鼠李糖乳杆菌发酵液中水溶蛋白的提取及其抗氧化活性
5种乳酸菌及其灭活态体外抗氧化能力的比较研究
5种乳酸菌及其灭活态体外抗氧化能力的比较研究陈漪汶;方若楠;朱剑锋;庞旭;徐健;胡文锋【摘要】以总抗氧化活性(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、羟自由基清除率(OH-·)、超氧阴离子清除率(O2-·)、还原活性为测定指标,对5株乳酸菌灭活前后发酵上清液、完整细胞悬液、胞内提取物的抗氧化能力进行比较研究,并筛出抗氧化能力相对较强的3株乳酸菌进行复配.结果表明:5种乳酸菌灭活前后的发酵上清液、完整细胞悬液、胞内提取物具有不同的抗氧化能力,其中嗜酸乳杆菌灭活前和灭活后的发酵上清液的总抗氧化活性最好,分别为45.9、35.0 U/mL.菊糖芽孢乳杆菌未灭活的发酵上清液的超氧阴离子自由基清除率较强为21.03％.嗜热链球菌的灭活胞内提取物的总超氧化物歧化酶活力最强为456.7 U/mL,其未灭活的胞内提取物的羟自由基清除率最强为79.26％.唾液乳杆菌的灭活发酵上清液的还原活性最强.复配结果表明,灭活完整细胞悬液的超氧阴离子清除率(O2-·)较单一菌株强;菊糖芽孢乳杆菌和嗜酸乳杆菌复配后灭活完整细胞悬液的羟自由基清除率(OH-·)最强,为82.40％;而菌株复配后的总抗氧化活性(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力与单菌差异不显著.不同乳酸菌菌株的抗氧化能力存在差异,且其发挥抗氧化作用的活性物质存在的部位也因菌株不同而具有较大的差异性.【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2019(040)011【总页数】7页(P85-90,97)【关键词】乳酸菌;抗氧化能力;发酵上清液;完整细胞悬液;胞内提取物【作者】陈漪汶;方若楠;朱剑锋;庞旭;徐健;胡文锋【作者单位】华南农业大学食品学院,广东广州510642;华南农业大学食品学院,广东广州510642;生物源生物技术(深圳)股份有限公司,广东深圳518118;广州无两生物科技有限公司,广东广州510640;广州柏芳生物科技有限公司,广东广州510640;华南农业大学食品学院,广东广州510642【正文语种】中文【中图分类】TS201.1氧化应激是机体细胞内促氧化成分(如超氧化物、过氧化氢等)与抗氧化成分(超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽等)之间平衡失调,体内氧自由基生成过多无法被清除,引起机体过度氧化,造成机体组织功能损害的一系列适应性的反应[1-2]。
鼠李糖乳杆菌抗胁迫菌株的筛选及培养条件优化
鼠李糖乳杆菌抗胁迫菌株的筛选及培养条件优化韩墨;张志伟;王燕【摘要】以新疆传统酸奶中分离出的八株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）为出发菌株,对其产酸能力较强菌株的抗氧、抗酸、抗低温胁迫能力进行检测,优选出胁迫抗性能力强的菌株L.rhamnous LGG-QF-3。
在单因素试验的基础上,通过正交试验对菌株L.rhamnous LGG-QF-3的培养基生成和培养条件进行优化,得到最佳培养基配方为：3%豆粕、1%酵母粉、10%红糖无机盐,培养条件为37℃,60 r/min振动培养48 h。
【期刊名称】《齐鲁工业大学学报：自然科学版》【年(卷),期】2016(030)002【总页数】5页(P31-35)【关键词】鼠李糖乳杆菌;胁迫抗性;培养基优化【作者】韩墨;张志伟;王燕【作者单位】齐鲁工业大学生物工程学院,山东济南250353【正文语种】中文【中图分类】Q815鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)是一种常见的益生菌，在人体新陈代谢中起着关键作用。
鼠李糖乳杆菌最早由美国人Sherwood Gorbach和Barry Goldin于1983年从健康人体的肠道菌群中分离得到[1]。
该菌属于乳杆菌(Lactobacillus)属、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)种，革兰氏阳性菌，无质粒，由于其糖代谢时可代谢单糖而不可代谢乳糖而得名。
鼠李糖乳杆菌肠道黏着率高，定植能力强，并具有高效降胆固醇，促进细胞分裂的能力，可起到调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、排除毒素、预防龋齿、提高机体免疫力及抗癌等重要生理保健功能，可广泛应用于青贮饲料、功能食品和医疗保健等领域[2]。
随着鼠李糖乳杆菌益生功能研究的深入，以活性鼠李糖乳杆菌为主的产品越来越多。
这些产品在现代化的工业生产、产品运输、销售过程中，要面对各种各样的生存胁迫，其中包括由菌株自身产生乳酸带来的酸胁迫，活性氧族(Reactive Oxygen Species,ROS)产生的氧压力胁迫，低温冷冻贮藏、运输(0～5 ℃)过程中产生的温度胁迫及发酵过程中遇到的噬菌体胁迫等[3]。
乳酸菌协同发酵玉米蛋白水解物工艺条件优化及其对抗氧化活性影响
乳酸菌协同发酵玉米蛋白水解物工艺条件优化及其对抗氧化活性影响丛珊滋;曹雨佳;张欣欣;李冠龙;刘晓兰;胡楠【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2024(45)5【摘要】该文以玉米蛋白水解物为原料,以鼠李糖乳杆菌YY⁃15和发酵乳杆菌YY⁃16为发酵菌株,通过单因素试验和响应面试验优化发酵条件,并对发酵后玉米蛋白水解物的体外抗氧化能力和氨基酸含量进行分析评价。
结果表明,两株乳杆菌协同发酵玉米蛋白水解物的最佳发酵工艺为菌种体积比3∶1,玉米蛋白水解物浓度20.50%,接种量4%,果葡糖浆添加量5%,发酵温度39.5℃,发酵时间24 h。
