纯化大肠杆菌
纯化大肠杆菌的方法
纯化大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道菌，也是许多生物学实验室中最常用的微生物之一。
在进行分子生物学和遗传学研究时，纯化大肠杆菌是必不可少的步骤之一。
纯化大肠杆菌的目的是将目标菌种从其他微生物（如其他细菌、真菌）和杂质中分离出来，以便后续的实验操作。
以下是一种常用的纯化大肠杆菌的方法：1. 培养大肠杆菌首先，需要选择一株含有目标基因的大肠杆菌株，并进行培养。
将该菌株接种到含有合适营养物质的培养基中，并在适当的温度下培养。
常用的培养基包括Luria-Bertani培养基（LB培养基）等。
2. 收获大肠杆菌在培养过程中，大肠杆菌会进入对数生长期。
当细菌数量达到一定程度时，可以收获细菌。
收获大肠杆菌的方法有两种：离心收获和滤膜收获。
离心收获适用于较大规模的细菌培养，而滤膜收获适用于小规模的细菌培养。
3. 细胞破碎将收获的大肠杆菌细胞进行破碎，以释放细胞内的目标蛋白或核酸。
细胞破碎的方法有多种，包括机械破碎、超声波破碎和化学破碎等。
机械破碎是最常用的方法之一，可以使用搅拌器或高压均质器对细胞进行破碎。
4. 离心分离通过离心将细胞的残渣和细胞碎片与溶解的目标物分离。
首先，通过低速离心将细胞碎片和细胞碎片从溶解的目标物中分离出来。
然后，通过高速离心将残留的细胞碎片和杂质从溶解的目标物中完全清除。
5. 溶解目标物将离心分离的溶解物中的目标物进行溶解，得到纯净的目标蛋白或核酸。
溶解的方法根据目标物的性质不同而不同，可以使用洗脱缓冲液、盐溶液或变性剂等。
溶解后，可以通过低速离心将溶解物中的可溶性目标物与不溶性杂质分离。
6. 纯化目标物将溶解的目标物进行纯化，以获得纯净的目标蛋白或核酸。
常用的纯化方法包括亲和层析、凝胶过滤层析、离子交换层析和透析等。
选择合适的纯化方法可以根据目标物的性质和目标物与杂质之间的亲和性进行选择。
7. 鉴定目标物对纯化后的目标物进行鉴定，确保纯化的目标物具有预期的功能和性质。
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
大肠杆菌系统表达和纯化流程
转化及表达鉴定：3~4天（表达不明显做WB或者
换感受态）
常用的感受态：Bl21（DE3）、BL21(DE3)pLysS 、
Rosetta(DE3) 、OrigamiB(DE3)等
扩大培养：3~4天，根据表达鉴定的结果选择最
优的表达条件扩大
纯化：2~14天，多步纯化后蛋白仍不符合要
求或量不足，则重新扩大
：1~2天，带标签需要WB，tagfree需要
做质谱。
所以蛋白发货前要冻融测
试2次。
总量：1mg，3mg或者其他；1L或小试纯化（得到数据后可根据得率在扩大）
纯度：85%；90%；95%（灰度分析方法或HPLC方法）
浓度：≥0.1mg/ml
基因优化：蛋白序列大小>80kd，（能否提供基因序列，是否需要优化）
从哪里获得：能否接受从包涵体中获得蛋白（含复性）
标签：His tag 为主（N端或C端）；GST，MBP，Trx，Flag tag等
是否酶切：是否需要酶切，接受残留氨基酸
内毒素要求：1EU/ug，0.1EU/ug等
最后Storage buffer：有没有具体buffer，常用Tris，PB 加NaCl，甘油。
复性的蛋
白有可能加入L-arginine或detergent
发货要求：液体或冻干粉
能否提供文献参考：protocol等
蛋白用作什么用途：结晶，抗体等。
纯化大肠杆菌的方法
纯化大肠杆菌的方法
首先，准备工作是非常重要的。
在进行大肠杆菌的纯化前，需要准备好所需的实验器材和试剂，包括培养基、离心管、离心机、超声波破碎机等。
同时，要确保实验室环境的清洁和无菌操作。
其次，进行大肠杆菌的培养和收获。
首先将大肠杆菌接种到含有适当抗生素的培养基中，进行培养。
培养时间和条件根据具体实验而定，一般需要在37摄氏度下培养12-16小时。
培养后，使用离心机将培养液进行离心，收集细菌沉淀。
接下来是大肠杆菌的破碎和裂解。
将收集到的细菌沉淀用适当的缓冲液进行悬浮，然后使用超声波破碎机进行破碎和裂解。
这一步是为了破坏细菌细胞壁，释放细胞内的目标蛋白。
然后进行蛋白的纯化和分离。
通过离心、过滤、层析等方法，将目标蛋白从混合物中分离出来，得到较纯的蛋白样品。
这一步需要根据目标蛋白的特性选择合适的纯化方法，如亲和层析、离子交换层析等。
