乳中抗生素的检验
乳中抗生素的检验
不显色 显色者 阴性 不显色者 36°cห้องสมุดไป่ตู้浴30min 阳性
红色
抗生素阴性
报告
报告
（1）菌液的制备 将菌种移至脱脂乳中，经 36°c培养15h后已灭菌乳1：1稀释。 （2）检 验 取 检样9ml置于试管。 80°c水浴加热5min，取出冷却至37°c,加菌液1ml， 36°c水浴培养2h 加TTC0.3ml 36°c 水浴培养30min，观察如为阳性，再于水浴培养 30min，作第二次观察。每份检样做二份另外再做 阴性和阳性对照各一份阳性对照管用无抗生素的乳 8ml加抗生素及菌液和TTC,阴性对照管用无抗生素 乳9ml加菌液和TTC
抗生素产生的与原因
• 为了预防和治疗奶牛的乳房炎，成注射大量的抗 生素，例如 青霉素 庆大霉素 卡那霉素 等， 这些霉素的半衰期较长，会残留在乳中。为了保 证饮用者的安全和实际的生产需要，对鲜乳中抗 生素的残留检验很有必要。TTC试验是用来检验鲜 乳中是否含有抗生素的简单方法
细菌进行生物氧化有三种方式： 加氧 脱氢脱电子 ，相反即还原。当乳中 加入嗜热链球菌是乳中无抗生素，嗜热链球菌就繁殖在新陈代谢中进行生物 氧化。其中脱出的氢可以和乳中的氧化型TTC结合而成还原型TTC.氧化TTC 无色 ，还原型TTC红色，所以可以使乳变红色。相反 ，如中存在抗生素， 嗜热链球菌不生长。没有氢的释放，TTC不变色乳汁也无色
阴性 阳性
显色状态
判断
显色状态
判断
未显色者 微红色着
阳性 可疑
桃红色至红色
阴性
抗生素的名称
最低检出量
抗生素的名称
最低检出量
青霉素 链霉素
0.004IU 0.5IU
庆大霉素 卡那霉素
牛奶中抗生素残留的危害及检测方法
牛奶中抗生素残留的危害及检测方法牛奶中抗生素残留是指生产牛奶过程中使用的抗生素残留在牛奶中的现象。
这可能是因为奶牛在患有疾病时，农民会给奶牛注射抗生素来治疗疾病，或者是在奶牛饲养过程中，农民使用抗生素来预防疾病的发生。
尽管抗生素在奶牛饲养和产奶过程中的使用是为了保证牛奶的质量和奶牛的健康，但过多的抗生素残留可能会对人类健康产生潜在的危害。
牛奶中抗生素残留可能导致人类对抗生素的耐药性增加。
长期摄入含有抗生素残留的牛奶，人体会逐渐产生对这些抗生素的耐药性，从而减弱对治疗感染性疾病的效果。
当人类患病时，需要使用抗生素进行治疗，但由于耐药性的增加，常规剂量的抗生素可能无法起到应有的疗效，导致病情加重或难以治愈。
抗生素残留可能对消费牛奶的人群产生过敏反应。
某些抗生素成分对某些人来说是过敏原，摄入含有抗生素残留的牛奶后，可能会引发过敏反应，如皮肤瘙痒、呼吸困难、恶心等症状。
对于某些敏感人群来说，抗生素残留应尽量避免。
抗生素残留可能对人体的内分泌系统产生干扰。
抗生素残留中的一些化学物质可能对人体的内分泌系统产生干扰，导致内分泌紊乱，影响人体的正常发育和生理功能。
特别是对于婴儿和幼儿来说，抗生素残留可能对其生长发育产生不良影响。
为了保证牛奶的质量和人类的健康，对牛奶中的抗生素残留进行检测是非常重要的。
常用的检测方法包括免疫学方法、生物学方法和化学方法。
免疫学方法主要利用抗生素与特异性抗体之间的免疫反应进行检测，如酶联免疫吸附测定法（ELISA）。
生物学方法主要是利用生物学试剂对抗生素进行筛选或检测，如生物传感器技术和细菌抑制试验。
化学方法则是通过色谱法、质谱法等对抗生素进行定量分析。
牛奶中抗生素残留的危害包括耐药性增加、过敏反应和内分泌干扰，为了保护人类健康，对牛奶中的抗生素残留进行检测是必要的。
不仅要加强牛奶生产过程中对抗生素的使用和管理，还要建立健全的抗生素残留检测制度，确保牛奶的安全和质量。
《食品微生物检验技术》教学课件—鲜乳中抗生素的检测
工作任务九
1、容易引起过敏反应 2、造成环境平衡紊乱或菌群失调 3、在药物治疗中产生耐药性 4、发酵异常
检验依据：国家标准《GB/T 4789.27-2008 鲜乳中抗生素残留检验》
检测范围：国标中规定
第一法适用于鲜乳中能抑制嗜热链球菌（Streptococcus thermophislus）的 抗生素的检验；