在该条件下,发酵后玉米蛋白水解物的体外DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基三者清除能力的IC50值分别为0.227、0.200、12.851 mg/mL,Fe^(2+)螯合能力的IC_(50)为1.856 mg/mL,与发酵前相比分别提高了50.65%、34.64%、6.41%、41.36%。
【总页数】11页(P152-162)【作者】丛珊滋;曹雨佳;张欣欣;李冠龙;刘晓兰;胡楠【作者单位】齐齐哈尔大学食品与生物工程学院;黑龙江省玉米深加工理论与技术重点实验室【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件优化及水解物抗氧化活性研究2.中性蛋白酶水解条件对玉米蛋白酶水解产物抗氧化活性影响研究3.米曲霉浓醪发酵玉米蛋白粉制备具有抗氧化活性的蛋白水解物4.米曲霉种曲和碱性蛋白酶协同水解玉米-大豆蛋白复配物及其产物的抗氧化活性5.麦芽协同复合蛋白酶催化玉米蛋白水解物制备及抗氧化活性研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用
DOI:10.13995/ki.11-1802/ts.026326引用格式:陈大卫,梁娇娇,程月,等.鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用[J].食品与发酵工业,2021,47(11):61-67.CHEN Dawei,LIANG Jiaojiao,CHENG Yue,et al.Probiotic function of Lac-tobacillus rhamnosus hsryfm 1301fermented milk on human hepatocyte L-02in NAFLD cell model[J].Food and Fermentation Industries,2021,47(11):61-67.鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳在非酒精性脂肪肝细胞模型中对人肝细胞L-02的益生作用陈大卫1,梁娇娇1,程月1,瞿恒贤1,陈春萌1,任晨瑜1,张臣臣1,关成冉1,马文龙1,陈霞1,李启明2,顾瑞霞1∗1(扬州大学食品科学与工程学院江苏省乳品生物技术与安全控制重点实验室,江苏扬州,225127)2(新希望乳业股份有限公司,四川成都,610023)摘㊀要㊀建立由游离脂肪酸(free fat acid ,FFA )诱导的体外人肝细胞L-02非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fat-ty liver disease ,NAFLD )模型,探究益生菌发酵乳在模型中对人肝细胞的益生作用㊂利用FFA (油酸ʒ棕榈酸=2ʒ1,摩尔比)诱导人肝细胞脂肪变性,通过细胞存活率㊁胞内甘油三酯(triglyceride ,TG )和总胆固醇(total choles-terol ,TC )含量㊁培养液中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase ,AST )和谷丙转氨酶(alanine amin-otransferase ,ALT )含量及细胞凋亡率等指标来评价脂肪变性模型,探讨鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠4周后的血清在模型中对人肝细胞L-02的影响㊂结果表明,当模型中FFA 的浓度为1.5和2mmol /L 时,人肝细胞的存活率显著低于未添加(P <0.05),均低于32%,细胞数量明显减少且形状发生变化;当FFA 浓度为1mmol /L 时,人肝细胞存活率较高,为86.37%,脂滴数量达到最高,此时建立的NAFLD 细胞模型中胞内TG 含量和培养液中AST 含量分别为5.73mmol /L 和113.50U /L ,均显著高于未添加(P <0.05),而胞内TC 含量及培养液中ALT 含量则无显著性差异(P >0.05),且细胞凋亡率差异较小㊂鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预大鼠后的血清降低了NAFLD 模型中肝细胞的脂滴数量,胞内TG 含量及大鼠血清细胞培养液中AST 含量均显著低于未干预菌株的对照组大鼠血清(P <0.05),分别为1.95mmol /L 和93.33U /L ;细胞凋亡率较对照组下降了2.96%,正常细胞数量上升了4.50%㊂利用1mmol /L 的FFA 可以建立人肝细胞L-02的NAFLD 模型,鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中人肝细胞L-02的脂肪变性具有改善作用㊂关键词㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301;发酵乳;人肝细胞L-02;游离脂肪酸;非酒精性脂肪性肝病第一作者:博士,副教授(顾瑞霞教授为通讯作者,E-mail:guruixia1963@)㊀㊀基金项目:国家自然科学基金青年项目(31701627,31801565);国家自然科学基金面上项目(31972094);江苏省高等学校自然科学研究重大项目(19KJA140004);江苏省高等学校自然科学研究面上项目(17KJB550009); 十三五 国家重点研发计划课题项目(2019YFF0217602);成都市重大科技应用示范项目(2019-YF09-00055-SN)收稿日期:2020-12-01,改回日期:2021-02-04㊀㊀非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver dis-ease,NAFLD)是由非酒精消耗或其他原因引起的肝脏脂质过量,造成肝细胞中脂滴积聚,肝脏呈现肿大的现象,会对人体健康产生较大的影响[1]㊂目前,NAFLD 的药物治疗主要是通过预防肝细胞的氧化㊁减少肝细胞的促炎因子及血脂水平等方式进行[2-3],但其存在一定的副作用[4]㊂通过膳食干预也能有效改善肝脏的脂肪变性和炎症反应,并具有良好的益生作用[5],因此,膳食干预是人们进行辅助治疗NAFLD 