同型半胱氨酸检测方法的研究进展
同型半胱氨酸检测方法的研究进展
同型半胱氨酸检测方法的研究进展肖倩;杨颖;甘家宝;张瑞云;刘春叶【摘要】同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)在细胞和组织的生长中起重要作用,人体Hcy水平与病理过程和人类疾病密切相关,实现准确、快速、高选择性地检测血尿中Hcy含量,对生命科学研究以及临床诊断具有重要的作用.对Hcy的检测方法进行了综述,分别对放射酶法、免疫法、HPLC法、质谱法、毛细管电泳法、微流控纸芯片法等的优缺点进行对比总结,为Hcy的研究和临床诊断提供了参考.【期刊名称】《广州化工》【年(卷),期】2019(047)010【总页数】4页(P14-16,39)【关键词】同型半胱氨酸;检测方法;微流控纸芯片【作者】肖倩;杨颖;甘家宝;张瑞云;刘春叶【作者单位】西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021;西安医学院药学院,陕西西安710021【正文语种】中文【中图分类】R1同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是含有硫分子的氨基酸，主要来源于进食过程中的蛋氨酸，即甲硫氨酸去甲基化形成Hcy。
Hcy本身不参与蛋白质合成，也不进行编码，血液中的Hcy含量是人体健康的重要指标，Hcy浓度增高，将使人体的DNA不能很好地修复从而面临更高的疾病风险。
此外，它还会引起重金属和自由基等人体代谢废物在体内积聚，导致各种炎症、细胞损伤。
因此，检测Hcy在人体内的含量对上述疾病的预防、诊断和治疗非常重要，本文对目前Hcy检测方法进行。
1 放射酶分析法放射酶实验(Radio enzymic Assays) [1]，是最早测人类血清Hcy的方法。
1981年，Kredich[2]提出相关理论。
1984年，Ueland P M等[3]测定了大鼠、兔子组织提取液中的Hcy。
1985年，Helga Refsum等[4]测定了人血清中的Hcy含量。
同型半胱氨酸的研究新进展
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Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１１，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１１
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
随时间延长而增高，采 集 血 样 后 立 即 离 心 去 除 血 细 胞 ；血 样 的 保 存 状 态 ：去 除 血 细 胞 后 的 待 检 血 样 在 室 温可保存４ｄ，在０ ℃～２ ℃下保存 ２ 周，于 －２０ ℃ 下数年保持ｔＨｃｙ性质 稳 定 性。（２）检 测 方 法：用 不 同的检验方法得 出 的 检 验 结 果 有 一 定 的 差 异。（３） 规范操作：标准化 建 立、质 量 控 制、操 作 规 范 以 保 证 提 高 准 确 度 ，降 低 分 析 差 异 。 ２．４ 药 物 影 响 如 烟 酸 、胰 岛 素 、茶 碱 、质 子 泵 抑 制 剂、二 甲 双 胍、苯 妥 英 钠、左 旋 多 巴、异 烟 肼、甲 氨 蝶 呤 、利 尿 剂 、抗 痉 挛 药 、阿 扎 立 平 、口 服 避 孕 药 等 有 升 高 Ｈｃｙ的作用，青霉胺可降低血 Ｈｃｙ水平。
贵 州 医 药 ２０１１ 年 １１ 月 第 ３５ 卷 第 １１ 期
同型半胱氨酸HCY
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的代谢研究, 1955年获得了诺贝尔化学奖。
同型半胱氨酸尿症的特点
马凡样的表现: --中枢神经系 统的表现，如 智力缺陷
骨骼肌的表 现: 骨质疏 松症
血管表现: 血管闭 塞，血栓栓塞
眼睛的表现: 异位 晶状体
该图为HCy尿症的特 点, 其中我们可以 很明显的看到, 血 管闭塞, 血栓栓塞
的血管表现。
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• 第五，增殖性疾病的影响: 细胞增殖加快可以使同型半胱氨酸浓度升 高，例如慢性炎症性疾病，以及恶性疾病如急性淋巴细胞白血病时都
