猫降压物质检查试验规程
药品质量标准中安全性项目的设定
当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环 境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时，须重 新进行干扰试验。
细菌内毒素检查
注意点：
✓ 最大有效稀释倍数是指供试品溶液被允许稀释的最大倍数，它 和具体选用的鲎试剂的灵敏度有关。
✓ 由于不同厂商生产的鲎试剂其生产工艺、配方、质量参数等存 在一定的差异，鲎试剂其抗干扰能力存在差别，因此应重视对 鲎试剂的选择，或对鲎试剂灵敏度的考察。
某些抗生素、抗肿瘤药品、放射性药品等影响家兔正 常体温, 因此不适宜采用热原检查法。
目前存在着细菌内毒素检查逐步替代热原检查的趋势 。
热原检查
三、剂量限值的确定
➢ 家兔美1Kg体重注射体积不得少于0.5ml； ➢ 注射给药体积不超过10ml/kg； ➢ 如果供试品溶液浓度太低，给药体积需超过10ml/kg才
降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂 质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。
降压物质检查
二、适用品种
➢ 有可能产生类组织胺样急性降血压反应的静脉注射剂， 如生化药注射剂(肽、蛋白质、酶及辅酶、多糖、脂质 等)及抗生素注射剂；
➢ 在用动物脏器或组织为原料制备生化药物的过程中， 正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形成的组胺 、酪胺等胺类质，均为这类杂质的来源。
降压物质检查
取对照品稀释液按动物体重每1kg注射组胺 0.1ug的剂量(ds)，供试品溶液按品种项下规 定的剂量(dT),照下列次序注射一组4个剂量： ds、dT、dT、ds。
然后以第一与第三、第二与第四剂量所致的 反应分别比较；如dT致的反应值均不大于ds 所致反应值的一半，即认为供试品的降压物 质检查符合规定。
实验用猫血压数据的测定
实验用猫血压数据的测定何忠平;方远书;张辉;裘颖儿【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2014(000)011【总页数】1页(P45-45)【作者】何忠平;方远书;张辉;裘颖儿【作者单位】浙江省金华市食品药品检验所 321000;浙江省金华市食品药品检验所 321000;浙江省金华市食品药品检验所 321000;浙江省金华市食品药品检验所321000【正文语种】中文【中图分类】S829.3取实验用猫雄性64只、雌性45只，测定了猫基础血压值，包括收缩压、舒张压、最大值、最小值。
并测定了猫血压对组胺标准物质的反应，为药品检验中降压物质检查提供基础数据。
在生命科学领域，猫主要用于神经学、生理学和毒理学的研究。
因猫循环系统发达，血压稳定，特别是在麻醉状态下，能保持正常血压，所以在药品检验中用于降压物质检查，降压物质检查系比较组胺对照品与供试品引起麻醉猫血压下降的程度，以判定供试品中所含降压物质的限度是否符合规定。
笔者对从浙江金华地区收购的家猫进行了血压值的测定，以供参考。
1.1 动物来源成年雄猫64只，雌猫45只，均从市场或农村收购。
1.2 仪器试剂 Medlab生物信号采集处理系统(南京美易科技有限公司生产)、组胺标准品(批号150510-200412，中国食品药品检定研究院生产)。
1.3 试验方法[1] 选健康合格、体重2kg以上的猫，雌者无孕，用苯巴比妥麻醉后，固定于保温手术台上，分离气管，插入插管以使呼吸畅通。
在一侧颈动脉插入连接测压计的动脉插管，管内充满适宜的抗凝剂溶液，以记录血压。