的重要途径㊂益生菌及其发酵乳制品不仅可以通过调节肠道微生态平衡等来增强机体的抗氧化能力和免疫能力[6-7],还可以通过降低肝细胞的甘油三酯(triglyc-eride,TG)㊁总胆固醇(total cholesterol,TC)含量以及调节脂肪变性和炎症因子水平等来改善机体的NAFLD 症状[8-10]㊂而临床研究也发现,益生菌可以通过改善患者血清中的天门冬氨酸氨基转移酶(as-partate aminotransferase,AST )㊁肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)㊁白细胞介素-6(inter-leukin-6,IL-6)水平及降低脂肪肝指数等来达到辅助治疗NAFLD 的效果[11-14],但具体的作用机制尚不明确㊂目前,NAFLD 的机制研究大多数采用动物和肝癌细胞株HepG2来进行[15],但动物模型造模周期长㊁成本高㊁稳定性较差;同时,肝癌细胞株HepG2与人肝细胞存在较大的差距[16]㊂与之相比,人肝细胞系L-02具有造模周期短㊁个体差异小等优势[17]㊂来源于广西巴马长寿人群的鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳对由高血脂症引起的大鼠肝脏细胞脂肪变性具有良好的改善作用[18],但对于人肝细胞的作用效应和机制尚不明确㊂研究显示,将样品在大鼠体内经过一系列的生物转化,再作用于细胞的研究结果较样品直接添加到细胞中更为准确[19]㊂本文利用油酸和棕榈酸的混合物游离脂肪酸(free fat acid,FFA)建立体外人肝细胞L-02NAFLD模型,探讨鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预大鼠后的血清在模型中对脂肪变性的人肝细胞L-02的益生作用,并建立一种更接近于人肝细胞的体外NAFLD细胞变性模型㊂1㊀材料与方法1.1㊀材料与试剂Wistar雄性大鼠,6周龄,体重(200ʃ20)g,扬州大学比较医学中心,动物生产许可证号SCXK(苏) 2017-0007,实验动物使用许可证号SYXK(苏)2017-0044;基础饲料(面粉㊁米粉㊁玉米㊁鼓皮㊁豆料㊁鱼粉及骨粉的质量分数分别为20%㊁10%㊁20%㊁26%㊁20%㊁2%㊁2%),江苏省协同医药生物工程有限责任公司;鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosu s)hsryfm 1301,江苏省乳品生物技术与安全控制重点实验室;人肝细胞株L-02,苏州北纳创联生物技术有限公司㊂胎牛血清,杭州四季青生物有限公司;RPMI-1640培养液,美国Hyclone公司;无脂肪酸牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),德国Ruibio公司;细胞冻存液㊁胰酶消化液(质量分数为0.25%)㊁RI-PA裂解液,上海碧云天生物技术有限公司;油酸钠(oleic acid,OA)㊁油红O试剂盒㊁AV/PI凋亡试剂盒,生工生物工程(上海)股份有限公司;棕榈酸钠,美国Sigma公司;CCK8(Cell Counting Kit-8)细胞增殖-毒性检测试剂盒,日本同仁公司;甘油三酯(triglyceride, TG)㊁总胆固醇(total cholesterol,TC)㊁天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)㊁丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)试剂盒,美康生物科技股份有限公司㊂1.2㊀仪器与设备HERAcell150CO2培养箱㊁Multiskan Sky1510全波长酶标仪,美国ThermoFisher科技有限公司;IX2-ILL100荧光倒置显微镜,日本Olympus公司;7020全自动生化分析仪,日本日立公司;5804R高速冷冻离心机,德国Eppendorf股份公司;LSRFortessa流式细胞仪,美国BD公司㊂1.3㊀试验方法1.3.1㊀细胞培养将复苏的人肝细胞L-02置于完全培养液中(RP-MI-1640培养液和胎牛血清的体积分数分别为90%和10%),于37ħ,体积分数为5%CO2的培养箱中培养,每24h更换1次培养液,待细胞生长至对数期时(细胞面积>80%),用胰酶消化液消化传代,取5代后的细胞进行后续试验㊂1.3.2㊀NAFLD细胞模型中FFA的添加浓度1.3.2.1㊀不同FFA浓度对细胞存活率的影响取100μL浓度为5ˑ104个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于96孔培养板中,在37ħ,体积分数为5%CO2的培养箱中培养24h后弃去培养液;利用含质量分数为1%的BSA完全培养液将5mmol/L FFA 分别稀释至0㊁0.25㊁0.5㊁0.75㊁1㊁1.5和2mmol/L;以未添加FFA为对照组,添加不同浓度的FFA为模型组,每组3个复孔,CO2培养箱培养24h后加入10μL CCK8试剂,37ħ孵育1h后于490nm处测定OD值,按公式(1)计算细胞存活率:细胞存活率/%=模型组OD值对照组OD值ˑ100(1) 1.3.2.2㊀不同FFA浓度对细胞脂滴的影响取1mL浓度为5ˑ105个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于6孔培养板中,在37ħ,体积分数为5% CO2的培养箱中培养24h后弃去培养液,以未添加FFA为对照组,添加1.3.2.1小节中不同浓度的FFA 