Trizol法大鼠心肌总RNA提取方法探讨
trizol法提取rna的原理
trizol法提取rna的原理
Trizol法是一种常用的RNA提取方法，它是一种单步法，可以同时提取RNA、DNA和蛋白质。
该方法基于酚和胍的化学性质，通过酚的溶解性和胍的离子性来分离RNA、DNA和蛋白质。
Trizol法的原理是利用酚的溶解性质将细胞膜和细胞核膜破坏，使RNA、DNA和蛋白质释放出来。
然后，加入氯仿，使RNA、DNA和蛋白质分为两个相，RNA在上层，DNA和蛋白质在下层。
接着，加入异丙醇，使RNA从上层转移到异丙醇层中，形成RNA沉淀。
最后，将RNA沉淀用乙醇洗涤，去除杂质，得到纯净的RNA。
Trizol法的优点是简单、快速、高效，可以同时提取RNA、DNA 和蛋白质，适用于多种样品类型，如细胞、组织、血液、尿液等。
此外，该方法提取的RNA质量好，适用于后续的实验操作，如RT-PCR、Northern blot、RNA测序等。
但是，Trizol法也存在一些缺点。
首先，该方法对RNA的长度和结构有一定的限制，不适用于长链RNA和某些结构特殊的RNA。
其次，该方法对样品的处理和操作技巧要求较高，容易受到外界因素的影响，如温度、湿度、pH值等。
最后，该方法的成本较高，需要使用较多的试剂和设备。
Trizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是利用酚和胍的化学性质分离RNA、DNA和蛋白质。
该方法具有简单、快速、高效等
优点，但也存在一些缺点。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的RNA提取方法。
trizol提rna方法
trizol提rna方法TRIzol提RNA方法简介TRIzol提RNA方法是一种常用的RNA提取方法，采用TRIzol试剂将RNA稳定在总RNA样品中提取出来，通过分离纯化使RNA的质量和完整性得到一定保证。
TRIzol提RNA方法具有以下特点：1. 适用范围广TRIzol提RNA方法不仅适用于多种类型的样品，如细胞、组织和微生物等，还可用于分离多种类型的RNA分子，如mRNA、rRNA和miRNA等。
2. 提高RNA的纯度和质量TRIzol试剂具有独特的成分，可以最大限度地去除DNA、蛋白质等干扰物质，提高RNA的纯度和质量。
同时，TRIzol提RNA方法还可以避免RNA的降解和失活，保证RNA完整性。
3. 操作简单、快速TRIzol提RNA方法操作简单，一般可以在1-2小时内完成RNA提取。
相对于其他RNA提取方法，TRIzol提RNA方法快速、高效。
TRIzol提RNA方法步骤TRIzol提RNA方法共分为以下步骤：1. 样品裂解将样品加入TRIzol试剂中，裂解细胞并溶解RNA。
2. 相分离将样品和TRIzol混合液沉淀，然后加入一个有机溶剂，使RNA与水相分离。
3. 提取RNA将RNA上清液收集起来，加入氯仿，进一步去除有机溶剂和DNA。
4. 沉淀RNA将RNA上清液沉淀，将RNA稳定在沉淀中，去除残留的有机溶剂和盐分。
5. 溶解RNA将RNA沉淀中的RNase-free水添加至RNA沉淀中，彻底溶解RNA。
如何提高TRIzol提RNA质量和完整性1. 样品处理不同类型的样品有不同的处理方式。
对于细胞和组织等样品，应尽量在收集后尽快进行TRIzol提RNA操作，避免RNA在细胞或组织中降解和失活。
2. TRIzol试剂的使用使用新鲜的TRIzol试剂，并根据使用说明操作。
避免直接接触试剂和皮肤等。
3. RNA逆转录和扩增在进行RNA逆转录和扩增前，应对RNA质量和完整性进行检测，以确保数据准确性。
总RNA的提取（Trizol法提取）（PDF）
总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water溶解RNA沉淀。
PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。
TaKaRa Taq TM是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。
TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。
Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。
Trizol提取组织总RNA的方法
Trizol提取组织总RNA的方法实验原理：Trizol试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。
当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA 分离开。
水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。
液氮研磨组织：实验准备：研钵、研棒、药匙清洗后高压消毒；线手套、烧杯高压消毒。
材料：1.5mlEP管，200μL EP管（RNA-Free）试剂：Trizol；氯仿；异丙醇；75％乙醇（DEPC处理水：无水乙醇=1:3）；桌面清理干净，酒精擦拭消毒。
1.取出冻存于-80℃的组织，放于液氮中。
2.在研钵中导入部分液氮，对研钵、研锤进行预冷。
取出组织，放入含有液氮的研钵中，左手戴上线手套，外面套两层PE手套，扶住研钵，右手持研锤压碎组织。
Tip：为了防止组织研碎过程中蹦出，左手在刚开始研磨过程中可以护住研钵口；可以用研棒将组织聚集到一起进行研磨，这样更容易捣碎；研磨期间不断加入液氮，防止组织中RNA因温度升高降解；3.研磨完成后，将研磨好的组织粉末收集到已经编号的含有Trizol的EP管中。
如果组织较少，可以将Trizol 的量减半（500μL）。
4.接下来进行Trizol提取RNA操作Trizol 提取RNA实验准备：离心机预冷；70％乙醇预冷值-20℃。
1.将EP管上下颠倒，充分混匀，室温放置5分钟。
2.在通风橱中操作。
加入200ul（0.2倍体积）的氯仿，盖紧盖，剧烈震荡混匀15秒，室温静置5 min。
12000g，4℃离心15min。
Tip：使用1mL的枪吸取。
3.离心后溶液分为三层，RNA存在于上清中，离心管从离心机上拿下来时要轻巧，以免管内物质震荡导致下层沉淀激起。
吸取上清的时候一定要轻，切忌吸取太多，少量即可（400-500ul），避免碰到下层沉淀。
Trizol法提取总RNA Protocol
Trizol法提取总RNATrizol法是一种常用的RNA提取方法，其原理是基于氯仿-异硫氰酸胍的试剂，能够迅速破碎细胞并抑制细胞释放出的核酸酶。
通过将样品与Trizol试剂混合，可以裂解细胞并释放出RNA。
然后加入氯仿进一步抽提RNA，并通过离心分离出上清液中的RNA。
最后通过乙醇沉淀和洗涤得到纯化的RNA。
所需试剂和耗材1.Trizol试剂：用于细胞裂解和RNA的释放。
2.氯仿：用于抽提RNA。
3.无水乙醇：用于洗涤沉淀的RNA。
4.DEPC水：用于制备无RNA酶的水。
5.1.5ml Eppendorf管：用于RNA的存储。
6.Tips：用于吸取无RNA酶的水和Trizol试剂。
实验仪器1.台式高速离心机：用于离心分离RNA。
2.涡旋振荡器：用于混合样品和试剂。
3.移液器：用于吸取试剂和样品。
4.无菌微量离心管：用于样品和试剂的存储。
5.无菌手套：用于防止RNA酶的污染。
准备工作1.在实验前需要将实验区域和所有实验用具进行清洁和消毒，以避免RNA酶的污染。
2.使用Trizol试剂前需仔细阅读说明书，并确保按照说明书的要求进行操作。
3.为避免RNA酶的污染，需要穿戴无菌手套进行实验操作。
实验方法1.准备无菌的DEPC水，加入DEPC水至10ml，然后加入10μl的氯仿，充分混匀后放置备用。
2.在无菌的1.5ml Eppendorf管中加入100μl的Trizol试剂，加入10μl的氯仿，充分混匀后加入步骤1中制备好的DEPC水-氯仿混合液100μl，再次充分混匀后放置备用。
3.将样品加入到步骤2中制备好的溶液中，充分混匀后加入氯仿，再次充分混匀后进行高速离心，分离出上清液。
4.将上清液转移至新的离心管中，加入等体积的无水乙醇，充分混匀后进行高速离心，收集沉淀的RNA。
5.用70%乙醇洗涤沉淀的RNA，去除残留的乙醇和盐类，最后将RNA沉淀干燥后重新溶解在水中或指定的缓冲液中。
注意事项1.在加入氯仿之前，不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