最后是对纯化后的蛋白进行检测和分析。
使用SDS-PAGE凝胶电
泳、Western blotting等方法对纯化后的蛋白进行检测和鉴定，确
保蛋白的纯度和活性。
通过以上步骤，可以得到较为纯净和活性较高的大肠杆菌蛋白
样品。
这种方法不仅适用于纯化大肠杆菌蛋白，也可以根据具体情
况进行相应的改进和优化，以满足不同实验的需求。
总之，纯化大肠杆菌的方法是一个复杂而又重要的过程，需要
仔细操作和科学设计。
只有通过严格的实验操作和精准的技术手段，才能得到理想的纯化效果。
希望本文介绍的方法对您有所帮助，谢
谢阅读。
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌是一种重要的肠道细菌，对于科学家和医生来说具有重要的研究和治疗价值。
分离和鉴定大肠杆菌的方法有许多种，本篇文章将介绍几种比较常见的方法。
1. 感染部位样本的获得
首先需要获得感染部位的样本，可分为分泌物、血液、尿液、粪便等。
获得样本的方
法可以根据不同部位进行取样，比如粪便可以通过肛门插入取样器进行获取。
2. 抗生素筛选
将样本接种于相应的富营养基质，对其中加入多种抗生素。
根据对应的扩散系数，只
有大肠杆菌具有生长优势，因此只有大肠杆菌能够在抗生素的存在下继续生长。
3. 纯化
从上面的富营养基质中挑选具有脐带颜色和形态特征的菌落，将其在富营养基质上进
行纯化。
纯化后的大肠杆菌能在多种富营养基质上进行生长即可分离。
4. 经典分离法
包括肉汤琼脂平板法、 MacConkey琼脂平板法、格拉莫琼脂平板法、 EMB琼脂平板法等一系列基本细菌检测方法。
1. 化学特性法
常用方法有氧化氨酸特性试验、熏蒸酸特性试验、脱氧氮碱试验、醛类试验等。
通过
观察变化与发色的差异，以及其化学反应程度来判断是否为大肠杆菌。
通过观察菌落形态、革兰染色阳性反应、运动情况、气体代谢情况等特性判断是否为
大肠杆菌。
可采用比色相比法、蛋白溶液胶片法、氧测定法、etc。
3. 抗原性鉴定
通过采用血相似抗原、鞭毛抗原、菌体抗原等抗原进行抗血清试验，来确定是否为大
肠杆菌。
大肠杆菌重组质粒蛋白纯化
大肠杆菌重组质粒蛋白纯化1、挑单克隆至含有氨苄抗生素的2mlLB液体培养基37℃过夜培养。
2、接种活化好的菌液500ul至50ml含有氨苄抗生素的LB培养基37℃，250rpm培养2h 至OD600=0.5。
3、加500ul 0.5M 的IPTG28℃诱导培养2-3h。
4、取0.5ml菌液离心2min，去弃上清液，并用2X SDS-PAGE Sample Buffer重悬菌液，SDS-PAGE电泳检测诱导效率。
5、取剩余的菌液300rpm离心6min，去弃上清，并用5 ml Column Buffer重悬菌液，再至于-70℃冷冻。
6、将细胞置于冰浴中，然后用30%的功率超声波10s，再置于冰上20s。
重复10min。
7、12,000rmp，4℃离心10min。
轻轻倒出上清液置于冰上。
8、取200-500ul的支链淀粉树脂到15ml的离心管，简单离心。
用10ml的Column Buffer 冲洗2次去除上清液。
9、将粗体蛋白用支链淀粉树脂混匀并在4℃孵育4-6h。
10、3,000 rmp离心4-5min，弃去上清。
用12体积的Column Buffer润洗树脂20min，3次。
11、用0.5-1 mL column Buffer洗脱融合蛋白，并用10 mM的麦芽糖4℃孵育1-2h。
12、收集每次洗脱的第一和第二个片段。
Column Buffer20 mM Tris-HCl pH7.4200 mM NaCl1 mM EDTA1X Bacterial Protease inhibitor. 50ul PMSF-5ml Column Buffer2x SDS-PAGE sample buffer90 mM Tris·HCl, pH 6.820% (v/v) 甘油2 % (w/v) SDS0.02 % (w/v) 溴酚蓝0.1 M DTT试剂丙烯酰胺（Acr），亚甲基双丙烯酰胺（Bis），TEMED,过硫酸铵，SDS，Tris-base，Hcl，甘油，巯基乙醇，溴酚蓝，甘氨酸，考马斯亮蓝R-250，甲醇，冰醋酸，乙醇，乙酸钠，戊二醛，硫代硫酸钠，乙二胺四乙酸二钠等。
大肠杆菌培养实验报告
一、实验目的1. 学习大肠杆菌的培养方法，掌握其生长规律。