为模型组,每组3个复孔,CO2培养箱培养24h后,釆用油红O染色法观察细胞内脂滴变化情况㊂1.3.3㊀NAFLD细胞模型的评价1.3.3.1㊀细胞内TG㊁TC含量的测定取1mL浓度为5ˑ105个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于6孔培养板中,以不添加FFA为对照组,添加最佳浓度的FFA为模型组,每组3个复孔,在37ħ,体积分数为5%CO2的培养箱中培养24h后弃去培养液,胰酶消化液消化3min后,用完全培养液终止消化,1000ˑg离心5min,PBS溶液清洗2遍,每管加入1mL RIPA细胞裂解液,吹打均匀,置于冰上裂解4h后,12000ˑg离心10min取上清液,采用全自动生化分析仪测定上清液中TG和TC 含量㊂1.3.3.2㊀细胞培养液中AST㊁ALT酶活力的测定从1.3.3.1小节培养24h后的6孔培养板中取出细胞上清液,以不添加FFA为对照组,4000ˑg离心5min,测定培养液中AST和ALT的含量㊂1.3.3.3㊀细胞凋亡率的测定取1mL浓度为5ˑ106个/mL的人肝细胞L-02悬液接种于6孔培养板中,在37ħ,体积分数为5% CO2的培养箱中培养24h,对照组加入含1%的BSA 的完全培养液,模型组加入最佳浓度的FFA,每组3个复孔,培养24h后加入500μL胰酶消化液消化3min后,加入完全培养液终止消化,1000ˑg离心5min,去上清液收集细胞;用100μL1ˑbuffer轻轻吹打细胞后,分别加入4μL异硫氰酸荧光素和4μL碘化丙啶,轻轻涡旋混匀,室温避光孵育15min后每管加入400μL1ˑbuffer,混匀,测定细胞凋亡率㊂1.3.4㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳的制备将在MRS液体培养基中活化2代后的鼠李糖乳杆菌hsryfm1301按3%的接种量接种至热处理后质量分数为12%的脱脂乳中,42ħ发酵至活菌数为109 CFU/mL,进行活菌计数,4ħ贮藏备用㊂1.3.5㊀大鼠血清的制备试验期间保持动物房通风㊁透光,室温为(23ʃ1)ħ,湿度为(50ʃ5)%,22只Wistar雄性大鼠用基础饲料正常饲喂1周后,按各组间平均体重无显著差异分为对照组和益生菌干预组,每组11只㊂干预组喂食基础饲料,并按1mL/100g的量灌胃鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳,对照组喂食基础饲料及等量的质量分数为0.9%的生理盐水,每天上午灌胃1次,记录每天的进食量及每周的体重,以便调整灌胃量㊂4周后眼球取血,4ħ孵育30min,3500ˑg离心20min,合并同组大鼠血清,56ħ灭活30min除去血清中的杂抗体等物质,并利用0.22μm滤孔过滤除菌,避免细胞受到污染[17,20],-80ħ保存备用㊂所有实验程序严格按照‘实验动物的护理和使用指南“进行㊂1.3.6㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中细胞的益生作用利用RPMI-1640培养液分别将对照组和干预组的大鼠血清稀释至10%[17],然后取1mL加至细胞模型中,每组3个复孔,于37ħ,体积分数为5% CO2的培养箱中培养24h,PBS溶液清洗2遍;观察各组细胞内脂滴的变化,并测定细胞中TG㊁TC含量㊁细胞凋亡率以及血清细胞培养液中AST和ALT的含量㊂1.4㊀数据处理与分析数据均采用Sigmaplot10.0㊁SPSS21.0软件进行统计和分析,结果以均值ʃ标准差(MeanʃSD)表示,以单因素方差分析进行显著性检验,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2㊀结果与分析2.1㊀NAFLD细胞模型中FFA的添加浓度通过测定模型中人肝细胞L-02的存活率及观察细胞内脂滴变化情况来确定模型中FFA的最佳添加浓度,结果如表1和图1所示㊂表1㊀不同浓度的FFA对细胞存活率的影响(n=3)Table1㊀Effect of different concentration of FFAon the survival rate of cellsFFA浓度/(mmol㊃L-1)OD值细胞存活率/% 0(对照组) 1.04ʃ0.01a100.00ʃ0.00a 0.250.98ʃ0.02b94.34ʃ1.58b 0.500.97ʃ0.02b92.88ʃ1.92b0.750.94ʃ0.01c88.78ʃ1.31c1.000.90ʃ0.01d86.37ʃ0.49c1.500.33ʃ0.01e31.98ʃ0.54d2.000.20ʃ0.00f19.48ʃ0.02e ㊀㊀注:不同字母表示具有显著性差异(P<0.05)(下同)a-0mmol/L(对照组);b-0.25mmol/L;c-0.5mmol/L;d-0.75mmol/L;e-1mmol/L;f-1.5mmol/L;g-2mmol/L图1㊀不同浓度的FFA对细胞脂滴的影响(ˑ400)Fig.1㊀The effect of different concentration of FFAon the lipid droplets in cells由表1可知,当模型中FFA的浓度分别为0.25㊁0.50和0.75mmol/L时,人肝细胞L-02的存活率较高,均大于88.78%;而随着FFA浓度的不断增加,细胞的存活率随之下降,当FFA浓度大于1mmol/L 时,细胞的存活率显著下降(P<0.05),由1mmol/L时的86.37%分别下降至1.5mmol/L时的31.98%和2mmol/L时的19.48%㊂由图1可知,人肝细胞L-02经油红O染色后,未添加FFA的细胞边缘清晰,核膜完整,细胞内未见红色脂滴;而随着FFA浓度的增加,细胞内脂滴数量呈逐渐增多,且体积呈逐渐增大的趋势㊂当FFA浓度大于1mmol/L时,肉眼可见的细胞数量大幅度减少,细胞形状发生变化,表明当添加的FFA超过一定浓度时,会严重损伤细胞;但当浓度低于1mmol/L时,脂肪变性不充分,脂滴数量较少;当FFA浓度为1mmol/L时,细胞脂肪变性充分,脂滴数量较多,结合细胞存活率的试验结果,选取1mmol/L作为模型中FFA的最佳添加浓度㊂2.2㊀NAFLD细胞模型由表2可知,添加了1mmol/L FFA的模型组人肝细胞L-02培养24h后,细胞内TG含量为5.73 