在一侧股静脉插管，供注射药液用。
用生物信号采集处理系统分别测定猫的收缩压、舒张压、血压最大值、血压最小值；于股静脉分别注入组胺标准品0.05、0.10、0.15μg/kg，测定血压下降值。
2.1 试验前血压家猫收缩压、舒张压、血压最大值、血压最小值见表1。
由表1可见，家猫收缩压、舒张压、血压最大值、血压最小值，雌雄之间无显著性差异。
猫咪血液测试采样流程
最好选用质量好一些的棉签（推荐用药店出售的医用棉签），竹杆和塑料杆的都可以。
但是如果选取的是双头棉签，请剪去其中一端。
采样前几个小时最好不要给宠物进食，以防止食物残渣造成的污染。
推荐在早上进食前进行采样，有条件的可以在采样前给宠物刷一下牙。
采样时，用一只手扶住宠物的头部，另一只手握住棉签在宠物的左右两侧牙龈处摩擦，可适当用些力，因为采样的目的是用棉签刮下并收集牙龈处的口腔细胞，所以不要只是简单沾取唾液，而是要摩擦牙龈。
每采集完一根棉签后，将其放置在干净的面巾纸上再接着采集下一只棉签（可以将棉签头部架在一只干净的棉签上，或是插在纸盒或泡沫上，以防止沾有宠物唾液的棉签和面巾纸接触）。
每只宠物采集4-6根棉签。
如果一次要采集多只宠物的DNA样品，请在每次采完一只后仔细洗一下手再采集下一只，以防止不同宠物间的DNA相互污染。
采集完成后将棉签放置在阴凉通风处晾干后用干净面巾纸包起来，然后放进纸质信封里。
并在信封上写上在网站提交宠物信息后所获得的9位编码。
最后将纸质信封装进快递袋里寄过来即可。
注意：1、务必确保棉签完全干透，因为潮湿环境下DNA极易降解，对检测结果影响很大。
2、不同宠物间的棉签绝对不可以相互接触到，在晾干过程中也不要让宠物触碰到棉签。
因为DNA检测极其灵敏，轻微的接触也可能造成污染，导致检测结果不准确。
3、在北方干燥条件下，通常一天的时间即可保证棉签彻底晾干。
但在南方潮湿天气里，或是时间比较紧急的情况下，可用电吹风辅助吹干，但是注意不要用加热档，防止高温下DNA降解。
4、如果怀疑在取样或是晾干棉签过程有可能发生了污染，请遗弃该棉签并重新采样。
生物标准品(对照品)活性验证方法探讨
生物标准品〔对照品〕活性验证方法讨论 - 医药类中国药典2022年版二部和2022年版二部附录中收载的生物检查方法如升压物质、降压物质检查法，以及生物测定如升压素、肝素、缩宫素生物测定法，对标准品或对照品溶液可继续使用的条件规定是不同的。
2022年版药典规定“如无沉淀析出，可在3个月内使用”，而2022版药典那么改为“经历证保持活性符合要求的条件下，可在3个月内使用”。
这两版式药典的规定有无质的差异，以及标准品和对照品的活性应当怎样来验证，笔者在这里谈谈自己的粗浅认识，。
1 两版药典不同规定的质的差异药典中收载的这几种检查或测定方法所涉及的标准品或对照品，其溶解性都很好，并不会因为贮存时间延长而发生溶解性降低析出沉淀。
溶液中有沉淀析出一般都是由于溶液中长菌了，产生菌落状的团块。
发生这样的情况就说明溶液已经变质，不能再使用。
这种情况很容易观察到，在工作中也容易掌握。
但2022年版药典并没有考虑标准品或对照品溶液的活性会随着贮存时间的增长有可能发生变化，主要是活性有可能降低。
因此，2022年版规定要考察活性，且活性应符合要求才可以使用，是考虑了生物标准品和对照品最本质的东西，应该说这一规定是非常科学的。
2 标准品或对照品活性验证的关键点标准品或对照品即使在长菌等情况下，其生物活性还是或多或少的存在，但其活性已大大降低，已达不到作为标准品或对照品的准确性要求，不能再使用。
因此，活性验证的关健是活性的大小是否符合作为标准品和对照品的要求，活性验证的目的就是要验证标准品或对照品的活性大小是否符合要求。
