肿瘤耐药基因表达的临床意义及其逆转研究
肿瘤的多药耐药机制及逆转剂的研究进展
ａ ｄ Ｓ ｏ ｔ ．ｎ ａ ｄｔｏ ． ｎ Ｏ ｆ ｒｈ Ｉ ｄ ｉ ｎ ＤＮＡ ｔ ｙａｉ ｎｉ ｌｏａｆｃｏ ｖ ｌｅ ｅＭ ＤＲ ｆｃ ｎ ｅ ｅｌ． ｎ ｔｉ ｅ ｉｗ，ｈ ｕ ｅ ｔ ｉ ｍｅｈ ｌｔｏ Ｓａｓ ａ ｔｒｉ ｏｖ ｄ ｉ ｔ ｎ ｎ ｈ ｏ ａ ｃ ｒｃ ｌ Ｉ ｈ ｓｒｖ ｅ ｔ ｅｃ ｒ ｎ ｓ ｒ ｓ ａｃ ｒ ｇ ｅ ｓｏ ｅｍｅ ｈ ｎｓ ｏ ａ ｃ ｒｃ ｌＭ ＤＲ ｎ ｏ ｅｐ ｎ ｉｇＭ ＤＲ ｅ ｅ ｓ ｌ ｇ ｎｓｗｅｅｄ ｓ ｒ ｅ ． ｅ ｅ ｒｈｐ ｏ ｒ ｓ ｎ ｔ ｃ ａ ｉｍ ｆｃ ｎ ｅ ｅｌ ｈ ａ ｄｃ ｒ ｓ ｏ ｄｎ ｒｖ ｒａ ｅ ｔ ａ ｒ ｅ ｃ ｂ ｄ ｉ
ｔ ａ ｈ ｕｔ ｒ ｇｒ ｓｓａ ｃ ｅ ｅｍｄ ｌａ ｄｍｕ ｔ ｒ ｇｒ ｓｓａ ｃ —ｓ ｏ ｉｔｄｐ ｏ ｅｎｇ ｎ ｐ ｓ ｏ ｄｉ ｃｅ ｓｄ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｈ ｔ ｅｍ ｌｄ ｕ ｅ ｉｔｎ ｅｇ ｎ ｒ ｎ ｌｉ ｕ ｅ ｉｔｎ ｅａ ｓ ｃａｅ ｒ ｔｉ ｅ ｅｍｒ ｈ ｗｅ ｎ ｒａ ｅ ｘ ｒ ｓｉ ｎ ｔ ｉ ｄ
Ｇｒ ｕ ｒ ｏ ａｉｎ， ｅ ｇ ｕ ６ ０ ， ｉａ ｏ ｐＣｏｐ ｒｔｏ Ｃｈ ｎ ｄ ５１ Ｃｈ ｎ ） １ ０
Ａｂ ｔａｔ Ｍ ｕｔ ｌ ｒ ｇｒｓ ｔ ｃ ＭＤＲ） ｆ ａ ｃ ｒ ｅｌ ｉ ｏ ｅｏ ｅｍａｎｆｃｏｓ ｅｕｔ ｇｉ ｅ ｔ ｎ ｉ ｕｔ ｓ ｓｒ ｃ： ｌｐｅｄｕ ｉａ ｅ（ ｉ ｅ ｓｎ ｏ ｎ ｅ ｌ ｎ ｆｈ ｉ ａｔｒ ｒｓｌｎ ｔ ａ ｃ ｃ ｓＳ ｔ ｉ ｎ ｒ ｍｅ ｔ 币ｃ ｌｅ ｄ ｉ
Ｋｅ ｒ ｓ ｔ ｍｏ ： ＤＲ； ＤＲ ｖ ｒ ａ ｇ ｎ ｓ ｙ ｗｏ ｄ ： ｕ ｒＭ Ｍ ｒ ｅｓｌ ｅ ｔ ｅ ａ
肿瘤多药耐药机制及其逆转方案的研究进展
１７ ９ ０年 Ｂｌｅ 等 就 在对 中 国仓 鼠肺 细胞 Ｐ ８ ｉ ｒ ｄ ３３
肿瘤 细胞 的研 究 中首 次发 现 了 ＭＤ Ｒ现 象 ¨ 。肿 瘤
Ｐｇ ．Ｐ为一种 能量依 赖 性 的外 排 蛋 白 ， 由多 药 是 耐 药基 因 ＭＤ １表 达 的 一 种 单 链 跨 膜 糖 蛋 白 ， Ｒ 由 １２ ０个 氨基 酸 构 成 ， 对 分 子量 为 １０ ｋ 属 于 ８ 相 ７ Ｄ，
ｇ 具 有 抑 制 肿 瘤 细 胞 凋 亡 的 功 能 ， 研 究 表 ｐ还 有 明 ， —Ｐ能 够 抑 制 ｃｓａｅ３和 ｃｓａｅ Ｐｇ ａｐ ｓ－ ａｐ ｓ一 ８的裂 解 激 活 ， 而 抑 制 了 ｃｓａｅ依 赖 的 细 胞 凋 亡 。Ｐ ｇ 从 ａｐｓ ．Ｐ 不 仅在肿 瘤组织 中高表 达 ， 正 常组 织 中也 有 区域 在
肿 瘤 多药 耐 药 （ ｕｔｄｕ ｅｉａ ｃ ， Ｒ） ｍ ｌ—ｒｇｒｓ ｔｎｅ ＭＤ 的 ｉ ｓ 客 观存在是肿 瘤化 疗失 败 的主要 原 因 ， 发 生 的影 其 响因素较多 。 目前 ， 究 肿瘤 ＭＤ 机制 ， 找低 毒 研 Ｒ 寻 高效 的肿瘤耐 药逆转剂 已是肿 瘤化疗 药物领域研 究 的热 点 。现对 肿瘤 ＭＤ Ｒ机 制及 其 耐 药逆 转 方案 的 研究进展 作一综述 。
・
１４ ・ ７
： ０ ０年 ６月第 ２卷 第 ３期 ２１
Ｃ ｉ ＪＳｒ ｎｏＪｎ２ １ ｈｎ ｕｇＯ综
述
肿瘤 多药 耐 药机 制及 其 逆转 方 案 的研究 进展
刘 嘉
作者单位 ：１０９ 江苏 ２ ０２
作者简介 ： 刘
南京 ， 江苏建康职业学院 编译部
嘉 ， ， 苏南 京 人 ， 学硕 士 ， 瘤学 编 辑 。 — ｉ ｌ ｊ４ ２ １３ ｃｎ 男 江 医 肿 Ｅｍａ ： ｕ ａ０ ＠ ６ ．ｏ ｌｉｉ