第二法适用于鲜乳中能抑制嗜热脂肪芽胞杆菌卡利德变种（Bacillus stearothermohpilus var.calidolactis）的抗生素的检验，也可用于复原乳、消 毒灭菌乳、乳粉中抗生素的检测。”
检测原理：
样品经过80℃杀菌后，添加嗜热链球菌菌液。培养一段时间后，嗜热链球 菌开始增殖。这时候加入代谢底物2,3,5-氯化三苯四氮唑（TTC），若该样 品中不含有抗生素，或抗生素的浓度低于检测限，嗜热链球菌将继续增殖， 还原TTC 成为红色物质。相反，如果样品中含有高于检测限的抑菌剂，则 嗜热链球菌受到抑制，因此指示剂TTC不还原，保持原色。
（2）HLPC法：
高效液相色谱法是世界上迄今为止公认的农残药残的定量方法，同时也是世界 上主要的仲裁标准方法。
1、加强对饲料的检测，防止饲料中出现抗生素药物 2、控制奶牛乳腺炎的发病率 3、严格遵守休药期规定 4、加强饲养管理 5、加强法规体系建设
检验报告： 最终观察时，培养基依然保持原有的紫色，可以报告为抗生素残留性。
鲜乳中抗生素残留检测
1.原理 细菌生物氧化有三种方式，即加氧、脱氢和脱电子。 当样品中加入嗜热链球菌后，如果样品中没有抗生素残 留，嗜热链球菌就生长繁殖，在新陈代谢过程中进行生 物氧化，其中脱出的氢可以和加在样品中的氧化型TTC 结合而成为还原型TTC，氧化型TTC是无色的，还原型 TTC是红色的，所以可以使样品变红色。相反，如果样
鲜乳中抗生素残留检测
注：嗜热链球菌的筛选方法
（1）培养 培养基配方：酵母膏7.5g 、蛋白胨7.5g、葡萄糖10g 、KH2PO4 2g、西红柿 汁100mL 、吐温80 0.5mL、 蒸馏水900mL pH 7.0 ★ 西红柿汁的制作方法： 将新鲜番茄洗净，去皮切碎（切勿捣碎），放入锥形瓶，置4℃冰箱8~12h，取 出后用纱布过滤。如一次使用不完，可将其置入0℃冰箱，可保存四个月。使 用时让其在常温下自然溶解。 制法：将上述各成分加热溶解，校正pH，分装于灭菌锥形瓶中，在115℃下高 压灭菌20min。取适量酸奶（3~5mL）接种于培养基，进行培养分离。
品中存在抗生素，嗜热链球菌就不能生长繁殖不变色。
鲜乳中抗生素残留检测
2.设备与材料
水浴锅 恒温培养箱
温度计
试管架 灭菌10mL吸管
灭菌1mL吸管
灭菌15×150mm试管 杀菌锅
鲜乳中抗生素残留检测
3.培养基和试剂
菌种：嗜热链球菌 脱脂乳：脱脂奶粉按10%含量（W/V）加蒸馏水调
鲜乳中抗生素残留检测
5. 判断方法
准确培养30min，观察结果，如为阳性，再继续培养30min做第二次观 察。在观察时要迅速，避免光照过久干扰，乳中有抗生素存在，则在向 检样中加入菌液培养时细菌不增殖，此时由于加入的指示剂TTC不还原， 所以不显色。与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即进行增殖， TTC被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色时为阳性，成红色为阴 性。
乳中抗生素的检验
利用特定微生物对抗生素的敏感性，将微生物与待测乳样混合培养，根据微生物的生长情况来判 断乳中抗生素的残留。
酶底物法
利用抗生素对特定酶的抑制作用，将酶底物与待测乳样混合，观察底物的水解情况来判断乳中抗 生素的残留。
理化检验方法
高效液相色谱法（HPLC）
利用高效液相色谱技术对待测乳样进行分离和检测，通过对比标准品色谱图来判断乳中抗 生素的种类和含量。
积极参加国内外权威机构组织的能力验证活 动，提高实验室检验能力。
实验室间比对
定期与其他实验室进行比对试验，评估实验 室检验结果的准确性和一致性。
外部审核和认可
接受外部审核机构的审核和认可，确保实验 室管理体系的持续改进和有效运行。
客户满意度调查
定期开展客户满意度调查，收集客户反馈意 见，及时改进服务质量。
依据国家颁布的乳制品中抗生素 残留限量标准及相关法规进行判 定。
02
