高效液相色谱法测定麦精中的低聚糖

纤维四糖占所有低聚糖的90%以上[8-9]。所以准确 测定其中纤维三糖和纤维四糖含量对研究麦精的 营养品质及应用具有重要意义。 目前，测定碳水化合物的主要方法包括气 相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、配有脉冲电 流检测器的高效阴离子交换色谱(HPAEC-PAD) 等 [8-11] 。气相色谱法虽可测定糖的组成，但必须 对糖进行衍生化才可检测，其检测步骤繁琐。 HPAEC-PAD法虽然准确但对设备要求较高。 HPLC相对于其他2种比较简单、快速、准确。所 以本实验尝试利用葡萄糖淀粉酶和普鲁兰酶专一 性酶解α-1,4糖苷键和α-1,6糖苷键的特性除去麦 精中的麦芽低聚糖后[12]，运用HPLC法，以示差检 测器对麦精中的纤维三糖和纤维四糖进行测定。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 保益加麦精：上海英联食品饮料有限公司； 麦芽三糖、麦芽四糖标准品(以此为对照测定麦精 中纤维三糖和纤维四糖的含量) [8-9]：Sigma公司； 葡萄糖淀粉酶、普鲁兰酶：诺维信公司；其他试 剂均为分析纯。 1.2 仪器与设备 Waters600高效液相色谱仪：配有自动进样 器、示差检测器，Waters公司；旋转蒸发仪：上 海亚荣生化仪器厂；离心机：上海安亭科学仪器 厂；0.22 µm微孔滤膜。 1.3 试验条件 1.3.1 色谱条件 色谱柱：Carbomix H-NP10： 5%(10 µm，7.8 mm×300 mm)，检测器：示差检 测器，流动相：2.5 mmol/L H2SO4水溶液，柱温： 55 ℃，进样量：20 µL，流速：0.5 mL/min。 1.3.2 样品制备 精确称取10 g保益加麦精溶于 100 mL去离子水中，调节pH至4.0后，分别加入50 µL的葡萄糖淀粉酶和普鲁兰酶，在60 ℃下糖化 反应10 h，进行彻底糖化。糖化结束后沸水浴5 min灭酶后在糖化液中加入3倍于体积的95%的乙 醇，放入4 ℃的冰箱，静置24 h后取出，在4000 r/min转速下离心30 min，除去蛋白和多糖。反复 2~3次 。收集上清液旋转蒸发定容至100 mL，经 0.22 µm滤膜过滤后精密吸取上述溶液20 µL注入 液相色谱仪，记录峰面积。 1.3.3 标准溶液的配制 精确称取10 mg麦芽三糖 和麦芽四糖2种标准品溶于10 mL去离子水中，配
*通讯作者 收稿日期：2012-03-06 基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金和上海科委对本研究的资助课题(10dz1200904)。 作者简介：吕宝龙(1987—)，男，陕西宝鸡人，硕士研究生，研究方向为谷物化学。
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食品安全与检测
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第 37卷 第 10期
Abstract: HPLC was established to determine cellotriose and cellotetrose in malt extract. The final chromatographic conditions are as follows: Carbomix H-NP10: 5% chromatographic column with refractive index detector, elution influent is 2.5 mmol/L sulfuric acid solution, flow rate 0.5 mL/min and injection volume 20 µL. The repeatability relative standard deviations of this method is below 2% and the recovery is over 97%. A satisfied result is obtained under this chromatographic conditions, and the whole separation can be finished within 15 min. The results showed that this new HPLC analysis method is not only correct but also fast enough to be used to determine most kinds of foods containing these oligosaccharide. Key words: malt extract; HPLC; cellotriose; cellotetrose
Determination of oligosaccharide in malt extract by HPLC method
LV Bao-long, CHEN Ru-qi, LU Yan-hua, LIU Shao-wei*
(East China University of Science and Technology, Shanghai 200237)
食品科技
2012年 第 37卷 第 10期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
食品安全与检测
高效液相色谱法测定麦精中的 低聚糖
吕宝龙，陈如琪，卢艳花，刘少伟* (华东理工大学生物工程学院，上海 200237)
摘要 ： 采用高效液相色谱法对麦精中的纤维三糖和纤维四糖进行了定量测定研究 ， 最终确定 的最佳分析方法为 Carbomix H-NP10 ： 5% 分析柱 ； 示差折光检测器 55 ℃ 柱温 ； 流动相 ： 2.5 mmol/L H2SO4水溶液；流速：0.5 mL/min；进样量：20 µL。该方法精密度RSD＜2%，回收率＞ 97%。在此色谱条件下15 min内完成了三糖和四糖的分离，结果比较理想。研究表明此新建方 法准确而快速，并能适用于绝大部分食品中低聚糖的测定。 关键词：麦精；高效液相色谱法；纤维三糖；纤维四糖 中图分类号：TS 207.3 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)10-0257-03
Hale Waihona Puke Baidu
麦精是从大麦和麦芽中通过酶解提取的 纯 天然营养物质。由于其含有丰富的营养物质及 特殊的风味，已被广泛应用于乳品、饮料及啤 酒酿造中 [1-2] 。但其原料中含有的β-葡聚糖溶 于水后会增加料液的黏度，而不利于料液的过 滤，所以在麦精的生产过程中会对其中的β-葡
聚糖进行降解 [3]。 β-葡聚糖属非淀粉多糖类，是以β-(1-3) 和β-(1-4)混合连接的葡萄糖聚合物[4]。经酶解后 会形成一系列由β-1,4糖苷键连接而形成的低聚 糖 [5]。而且具有重要的生理功能[6-7]。Johansson等 (2006)研究发现β-葡聚糖酶解后其中纤维三糖和