mmol/L,显著高于对照组(P<0.05);同时,培养液中AST含量为113.50U/L,显著高于对照组的73.67U/L(P<0.05),表明1mmol/L的FFA造成了细胞的脂肪变性,与NAFLD大鼠模型特征较为一致[21]㊂表2㊀脂肪变性细胞内TG㊁TC及细胞培养液中AST和ALT的含量(n=3)Table2㊀Content of TG,TC in the steatosis cells and AST,ALT content in the cell culture medium指标TG 含量/(mmol㊃L-1)TC含量/(mmol㊃L-1)AST含量/(U㊃L-1)ALT含量/(U㊃L-1)对照组 2.31ʃ0.15a0.04ʃ0.01a73.67ʃ5.69a5.23ʃ0.58a 模型组 5.73ʃ0.08b0.05ʃ0.01a113.50ʃ8.02b5.44ʃ0.58a由图2可知,对照组人肝细胞L-02的早期凋亡率为1.82%,晚期凋亡率为1.79%,占总体细胞的3.61%;而模型组细胞早期凋亡率为1.88%,晚期凋亡率为2.14%,占总体细胞的4.02%,两组之间的细胞凋亡率差异较小,表明1mmol/L的FFA对细胞未造成严重损伤,与机体单纯性脂肪变性特征相符[22]㊂2.3㊀鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中细胞的益生作用2.3.1㊀大鼠血清对细胞脂滴的影响以未干预菌株发酵乳的大鼠血清作为对照组,研究鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对NAFLD模型中人肝细胞L-02脂滴的影响,结果如图3所示㊂a-对照组;b-模型组图2㊀脂肪变性对细胞凋亡率的影响Fig.2㊀Effect of steatosis on the apoptosis rate of cellsa-对照组;b-益生菌干预组图3㊀大鼠血清对细胞脂滴的影响(ˑ400) Fig.3㊀Effect of rats serum on the lipid droplets in cells由图3可知,对照组大鼠血清作用脂肪变性的人肝细胞L-0224h后,细胞边缘较为明显,核膜完整,胞内出现红色脂滴且体积较大,出现脂肪变性现象;与对照组相比,干预组大鼠血清作用的细胞内胞浆丰富,胞内红色脂滴数量较少㊁体积较小,表明鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预的大鼠血清能有效改善细胞的脂肪变性㊂2.3.2㊀大鼠血清对细胞TG、TC含量及血清培养液中AST和ALT含量的影响鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清对模型中人肝细胞L-02胞内TG㊁TC含量的影响及血清培养液中AST和ALT的含量见图4和图5㊂由图4可知,干预组的大鼠血清作用于人肝细胞L-02后,细胞内TG 含量为1.95mmol /L,显著低于对照组的2.88mmol /L(P <0.05);TC 含量稍低于对照组,但无显著性差异(P >0.05)㊂图4㊀大鼠血清对细胞TG 和TC 含量的影响(n=3)Fig.4㊀The effect of rats serum on the content of TG and TC in cells图5㊀大鼠血清细胞培养液中AST 和ALT 的含量(n =3)Fig.5㊀The content of AST and ALT in the cell culture mediumof rats serum由图5可知,对照组的人肝细胞L-02培养液中AST 的含量为118.67U /L,干预组的血清细胞培养液中AST 的含量为93.33U /L,显著低于对照组(P <0.05);而ALT 的含量分别为5.59U /L 和5.83U /L,无显著性差异(P >0.05);表明鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳可通过降低细胞内TG 和AST 转氨酶的含量来减轻NAFLD 对细胞的损伤㊂2.3.3㊀大鼠血清对细胞凋亡率的影响鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预后的大鼠血清对人肝细胞L-02凋亡率的影响如图6所示㊂a-对照组;b-益生菌干预组图6㊀大鼠血清对细胞凋亡率的影响Fig.6㊀The effect of rats serum on the apoptosis rate of cells由图6可知,对照组中人肝细胞L-02的早期凋亡率为1.42%,晚期凋亡率为5.04%,正常细胞数量为91.2%;经干预组的大鼠血清作用后,人肝细胞L-02的早期凋亡率为0.89%,晚期凋亡率为2.61%,正常细胞数量高达95.7%㊂与对照组相比,干预组的细胞凋亡率相对下调了2.96%,正常细胞数量相对上调了4.5%,说明鼠李糖乳杆菌hsryfm 1301发酵乳干预的大鼠血清能够降低人肝细胞L-02的凋亡率,缓解细胞损伤,对NAFLD 具有较好的改善作用㊂3㊀讨论由于人与动物之间生物代谢表达和活性不同[23],使得在动物试验中肝细胞脂肪变性的稳定性较差[14],因此建立一种理想的体外模拟人肝细胞的NAFLD 模型尤为重要㊂棕榈酸是饮食和血清中最丰富的游离脂肪酸,容易引发肝脏的脂肪变性[24-25],而油酸毒性较小,能够抵消棕榈酸对肝细胞的毒性[26],并具有增强棕榈酸酯化和稳定脂滴的能力[27]㊂因此,试验采用油酸和棕榈酸混合的FFA 建立人肝细胞L-02脂肪变性模型㊂当1mmol /L 的FFA 作用于人肝细胞L-02时,对细胞的存活率影响较小,同时还使得细胞内脂滴数量达到最大值,并显著增加了模型中细胞TG 含量及培养液中AST 含量(P <0.05),且细胞的凋亡率与对照组无显著性差异(P >0.05),符合NAFLD的特征指标[21]㊂表明成功建立的NAFLD 