ETS1基因沉默逆转MCF-7ADR多药耐药的实验研究的开题报告
ETS1基因沉默逆转MCF-7ADR多药耐药的实验研究的开题报告一、研究背景与意义多药耐药是肿瘤治疗中常见的问题，也是肿瘤患者治疗失败的主要原因之一。
研究表明，多药耐药与肿瘤细胞中特定基因的表达失调等因素有关。
ETS1基因作为一种转录因子，在多种肿瘤中表达异常，并且与肿瘤细胞的增殖、转移和耐药性等方面密切相关。
因此，探究ETS1基因在多药耐药中的作用机制，对于寻找肿瘤治疗新靶点，提高治疗效果具有重要的意义。
二、研究内容本研究将采用质粒介导的siRNA技术沉默MCF-7ADR细胞中的ETS1基因，观察ETS1基因沉默对MCF-7ADR细胞耐药性以及细胞增殖、转移能力的影响，并研究ETS1基因沉默对多种耐药基因的表达变化及其调控机制。
三、研究方法1、建立沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞株：通过质粒介导的siRNA技术，构建含有ETS1基因特异性siRNA的质粒，并将其转染到MCF-7ADR细胞中，筛选出效果最佳的siRNA序列，建立沉默ETS1基因的细胞株。
2、细胞增殖和转移能力的检测：采用CCK-8法和Matrigel侵袭实验，测定沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞的增殖和转移能力。
3、耐药基因的表达变化：利用qRT-PCR技术，检测沉默ETS1基因的MCF-7ADR细胞中多种耐药基因的表达变化。
四、预期结果我们预计，ETS1基因沉默可逆转MCF-7ADR细胞的多药耐药性，并抑制细胞增殖和转移能力。
同时，ETS1基因沉默可能通过影响多种耐药基因的表达，参与细胞的多药耐药性形成与发展。
五、研究意义本研究有望为肿瘤治疗的新靶点的寻找提供重要线索，为寻找治疗耐药性的新策略提供理论依据，进一步拓展肿瘤治疗的可能性。
非小细胞肺癌耐药机制及其逆转耐药的研究进展
据中国肿瘤登记中心2018年发布的数据显示，肺癌在我国男性肿瘤发病患者中占首位，在女性中位列第三［1］。
按照病理类型，肺癌可分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌两大类，非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer ，NSCLC ）约占80%［2］。
靶向治疗、细胞治疗和免疫治疗的快速发展为患者带来了希望，但目前化疗仍然是NSCLC 治疗的主要手段。
肿瘤细胞对化疗药物的耐药性是导致临床化疗失败的主要原因。
因此，对多药耐药（multidrug resistance ，MDR ）机制的研究仍是当今肿瘤研究领域的一个热点。
肺癌的MDR 机制涉及膜转运蛋白介导的药物外排泵、酶介导的肿瘤细胞解毒和DNA 修复功能增强、凋亡调控基因异常、信号转导因子发挥抗凋亡机制等多种途径，这些途径中的关键基因和蛋白都与诱发肿瘤细胞形成耐药表型相关［3，4］。
本文就近年来有关肺癌MDR 的机制研究及中药在逆转NSCLC 耐药性方面的研究进展作一简单综述。
1ATP 结合盒转运体蛋白ATP 结合盒转运体（ATP-bingding cassette transport ，ABC 转运体）蛋白家族是一大类跨膜蛋白，广泛存在于各种生物体。
ABC 转运体利用ATP 水解产生的能量将底物（包括抗癌药物）从细胞内排出，使细胞内药物的浓度降低，在肿瘤细胞表现为耐药。
在ABC 转运蛋白家族中研究较多的是磷酸化糖蛋白（phosphorylated glycoprotein ，P-gp ）、MDR 相关蛋白（multidrug resistance-associated protein ，MRP ）、乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein ，BCRP ）等。
