(医疗药品)高等药分试题及答案

1.简述现代药物分析教传统药物分析的新特点。

传统的药物分析，大多是应用化学方法分析药物分子，控制药品质量。其中容量分析法和重量分析法占有主导和统治地位。

从静态发展到动态分析，从体外发展到体内分析，从品质分析发展到生物活性分析，从单一技术发展到联用技术，从小样本分析发展到高通量分析，从人工分析发展到计算机辅助分析。采用的现代仪器分析技术有光谱分析法、色谱分析法、电化学分析法等，使药物分析技术向微量、灵敏、准确、简便、快速、自动化的方向发展。

2.现代药物分析的新进展主要有哪些方面。

分析领域的发展：药物质量控制、手性药物分析、药物代谢分析、兴奋剂检测等

分析技术的发展：分子烙印技术、超临界流体色谱、微乳色谱等。。

3.常用的手性固定相有哪些？并简述其各自的原理.

手性固定相(chiralstationaryphase,CSP)是通过物理吸附或者化学键合的方法把手性化合物键合到固相载体上，由于样品中的对映体与键合的手性分子形成非对映异构体络合物的结合能力的差异而达到拆分目的。

手性固定相可以根据其化学类型分类为：

(1)Pirkle型（刷型）CSP：具有确定的化学结构，①被分离溶质与CSP芳环的π-受体和π-

授体之间的π-π作用；②CSP上的仲胺、羰基基团与溶质的酸性质子、羟基、氨基之间的氢键作用；③偶极-偶极作用；④大体积非极性基团靠近CSP手性中心而产生的空间立体效应。

(2)配体交换型CSP：利用配体交换的分离机制而制成的，一个金属离子可结合一个配体分

子和一个对映体溶质分子,形成可逆的非对映体复合物,以达到分离对映体的目的。主要用于拆分氨基酸。

(3)蛋白质类CSP：由L-氨基酸组成的高分子聚合物，具有天然的手性选择性质，其具有大

量不同的可与样品分子结合的部位，固定相与疏水性溶质之间发生较强的疏水作用。对酸类、胺类药物的拆分较好。

(4)冠醚类CSP：冠醚是具有一定大小空腔的大环聚醚化合物，和一定的金属离子形成包容

性络合物，手性试剂与其中的金属离子相互作用，从而使对映体得到拆分。溶质分子与手性冠醚环腔形成主客体络合物的稳定常数不同。冠醚的手性“臂障"越大，其手性识别能力越高。

(5)环糊精类CSP：环糊精的手性识别主要来自环内腔对芳烃或脂肪烃类侧链的包容作用,以

及环外壳上的羟基与药物对映体分子发生氢键缔合作用。

4.手性高效液相色谱法的分类有哪些？并简述其各自的原理。

1)间接法即衍生化试剂法（CDR）采用非手性固定相

将光活性试剂SE引入溶质分子内，对映体混合物以手性试剂SA作柱前衍生，形成一非对映异构体对，然后以常规的固定相分离

(R)–SA→(R)–SE–(R)–SA

(R)–SE+

(S)–SA→(R)–SE–(S)–SA

2)直接法

a.手性固定相法（CSP）

利用手性固定相与对映体消旋物相互作用，其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物，使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同，从而得到分离。

b.手性流动相添加剂法（CMP）

将手性试剂添加到流动相中，利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不

同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，实现对映体的分离。

5.毛细管电泳的种类有哪些？毛细管电泳分离的驱动力是什么？毛细管电泳比高效液相色谱高效的原因是什么？

毛细管电泳CE又称高效毛细管电泳HPCE，是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。

分类：

毛细管区带电泳CZE：毛细管和电极槽灌有相同的缓冲液

胶束电动毛细管色谱MECC：在CZE缓冲液中加入一种或多种胶束

毛细管凝胶电泳CGE：管内填充凝胶介质，用CZE缓冲液

毛细管等速电泳CITP：使用两种不同的CZE缓冲液

毛细管等电聚焦CIEF：管内装pH梯度介质，相当于pH梯度CZE

毛细管电动色谱PICEC：在CZE缓冲液中加入可微观分相的高分子离子

CE是以高压电场为驱动力

细管电泳比高效液相色谱高效的原因：

（1）高效CE理论塔板数为几十万，而HPLC一般几千到几万；毛细管电泳中，使用空心毛细管柱，无涡流扩散项，毛细管内壁也不涂渍固定液，消除了组分在固定相与流动相间平衡所需的时间，传质阻抗项趋零，而高效液相色谱中存在两种影响因素，因而CE的柱效高于HPLC。