2. 掌握无菌操作技术，培养纯化大肠杆菌。
3. 了解大肠杆菌在食品、环境及医学等领域中的应用。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在实验室条件下，大肠杆菌可以通过人工培养获得纯化菌株。
本实验采用LB培养基培养大肠杆菌，通过观察菌落形态、显微镜观察等方法，了解大肠杆菌的生长特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）大肠杆菌菌种；（2）LB培养基；（3）无菌水；（4）无菌试管、培养皿、移液管、镊子、酒精灯等。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）酒精灯；（4）高压蒸汽灭菌器。
四、实验步骤1. 菌种复苏（1）将大肠杆菌菌种接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）待菌液生长旺盛后，取适量菌液，用无菌水进行稀释。
2. 培养基制备（1）按照LB培养基配方，称取相应的成分，加入去离子水溶解。
（2）将溶液煮沸，去除其中的氧气。
（3）将溶液冷却至50-55℃，加入适量的无菌水。
（4）用无菌滤膜过滤除菌。
3. 接种与培养（1）将制备好的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌移液管吸取菌液，均匀涂布于培养基表面。
（2）将培养皿倒置，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
4. 观察与鉴定（1）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、边缘等特征。
（2）用无菌镊子挑取菌落，制成涂片。
（3）将涂片置于显微镜下观察，观察细菌的形态、排列等特征。
5. 结果与分析（1）菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
（2）显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
五、实验结果1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
2. 显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
六、实验讨论1. 在实验过程中，无菌操作非常重要，以免污染菌种。
纯化大肠杆菌的方法
纯化大肠杆菌的方法
首先，要准备好大肠杆菌的培养基。
培养基的选择对于大肠杆菌的纯化至关重要，一般可以选择LB培养基或者其他含有营养物质的培养基。
将培养基加入到培养皿中，并在适当的温度下进行预培养。
接下来，需要将待纯化的大肠杆菌接种到培养基中。
首先要将大肠杆菌进行预处理，可以选择从冻存的大肠杆菌菌液中取出适量的菌液，然后在预培养的培养基中进行接种，使其进行生长。
在大肠杆菌培养达到一定浓度后，可以进行离心。
离心可以将培养基中的大肠杆菌细胞沉淀到底部，去除培养基中的其他杂质和细胞碎片，从而得到相对纯净的大肠杆菌细胞。
接下来，需要对离心后的大肠杆菌细胞进行溶解和裂解。
可以选择添加适量的溶解液，使得大肠杆菌细胞完全溶解，并释放出内部的蛋白质和其他生物大分子。
随后，可以进行蛋白质的纯化步骤。
可以选择离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等方法，根据所需纯度和产量的不同选择
不同的蛋白质纯化方法，最终得到纯净的大肠杆菌蛋白质。
最后，需要对纯化后的大肠杆菌蛋白质进行检测和分析。
可以选择SDS-PAGE凝胶电泳、Western blotting等方法对蛋白质进行鉴定和分析，确保获得的蛋白质是纯净的并且符合所需的要求。
通过以上步骤，就可以得到纯化后的大肠杆菌蛋白质，可以用于各种实验和应用中。
这种纯化方法简单易行，可以得到高纯度和高产量的大肠杆菌蛋白质，非常适合于科研和生产中的需要。
食品中大肠菌群的检测及分离纯化
实验8: 食品（饮用水）中大肠菌群的检测（滤膜法）及分离纯化（6学时）一、目的要求1.利用滤膜法测定食品中大肠菌群。
2.掌握分离微生物的基本操作。
二、基本原理1.滤膜法是采用过滤器过滤水样，使其中的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养，大肠菌群可直接在膜上生长，从而可直接计数。