这些细胞膜药物转运蛋白均依赖ATP 供能发挥“药泵”作用，能把进入细胞内的药物排出细胞外，降低细胞内药物浓度，导致药物细胞毒作用减弱甚至丧失，降低药物对肿瘤细胞的杀伤作用，从而导致肿瘤细胞耐药［5］。
抗肿瘤药物的耐药机制与逆转策略
抗肿瘤药物的耐药机制与逆转策略随着科技的进步和医疗技术的不断发展，肿瘤治疗取得了重大的突破。
然而，肿瘤耐药性问题一直困扰着临床医生和患者。
耐药性是指肿瘤细胞对抗肿瘤药物产生的抗性，导致药物失去效果。
本文将重点探讨抗肿瘤药物的耐药机制以及逆转耐药性的策略。
一、耐药机制1. 基因突变基因突变是导致肿瘤细胞产生耐药性的重要机制之一。
肿瘤细胞会发生突变，使得药物靶点的结构发生改变，从而失去与抗肿瘤药物结合的能力。
例如，肿瘤细胞突变后的蛋白质结构会阻碍药物结合，使药物无法发挥作用。
2. 表观遗传学变化表观遗传学变化是指对基因表达的调控，而不改变基因本身的序列。
这种变化在肿瘤细胞耐药性中起着重要作用。
例如，DNA甲基化和组蛋白修饰等改变会导致基因的失活或过度表达，从而减少药物对肿瘤细胞的效果。
3. 肿瘤微环境肿瘤微环境对肿瘤细胞的增殖和侵袭具有重要的调节作用。
在肿瘤微环境中，存在一些细胞因子和信号分子，它们能够通过多种途径促进肿瘤细胞的生长和存活。
同时，肿瘤微环境中的细胞间相互作用也会对抗肿瘤药物的疗效产生影响。
二、逆转策略1. 组合治疗组合治疗是目前临床应用最广泛的逆转耐药性策略之一。
通过同时或交替使用多种抗肿瘤药物，可以避免单一药物导致的耐药性。
组合治疗可以通过不同的靶点以及不同的作用机制，综合发挥抗肿瘤的效果，降低耐药性的风险。
2. 靶向治疗靶向治疗是根据肿瘤细胞的特异性靶标，选择相应的抗肿瘤药物进行治疗。
与传统的化疗药物相比，靶向药物可以更精确地作用于肿瘤细胞，减少对正常细胞的毒副作用。
同时，靶向药物也可以通过作用于特定的信号通路，逆转肿瘤细胞的耐药性。
3. 免疫治疗免疫治疗是利用激活患者自身免疫系统来攻击和杀灭肿瘤细胞的治疗策略。
通过调节免疫系统的功能和增强免疫细胞对肿瘤细胞的识别和攻击能力，免疫治疗可以逆转肿瘤细胞的耐药性。
4. 补充治疗在抗肿瘤治疗过程中，适当的营养支持和身体护理也是逆转耐药性的重要策略。
超声波体内逆转肿瘤多药耐药基因表达的实验研究
１ ． １ 实验 动 物 Ｈｅ ｐ Ｇ ２ ／ Ａ Ｄ Ｍ 裸 鼠 移 植 瘤 模 型 的 建 立 参 见 文
无互 补 序列 ； ５ ） 引物 ３ ’ 末端碱基与模板 Ｄ Ｎ Ａ 完 全 配对 。ｍｄ ｒ ｌ 、 ｍ ｒ ｐ 、 ｌ ｒ ｐ引 物序列 均 由上 海生 物 工程 公
深 度不 超过 ０ ． ５ ｃ ｍ， 治疗 部 位随 机取 三处 。部分 标本
置一 １ ７ ３ ｏ Ｃ 液 氮保 存备 用 ：部 分标 本经 １ ０ ％ 中性 福尔 马林 固定 、 脱水 、 石蜡 包埋 ， 石 蜡块 保存 备 用 。
１ ． ６ Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ检测 多药 耐药 蛋 白 １ ． ６ ． １ 组织 Ｒ Ｎ Ａ提 取 用 液氮 预冷碾 钵 、杵 子 、 药
献［ ４ ］ ， 实 验 动物 由重 庆 医科 大学 动 物实 验 中心 在无
特定 病原体 （ Ｓ Ｐ Ｆ ） 条 件下 饲养 。
１ ． ２ 实 验分 组
司合 成 。
实 验结 束后 取 Ｐ Ｃ Ｒ产物 与 Ｄ Ｎ Ａ上 样 Ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ 混