（2）快速CE一般在十几分钟内完成分离；

（3）微量CE进样所需的样品体积为nL级,仅为HPLC的几百分之一

（4）多模式可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器；

（5）经济实验消耗不过几毫升缓冲溶液，维持费用很低；

（6）自动CE是目前自动化程度较高的分离方法

6.HPLC-ESI-MS联用分析条件选择时需考虑的主要因素有哪些？

流动相的选择：

优先使用低水比例的溶液为流动相，水含量高，降低离子化效果；提高有机相比例可提高离子化效率。一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈。不挥发性的盐会在离子源内析出结晶，而表面活性剂会抑制其它化合物电离，与LC/MS不匹配，如磷酸盐、枸橼酸盐、硼酸盐。在LC-MS分析中常用的挥发性酸、碱和盐，如醋酸铵、甲酸铵、甲酸、乙酸、氨水等。为了离子化效果，以上电解质浓度宜小。定性分析时，有时加入NH4+、Li+，帮助判断母离子。但会使图谱复杂。

pH的选择：

C18柱pH适用范围是2~8。pH值影响离子状态，影响生成气相离子的效率和检测灵敏度。测碱性物质，pH值在（pKa-2），正离子检测。测酸性物质，pH值在（pKa+2），负离子检测。实际工作中，负离子方式检测酸性物质，往往加少量乙酸（＜0.05%）可使灵敏度提高。

流动相的流速和色谱柱内径的选择：

流动相流速受柱子内径和流动相组成影响。对ESI，较小的流速可获得较好离子化效率。尽量选内径小的色谱柱。但是要兼顾分析速度的因素，因此多采用内径2.1mm的色谱柱，0.2~0.4ml/min的流速。只有粗径柱，只能大流量时，可用三通分流以满足MS的流量要求。

流动注射（FIA）比柱分离响应强，但混有待测组分外的物质。

有些样品很容易吸附在进样阀和管路中，因此实验后要对柱子进行冲洗（纯水—纯甲醇）7.在进行天然药物HPLC-UV分析时，是否可以直接对得到的单一色谱峰进行含量测定？为

什么？

否。HPLC-UV作定量分析，依据的是峰面积，而峰面积会因多种因素而变化：色谱柱，不流动相，柱温，检测器波长的准确度。天然药物中成分很复杂，所以图中的单一峰有可能包含其他物质，所以可以先做个峰纯度检测，确定是单一成分后用内标法或外标法都可以进行定量。

8.简述高速逆流色谱的原理。

高速逆流色谱仪(High-speedCountercurrentChromatography，简称HSCCC)，于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术。

高速逆流色谱是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力，使互不相溶的两相不断混合，同时保留其中的——相（固定相），利用恒流泵连续输入另一相（流动相），随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配，按分配系数的次序，被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脱。

9.胶束形成的条件和原理以及胶束在分析中的特点。

表面活性剂浓度达到临界胶束浓度，缔合形成胶束。

表面活性剂溶于水后，首先在溶液表面层聚集形成正吸附，达到饱和后，溶液表面不能再吸附，表面活性剂分子即转入溶液内部。因其分子结构具备两亲性，致使表面活性剂分子亲油基团之间相互吸引，即亲油基团朝内，亲水基团朝外，缔合形成大小不超过胶体粒子范围(1～100nm)，且在水中稳定分散的胶束。

特点：

增敏作用：。胶束可提高荧光和磷光强度。在胶束中粘度很大,减少了分子的自由运动,因而也减少了因碰撞引起的无幅射衰变,增加了量子收率,提高了分析灵敏度。

增溶作用：胶束可使原来不溶于水的络合物成为水溶性胶束增溶络合物而溶解，得以水相光

度测定，无需溶剂萃取。

增稳作用：高配位络合物的生成"分子间力加强"胶束提供的保护性微环境均使稳定性增强。增加对比度：胶束可以降低某些化合物紫外吸收的检测下限，增加紫外检测的灵敏度。

胶束褪色作用：

如果溶液中加入过多的表面活性剂"溶液中的胶束大大增加"则胶束上面的显色剂浓度减小"有一些有色配合物被离解"即产生了褪色现象"在光度分析中可利用表面活性剂褪色功能来提高显色剂反应的选择性。