TRIZOL法提取总RNA
目录
• 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 注意事项 • 实验优化和常见问题处理
01
实验原理
Trizol的组成和作用
Trizol是一种常用的细胞裂解液，主要由苯酚、异硫氰酸胍和苯酚等成分 组成。
苯酚的作用是使蛋白质变性并释放核酸，异硫氰酸胍的作用是抑制DNA 酶活性，防止DNA降解，同时能ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ效地变性蛋白质，使RNA充分释放。
RNA的完整性检测
琼脂糖凝胶电泳
将RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，观察28S和18S rRNA条带的亮度及完整性， 判断RNA的质量。
生物信息学分析
将RNA测序数据与基因组数据进行比对，分析转录本的拼接情况，评估RNA的 完整性。
反转录和PCR验证
反转录
将RNA反转录成cDNA，以便进行后 续的PCR验证。
效果。
去除DNA和蛋白质
在提取RNA的过程中，需要去除DNA 和蛋白质等杂质，以避免对后续实验 的干扰。
在去除杂质的过程中，需要注意控制 好离心时间和转速，以保证去除效果。
Trizol法中，DNA和蛋白质可以通过 离心和洗涤的方法去除。在离心后， 上清液中的DNA和蛋白质可以被去除， 而RNA则留在沉淀中。
在使用Trizol法时，通常采用玻璃匀浆器或匀浆机进行匀浆破碎。
抽提RNA
抽提RNA的目的是将RNA从细 胞碎片和其他杂质中分离出来。
Trizol法是一种常用的RNA抽提 试剂，它能够有效地分离出
RNA，同时抑制DNA和蛋白质 的降解。
在抽提过程中，需要按照试剂说 明书进行操作，注意控制好细胞 碎片的浓度和体积，以保证抽提
将提取的RNA存储在无菌环境中， 避免污染。
Trizol法大鼠心肌总RNA提取方法探讨
Trizol法大鼠心肌总RNA提取方法探讨戴先成;柴智锋;徐永城;王山青【摘要】目的探讨大鼠心肌总RNA的提取方法,为今后法医学研究和实践工作提供参考.方法用Trizol法,严格注意无RNA酶操作,通过裂解组织,分离、沉淀RNA 而提取大鼠心肌总RNA,并用分光光度计、凝胶电泳及RT-PCR检测结果.结果Trizol法能获得较高纯度和产量的完整总RNA.结论 Trizol法是提取总RNA可靠有效的方法,可望在法医学领域有较广的应用.【期刊名称】《刑事技术》【年(卷),期】2014(000)003【总页数】2页(P15-16)【关键词】法医病理学;总RNA提取;Trizol法【作者】戴先成;柴智锋;徐永城;王山青【作者单位】浙江省诸暨市公安局,311800;浙江省诸暨市公安局,311800;浙江省宁波市公安局鄞州分局,315100;北京市公安局法医中心二部,102488【正文语种】中文【中图分类】DF795.1分子生物学技术已经在各个领域广泛运用，其中在RNA 方面的研究也正在被各领域研究人员所青睐，法医工作者也不例外。
但是由于RNA 降解快而使其应用大受限制，本文介绍以Trizol为主要试剂的总RNA 提取方法，并就其提取过程中的注意事项进行讨论，以期在法医学领域能有较好的应用。
1 材料与方法1.1 材料健康雌性Sprague－Dawley大鼠3只（8周龄，200±20g）；焦碳酸二乙酯（DEPC）、Trizol（美国）、氯仿、异丙醇等试剂；ND－100分光光度计（美国）、Microfuge 22R4℃离心机（美国）、9700PCR 仪（美国）等设备。
1.2 方法实验准备：200℃干烤金属器械及玻璃器材4h、1／1000DEPC液浸泡塑料器材过夜后烘干待用；实验员戴无RNA 酶手套、医用口罩及手术帽，用3%H2O2 擦洗操作台及设备。