实验 动物 ７ ０只 ， 用 Ｈｅ ｐ Ｇ ２ ／ Ａ ＤＭ 细胞 悬液 皮下 注射 法 。 建立 多药 耐药荷 瘤 鼠模 型 。 荷 瘤 鼠瘤 体积 生 长到 ６ ０ １ ０ ０ ａｍ ｒ 时后 。 依据治疗方法的不 同， 随 机 分为 ： １ ） Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ ／ Ａ Ｄ Ｍ 移 植瘤 对 照 组 １ ０只 （ 无 任 何 处理 措施 ） ： ２ ） Ｈｅ ｐ Ｇ ２ ／ Ａ ＤＭ 移 植 瘤 ＋ Ａ Ｄ Ｍ组 ２ ０只 （ Ａ Ｄ Ｍ 治疗 ） ； ３ ） Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ ／ Ａ Ｄ Ｍ 移 植瘤 ＋ Ｕ Ｓ组 ２ ０只 （ 超声 波 治疗 ） ； ４ ） Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ ／ Ａ Ｄ Ｍ 移 植瘤 ＋ ＡＤ Ｍ＋ Ｕ Ｓ组 ２ ０只 （ Ａ Ｄ Ｍ 治疗 ＋ 超声 波治疗 ） 。
癌症耐药性机制及逆转策略
癌症耐药性机制及逆转策略癌症是一种常见的疾病，也是一种极具破坏力的疾病，传统治疗方法包括手术、放疗、化疗等，对于患者来说都带来了不小的痛苦。
然而即使接受了全面治疗，仍然会有患者的肿瘤反复出现，而这种反复性的发作难以根除正是由于癌症耐药导致的。
癌症耐药性是指在正常治疗下，肿瘤细胞逐渐对疗法产生耐药，使得治疗无效。
本文将对癌症耐药性机制及逆转策略进行详细阐述。
一、癌症耐药性机制1、多药耐药性机制（MDR）多药耐药性（MDR）是一种常见的药物耐受现象，它使得肿瘤细胞在较短时间内对不同类别的抗肿瘤药物具有阻抗作用，使肿瘤细胞逐渐耐受各种不同的抗组织胺药、抗氟胞嘧啶药和其他相关抗癌药物。
主要机制涉及膜转运蛋白超表达、噬菌体蛋白表达和DNA损伤修复途径的变化等。
2、问药耐药性机制问药耐药性（AD) 的机制比 MD 更为复杂，包括内激酶信号途径的激活、损伤修复的增强及代谢物转移表达的改变，导致在合理剂量下仍可繁殖和形成耐用肿瘤。
3、肿瘤微环境耐药性机制肿瘤微环境耐药性是由肿瘤细胞周围的环境，包括肿瘤细胞外基质、母细胞和肿瘤周围的血管所产生的反应引起的。
这些因素支持肿瘤细胞的生长和生存，有时又使肿瘤细胞对抗药物耐药性，导致化疗失效。
以上三种机制均极大限制了化疗的效果，因此寻找能够减少耐药性的逆转策略已经成为重点研究领域。
二、逆转策略1、肿瘤细胞凋亡逆转策略肿瘤细胞的凋亡是一种正常细胞死亡的形式，它被认为是控制恶性肿瘤的重要机制之一。
近年来研究发现，肿瘤细胞耐药性的产生也与凋亡能力的改变有关。
一些研究通过调节凋亡相关蛋白，如Caspase，可抑制肿瘤细胞的生长，带来很好的治疗效果。
2、肿瘤细胞增殖逆转策略肿瘤细胞增殖、分化和细胞凋亡等过程涉及多个信号通路，抑制其增殖是目前癌症治疗的主要方式。
逆转耐药可利用药物，平衡细胞增殖危象，最终达到长时间治疗的目的。
3、肿瘤细胞代谢逆转策略癌症耐药性的机制之一是肿瘤细胞代谢变化，调节肿瘤细胞的代谢即变得非常重要。
多耐药基因(MDR1)在宫颈癌组织中的表达及临床意义
多耐药基因（MDR1）在宫颈癌组织中的表达及临床意义目的探讨多耐药基因（MDR1）在宫颈癌组织中的表达及临床意义。
方法免疫组化法检测78例中、晚期宫颈癌组织微阵列芯片标本中MDR1表达，探讨其与宫颈癌临床病理特征的关系。
结果78例宫颈癌组织中MDR1阳性表达率为85.6%，随着FIGO分期的变晚、淋巴转移的出现、分化程度的降低，MDR1的表达逐渐增高。
结论MDR1在宫颈癌组织中表达可能与宫颈癌的侵袭、转移和进展密切相关。
标签：子宫颈癌；MDR1基因；耐药；表达宫颈癌是全球女性第二高发癌症，每年有52.9万例新发病例，50%发生于发展中国家[1]，发病率仅次于乳腺癌，严重危害着女性的身心健康，近27.4万女性死于该病[2-3]。