3 标准品或对照品活性验证方法3.1升压物质检查法升压物质检查所使用的标准品是垂体后叶标准品，其活性验证可采取该方法规定的大鼠灵敏度测定方法。
标准品溶液配制成0.1u/ml浓度，低剂量应能使大鼠血压升高1.33～3.33kPa，且高、低剂量之比约为1:0.6，高剂量所致反响的平均值应大于低剂量所致反响的平均值。
猫降压物质检查试验规程完整
猫降压物质检查试验规程No.实验室及负责人印章发布日期执行日期编写者审核者QAU负责人修订与更改记录废除更改修订日期签名或盖章1234猫降压物质检查试验规程摘要本SOP规定了本实验室猫降压物质检查试验规程关键词降压物质检查，猫前言本标准操作程序规定了本实验室猫降压物质检查试验规程。
本法系给予猫一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察猫血压变化情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。
内容1 试验动物品系：猫体重：2kg以上性别：雌雄均可2 给药途径及样品配制静脉注射。
组胺配制成含组胺0.5μg/ml的对照品。
除另有规定外，受试样品用氯化钠注射液按各品种项下规定的浓度制成供试品溶液。
3 试验方法将猫腹腔注射3％戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉，仰位固定于保温手术台上。
做气管插管以保持呼吸畅通，分离一侧颈总动脉做插管连接压力换能器及MP150多道生理记录仪，分离一侧股静脉插管供给药用。
插管内均充以100U/ml的肝素生理盐水溶液抗凝。
待血压稳定后，进行药液注射。
所有样品注射体积均为1 ml/kg，药物于15s内注射完毕，注射间隔5min（待血压波动恢复后）。
每次注射结束后均推注1ml的生理盐水。
首先进行动物灵敏度检查，依次注射0.05、0.1、0.15μg/kg的组胺（0.5μg/ml 组胺：0.1ml/kg、0.2ml/kg、0.3ml/kg，用生理盐水配至1ml/kg），每个剂量重复2次。
如果0.1μg/kg剂量使血压下降均不小于2.67 kPa（20mmHg），同时各剂量所致反应平均值有差别，即符合规定。
可以进行降压物质检查。
4 观察指标和时间组胺注射0.1μg/kg（S），受试样品（T），按照S、T、T、S的顺序注射，比较第一和第三，第二和第四次所致的反应，如T的反应值均不大于S反应值的一半，即认为受试样品的降压物质检查符合规定。
否则重复一次，如两组内T的反应值均不大于S的反应值，亦认为合格。
检验记录管理规程
检验记录管理规程检验记录是出具检验报告书的依据，是进行科学研究和技术总结的原始资料；为保证药品检验工作的科学性和规范化，检验记录必须做到：记录原始、真实，内容完整、齐全，书写清晰、整洁。
药品检验报告书是对药品质量作出的技术鉴定，是具有法律效力的技术文件；药检人员应本着严肃负责的态度，根据检验内容记认真填写检验记录，经逐级审核后，由领导签发“药品检验报告书”。
要求做到：依据准确，数据无误，结论明确，文字简洁，书写清晰，格式规范；每一张药品检验报告书只针对一个批号。
1 检验记录的基本要求：1.1 原始检验记录应采用统一印制的活页记录纸和各类专用检验记录表格，并用蓝黑墨水或碳素笔书写(显微绘图可用铅笔)。
凡用微机打印的数据与图谱，应剪贴于记录上的适宜处，并有操作者签名；如系用热敏纸打印的数据，为防止日久褪色难以识别，应以蓝黑墨水或碳素笔将主要数据记录于记录纸上。
1.2 检验人员在检验前，应注意检品标签与所填请验单的内容是否相符，逐一查对检品的编号、品名、规格、批号和效期，生产单位，检验目的和收检日期，以及样品的数量和包装情况等。
并将样品的编号与品名记录于检验记录纸上。
1.3 检验记录中，应先写明检验的依据。
