胱尿路上皮癌患者进行治疗的关键期，由于当前临床治疗诊断中膀胱镜及尿细胞学检查的自身缺陷，fish检测技术将逐渐成为诊断和进行膀胱癌患者监测的重要手段之一。

fish检测技术对于膀胱癌特别是膀胱移行细胞癌的早期诊断和术后监测有着重要意义，对于膀胱癌的临床应用中，可弥补膀胱镜与尿细胞学检测未发现的肿瘤， fish检测技术作为一种重要的辅助监测手段，未来应大力进行推广应用于临床。

参考文献
[1]王丽丽，陈云昭，李锋等.fish技术在恶性淋巴瘤诊断中的应用[j].现代肿瘤医学，2010，18（4）：820-821.doi：
10.3969/j.issn.1672-4992.2010.04.70.
[2]马春雷，司今，戴聪等.膀胱癌荧光原位杂交检测及其临床意义[j]中国肿瘤临床，2009，36（23）：1329-1332.
[3]李连印，姜君仪，刘俊江等.urovysion荧光原位杂交监测膀胱癌复发的研究[j].医学研究生学报，2011，24（5）：516-519.。