其中侵袭、转移被认为是宫颈癌患者死亡的重要原因，是影响患者预后的独立因素。
因此研究与宫颈癌侵袭、转移的相关因素具有重要意义。
多药耐药（muhidrugresistance，MDR）指的是腫瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制完全不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性[4]。
本研究采用免疫组织化学方法检测MDR1在中、晚期宫颈癌组织中的表达，分析MDR与中晚期宫颈癌临床病理之间的关系，探讨MDR1在宫颈癌侵袭、转移和进展中的作用。
1 资料与方法1.1一般资料宫颈癌组织微阵列芯片购自西安艾丽娜生物科技有限公司，组织芯片的病理学诊断由两个独立的病理科医师一致得出。
芯片组织标本由宫颈活检病理确诊，按照国际妇产科联盟（FIGO）2009年修订的宫颈肿瘤分期标准，Ⅱ期43例，Ⅲ期22例，Ⅳ期13例（含淋巴结转移癌8例）。
1例正常宫颈腺体作为阴性对照，年龄为47岁。
另有一例粘液表皮样癌，不进入统计。
有1例标本无组织学分级资料。
山羊血清、HRP-山羊抗兔二抗均购自康为世纪、兔抗人MDR、DAB显色试剂盒、苏木素染色剂、中性树胶均够自博士德。
1.2免疫组化法检测MDR在宫颈癌组织中的表达切片常规烘烤、脱蜡、水化、抗原修复、山羊血清室温封闭1h，每张切片分别滴加0.01M PBS按1：100稀释的兔抗人MDR一抗，4℃过夜，滴加生物素标记的二抗300μl，室温避光孵育30min，滴加DAB显色液液300μl，苏木素复染、常规脱水、透明、中性树胶封片、读片。
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九 五 攻 关
Abstract :Based on the investigation of K562/ A02 and A549PDD ,the results show that the phenotype of drug resistance is multi - genes. It varies with the induced drugs , the kinds and differentiation of tumor and the host micro-environment , resulting in overexpression of one resistant gene or multi - genes simultaneously. It has been proved that mdr1/ P-gp is the only one related tumor resistance in clinic . Using cDNA Array technique to compare the RNA from the resistant cell line K562/ A02 with its parent cell line K562 ,several genes were found that have not related with tumor resistance before . New reagents for reversal of MDR have been developed for its potential application in clinic and also Diabody anti CD3 / anti P-gp which is a new approach for the therapy of P-gp + tumors ,especially in metastasis.