细胞模型,具有造模周期短㊁稳定性好等优势[28]㊂鼠李糖乳杆菌可以通过调节肠道微生物来改善机体的NAFLD症状[29]㊂鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳能够通过调节与脂质代谢相关的肠道微生物来改善大鼠血清的脂质代谢[18],而本文的研究还发现,鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预后的大鼠血清不仅可以显著降低细胞TG含量,还可以显著降低细胞培养液中AST的含量(P<0.05);CAUSSY 等[30]的研究发现,血清中来自肠道微生物的代谢产物在改善NAFLD症状过程中发挥着重要作用;而双歧杆菌㊁乳杆菌等益生菌可以通过调节机体血清中的脂质㊁转氨酶㊁炎症因子及抗氧化物质等代谢产物来降低NAFLD对机体的损伤[11-13,31]㊂因此,鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳可能是通过调节肠道微生物来改善机体血清中脂质㊁转氨酶等代谢产物,进而发挥其对NAFLD人肝细胞L-02的益生作用㊂益生菌还能通过调节SIRT-1/PGC-1α/SREBP-1㊁Nrf-2/HO-1和PPAR-α等与血脂㊁抗氧化物质及胆汁酸代谢途径相关基因的表达来减轻机体的NAFLD 症状[8,32-33]㊂因此,后续将从肠道微生物-血清的代谢产物及其代谢通路等方面入手,进一步阐明鼠李糖乳杆菌hsryfm1301发酵乳干预的大鼠血清在NAFLD模型中对人肝细胞L-02的益生作用机制㊂参考文献[1]㊀DAY C,SAKSENA S.Non-alcoholic steatohepatitis:Definitions andpathogenesis[J].Journal of Gastroenterology&Hepatology,2003, 17:S377-S384.[2]㊀NOBILI V,ALISI A,MOSCAET A,et al.The antioxidant effects ofhydroxytyrosol and vitamin E on pediatric nonalcoholic fatty liver disease,in a clinical trial:A new treatment?[J].Antioxidants& Redox 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Free fatty acids(mol ratio,oleic acidʒpalmitic acid=2ʒ1)were used to induce human hepatocytes steatosis,and the model was evalua-ted by the survival rate of cells,the content of total triglyceride(TG),total cholesterol(TC)and lipid droplets in cells,the content of aspartate aminotransferase(AST)and alanine aminotransferase(ALT)in the culture medium of L-02cells,and the apoptosis rate of cells.The effect of rats serum,which was obtained after intervention by fermented milk of L.rhamnosu s hsryfm1301for4weeks,on the L-02cells in the model was discussed.The results showed that the survival rate of L-02cells were all lower than32%when the con-centration of FFA was1.5mmol/L and2mmol/L in the model,which were significantly lower than that without FFA(P<0.05),and the number of L-02cells was reduced obviously and the shape changed.While the survival rate of L-02cells was86.37%when the con-centration was1mmol/L,and the number of lipid droplets was the highest,and the content of TG in the L-02cells and the content of AST in the cell culture medium were significantly higher than that of the control group(P<0.05),which were5.73mmol/L and113.50U/L respectively.The apoptosis rate of L-02cells,the content of TC in the L-02cells and the content of ALT in the cell culture medium had no significant difference(P>0.05).The number of lipid droplets in the L-02cells was reduced,and the content of TG in the L-02cells and the content of AST in the cell culture medium were significantly decreased by the serum of rats that were administered by