实验操作：（1）断颈处死大鼠，立即剪取新鲜心肌组织50mg～100mg，液氮浸泡数分钟（直至组织块不冒气泡、完全沉到液氮底部为止），再放入已加1mL预冷Trizol的玻璃匀浆器，冰上碾磨15min，转移混合液至2mL EP管并室温裂解5min；（2）4℃、12000r／min离心10min，后转移上清至新管，向新管加氯仿200μL，盖紧并振荡混匀，手动剧烈摇晃15sec，室温放置3min；（3）4℃、12000r／min离心15min，再用200μL 小枪头分多次转移上清至新管，向新管加异丙醇500μL，盖紧混匀，手动摇晃15sec，室温放置10min；（4）4℃、12000r／min离心10min，弃上清并加入75%乙醇1mL，温和震荡、悬浮沉淀；（5）4℃、7500r／min离心5min，弃上清并在超净工作台风干；（6）用20μL 无RNA 酶水溶解沉淀，ND－100 分光光度计及1%琼脂糖凝胶电泳检测；（7）将RNA 逆转录成cDNA，并对管家基因GAPDH 进行PCR 扩增及电泳检测。
心肌细胞总RNA的提取
心肌细胞总RNA 的提取1. 匀浆化作用：50mg 心肌（置于1ml 玻璃匀浆器内）加1mlTrizol 溶液①进行研磨匀浆液（倒入1.5mlEP 管中）颠倒混匀10下，室温静置5分钟，12，000rmp4℃离心5分钟。
下层液（弃去） 上清液（置新的EP 管中）2.分离阶段上清液加入氯仿（0.2ml ）,剧烈震荡15秒，乳化后，室温静置5分钟，12，000rmp4℃离心15分钟。
分为三层的匀浆液3.RNA 的沉淀 三层匀浆液白色中间层 无色的上清液 下层有机相（取0.2ml 置新的EP 管中）加入0.2ml 异丙醇，上下颠倒混匀，室温静置10分钟，12，000rmp4℃离心10分钟。
具沉淀上清液4.RNA的洗脱具沉淀上清液上清液（弃去）沉淀缓慢沿EP管壁加入75%乙醇1ml(DEPC水配制并预冷)②，轻轻振摇，12，000rmp4℃离心5分钟。
乙醇（弃去）沉淀（新）5.RNA的再溶解沉淀（新）室温干燥3-5分钟，加入适当的Rnase-free水（20ul）③溶解。
溶液（于-80℃保存）①Trizol溶液：在2000ml的烧杯中加入以下物质，混合均匀：500ml重蒸苯酚；250g异硫氢酸胍；293mL蒸馏水；17.6mL 0.75M 柠檬酸钠溶液（pH≥7）26.4mL 10％sarcosy（十二烷基肌氨酸钠）溶液50mL 2M NaAc溶液(pH≥4)TRIzol需4℃低温保存，保质期约一年。
100mL TRIzol试剂市场售价约478元人民币。
注释：（1）水和苯酚部分互溶，Trizol中苯酚被水饱和，形成均匀溶液；（2）NaAc等盐类的作用是提供缓冲环境。
②75%乙醇（DEPC水配制）：先配置DEPC水，1000 ml双蒸水加1 ml DEPC，不用灭菌。
100%的乙醇与DEPC水按3：1的体积比配置；一段时间（一般12小时左右）后再高压灭菌。
③Rnase-free水：1000 ml双蒸水加1 ml DEPC，不用灭菌。
Trizol总RNA抽提步骤
Trizol总RNA抽提步骤1样品的处理1.1样品的匀浆A.贴壁细胞尽量弃去培养液，直接往直径3.5cm的培养板中加入1ml Total RNA Extraction Reagent 覆盖并反复吹打裂解细胞。
【注】：1）依据培养板的面积而不是细胞的数量来决定所需的Total RNA Extraction Reagent 量（每10cm2 加1ml）。
2）当加入Total RNA Extraction Reagent量不足时可导致抽提的RNA有DNA污染。
3）贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全裂开，并已释放RNA，继续后续实验即可。
B. 悬浮细胞离心收集细胞，每5 ×106-107个细胞加入1 ml Total RNA Extraction Reagent，用移液器反复吹打直至无明显颗粒样存在。
【注】：在加入Total RNA Extraction Reagent前避免洗涤细胞，否则会增加mRNA降解的可能性。
裂解某些酵母和细菌可能需要使用匀浆器。
C. 动/植物组织取新鲜动植物组织或-70℃冻存动物组织在液氮中充分研磨，按照表1加入适当量Total RNA Extraction Reagent 混匀。
或取新鲜动植物组织尽量剪碎，加入适当Total RNA Extraction Reagent量，匀浆仪进行匀浆处理。
【注】：样品体积一般不要超过Total RNA Extraction Reagent体积的10%。
1.2 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
1.3（可选）在4℃条件下，12000rpm 离心10min，取上清。