The Clinical Significance of Overexpression of Drug - Resistance Genes and Reversal of Multidrug Resistance in Cancer
YANG Chun-zheng1 , LIU Shu-yi2 (1. National Laboratory of Experi mental Hematology , Hematologic Institute , Chinese Academy of
上述 mdr1 基因转染实验证明 , mdr1 扩增和由它编码的 P2gp 表达增加是肿瘤细胞产生多药耐药的原因 。
此外用狭缝杂交法检测 Top Ⅱ基因表达 , 发现 Top Ⅱ基 因表达明显低于 K562 细胞谷胱甘肽 -S- 转移酶活性检测结 果 K562/ A02 和 K562 细胞 GST含量分析为 01372 和每分钟 01175nM/ 107 个细胞 , 两者差异显著 。在敏感及耐药的人肿 瘤细胞中的端粒酶活性测定表明耐药细胞 K562/ A02 的端粒 酶活性是增加的 , 并且除抗凋亡基因 Bcl-2 表达增加外 PKC 活性也明显增加 。
132
K562/ HHT, ③人结肠癌耐药细胞株 HCTv2000 , ④A2780 细胞 对阿霉素耐药系 , ⑤小鼠耐 Mel (马法兰) 细胞株 L1210/ Mel , ⑥人白血病耐 Mel 细胞株 K562/ Mel , ⑦人肺癌耐 PDD 细胞株 A549PDD。并对人白血病多药耐药细胞株 K562/ A02 和人肺 癌耐 PDD 细胞株 A549PDD 进行系统鉴定 。
耐药基因的表达 ,用点杂交检测 K562/ A02 和 K562 细胞 mdr1 基因 ,发现 K562/ A02 的 mdr1 基因拷贝数不增加 。K562/ A02 用 RT- PCR 扩增后电泳产生 114bp 作为内标的β2 微球 蛋白基因扩增产物和 157bp 的 mdr1 基因扩增产物与 mdr1 cDNA 扩增产物相同 , mdr2 cDNA 为阴性 , K562 细胞只产生 114bp 的β2 微球蛋白扩增产物 。这表明它没有基因扩增而是 mdr1 基因转录增加 。
K562/ A02 细胞内药物浓度变化 : K562/ A02 在用药物孵 育 60 分钟后 ,细胞内柔红霉素 (DNR) 浓度仅为 K562 的 1/ 3 。 3μM 的环胞菌素 CsA 和 10μM 的异搏定 VPL 均能显著增加 耐药细胞 K562/ A02 对 DNR 的外排作用 , CsA 较 VPL 作用更 强 。它们分别增加 200 %和 138 %左右 , 但对 K562 细胞无作
们的总 RNA , 再按照 Atlas cDNA Expression Arrays User Manual 进行操作 ( PT314ol2 umn 纯化制备的 cDNA 探针 ,再以 cDNA 探针与 Atlas Array 杂 交 , 用 Clontech 公司 Atlas VisionTM 310 software 分析自显影图
Human 112 ⅡAtlas array 由 1176 个 cDNA 组成 , 包括癌 基因 、肿瘤抑制基因 、凋亡相关基因 、DNA 损伤 、转录因子 、受
体 、细胞间连接 、细胞骨架等多个方面 ,但不包括多药耐药相
关基因 mdr1 、MRP 基因 、BCRP 基因等 。
我们取对数生长期的细胞 K562 、K562/ A02 分别提取它
诱导的药物不同 ,肿瘤种类 ,分化程度以及宿主微环境的不同而表现为一种或几种耐药基因同时表达 。临床研究肿瘤共 524 例包
括白血病 260 例 ,实体瘤 264 例 ,但目前能在临床证实跟一些肿瘤耐药相关的基因只有 mdr1/ P2gp 。用比较敏感细胞和对应的耐药 细胞 cDNA 阵列表达水平的差别新技术发现了除已知 mdr1 等耐药基因以外新的与耐药相关基因 。这也为基因组学在耐药基因研