会出现同型半胱氨酸浓度升高。快速的细胞分裂增加了对于叶酸的需 求可能是造成这种表现的原因之一。
• 第六，肾功能的影响: 目前对于肾衰竭患者血浆同型半胱氨酸浓度增 加的机制还不是很清楚。不管原因如何，终末期肾脏病的患者总同型
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同型半胱氨酸（HCY）的研究历史
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同型半胱氨酸（Homocysteine, Hcy）
同型半胱氨酸（Homocysteine, 简称Hcy）, 1931年由Vicent du Vigneaud首次从膀胱结石
中分离到, 它是一种含硫的氨基酸。du Vigneaud主要进行有机硫化合物, 包括含硫氨基酸
• 研究表明: Hcy的升高是与中风有重要关联的危险因子。美国最新的 数据显示中年后期男性中风发病率，处于55-64这个年龄段的男性相 对于45-54年龄段的男性而言，前者患中风的几率是后者的三倍。
• 高HCY是造成老年痴呆症与帕金森的重要因素，英国研究发现， Hcy 水平大于11.2μmol/L的病人，三年后随访，发现他们大脑颞叶（包 括海马）快速萎缩。
2.同型半胱氨酸的代谢主要有再 甲基化途径和转硫途径两个。
1）再甲基化途径：是指约有50% 同型半胱氨酸在蛋氨酸合成酶的作用 下，以维生素Ｂ12为辅酶因子，以N5-甲基四氢叶酸为甲基供体，发生再 甲基化，重新合成蛋氨酸。
同型半胱氨酸的检测及临床意义范文
同型半胱氨酸的检测及临床意义一、同型半胱氨酸同型半胱氨酸（homocysteine, Hcy）是一种人体内的含硫氨基酸，为蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中的重要中间产物，部分以同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化物存在，微量以还原型同型半胱氨酸存在，大部分通过二硫键与白蛋白结合而存在。
大量对Hcy的研究表明Hcy是心脑血管疾病的独立危险因素，危险度随着浓度的升高而增加。
Boushey等的研究结果显示，血浆总Hcy水平每升高5umol/L，相当于胆固醇升高500umol/L。
伴有血浆Hcy升高(>10umol/L)的原发性高血压定义为H型高血压。
二、影响血液Hcy水平的因素1、遗传因素：C667T点突变可引起Hcy升高。
CBS基因多态性。
蛋氨酸合成酶基因多态性。
2、性别与年龄：国内外不少研究发现，Hcy随年龄增长而升高，而且男性>女性。
女性在绝经前的水平较低，绝经后显著升高，认为其机制可能与雌激素水平的变化有关。
3、营养因素：①VitB6、VitB12、叶酸等Hcy代谢辅酶摄入不足时，则Hcy升高。
②饮酒：长期饮酒可引起肝细胞蛋氨酸合成酶活性下降，从而造成Hcy血症。
③饮食中蛋氨酸过高：有报道认为高动物蛋白饮食可能是Hcy血症的危险因素之一。
三、同型半胱氨酸致病机理1、内皮毒性作用。
2、刺激血管平滑肌细胞增生。
3、致血栓作用：Hcy可促进血栓调节因子的表达，激活C蛋白和凝血因子Ⅻ、Ⅴ，血小板内前列腺素合成增加，从而促进血小板粘附和聚集。
4、脂肪、糖、蛋白代谢紊乱：Hcy可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。
5、干扰谷胱甘肽的合成：谷胱甘肽是一种重要的高氧化剂，它能防止很多细胞成分的氧化互相作用，对血管产生保护作用。
Hcy干扰谷胱甘肽的合成，从而对机体造成危害。
6、影响体内的转甲基化反应：Hcy浓度的升高会影响体内许多物质的甲基化过程，甲基化能力的降低影响细胞的发育及分化，这可能是Hcy致病的关键因素。
同型半胱氨酸检测方法学及评价的某些进展
同型半胱氨酸检测方法学及评价的某些进展摘要：同型半胱氨酸( HCy)又称高半胱氨酸(HHcy)，是一种含硫氨基酸，它不属于组成蛋白质的20种氨基酸，本身不参与蛋白质的合成，也没有特异的3个DNA碱基对其进行编码，在体内不能合成，它是由蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中产生的重要的中间产物，只能来源于蛋氨酸的分解代谢。
血浆Hcy是一个总称，指血浆中所有形式的Hcy，包括还原型Hcy，双硫Hcy，混合双硫半胱氨酸Hcy和混合双硫蛋白质Hcy，正常情况下游离Hcy很少，主要以蛋白质形式存在。