国际标准和指南
参考国际食品法典委员会(CAC)、 欧盟等国际组织和地区的相关标 准和指南进行结果判定。
03
企业标准和内控指 标
结合企业自身制定的产品标准和 内部控制指标，对检验结果进行 综合判定。
误差来源分析及消除策略
样品处理误差
07 结论与展望
本次研究主要成果总结
1
成功建立了乳中抗生素残留的高效液相色谱检测 方法，该方法具有灵敏度高、准确性好的特点。
2
通过对市售乳制品进行抽样检测，发现部分样品 中存在抗生素残留超标的情况，为乳制品安全监 管提供了有力依据。
3
研究了不同种类抗生素在乳制品中的残留规律， 为制定更加科学合理的乳制品安全标准提供了参 考。
疾病。
氨基糖苷类
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法1.高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱是一种基于溶剂流动的液相色谱方法，具有灵敏度高、分离能力强等特点。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先将牛奶样品经过样品前处理，去除干扰物，然后使用适当的洗脱液将抗生素从固相萃取柱中洗脱出来，最后用高效液相色谱对抗生素进行分离和定量。
2.毛细管电泳法（CE）：毛细管电泳法是一种基于电场作用下溶液中离子迁移速度的分析方法。
该方法具有高分离能力、快速分析速度等特点。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先将牛奶样品进行前处理，然后通过毛细管电泳仪器进行分析。
该方法不仅可以同时检测多种抗生素，而且样品准备过程相对简单。
3.气相色谱法（GC）：气相色谱法是一种基于色谱柱分离原理的分析方法，通过适当的蒸发和衍生反应可以将抗生素样品转换为易于气相色谱分析的衍生化物。
该方法具有高度选择性、高灵敏度等优点。
在牛奶中检测抗生素残留时，通常需要进行样品前处理。
首先将牛奶样品中的脂肪物质去除，然后使用适当的溶剂将抗生素从样品中提取出来，并通过气相色谱进行分离和定量分析。
4.酶联免疫吸附法（ELISA）：酶联免疫吸附法是一种基于抗原-抗体反应原理的免疫学方法。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先利用适当的蛋白质工程技术制备特异性抗生素抗体，然后将牛奶样品中的抗生素与抗体结合，通过酶标记的二抗或亲和素染色法对特异性抗体进行检测。
该方法具有灵敏度高、操作简单等特点。
5.高分辨质谱法（HRMS）：高分辨质谱法是一种基于质荷比检测的方法，具有高灵敏度、高分辨率等优点。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先将牛奶样品经过适当的前处理，然后通过质谱仪对抗生素进行定性和定量分析。
该方法不仅可以同时检测多种抗生素，而且可以准确测定其残留量。
总结起来，牛奶中抗生素残留的检测方法包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱法、酶联免疫吸附法和高分辨质谱法等。
这些方法具有不同的优点和适用范围，可以根据具体需求选择合适的方法进行检测。
乳酸菌抑制法检测牛乳中抗生素残留
乳酸菌抑制法检测牛乳中抗生素残留乳酸菌抑制法检测牛乳中抗生素残留近年来，人们对食品安全问题越来越关注，其中牛乳作为人们日常饮用的重要食品之一，其安全性备受关注。
然而，由于牛乳生产过程中可能存在抗生素的使用，其中的抗生素残留对人体健康造成潜在的威胁。
因此，开发一种有效的方法检测牛乳中抗生素残留显得尤为重要。
传统的检测方法中，高效液相色谱法（HPLC）是应用最为广泛的一种技术。
然而，该方法通常需要复杂的设备和专业操作，且对操作环境要求较高，给检测工作带来一定的难度和限制。
为了克服这些问题，乳酸菌抑制法应运而生。
乳酸菌抑制法基于乳酸菌对抗生素的敏感性。