the fermen-ted milk of L.rhamnosus hsryfm1301when compared with the serum of rats that were not administered(P<0.05),which were1.95 mmol/L and93.33U/L respectively.And the apoptosis rate was decreased by2.96%,the number of normal cells was increased by 4.5%.The NAFLD model of human hepatocyte L-02in vitro can be established by1mmol/L FFA.The human hepatocyte L-02in NAFLD model can be improved by the serum of rats that were intervened by the fermented milk of L.rhamnosus hsryfm1301.Key words㊀Lactobacillus rhamnosus hsryfm1301;fermented milk;human hepatocyte L-02;free fatty acids;nonalcoholic fatty liver disease。
鼠李糖乳杆菌在发酵乳中的应用
鼠李糖乳杆菌在发酵乳中的应用任伟; 杜晓华; 何伟; 吴伟; 黄菊; 常玉【期刊名称】《《中国乳业》》【年(卷),期】2019(000)007【总页数】3页(P79-81)【关键词】益生菌; 发酵乳; 鼠李糖乳杆菌【作者】任伟; 杜晓华; 何伟; 吴伟; 黄菊; 常玉【作者单位】四川雪宝乳业集团有限公司【正文语种】中文发酵乳是以生乳或还原乳为原料，经巴氏杀菌和冷却后，加入乳酸菌发酵剂，保温发酵制成的产品。
发酵乳的历史较为悠久，并以营养丰富和维护人类健康而闻名。
发酵乳是营养强化载体，含多种人体必需营养素，如蛋白质、钙、钾、磷、维生素B2和维生素B12等。
由嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌为发酵剂的发酵乳称为传统发酵乳[1]。
然而，随着消费者健康饮食意识的日益增强，从而更倾向于利用营养信息来进行产品选择[2]。
最近研究表明，相对于传统发酵乳而言，益生菌发酵乳对人类健康更为有益。
同时，发酵乳是益生菌的重要载体，可以有效保护菌株，免受不良环境的影响[3]。
因此，普通发酵乳已不能满足消费者的需求，研制营养价值高且具有特定保健功能的益生菌发酵乳已经成为各乳品企业的研发重点。
1 益生菌“益生菌（Probiotics）”一词最早来源于希腊语，意思是“对生命有益”[4]。
益生菌是指一类具有活性的微生物，当摄取一定剂量后，则会有益于宿主的健康[5]。
益生菌是人类正常的生理菌，主要寄居在肠道，改善宿主肠道的微生态平衡[6]，对宿主有着其他生理菌无法比拟的生理功能，如调整肠道菌群平衡、增强人体免疫力、延缓人体衰老、缓解乳糖不耐症、降低胆固醇、抗感染等[7，8]。
2 鼠李糖乳杆菌鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus GG，LGG）为乳杆菌属、鼠李糖杆菌种，是无质粒、厌氧耐酸、不产芽孢的革兰氏阳性菌，大多存在于人和动物肠道内，是正常菌群之一。
鼠李糖乳杆菌不可利用乳糖，但可发酵多种单糖产生乳酸，如葡萄糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
鼠李糖乳杆菌Lr-G14发酵提取物在护肤品中的应用
防腐剂在日化产品中的主要功能是抑制细菌繁 殖 ，以防止产品变质或产生毒素，同时防腐剂还有助 于产品稳定和产品存储。 目前，日化产品中常用的防 腐 剂 有 甲 基 氯 异 噻 唑 啉 酮 、甲 基 异 噻 唑 啉 酮 、羟 苯 丁 酯 、羟苯甲酯、双 (羟 甲 基 ）咪唑烷基脲、辛甘醇和乙 基己基甘油和苯氧乙醇等'
第 2期
韩 迪 ： 鼠 李 糖 乳 杆 菌 Lr-(J14发 酵 提 取 物 在 护 肤 品 中 的 应 用
• 27 •
单 胞 菌 （ Pseudomonas aeruginosa ATCC No.9027 ) 、黑 分 别 将 pH值调节到5_0、6_0、7_0进行测试，评估它
曲 霉 （ Aspergillus niger ATCC No. 16404)、白色念珠菌 ( Candida albicans ATCC No.10231),均由润盈生物工
第4卷 第 2期 2018 年 4 月
生物化工 Biological Chemical Engineering
文章编号：2096-0387 (2018) 02-0026-04
Vol.4 No.2 Apr. 2018
鼠李糖乳杆菌Lr-G1 4 发酵提取物在护肤品中的应用
韩迪
(润盈生物工程（上海）有限公司，上 海 201700)
在 化 妆 品 成 品 中 抗 菌 保 护 的 效 能 ，将 大 肠 杆 菌 、铜 绿 假 单 胞 菌 、金 黄 色 葡 萄 球 菌 、白 色 念 珠 菌 和 黑 曲 霉 接
程(上海)有限公司菌种库保存。
鼠李糖乳杆菌乳饮料发酵工艺
鼠李糖乳杆菌乳饮料发酵工艺
张明;代青梅;任发政;杨子彪;赵亮
【期刊名称】《食品与发酵工业》
【年(卷),期】2015(041)007
【摘要】对无稳定剂鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnose发酵乳饮料的发酵工艺进行优化.以L rhamnose在不同碳源培养基中的发酵速度为评价指标,筛选出葡萄糖是其发酵的最适碳源.发酵时间、杀菌条件、发酵温度对发酵乳饮料的活菌数及沉淀率均有明显的影响.优化工艺参数为:杀菌条件115℃,15 min,发酵温度为37℃,发酵时间为84 h,按照此工艺制得的发酵乳饮料,活菌数达到8.5×108 CFU/mL,沉淀率为1.1％.