很多因素如遗传、营养、肾功能不全、药物、激素等因素均可能影响体内同型半胱氨酸的代谢，造成高Hcy血症。
近年来大量研究证明高Hcy血症是心脑血管疾病的一个新的独立危险因素。
还与糖尿病、肾衰、老年痴呆等高度相关，危险度随Hcy浓度的升高而增加[1]。
现就Hcy的检测方法及评价做一简述。
1放射免疫分析法：该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，同时同位素易衰变及对人体有危害限制了使用，为推广使用。
2气湘色谱质谱法(GC-MS) 1987年首先报道了GC-MS法联用测定Hcy，该法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点。
但因需要的设备昂贵，难以适合常规临床化学实验时使用门，但操作十分复杂，耗时长，仪器设备要求高，很难普及。
3高效液相色谱法(HPLC) 是目前公认的参考方法，基本分析原理：先使用还原剂使血样中所有形式的Hcy转变成还原形式，然后与荧光试剂进行衍生生成Hcy-荧光物质复合物[2]，将衍生后的样品进行色谱分析。
因色谱固定相对不同物质的吸附力不同，因此流动相将其洗脱下来的次序也不同，根据这一原理将样品中的不同物质分开，以荧光检测器检测洗脱下Hcy-荧光物质复合物的荧光强度，将其与标准品／内标的比值进行比较和计算，就可以测定血中Hcy的水平。
此方法灵敏度高，准确度和精密度好，但由于其操作繁琐复杂，耗时耗费，不适用于临床应用，主要用于实验研究。
血清同型半胱氨酸的研究进展
检测医学血清同型半胱氨酸的研究进展米文育,林延鹏(中国人民解放军第252医院儿科,河北保定071000)中图分类号:R541.4;R743 文献标识码:A 文章编号:1006-2084(2007)15-1185-03摘要:同型半胱氨酸(Hc y)是含巯基氨基酸,从细胞内的甲硫氨酸代谢中起源,为甲硫氨酸代谢的中间产物。
血中总Hc y 水平受许多因素的影响,如参与Hc y 代谢酶的基因遗传变异、某些药物、肾衰竭、性别与年龄、雌激素缺乏、Hc y 代谢所需辅助因子缺乏如叶酸、维生素B2、维生素B 6、维生素B 12等。
近期的研究表明:高同型半胱氨酸血症是冠状动脉疾病、脑血管疾病、外周血管疾病独立的危险因子,也是有效的预测因子,并具有较高的临床应用价值。
关键词:同型半胱氨酸;脑血管疾病;冠状动脉疾病;外周血管疾病Research Progress on Serum Homocysteine MI W en -yu ,LIN Yan -peng .(De partment o f Pediatrics ,No .252Hos pital o f PLA ,Bao ding 071000,China )Abstract :Homocystei ne (Hcy)i s a sulphate -contai ning amino aci d,which originated from meth-i oni ne metaboli sm and i ts intermediate product.The total Hc y level in s erum is affected by many factors,which i ncludes gene autogenous variation ofHcy metabolic enz yme,some drugs ,renal fail ure,sex and age,abs ence of es trogen,lack of co -factor needed in Hcy metabolis m such as folic acid,vi tamin B2,vi ta min B6,vi tamin B12and s o on.Recent studi es showed that high Hcy level is the independent risk factor and effec tive predictor of coronary artery dis eas e,cerebrovascular dis eas e and peripheral angiopathy,whic h als o has high value i n clinical application.Key words :Homocys teine;Cerebrovascular diseases;Cardiovascular di seas es;Peripheral vascular dis eas es随着检测技术的发展,以及对同型半胱氨酸(homocys -teine,Hcy)研究的进一步深入,目前认为Hcy 在诸多学科领域中具有较高的应用价值,尤其是在心脑血管疾病方面,被认为是缺血性心脑血管疾病的独立致病危险因素,也是预测心脑血管疾病转归的有效因子,同时在妊娠高血压综合征、耳聋、神经发育异常等方面亦有其临床意义。