乳酸菌属于一类有益菌，其作用是通过产生乳酸、醋酸等有机酸，使环境呈酸性，进而抑制其他微生物的生长。
研究发现，抗生素具有破坏乳酸菌作用的能力，因此可以利用乳酸菌的生长状态来间接推测抗生素在牛乳中的残留情况。
乳酸菌抑制法的实施步骤如下：首先，将乳酸菌培养液均匀涂布在含有津液的平板上；然后，在培养液固化前，将含有不同浓度抗生素的牛乳样品加入到涂布的乳酸菌平板上；最后，在恒温条件下培养一段时间，观察乳酸菌的生长情况。
如果抗生素浓度低于一定阈值，乳酸菌能够正常生长并产生酸性物质，呈现出固定的酸化效果；相反，如果抗生素残留量超过阈值，乳酸菌的生长将受到抑制，无法产生足够的酸性物质，导致涂布的乳酸菌平板呈现中性或碱性。
乳酸菌抑制法具有操作简单、处理时间短、不需要复杂设备等优点。
同时，该方法对抗生素种类的适应性较强，可以检测多种抗生素的残留情况，如青霉素、四环素等。
另外，由于该方法的检测结果直观可见，对于不具备专业知识的人员也较易理解和判断。
不过，乳酸菌抑制法也存在一些局限性。
首先，该方法无法准确测量抗生素残留的具体浓度，只能得出残留的有无和超过阈值与否的结果。
其次，由于牛乳中含有多种成分，这些成分对乳酸菌的生长也可能产生一定影响，因此在使用乳酸菌抑制法时需要对牛乳样品进行预处理，如去除脂肪、蛋白质等。
乳中抗生素的残留的测定
乳中抗生素的残留的测定中图分类号：S816.73文献标识码：A 文章编号：近20年来，兽药（包括药物添加剂）在畜牧业中的应用日益广泛，其在降低家畜发病率与死亡率、促生长、提高饲料利用率和改善产品品质方面的作用是十分显著的，已成为现代畜牧业不可或缺的物质基础。
牛乳与人们的生活息息相关，因此牛乳中的抗生素残留问题一直是各国政府和食品安全机构关心的重点，中国近年来对牛乳中的抗生素残留问题也逐渐予以关注。
1.1 牛乳中抗生素残留的原因青霉素、阿莫西林、氨苄西林等抗生素在奶牛养殖业中常用于治疗奶牛乳房炎和子宫内膜炎，由于其廉价和广谱的抗菌性而被大量且频繁地超剂量使用，因此导致了牛乳中高浓度抗生素残留。
牛乳中抗生素残留的原因主要是：非治疗目的用药、治疗目的用药和非法人为掺杂非治疗目用药的主要指在牛饲料中添加含有一定比例的抗生素的饲料添加剂，在饲料中添加抗生素的主要作用是：杀灭或抑制畜体内(特别是消化道内)的有害微生物，调节畜体胃肠道微生态平衡，从而改善动物健康，促进动物生长，达到预防奶牛疾病和使其生产力提高的目的。
这也是造成牛乳中抗生素残留的一个非常重要的一个原因如果在治疗后停止用奶时间不够，可能导致牛乳中抗生素残留超标美国食品和药品管理局（FDA）调查表明，用药不当是导致牛乳中抗生素残留的主要原因。
1.2 牛乳中抗生素残留的危害对于食品中药物残留是否引起严重后果仍有争议，特别是对药物残留的长期影响还不清楚，但是对于牛乳中抗生素残留引起的以下几点危害目前还是可以肯定的。
1.2.1 对人类健康的危害如果含有致敏抗生素的牛乳被敏感人群饮用，可引起食用者过敏反应，表现的症状轻则是皮疹、发热、关节疼痛，严重时可发生过敏性休克甚至危及生命。
曾报道，英国一对青霉素高度敏感的病人，使用约10IU/mL的青霉素的商品牛乳后，发生了变态反应。
链霉素可引起肾损害和听觉神经受损，四环素引起肝损害，其与骨骼、牙齿中的钙质结合，产生骨及牙齿感染，还可影响儿童的生长发育。
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检验所需器材
菌种、培养基和试剂 菌种:嗜热乳酸链球菌。 脱脂乳:经113℃加热灭菌20min。 4%2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液:称取1gTTC,溶于 5mL灭菌蒸馏水中,装褐色瓶内于7℃冰箱保存,临用时用 灭菌蒸馏水稀释至5倍。如遇溶液变为玉色或淡褐色,则 不能再用。 仪器用品 水浴锅、培养箱、不锈钢锅、温度计、蜡笔、试管架、 1ml和10ml的灭菌吸管、灭菌试管
不显色 红色 抗生素阴性
36±1℃水浴30MIN 显色者抗生素阴性 报告 阴 性 对 照 管