增宽PH值范围：使显色反应的PH值范围增宽，络合物稳定性增强。

胶束色谱有利利于梯度洗脱。一般液相色谱在进行梯度洗脱时．由于流动相组成的改变梯度完成之后，柱子需要重新平衡耗时较长。而胶束色谱梯度洗脱之后，柱子不需要重新平衡

耗费用低、选择性高

胶束用于色谱作为流动相修饰剂,溶质可选择性地分配在胶束集合体匕达到色谱分离洗脱的目的梯度洗脱反相色谱非极性溶液中则形成反相胶束,可用于正

时,不需要柱子和流动相之间的再平衡,且不影响电相色谱。胶束色谱的理论是在反相色谱中建立的,如

化学检测器的使用改善荧光检测的灵敏度在不特指,胶束色谱一般指反相胶束色谱。表是胶束

不分离除去蛋自质的情况下,尿血清直接进样

10.ELISA检测试剂盒的技术和应用

是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA检测试剂盒广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。

用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗体。在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。

11.简述药物分析试验方法学验证的内容及其具体含义、表示手法等.

目的：证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。

方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。

验证内容有：

（一）准确度（accuracy）

是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。

数据要求：规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。（二）精密度（precision）（重复性、中间精密度和重现性）

精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。

偏差（d）：测量值与平均值之差

标准（偏）差（SD或S）

相对标准（偏）差（RSD），也称变异系数（CV）

1.重复性在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价

2.中间精密度同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备

3.重现性不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。

（三）专属性（specificity）

指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。

（四）检测限（limitofdetection，LOD）

检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。

常用的方法：

1．非仪器分析目视法

用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

2．信噪比法

用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。

数据要求：应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。

（五）定量限（1imitofquantitation，LOQ）

指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10

（六）线性

在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。

（七）范围

指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。（八）耐用性指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度

12.简述质量标准制订的基础、原则，以及起草说明书的原则

药品（质量）标准是国家对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。我国现行的药品标准分为：国家药典（中国药典）、局标准（国家药品监督局药品标准）。