同型半胱氨酸的检测技术与临床应用新进展
仪 ｌ ， 反 应 原 理 在 膦 氯 化 氢 （ Ｃ Ｐ 作 用 下 氧 化 型 Ｈｃ 化 １其 ］ Ｔ Ｅ） ｙ转
【 键 词 】 半 胱 氨 酸 ； 代 谢 ； 临 床 实 验 室 技 术 关
中 图分 类 号 ： ４ ６ １ ２ Ｒ ４ ． ｌ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ３４ ３ （ ０ ８ １－０ ３０ １ ７ — ｌ ０ ２ ０ ） １１ ２ — ３
同型 半 胱 氨 酸 （ ｙ 又 称 高 半 胱 氨 酸 是 一 种 含 硫 氨 基 酸 ， Ｈｃ）
谢 酶 基 因多 态 性 ： 近 发 现 胱 硫 醚 ８合 成 酶 （ Ｂ ） 因 多 态 性 最 Ｃ Ｓ基 可 导 致 Ｈｃ ｙ中 度 升 高 。其 他 弓起 Ｈｅ ｌ ｙ升 高 的 代 谢 酶 基 因多 态 性 包 括 亚 甲基 四 氢 叶 酸 还 原 酶 、 氨 酸 合 成 酶 、 菜 碱 同 型 半 蛋 甜 胱 氨 酸 甲基 转 移 酶 等 。
同 型 半 胱 氨 酸 的 检 测 方 法
血 中总 Ｈｃ （ Ｈｃ） 括 蛋 白结 合 型 、 ｙ半 胱 氨 酸 混 合 ｙｔ ｙ 包 Ｈｃ－
型 二 硫 化 物 、 胱 氨 酸 及 还 原 型 Ｈｃ （ｅ ｙ ４ ， 中 与 蛋 白 高 ｙ ｒＨｃ ） 种 其
结 合 的 Ｈｃ 总 量 的 ７ ～ ８ 。 血 浆 中 约 ９ Ｈｃ ｙ占 Ｏ Ｏ ９ ｙ被 氧
同型半胱氨酸的相关研究进展
同型半胱氨酸的相关研究进展发表时间：2016-02-22T14:33:51.877Z 来源：《健康世界》2015年20期供稿作者：宋淑云[导读] 牙克石市建设社区卫生服务中心 Hcy是一种非特异性指标，受多种因素影响，因此监测血浆中Hcy水平对许多疾病的预防也具有重要意义。
宋淑云牙克石市建设社区卫生服务中心内蒙古呼伦贝尔 022150摘要：同型半胱氨酸（Hcy）升高可作为判断心脑血管疾病危险性的独立指标，与传统指标相比具有更高的应用价值。
并且近期研究表明Hcy也参与到糖尿病、肾病等疾病的发病与进展。
本文将就血浆Hcy影响因素、检测手段及临床应用进行简要综述。
关键词：同型半胱氨酸；心脑血管疾病；糖尿病；肾病同型半胱氨酸（Homocysteine，简称Hcy），是一种含巯基的氨基酸，1931年由Vicent du Vigneaud首次由膀胱结石中分离得到，重要的是1969年McCully首次提出了高同型半胱氨酸血症（HHcy）可导致动脉粥样硬化性血管疾病的假说。
近年来，HHcy与心脑血管疾病、糖尿病及肾病、肿瘤等疾病的相关性受到了越来越多学者的关注，并且国内外许多学者对于HHcy做为动脉粥样硬化发生的独立危险因素已达成共识[1]。
Hcy是一种非特异性指标，受多种因素影响，因此监测血浆中Hcy水平对许多疾病的预防也具有重要意义。
本文对其影响因素、检测方法及临床应用综述如下。
一、影响Hcy水平的因素1、年龄与性别：国外一些研究纳入大量一般人群，发现Hcy的浓度分布为非正态分布，多表现为右侧拖尾的正偏态分布。
无论男性还是女性，Hcy的血浆浓度均随着年龄的增长而增加。
在青春期以后，男性Hcy浓度比女性平均高出1-2?mol/L，这种差异是由于性激素的不同作用导致的，雄激素使Hcy浓度增高而雌激素可使Hcy浓度降低[2]。
因此绝经期以后，女性的Hcy浓度显著增高，与男性的差距逐渐缩小。
2、体内B族维生素水平：Hcy是蛋氨酸及胱氨酸的中间代谢产物，其代谢依赖于几种关键酶及辅助因子，即叶酸、维生素B12、维生素B6及维生素B2。