Key words :neoplasms ;gene ,drug resistance ;multidrug resistance ;glycoprotein
肿瘤细胞对多种化疗药物产生交叉耐药性称多药耐药 (Multidrug resistance , MDR) , 是造成肿瘤化疗失败的主要原 因 。有关资料统计 , 肿瘤年死亡率中 , 属内在性多药耐药 (intrinsic MDR) 的肿瘤 , 包括消化系统 、呼吸系统 、泌尿系统 以及大脑和中枢神经系统肿瘤约占肿瘤年死亡 61 %。属获得 性多药耐药 (acquired MDR) 的肿瘤 , 包括皮肤癌 、乳腺癌 、生 殖器癌 、内分泌肿瘤 、白血病和淋巴瘤 ,约占 33 %。这就是说 90 %以上肿瘤患者死因或多或少都与耐药有关 ,因此对 MDR 机制研究和逆转 MDR 成为肿瘤治疗亟待解决的问题 。我们 在国家“九五”攻关课题的支持下对肿瘤耐药基因表达及其 临床意义和逆转耐药进行了研究 。
新的耐药基因研究 ———基因芯片法 :DNA 芯片技术是 20 世纪 90 年代初期发展起来的一种 DNA 分析新技术 。cDNA Array 是 DNA 芯片中的一种 , 即 cDNA 阵列 , 比较敏感细胞和 对应的耐药细胞 cDNA 阵列表达水平的差别正是发现除已知
mdr1 等耐药基因以外新的与耐药相关的基因的有效方法 。
转染的 K562/ MDR1 细胞对阿霉素 、柔红霉素 、米托蒽 醌 、足叶乙甙 、高三尖酯碱和长春新碱交叉耐药 ,其耐药倍数 为 718 、811 、710 、2124 、4186 和 2127 倍 , 各药物组中 , K562/ MDR1 与 K562 的 IC50 比较均有显著性差异 ( P < 0105) , 表明 K562/ MDR1 对多药耐药谱的药物具有耐药性 ,而对非多药耐 药谱的药物阿糖胞苷无耐药性 。
究开辟了新的途径 。开发出新的耐药逆转剂 PZT11 、PND 和抗耐药肿瘤新药 PH Ⅱ27 有望在临床发挥作用 。抗 P2gp/ 抗 CD3 微型双 功能抗体也有望成为逆转肿瘤耐药新有力工具 。
关键词 :肿瘤 ;基因 ,耐药 ;多药耐药 ;糖蛋白
中图分类号 : R73 - 3
文献标识码 :A
文章编号 :1004 - 0242(2001) 03 - 0132 - 05
K562/ A02 是我们用阿霉素 (ADM) 诱导 K562 细胞 , 建立 的一株多药耐药细胞株 ,它表现出下列特性 :
K562/ A02 的耐药谱 : 分别测定 K562/ A02 和 K562 对不 同药物的 IC50 , 以耐药细胞的 IC50 与敏感细胞 IC50 之比为耐 药倍数 , 发现 K562/ A02 细胞系的耐药谱 : 对 ADM 的耐药倍 数为 160 倍 ,对与 ADM 的结构及药理特性相似 (DNR) 或不同 的 MDR 药物 (如 VCR、HHT、VP16 、AMSA 等) 都有程度不同的 较强的耐药性 , 而对非 MDR 药物 (如 DDP、5-Fu 、MTX 和 Ara-C) 则不耐药或轻度耐药 ,表现为典型的多药耐药表型 。
经 PA317- HaMDR1/ A1 共培养的 K562 细胞 ,用 315ng/ ml 秋水仙碱筛选后 , 挑取耐药细胞集落进行扩增 , 命名为 K562/ MDR1 ,其转染率为 2813 %。
用免疫组织化学法检测 P2gp 表达 , 结果表明被转染 NIH3 T3 和 K562/ MDR1P2gp 染色较未转染的亲代细胞增强 。
肿瘤耐药基因表达的临床意义及其逆转研究
杨纯正 1 ,刘淑仪 2
(11 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室 ,天津 300020 ;21 北京市肿瘤防治研究所 ,北京 100034)
摘 要 : 对人白血病多药耐药细胞株 K562/ A02 和人肺癌耐 PDD 细胞株 A549PDD 系统研究表明 ,耐药表型是多基因的 ,它随