所用滤膜是一种多孔硝化纤维膜或乙酸纤维膜，用水系过滤膜即可，其孔径约0.45μm。
2.在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。
得到纯培养的过程称为分离纯化。
三、试验原料及器材实验原料：伊红美蓝琼脂平板或远藤氏琼脂平板，乳糖蛋，蛋白胨，灭菌水，饮用水等；器材：镊子；夹钳；烧杯；真空泵；滤膜；过滤器等。
四、操作步骤1.大肠菌群的检测（1）滤膜灭菌将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，加热煮沸15分钟，共煮沸三次，前两次煮沸后换水洗涤2—3次再煮，以洗去滤膜上残留的溶剂。
（2）过滤器装置用无菌手续将已灭菌的过滤器基座、滤膜、漏斗和抽滤瓶安装好，其中滤膜用灭菌镊子(浸在95%酒精内，用时通过火焰灭菌)移至过滤器的基座上。
其他可直接用手或夹钳操作，但不要碰到伸入抽滤瓶的橡皮塞部分，以免染菌。
（3）将抽滤瓶接上真空泵。
（4）加水样过滤直径50mm的滤膜，所过滤的水量以培养后长出的菌落数一般需要较多过滤器装置，多于50个为适宜，所以采用多联过滤器最好，可以减少误差。
一般清洁的深井水或经处理过的河水与湖水等可取样 300—500 ml；对比较清洁的河水或湖水，可取样1-100ml；严重污染的水样可先进行稀释；未知的水样可做三个稀释度，选择菌落数合适的稀释度进行计算。
本次实验于过滤器漏斗内加入比较河水或湖水100ml，加盖。
（5）开动真空泵进行油滤。
（6）抽完后，加入等量的灭菌水继续抽滤，目的是冲洗漏斗壁。
（7）滤毕，关上真空泵，用灭菌镊子取滤膜边缘，将没有细菌的一面紧贴在伊红美蓝琼脂平板上。
滤膜与培养基之间不得有气泡。
大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化
大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化大肠杆菌表达重组蛋白的超声破碎及纯化一可溶性蛋白的纯化（一）菌体的破碎1. 仪器与材料：-80℃冰箱；超声波细胞破碎仪；50mM PBS或50mM Tris-HCl pH 7.5；50ml 离心管；冷冻高速离心机2. 方法2.1反复冻融2.1.1收集菌液500ml，等分10份，4000 r/min 4℃离心15min，弃上清。
2.1.2 菌体沉淀中加入相同菌液体积的50mM PBS 或50mM Tris-HCl（选择使蛋白稳定的缓冲液和pH）重悬洗涤一次。
2.1.3 然后按原菌液体积的1/4加入缓冲液重悬菌体，并加入蛋白酶抑制剂PMSF 和EDTA(带His标签不加)，PMSF终浓度为100μg/ml, EDTA的终浓度为。
取20μl重悬菌液进行电泳，检测蛋白表达的情况（是否表达，是可溶性表达还是包涵体表达）。
2.1.4 将菌液（经检测有表达）在-80度冰冻，室温融解，反复几次（反复冻融三次），由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。
2.2 超声波处理(对超声波及热敏感的蛋白慎用)2.2.1 将反复冻融的菌液（必要时可加入1mg/ml 溶菌酶，缓冲液pH＞8.0，加入后需静置20min），进行超声破碎，超声条件：400W，工作5秒，间隔5秒，重复一定次数，（根据我们的仪器找出一个比较好的工作条件）。
直至菌体溶液变清澈为止，大约花费时间。
2.2.2 取少量经超声破碎后的菌液，10000rpm离心10分钟，分别对上清和沉淀进行检测，并用全菌作为阳性对照，检测菌体破碎程度及目标条带占总蛋白的含量。
注意事项：（1）超声破碎具体条件可根据实验情况而定，要掌握好功率和每次超声时间，降低蛋白被降解的可能。
（2）功率大时，每次超声时间可缩短，不能让温度升高，应保持在4度左右，超声时保持冰浴。
（3）菌体破碎后总蛋白浓度的测定可用Bradford 法或者紫外吸收法。
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5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
①在火焰旁右手拿
①
②
_锥__形__瓶__，左手
拔__出__棉__塞_.