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第47卷第10期2019年5月广 州 化 工Guangzhou Chemical IndustryVol.47No.10May.2019同型半胱氨酸检测方法的研究进展*肖 倩,杨 颖,甘家宝,张瑞云,刘春叶(西安医学院药学院,陕西 西安 710021)摘 要:同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)在细胞和组织的生长中起重要作用,人体Hcy水平与病理过程和人类疾病密切相关,实现准确㊁快速㊁高选择性地检测血尿中Hcy含量,对生命科学研究以及临床诊断具有重要的作用㊂对Hcy的检测方法进行了综述,分别对放射酶法㊁免疫法㊁HPLC法㊁质谱法㊁毛细管电泳法㊁微流控纸芯片法等的优缺点进行对比总结,为Hcy的研究和临床诊断提供了参考㊂关键词:同型半胱氨酸;检测方法;微流控纸芯片 中图分类号:R1 文献标志码:A文章编号:1001-9677(2019)10-0014-04*基金项目:国家自然科学基金(No:81202492);陕西省大创项目(No:201825029);校级大创项目(No:2018DC-29)㊂第一作者:肖倩(1996-),女,药学专业本科生㊂通讯作者:刘春叶(1977-),教授,主要从事药物分析及质量评价㊂Research Progress on Detection Methods of Homocysteine*XIAO Qian,YANG Ying,GAN Jia-bao,ZHANG Rui-yun,LIU Chun-ye(School of Pharmacry,Xi’an Medical University,Shaanxi Xi’an710021,China)Abstract:Homocysteine is an essential amino acid that contains mercapto group,and it plays an important role in the growth of cells and tissues.Meanwhile,human Hcy level is closely related to the pathological process and human diseases.Therefore,accurate,rapid and highly selective detection of Hcy content in hematuria is of great significance for life science research and clinical diagnosis.The research progress on Hcy detection methods was discussed.The advantages and disadvantages of radio enzymic assays,immunoassay,HPLC method,mass spectrometer,capillary electrophoresis,paper-based microfluidic analytical devices were reviewed.The trends and future challenges of the method were summarized,which would provide references for the detection of Hcy in clinical research.Key words:homocysteine;detection methods;paper-based microfluidic analytical devices同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是含有硫分子的氨基酸,主要来源于进食过程中的蛋氨酸,即甲硫氨酸去甲基化形成Hcy㊂Hcy本身不参与蛋白质合成,也不进行编码,血液中的Hcy含量是人体健康的重要指标,Hcy浓度增高,将使人体的DNA不能很好地修复从而面临更高的疾病风险㊂此外,它还会引起重金属和自由基等人体代谢废物在体内积聚,导致各种炎症㊁细胞损伤㊂因此,检测Hcy在人体内的含量对上述疾病的预防㊁诊断和治疗非常重要,本文对目前Hcy检测方法进行㊂1 放射酶分析法放射酶实验(Radio enzymic