【总页数】5页(P104-108)
【作者】张明;代青梅;任发政;杨子彪;赵亮
【作者单位】北京工商大学食品学院,北京,100048;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083;大理农林职业技术学院食品工程与经管系,云南大理,671003;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083
【正文语种】中文
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鼠李糖乳杆菌的发酵工艺流程
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FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 年 第 卷 第 期
(・OH)、超氧自由基(O2-・)、过氧化氢(H2O2)等， 适量的自由基可以与氧分子维持着一定的生理平 衡。若体内自由基的含量过高，则会引起一些疾 病，如缺血性心脏病、肾脏病、动脉硬化、心血 管疾病、糖尿病、高血压、癌症等[1-3]。 对生命有机体来说，氧化作用是一个必要的 过程，同时还会引起机体内生物大分子的损伤。 虽然机体自身具有抗氧化防御体系，但是这些系 统并不能完全有效地抵御或修复氧化作用带来的 损伤。这时外加一些抗氧化剂有助于体内氧代谢 的平衡。由于许多化学合成的抗氧化物存在安全 问题，所以具有抗氧化活性的天然产物就倍受青 睐。乳酸菌(Lactic acid bacteria)是一种存在于人 类体内的益生菌，能够耐受消化道环境，具有调 节胃肠道正常菌群、预防和治疗腹泻、排除内毒 素和提高机体免疫力等功能 [4] 。国内外一些学者 的研究表明部分乳酸菌具有抗氧化活性。Kaizu 等 利用动物实验证明了乳酸菌的抗氧化活性， Lin等 [6-7]报道了嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)有抗脂 质过氧化和清除羟自由基的能力。但对于乳酸 菌的抗氧化活性物质及其抗氧化机制至今尚不 清楚。一般认为乳酸菌中可能具有一些抗氧化 酶类物质(如超氧化歧化酶(SOD)，NADH氧化酶 (NADH oxidase)，过氧化氢酶(CAT)等)使得其具 有抗氧化活性[8-9]。 我们用DPPH・法测定了4株鼠李糖乳杆菌 B7、B8、B10、B44的抗氧化活性，分析了各菌 株无细胞抽提液、全细胞和细胞裂解液等组分的 DPPH・清除能力及其超氧化物歧化酶(SOD)、过 氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活 性，并对灭酶前后各菌株组分的DPPH・清除能力 进行了比较[10]。试验表明所有菌株DPPH・清除能 力最强的组分是发酵液上清，各菌株的发酵液上 清均含有SOD活性，没有检测到GSH-PX和CAT活 性，但是各菌株之间发酵液上清DPPH・清除能力 没有显著差异(P>0.05)。本文选取抗氧化较高的鼠 李糖乳杆菌B10作为研究菌株，对从其发酵液中水 溶蛋白进行分离纯化，并对纯化后各组分进行抗 氧化性研究。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 菌种及培养基 鼠李糖乳杆菌B10：本研究 室保藏。
Extraction and antioxidant activity of the soluble protein from Lactobacillus rhamnosus broth
ZHANG Jing, WANG Dan, ZHANG Jing, WANG Yu-hua*
(College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University, Changchun 130118)
Abstract: In this paper, ammonium sulfate precipitation method was used to obtain the soluble protein from Lactobacillus rhamnosus B10 broth. The different protein components: the peak Ⅰ, peak Ⅱ and peak Ⅲ. It were purified and isolated using dextran gel Sephadex G-100 column. Their scavenging capacity of DPPH·, superoxide radicals (O2-·) and hydroxyl radical (·OH) were analysed. The results showed that the soluble protein, peakⅠ, peak Ⅱ and peak Ⅲ has scavenging effect on DPPH·, and the peakⅠ has more DPPH· scavenging capacity than peakⅡ, Ⅲ, the soluble protein is less than peak Ⅱ, Ⅲ. The O2-· and ·OH scavenging capacity of the peak Ⅰ is the strongest, and it was higher than 5 mmol/L Vc solution. The O2-· and ·OH scavenging capacity of the soluble protein is weak. Key words: Lactobacillus rhamnosus; soluble protein; antioxidant activity
食品科技
年 第 卷 第 期 FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
提取物与应用
鼠李糖乳杆菌发酵液中水溶蛋白的 提取及其抗氧化活性研究
张 静，王 丹，张 晶，王玉华* (吉林农业大学食品科学与工程学院，长春 130118)
摘要：采用硫酸铵沉淀法获得鼠李糖乳杆菌B10发酵液中水溶蛋白粗提物，并进行葡聚糖凝胶 Sephadex G-100柱纯化，分离得到不同的蛋白组分峰Ⅰ、峰Ⅱ和峰Ⅲ，分别对各组分DPPH自由 基清 除能力、清除超氧自由基(O2-・)和羟自由基(・OH)的能力及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化 氢酶(CAT)的活性进行分析。结果表明，纯化前后各样品均对DPPH・有清除作用，其中纯化后 的峰Ⅰ对DPPH・清除能力最强，峰Ⅱ、峰Ⅲ次之，均高于水溶蛋白粗提物；纯化后的峰Ⅰ对 O2-・和・OH的清除能力最强，均高于5 mmol/L的Vc溶液和水溶蛋白粗提物对O2-・和・OH的清 除作用，峰Ⅱ和峰Ⅲ均未检测到对O2-・和・OH的清除能力。 关键词：鼠李糖乳杆菌；水溶蛋白；抗氧化 中图分类号：TS 201.4 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2012)08-0235-05
氧是维持多数生命所必需的基本成分，但
氧在生命体内代谢时会形成活性氧，如羟自由基
*通讯作者 收稿日期：2012-02-06 基金项目：国家青年科学基金项目(31101252)；吉林省科技引导计划项目(20090576)。 作者简介：张静(1987—)，女，硕士研究生，主要从事食品微生物学及功能性食品研究工作。