【注】：如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或肌肉，植物的块茎结节等可离心去除。
离心后的沉淀中包含有细胞外膜、多糖以及高分子量DNA，上清中含有RNA。
处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂应尽量去除，取澄清的匀浆液进行后续实验。
Trizol法提取RNA实验步骤及原理
Trizol法提取RNA实验步骤及原理RNA（核糖核酸）在许多生物学过程中起着至关重要的作用，如基因表达调控、蛋白质合成等。
Trizol 法是一种广泛应用于提取细胞或组织中总 RNA 的方法。
下面将详细介绍 Trizol 法提取 RNA 的实验步骤及原理。
一、实验原理Trizol 试剂主要成分包括苯酚、异硫氰酸胍等。
异硫氰酸胍是一种强变性剂，能够迅速破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，并抑制RNA 酶的活性，从而保护RNA 不被降解。
苯酚则能够促使蛋白变性，并使核酸从蛋白核酸复合物中释放出来。
在 Trizol 处理样品后，RNA 会溶解在水相中。
通过加入氯仿，离心后可将溶液分为水相、有机相和中间层。
RNA 存在于水相中，而 DNA 和蛋白质分别存在于有机相和中间层。
收集水相，通过异丙醇沉淀可得到 RNA。
最后，用乙醇洗涤 RNA 沉淀以去除残留的盐和杂质，从而获得较为纯净的 RNA。
二、实验步骤1、材料准备细胞或组织样本Trizol 试剂氯仿异丙醇75%乙醇（用 DEPC 水配制）无 RNA 酶的离心管、移液器吸头离心机涡旋振荡器2、样本处理细胞样本：将培养的细胞收集到离心管中，离心弃去培养液。
加入适量的 Trizol 试剂，反复吹打使细胞充分裂解。
组织样本：将新鲜组织切成小块，放入液氮中速冻，然后研磨成粉末。
加入适量的 Trizol 试剂，充分匀浆。
3、室温静置裂解后的样本在室温下静置 5 分钟，使核蛋白体完全解离。
4、加入氯仿按每 1ml Trizol 试剂加入 02ml 氯仿的比例，剧烈振荡 15 秒，然后室温静置 2 3 分钟。
5、离心在 4℃下，以 12000g 离心 15 分钟。
离心后，溶液分为三层：上层为无色的水相，含有 RNA；中间层为白色；下层为红色的有机相，含有 DNA 和蛋白质。
6、转移水相用移液器小心地将上层水相转移到一个新的无RNA 酶的离心管中，避免吸取中间层和有机相。
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摘要 ： 目的
探 讨 大 鼠心肌 总 ＲＮＡ 的提 取 方 法 ， 为今 后 法 医学研 究和 实践 工作 提供 参 考 。方 法 用 Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ
Ｔｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法能获得 较 高纯度 和产 量 的 完整 总 Ｒ ＮＡ。结 论 Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法是提 取 总
Ａ Ｂ Ｓ Ｔ Ｒ Ａ Ｃ Ｔ： ０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｅ ｘ ｐ ｌ ｏ ｒ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ Ｒ Ｎ Ａ ｆ ｒ ｏ ｍ ｒ ａ ｔ ｍｙ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ｕ ｍ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｆ ｏ ｒ ｆ ｏ ｒ ｅ ｎ ｓ ｉ ｃ ｍ ｅ ｄ ｉ —
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烈 摇晃 １ ５ ｓ ｅ ｃ ， 室温 放置 ３ ｍｉ ｎ ； （ ３ ） ４ ￣ Ｃ、 １ ２ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ离 心 １ ５ ｍｉ ｎ ， 再用 ２ ０ ０ ／ ａ Ｌ小