Assays)[1],是最早测人类血清Hcy的方法㊂1981年,Kredich[2]提出相关理论㊂1984年,Ueland PM等[3]测定了大鼠㊁兔子组织提取液中的Hcy㊂1985年,HelgaRefsum等[4]测定了人血清中的Hcy含量㊂方法如下:清液加碱液,调节pH至7,加有机还原剂二硫代苏糖醇(DTT),37℃放置10min;利用活性炭不能吸附Hcy的特点,除去组织液中的其他腺苷;最后,Hcy在水解酶的催化下和同位素标识的腺苷发生反应,生成有放射性的s-腺苷半胱氨酸(SAH),用HPLC进行定量㊂实验证实,血清中70%的Hcy可与血浆中的载体蛋白组合㊂放射酶分析法敏感性和特异性比较好,但测量范围小,样品处理过程繁琐,需要经过酶培养㊁蛋白质沉淀㊁中和反应等步骤㊂但是,该方法可改进为采用薄层色谱或纸层析代替HPLC进行检测[5],不需要昂贵的仪器,实验简单易行㊂2 免疫检测法免疫检测法(immunoassay,IA)应用免疫学理论,以抗原或抗体测定样品的含量㊂IA包含荧光偏振和酶免疫两种㊂2.1 荧光偏振免疫分析法[6]1995年,Mohammed T.Shipchandler[7]中使用的荧光偏振免疫分析法(fluorescence polarization immunoassay,FPIA)原理检测血浆/血清中的Hcy㊂FPIA测定原理:Hcy水解酶和同位素标记的大量腺苷催化Hcy产生放射性SAH,加入SAH抗体(Ab)和抗原(Ag),当待测试的SAH的浓度较高时,则该体系中抗体可以全部反应,剩余未结合的SAH;若待测SAH浓度较低第47卷第10期肖倩,等:同型半胱氨酸检测方法的研究进展15时,则产生Ag-Ab复合物;自动免疫测定分析仪测量荧光偏振振幅,然后通过标准曲线方法测定Hcy含量,本实验简单易行㊂2012年,鄢盛恺[8]经过实验表明,FPIA与四种色谱方法具有良好的相关性㊂2.2 酶免疫测定法酶免疫吸附剂(enzyme imrrmnoassay,EIA)[9]于1995年被首次报道,该方法为基于荧光偏振免疫分析的定量免疫分析法[10],具有灵敏度高㊁方便快捷的特点,适用于临床实验室检测Hcy㊂EIA和FPIA检测原理相同,但是在EIA法中,用酶取代了放射分析法中的放射性核素,增加了对底物反应的灵敏度[11]㊂EIA法操作更简单快捷,准确度高,易于实现自动化[4],且测定速度更快(82个/2.5h),可用于某些物质的定性和定量分析㊂缺点是EIA法只能测量血清/血浆Hcy,不能测量尿液中的Hcy,且不能同时测定其他硫醇物类物质㊂3 高效液相色谱法高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)具有高速㊁高效㊁高灵敏度和自动操作的特点[12],因此,HPLC是目前确定Hcy最常用的方法之一㊂HPLC可根据不同的检测方法分为荧光检测法和电化学检测法,根据其衍生方法的不同,可分为柱前衍生化㊁柱上衍生化和柱后衍生化㊂3.1 荧光检测高效液相荧光检测法(high performance liquid with fluorescence detection,HPLC-FD),多采用柱前衍生技术来测定Hcy的含量㊂1993年,FiskerStrand等[13]首次使用HPLC法对血浆和尿液中的Hcy和含硫醇化合物进行测定㊂此后,国内相关学者对其进行改进[14]㊂3.2 电化学检测高效液相电化学检测(high performance liquid with electrochemical detection,HPLC-ED)法具有样品处理简单㊁样品不需要衍生化㊁特异性高㊁自动注入㊁检测时间短㊁可以同时测量大量样品和其他硫醇类物质㊂但是HPLC-ED法也存在一些问题,如:流通池污染㊁电极腐蚀等会对测量结果产生影响,因此,需要仔细保养检测器以使检测结果稳定准确㊂因此,有人尝试使用多孔碳电极库仑检测器代替金汞电极电流检测器来克服这个缺陷㊂直到1998年,Evrouski[15]采用脉冲积分电流计解决了上述问题㊂2000年,Accinni等[16]使用HPLC结合电化学库仑阵列来诊断新生儿筛查卡上干血斑中的Hcy,该方法线性关系好㊁精密度高㊁回收率高㊁简便快速㊁灵敏㊁价格低廉,在新生儿检测代谢异常方面有重要作用,且可被用作新生儿的Hcy常规诊断方法㊂4 