③④
5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
②锥形瓶的瓶口
①
②
_迅__速__通__过__火__焰_____。
③④
5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
① ③
③左手将培养皿
②
__打__开__一__条__缝__隙__,右手
_将_培__养__基__倒__入__培__养__皿___,
立刻盖上皿盖。
④
5.倒平板
待培养基冷却至50℃左右时在酒精灯火焰附近操作
④待平板冷却凝固
后，将平板
①
②
_倒__过__来__放__置_______。
③④
5.倒平板
思考5：锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？
4.灭菌：培养基、培养皿
5.倒平板：
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
琼脂20.0g 牛肉膏 5g 蛋白胨 10g NaCl 5g H2O 定容至1000ml
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
思考3：在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中， 动作要迅速，原因是什么？ 防止牛肉膏吸收空气中的水分 思考4：溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？
获得由单个细菌形成的标准菌落
二、纯化大肠杆菌
思考8：取菌种前灼烧接种环的目的是什么？ 消灭接种环上的微生物。 为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？ 消灭接种环上的残留菌种。 取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？ 防止高温杀死菌种 最后灼烧接种环的目的是？ 防止细菌污染环境和操作者 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？
1.将接种环在酒精 2.在酒精灯火焰旁冷却接
灯火焰上灼烧直至 种环，并打开大肠杆菌的
烧红
菌种试管的棉塞。
二、纯化大肠杆菌
1.平板划线法
3.将菌种试管口通过火焰达 4.将冷却的接种环伸入到 到消灭试管口杂菌的目的 菌液中沾取一环菌液
二、纯化大肠杆菌
1.平板划线法 5.将菌种试管口再次通过火焰 后塞上棉塞
6.将皿盖打开一条缝隙，把接种 环伸入平板内划3～5条平行线， 盖上皿盖，不要划破培养基。
二、纯化大肠杆菌
1.平板划线法
7.灼烧接种环，冷 却后从第一区划线 末端开始向第二区 域内划线。重复上 述过程，完成三、 四、五区域内划线。 注意不要将第五区 的划线与第一区划养
巩固练习
1、培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气所 采用的灭菌、消毒方法依次是( )
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④ B．①②③④⑤
C．⑥②③④① D．③④②①⑥
巩固练习
2、获得纯净培养物的关键是 ( ) Ａ．将用于微生物培养的器皿、接种用具、培养基 等进行灭菌 Ｂ．接种纯种细菌 Ｃ．适宜环境条件下培养 Ｄ．防止外来杂菌的入侵
3、下表所示为某微生物培养基的配方，请回答：
成分
含量 成分 含量
NaNO3
3 g FeSO4 0.01 g
K2HPO4
1g
(CH2O) 30 g
琼脂
15 g H2O 1 000 ml
MgSO4·7H 0.5 g 青霉素 0.1万单位 （1）2O物理性质，该培养基属于___固__体___培养基。依用
途划分，则属于___选__择___培养基。
⑵根据培养基原料，所培养微生物的同化作用的类型 是 ___异__养__型____。（异养型/自养型）
纯化大肠杆菌
1、本实验所用的培养基是牛肉膏蛋白胨固体培养基 2、本实验可分成配制培养基和纯化大肠杆菌两个阶段。
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
1.计算：根据配方比例，计算配制100mL培养基的用量 2.称量： 3.溶化：将各成分加水溶解并定容至100mL。
消灭瓶口杂菌，防止杂菌感染培养基。
思考6：倒平板的目的是什么？
防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。
思考7：若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培 养微生物？为什么？ 不能，空气中的杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污 染皿内的培养基。
二、纯化大肠杆菌
1.平板划线法
用带有微生物的接种环在固体培养基表面通过连续划线而 纯化分离微生物的一种方法。