凡按中国药典、部颁标准、地方药品标准或国外药典、及企业内控标准检验者，应列出标准名称及编号1.4 检验过程中，可按检验顺序依次记录各检验项目，内容包括：项目名称，检验日GMP文件陕西嘉禾药业有限公司文件名称文件编码检验记录、报告书写管理规程ZJ-SMP-0024-00 页码第 2 页共12 页期，操作方法（如系完全按照1.3检验依据中所载方法，可简略扼要叙述；但如稍有修改，则应将改变部分全部记录），实验条件（如实验温度，仪器名称型号和校正情况等），观察到的现象（不要照抄标准，而应是简要记录检验过程中观察到的真实情况；遇有反常的现象，则应详细记录，并鲜明标出，以便进一步研究），实验数据，计算（注意有效数字和数值的修约及其运算,详见《有效数字使用管理规程》和结果判断等；均应及时、完整地记录，严禁事后补记或转抄。
常用实验动物的实验基本操作技术
常用实验动物的实验基本操作技术第一节常用实验动物的生物学特征1．蛙（或蟾蜍）的生物学特点是什么？主要用于哪些实验？属于两栖变温动物，皮肤光滑湿润，有腺体无外鳞。
蛙的心脏有两个心房，一个心室，心房与心室区分不明显，动静脉血液混合，有冬眠习性。
生存环境比哺乳动物简单，在机能学实验中有多种实验选择该动物。
如：①离体蛙心实验，常用来研究心脏的生理功能及药物对心脏活动的影响。
②蛙的腓肠肌和坐骨神经可用于观察外周神经及其肌肉的功能，以及药物对周围神经、骨骼肌或神经肌肉接头的影响。
③缝匠肌可用于记录终板电位。
脊休克、脊髓反射、反射弧分析、肠系膜微循环等。
在临床检验中，可用雄蛙作妊娠反应实验。
2．小白鼠的生物学特征是什么？主要用于哪些实验？小白鼠性情温顺，易于捕捉，胆小怕惊，对外来刺激敏感。
它胃容量小，不耐饥渴，随时采食。
在机能学实验中常选用该动物。
故适用于大量的实验动物，如：某些药物的筛选实验、半数致死量（LD50）测定、药效比较、毒性实验、妊娠期20天左右，常用于避孕药实验及抗癌药实验。
3．大白鼠的生物学特征是什么？主要用于哪些实验？大白鼠性情温顺，行动迟缓，易于捕捉，但受惊吓或粗暴操作时，会紧张不安甚至攻击人。
大鼠嗅觉发达，对外界刺激敏感，抵抗力较强。
大鼠无胆囊，肾单位表浅，肝再生能力强。
大鼠的血压反应比兔稳定，可用它作血压实验，也可用于慢性实验、抗炎、降脂、利胆、子宫实验及心血管系统的实验。
药典规定该动物为催产素效价测定及药品指控中升压物质检查指定动物。
4．豚鼠生物学特征是什么？主要用于哪些实验？豚鼠性情温和，胆小，饲养管理方便，可群养。
豚鼠耳蜗管发达，听觉灵敏，存在可见的普赖厄反射（听觉耳动反射），乳突部骨质薄弱。
豚鼠对组织胺、人型结核杆菌很敏感。
能耐受腹腔手术，使用于肾上腺机能的研究。
其自身不能制造维生素C，是研究实验性坏血症的唯一动物。
5．家兔生物学特征是什么？主要用于哪些实验？家兔属于草食性动物，性情温顺但群居性差，听觉、嗅觉十分灵敏，胆小易惊，具夜行性和嗜睡性。
传出神经药物猫实验报告
一、实验目的1. 了解传出神经药物对猫血压的影响；2. 掌握传出神经药物对血压影响的实验方法；3. 培养实验操作能力和数据分析能力。
二、实验原理传出神经系统药物通过作用于心脏和血管平滑肌上相应的受体，产生调节血压的作用。
本研究主要观察传出神经药物对猫血压的影响，通过测量猫血压的变化，分析传出神经药物对血压的作用机制。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：健康成年猫3只；2. 传出神经药物：肾上腺素、去甲肾上腺素、乙酰胆碱等；3. 仪器：血压计、注射器、实验台等。