质谱法1993年,Ueland等[17]首先采用(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)GC-MS检测Hcy,以DTT作还原剂,N-甲基-N-(叔丁基二甲基)三氟乙酰胺为衍生化试剂,用GC-MS法在24h内完成了160份样品的分离和定量分析,可用于尿样中Hcy的测定㊂该法的缺点是半自动化和设备试剂的高成本,且衍生化过程复杂㊁耗时㊂同HPLC相比,GC-MS更可靠㊁选择性更高㊁更灵敏(GC-MS检测限0.1pmol/L;HPLC 检测极限2~4pmol/L)㊁精度更高,尤其适合低浓度Hcy的测定[18]㊂1999年,Magera等[19]发展了液相层析电喷涂串联质谱法(LC-MS/MS),即利用同位素稀释和电喷涂电离串联质谱仪结合测定Hcy,该方法具有多样性㊁高特异性和高灵敏度㊁成本低㊁检测速度快㊁易于自动化的特性,可用于检测尿液中Hcy,适用于大量临床样品(150~200/d)的Hcy检测㊂且此法与HPLC㊁FPIA均有很好的相关性㊂5 毛细管电泳法使用毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)法测定Hcy 已有文献报道[10]㊂主要过程为:Hcy与7-氟苯并-2-氧杂-1, 3-恶二唑-4-磺酰胺(ABD-F)在50℃下衍生反应,使用二极管阵列紫外检测器,电泳分离时间不超过8min,该方法可用于血液和尿液Hcy的高灵敏度检测[20]㊂与HPLC相比,CE法不使用固定相,避免了测量元件形态和固定相的形态变换,可更简单㊁更快速㊁更准确㊁更灵敏㊁更有效地进行Hcy㊁蛋氨酸㊁半胱氨酸㊁谷胱甘肽的同时测定,非常适用于临床研究和日常使用[21]㊂Kang等[22]也证明CE是简单且快速的自动的方法,特别是对于微量(1μL)㊁低浓度的Hcy样品和其他含硫醇的化合物的测定更具优势㊂但CE一般耗时较长,在实时监测方面并不实用㊂6 纸芯片法近年来,人们对小型的传感器件大量需求,以及对低价格的诊断手段的追求,使便携式微流控纸芯片的(microfluidic paper-based analytical devices,μPADs)关注度逐渐增加,成为当前的热门㊂μPADs是由Whitesides研究小组[23]在2007年提出,与传统的微流体分析系统相比,它具有自己独特的优势:纸质介质易于使用和运输,因为它们资源丰富,成本低,可再生,易于处理,可回收,易于化学改性,具有良好的稳定性和良好的生物相容性㊂因而,在食品和药物测试中㊁在环境检测㊁临床诊断上都有着较为理想的前景(表1)㊂表1 微流控纸芯片在各领域的应用研究Table1 Application ofμPADs in various fields应用领域检测样品参考文献临床诊断葡萄糖丙肝病毒[24][25]检测可替宁乳酸脱氢酶氨基转氨酶埃博拉病毒牛血清蛋白[26][27][28][29][30]环境污染物的监测非金属环境污染物的监测硝酸盐和亚硝酸盐铜离子[31-32][33][34-35]食品安全有毒物质的检测杀虫剂敌敌畏大肠杆菌单增李斯特菌沙门氏菌[36][37][38][38][38]汞离子㊁银离子氨基糖苷类抗生素[39][39][39] Kong等[40]构建了基于纸张双功能区μPADs,通过优选的多个氧化锌纳米树脂(ZnO nanoflowers,ZnO-NFS)和分子印迹聚合物(molecularly imprinting polymer,MIP)对L-谷氨酸和L-16 广 州 化 工2019年5月半胱氨酸进行检测,检出限分别为9.6μmol/L和24μpm/L,灵敏度较高㊂利用光氧化产物对紫外光下的生物分子进行高灵敏检测,可避免同一区域内多次修饰对重现性的影响,为L-谷氨酸和L-半胱氨酸提供了更有效的分析策略㊂7 结 语Hcy的检测有助于心血管疾病和糖尿病的早期预防㊁诊断与治疗㊂目前,Hcy的检测方法常用的为放射酶实验㊁免疫检测法㊁HPLC法㊁CE法等,前两者需要对样品进行标记,步骤繁琐,环境污染大;后两者则需要昂贵的仪器,不适合经济发达和偏远地区使用㊂与此相比,μPADs成本低廉㊁携带方便㊁易回收㊁无环境污染,很好地弥补了上述缺点,满足分析平台微型化㊁自动化㊁集成化的要求,为Hcy的检测提供了一个全新的平台㊂虽然该μPADs方法在Hcy的检测方面鲜有报道,相信在不久之后,μPADs会成为Hcy检测的新平台,为心脑血管等疾病的预防诊断提供新方法,对人们的健康提供保障㊂参考文献[1] 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