无抗生素的乳 8mL加抗生素及 菌液和TTC 无抗生素乳9mL 加菌液和TTC
显色者抗生素阳性 阳 性 对 照 管
报告
TTC检测法实验结果
准确培养30min观察结果,如为 阳性,再继续培养30min作第二 次观察。观察时要迅速,避免 光照过久发生干扰。检测各 种抗生素的灵敏度见表2 。
什么是TTC检测法？
TTC法，即氯化三苯基四氮唑法 ( tripheye tetrazolium chloride)，是目前 我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗 生素残留的检测方法(GB5409—85)。该 法简便、快速，无需特殊设备，3～4h可 见报告，很适合牧场、乳品厂及食品卫多种抗生素都很敏感，故可用于 多种抗生素的残留量检验。乳中有抗生素存在，则 检样中虽加入菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑 制，因此指示剂TTC不还原，不显色。与此相反，如 果没有抗生素存在，则加入菌液即行增殖，TTC被还 原而显红色，也就是说检样呈乳的原色时为阳性， 呈红色为阴性，见表1 。
班级：10食检二班 姓名：马兰
引言
随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛 应用，牛奶中抗生素残留问题日益 受到国际社会的重视。对此，检测 技术也迅速发展，以寻求简便、快 速、准确、敏感性高的检测方法满 足日趋严格的残留限量要求，保障 人们饮用牛奶的卫生和安全。
牛奶中抗生素残留的来源
一般认为，对泌乳牛用药不当或不注意安全时 间是牛乳中抗生素残留的重要因素，尤其是使 用乳房灌注法治疗乳腺炎时，易造成牛乳中抗 生素残留。在牛饲料中添加饲料添加剂已十分 普遍，其中含有一定比例的抗生素，主要作用 是预防疾病，这是牛奶抗生素残留的重要原因。 此外，一些不法交奶户在高温季节为防止乳的 酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，这也是 乳中抗生素残留的一个来源。1983年，Egan调查 表明，用经抗生素治疗的乳牛用过的挤乳器给 正常乳牛挤乳，可使正常牛的乳中残留抗生素， 所以挤乳是乳中抗生素残留的另一个来源。
抗生素名称 青霉素 最低检出量 0.004单位
链雹素
庆大霉素 卡那霉素
0.5单位
0.4单位 5单位
注意事项
配制培养基应注意的问题
嗜热链球菌的保存
结束语
综上所述，鉴于牛奶中抗生素残留是涉及人 类健康的公共卫生问题，应重视和加强检测 工作，并努力研究发展一些简单、快速和便 携化的筛选多残留分析技术；发展高效、高 灵敏的联用技术和多残留组分确证技术；实 现分析过程自动化或智能化，以提高分析效 率、降低成本，保证消费者的健康。
显色状态 未显色者 徽红色者 桃红色至红色者 判断 阳性 可疑 阴性
将菌种移种脱脂乳,经36±1℃ 培养15h后,以灭菌脱脂乳1:1 稀释待用
检样 80℃，加热5MIN 冷却37℃以下
取检样9mL,置15mm×150mm 试管内
加菌液1mL
加菌液，36±1℃水浴2h
加TTC0.3mL
加TTC指示剂，36±1℃水浴30MIN
牛奶中抗生素残留的危害
加工上不能用于生产 发酵乳 ② 对饮用者的健康不利
①
微生物检测法
微生物检测法是应用较广泛的方法，其测定原 理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的 抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药 物残留，如纸片法（PD）、TTC法、拭子法 （STOP）等。采用传统的微生物检测方法，缺 点是：(1)时间长；(2)显色状态判断通过肉眼辨 别，易产生误差，对微红色者无法做出准确判 断；(3)操作复杂。优点是费用低，一般实验室 都能操作。其中， 纸片法和TTC法是牛奶中药 物残留检测的两种常用的微生物检测法。