ＫＥ Ｙ Ｗ ＯＲＤＳ： ｆ ｏ ｒ ｅ ｎ ｓ ｉ ｃ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ； ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ Ｒ ＮＡ； Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ
分子 生物 学技 术 已经在 各个 领域 广 泛运 用 ， 其 中
使 其应用 大受 限制 ， 本 文介 绍 以 Ｔｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 为 主要试 剂 的
总 ＲＮＡ提 取方 法 ， 并 就 其 提取 过 程 中的 注意 事 项 进 行讨 论 ， 以期 在法 医学领 域 能有较 好 的应用 。
１ 材 料与 方法
新管 ， 向新 管加氯 仿 ２ ０ ０ ／ ￣ Ｌ， 盖 紧并 振荡 混 匀 ， 手 动剧
在 ＲＮＡ方 面 的 研 究 也 正 在 被 各 领 域 研 究 人 员 所 青 睐， 法 医工作 者也 不 例外 。但 是 由于 Ｒ ＮＡ 降解 快 而
实验 操作 ： （ １ ） 断颈 处死 大 鼠， 立 即剪 取新 鲜 心肌 组织 ５ ０ ｍｇ ￣１ ０ ０ ｍｇ ， 液 氮浸 泡数 分 钟 （ 直 至组织 块 不 冒气泡 、 完全沉到液氮底部 为止） ， 再放人 已加 １ ｍＬ 预冷 Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 的玻 璃 匀 浆 器 ， 冰上碾磨 １ ５ ｍｉ ｎ ， 转 移 混 合 液至 ２ ｍＬ Ｅ Ｐ管并 室 温裂解 ５ ｍｉ ｎ ； （ ２ ） ４ ℃、 １ ２ ０ ０ ０ ｒ ／ ａｉ ｒ ｎ离 心 １ ０ ａｉ ｒ ｎ， 后 转 移 上 清 至
法， 严 格 注意无 Ｒ ＮＡ 酶操 作 ， 通 过 裂解组 织 ， 分 离、 沉淀 Ｒ ＮＡ 而提 取 大鼠心 肌 总 ＲＮＡ， 并 用分光 光度 计 、 凝胶
电泳及 ＲＴ ＿ Ｐ Ｃ Ｒ检 测 结果 。结 果
ＲＮＡ 可靠 有效 的方 法 ， 可 望在 法 医学领域 有较 广的 应 用 。
关 键 词 ： 法 医病 理 学 ； 总Ｒ ＮＡ提 取 ； Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法 中 图分 类 号 ： Ｄ Ｆ ７ ９ ５ ． １ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ ０ ８ — ３ ６ ５ ０ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ３ — ０ ０ １ ５ — ０ ２
ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ＲＮＡ ｆ ｒ ｏ ｍ ｒ ａ ｔ ｍｙ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ｕ ｍ ａ ｎ ｄ ｃ ａ ｎ ｂ ｅ ｕ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｅ ｎ ｓ ｉ ｃ ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ｆ ｉ ｅ ｌ ｄ ．
蔓蕉
生笠
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技 术 交 流
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Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法 大 鼠 心 肌 总 ＲＮＡ 提 取 方 法 探 讨
戴先 成 ， 柴智锋 ， 徐 永城。 ， 王 山青。 （ １ ． 浙江省诸暨市公安局， ３ １ １ ８ ０ ０ ； ２ ． 浙江省宁波市公安局鄞州分局， ３ １ ５ １ ０ ０ ； ３ ． 北