四、实验方法1. 将3只健康成年猫随机分为三组，分别编号为A、B、C组；2. A组为对照组，不给予任何药物；3. B组给予肾上腺素，C组给予去甲肾上腺素；4. 将实验动物放置在实验台上，使用血压计测量其血压；5. 在给予药物前，记录猫的血压作为基础值；6. 给予药物后，每隔5分钟测量一次血压，连续测量30分钟；7. 记录各组猫在不同时间点的血压变化；8. 对实验数据进行统计分析。
五、实验结果1. 对照组（A组）血压变化：- 给药前：基础血压为120mmHg；- 给药后：血压无明显变化。
2. B组（肾上腺素）血压变化：- 给药前：基础血压为120mmHg；- 给药后：5分钟时血压为160mmHg，10分钟时血压为180mmHg，15分钟时血压为200mmHg，20分钟时血压为190mmHg，25分钟时血压为180mmHg，30分钟时血压为160mmHg。
3. C组（去甲肾上腺素）血压变化：- 给药前：基础血压为120mmHg；- 给药后：5分钟时血压为140mmHg，10分钟时血压为150mmHg，15分钟时血压为160mmHg，20分钟时血压为155mmHg，25分钟时血压为150mmHg，30分钟时血压为140mmHg。
六、实验分析1. 对照组血压无明显变化，说明未给予传出神经药物对猫血压无影响；2. B组给予肾上腺素后，血压升高，说明肾上腺素对猫血压有升高作用；3. C组给予去甲肾上腺素后，血压升高，说明去甲肾上腺素对猫血压有升高作用；4. 通过实验结果可以看出，传出神经药物对猫血压有显著影响，肾上腺素和去甲肾上腺素均可使猫血压升高。
降压物质检查法操作规程
降压物质检查法操作规程：1简述本法系比较一定量的组织胺对照品与供试品引起麻醉猫血下降的程度，以确定供试品中降压物质的含量是否符合规定的一种方法。
2 实验材料及用具2.1 天平精度0.1mg或0.01mg 对照品或供试品称量用精度1mg 试剂称用量精度10g 动物称重用2.2 血压记录装置记录仪、汞柱血压计、压力传感器或记纹鼓、描记杠杆、汞柱血压计。
2.3 实验用具手术台、注射器（1ml精度0.02ml，5ml精度0.2ml）吸管、移液管、容量瓶、带塞小瓶、安瓶、测量尺、三通开关、脱脂棉、绳、线。
2.4 手术用器械剪毛剪、手术剪、眼科直镊、眼科弯镊、手术刀、止血镊、气管插管、动静脉夹及插管。
2.5 试剂氯化钠、苯巴比妥钠、戊巴比妥钠、肝素钠及其他试剂。
3 溶液配制3.1 10%苯巴比妥钠溶液称取苯巴比妥钠适量，加水配成10%溶液（必要时加热溶解）。
3.2 5%戊巴比妥钠溶液称取戊巴比妥钠适量，加水配成5%溶液（必要时加热溶解）。
或用其他适当浓度试剂。
3.3 生理盐水称取氯化钠适量，加水配成0.9%溶液。
3.4 肝素钠溶液称取肝素钠适量，乘以每毫克标示效价单位，得肝素总单位数，加生理盐水配成1000u/ml溶液。
3.5 对照品溶液取磷酸组织胺对照品，放置至室温。
割开对照品小管，（注射勿使玻屑掉入）精密称量磷酸组织按适量。
将称取的毫克数乘以0.362，换算出组胺的实际重量（mg）。
加水将组胺溶解配成1.0mg/ml的对照品溶液，分装于安瓶中，熔封，置4～8℃保存用，在确保降压活性符合要求的前提下，可在3个月内使用。
实验当日，取出组按溶液，放置至室温。
割开安瓶，精密量取组胺溶液适量，用生理盐水配成0.5ug/ml的稀释液。
3.6 供试品溶液按中国药典正文规定的剂量，配成适当浓度的供试品溶液。
实验时，一般要求供试品溶液与对照品稀释液的注入体积相等。
4 实验动物健康无伤，体重2kg以上的猫，雌雄均可，雌者无孕。
降压物质检查法
1
2
降压物质检查法
（猫血压法）
BP EP ChP
组胺检查法
（豚鼠回肠法）
BP EP
《中国药典》2010版二部附录 XIX M化学药品注射剂安全性 评价应用指导原则中收载了组胺类物质检查法。
一、基本概念及原理
降压物质检查法
原理
方法
优点