药品质量标准制订的基础：

⑴文献资料查阅及整理；尤其要熟读各国药典的相似药品标准。查阅其化学名、俗称、英

文名及中文名；介绍药品的研制过程，简略说明实验室研究与临床试验的时间、机构和试验结论。国外已生产的，要介绍最早上市的国家（或厂家）和时间。

⑵对有关研究资料（化学、工艺、辅料等）的了解。在研究及制订新药质量标准时应对该

药有关的研究资料。

a)新药化学结构或处方的确定：通过各种方法（试验数据、图谱、图谱的解析、有关

文献资料）确证化学结构或组份，并注意可能存在的各种异构体。

b)生产工艺和晶型：不同生产工艺会有不同的异构体。还会产生不同的晶型。

c)晶型的性质与药效：晶型不同其生物利用度往往不同，可能会影响疗效、剂量、熔

点和红外图谱等。

d)生产或贮存过程中带来的杂质或降解产物：不同生产路线会带来不同的杂质，在贮

存过程中要考虑到药物的分解。

e)含量测定方法的制订：一种药物的含量可用多种方法进行测定，但在制订质量标准

时往往只选其中一种(精度与准确度，讨论影响测定结果的因素)。

f)药理及毒理作用的研究：新药研制时还要做毒理试验、“三致”（致癌、致畸、致

突变）试验。

g)药物动力学研究：主要是研究药物的吸收、分布、代谢和排泄的情况。

h)适当剂型的研究：剂型不同，药物的疗效也会不同，在确定质量标准前，找出最佳

的剂型用于患者。

i)新药的适应症、用法和用量：被研究物质逐步形成新药时，则应有足够的资料和数

据来说明这一药物的质量情况

这些资料具有重要的参考价值和指导作用。

原则：

1)安全有效性：药品质量的优劣，主要表现为安全、有效，药物的毒副反应、生物利用度、

晶型等要着重研究。

2)先进性：采用较先进的选择性强、灵敏度高的方法；如果研制的药物国外已有标准，那

么国内的标准应尽可能达到或超过国外的标准。

3)针对性：从生产工艺、流通、使用各环节了解影响药品质量的因素，针对药物本身的特

点，做到安全有效、技术先进、经济合理。

4)规范性：要按照SFDA制订的基本原则、基本要求和一般的研究规则进行。

坚持质量第一，充分体现“安全有效、技术先进、经济合理、不断完善”的原则，使标准能起到提高药品质量、保证择优发展和促进对外贸易的作用。

起草说明的原则：

1)原料药质量标准的起草说明应包括：①概况——说明本品的临床用途，我国投产历史，

有关工艺改革及重大科研成就，国外药典收载情况，目前国内生产情况与质量水平。②生产工艺——用化学反应式表明合成路线，或用简明的工艺流程图表示，说明精制方

法及可能引入的杂质。③标准制订的意见或理由——按标准内容依次说明。④与国外药典或原标准进行对比，并对本标准的水平进行评价。⑤起草单位及复核单位对本标准的意见（包括尚存在的问题，今后改进意见）⑥列出主要参考文献。

2)新增制剂标准的起草说明还应包括：①处方——列出附加剂的名称和用量。②制法—

—列出简要的制备方法。③标准制订的意见和理由——除与原料药要求相同外，还应有对制剂有效期建议的说明。

3)上版药典已收载品种的修订说明：对修订部分分别说明①对药典附录方法有实质性修改

的项目，如崩解时限法，栓剂，气雾剂等，应说明照新附录对产品考核结果，并列出具体数据。②对原标准的检验方法进行修改的项目或新增的检验项目，要说明增修订理由，方法来源，并写出产品的检验数据。含量测定方法的修改要附有专题研究材料。③对原标准限度的修订，要说明理由并列表说明产品的检验数据及与国外药典本项目的比较，对不修订部分，要写出综合材料说明不修订的理由。

4)其他：应阐明曾经做过的有关实验，包括不成熟的、尚待完善的或失败的，暂未或不能

受灾与正文的鉴定方法的理由，并提供相关的试验资料。

13.写出4G的英文简称，中英文全称，并说明其具体含义.

●GCP药品临床试验管理规范（GoodClinicalPractice）

是为了保证药品临床试验过程的规范、结果科学可靠、保护受试者的权益并保障其安全，根据《中华人民共和国药品管理法》，参照相关法规及国际公认原则而制订的。

是药品临床试验全过程的标准规定，包括方案设计、组织、实施、监查、稽查、记录、分析总结和报告。

药品所进行的各期临床试验，包括人体生物利用度或生物等效性试验，均须按此规范执行。

●GMP药品生产质量管理规范(GoodManufacturePractice)

1998年修订，1999年7月1日施行

这是药品生产和质量管理的基本准则，适用于药品制剂生产的全过程、原料药生产中影响成品的关键工序。

该规范分为14章，详尽地对机构与人员的要求、厂房与设施、生产设备、物料、卫生、验证、文件、生产管理、质量管理、产品销售与回收、投诉与不良反应报告、自检等均进行了规定。

●GSP药品经营质量管理规范（GoodSupplyPractice）

2001年1月实施

是为了加强药品经营质量管理、保护消费者的合法权益，保证人民群众用药安全有效而制订的，是药品经营质量管理的基本准则，适用于中华人民共和国境内经营药品的专营或兼营企业。主要内容包括药品的购进、储运和销售等环节实行质量管理的规定，并分别将其分为药品批发的质量管理、药品零售的质量管理二大类。

●GLP药品非临床研究质量管理规范(GoodLaboratoryPractice)

GLP是为了提高药品非临床研究质量，确保实验资料的真实性、完整性和可靠性，保障人民群众的用药安全。它适用于诊断和防治人体产生的各种药品，在申报审批前所进行的非临

床安全性研究。即为申请药品注册而进行的非临床安全性研究它是1999年11月1日开始实施的。