•利用降压物质可引 起猫血压下降，通 过比较组胺对照品 与供试品引起麻醉 猫血压下降的程度， 以确定供试品中降 压物质含量是否超 出限度
2ml ----------------->0.5ug/ml (SM)
6mlNacl*
3ml --------------->0.75ug/ml (SH)
5mlNacl*
如品种项下规定给药体积：1ml/kg，磷酸组胺应配置的终浓度相应变为：0.05、0.1、0.15ug/ml 如品种项下规定给药体积：0.5ml/kg，磷酸组胺应配置的终浓度相应变为：0.1、0.2、0.3ug/ml
注： 对照品割开时勿使玻璃屑掉入瓶内 折算系数：0.342,即1mg磷酸组胺相当于组胺的mg数 储存液冷藏保存，使用时取出放置至室温
检查法—溶液制备
例：称取磷酸组胺21.26mg×0.342=7.27mg即相当于组胺7.27mg，加灭 菌注射用水7.27ml使溶解，即得1mg/ml。
0.5ml
0.5ml
检查法—溶液制备
2.供试品溶液
按品种项下规定的剂量，配成适当浓度的供试品溶液。实验时， 要求供试品溶液与对照品稀释液的注入体积相等。
注：除另有规定外，一般供试品与对照品注入体积为0.2ml/kg 供试品和对照品如体积相差过大，可通过补充生理盐水量调整。
举例：阿奇霉素注射液，标准规定每kg体重注入2000U，则实际应配成 10000U/ml，按0.2ml/kg注入，给药量即为2000U/kg。
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猫降压物质检查试验规程
No.
实验室及负责人印章
发布日期
执行日期
编写者
审核者
QAU负责人
修订与更改记录
废除更改修订日期签名或盖章1
2
3
4
猫降压物质检查试验规程
摘要本SOP规定了本实验室猫降压物质检查试验规程
关键词降压物质检查，猫
前言本标准操作程序规定了本实验室猫降压物质检查试验规程。
本法系给予猫一定剂量的供试品溶液，在规定时间内观察猫血压变化情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。
内容
1 试验动物
品系：猫
体重：2kg以上
性别：雌雄均可
2 给药途径及样品配制
静脉注射。
组胺配制成含组胺0.5μg/ml的对照品。
除另有规定外，受试样品用氯化钠注射液按各品种项下规定的浓度制成供试品溶液。
3 试验方法
将猫腹腔注射3％戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉，仰位固定于保温手术台上。
做气管插管以保持呼吸畅通，分离一侧颈总动脉做插管连接压力换能器及MP150多道生理记录仪，分离一侧股静脉插管供给药用。
插管内均充以100U/ml的肝素生理盐水溶液抗凝。
待血压稳定后，进行药液注射。
所有样品注射体积均为1 ml/kg，药物于15s内注射完毕，注射间隔5min（待血压波动恢复后）。
每次注射结束后均推注1ml的生理盐水。
首先进行动物灵敏度检查，依次注射0.05、0.1、0.15μg/kg的组胺（0.5μg/ml 组胺：0.1ml/kg、0.2ml/kg、0.3ml/kg，用生理盐水配至1ml/kg），每个剂量重复2次。
如果0.1μg/kg剂量使血压下降均不小于2.67 kPa（20mmHg），同时各剂量所致反应平均值有差别，即符合规定。
可以进行降压物质检查。
4 观察指标和时间
组胺注射0.1 g/kg（S），受试样品（T），按照S、T、T、S的顺序注射，比较第一和第三，第二和第四次所致的反应，如T的反应值均不大于S反应值的一半，即认为受试样品的降压物质检查符合规定。
否则重复一次，如两组内T的反应值均不大于S 的反应值，亦认为合格。
否则另取动物复试或认为不合格。
5 其它
动物灵敏度如合格，可继续实验。