湿热灭菌
湿热灭菌的工作原理
湿热灭菌的工作原理
湿热灭菌是一种常用的灭菌方法，其工作原理是利用高温和水蒸气对物品进行消毒。
在湿热灭菌过程中，首先将被灭菌物品放置在密闭的灭菌容器中，然后加入适量的水，并通过加热使水蒸气温度达到约121°C。
在高温和高湿的环境下，水蒸气能够通过物品表面的
孔隙和裂缝，渗透到物品内部。
随着温度的上升，水蒸气会与物品表面的细菌、病毒、真菌和其他微生物发生热凝固反应。
热凝固具有杀灭微生物的作用，同时还会导致微生物的DNA、RNA和蛋白质变性，使其失去
活性。
此外，高温和湿度还有助于破坏微生物的细胞膜，进一步杀灭微生物。
湿热灭菌还可以通过在灭菌过程中增加压力来提高灭菌效果。
增加压力可提高水蒸气的渗透能力，使其更容易进入物品的各个部分。
此外，高压还可以提高水蒸气的温度，使灭菌效果更加彻底。
整个湿热灭菌过程通常需要持续一定的时间，以确保物品内部的所有微生物都能被灭活。
一般而言，物品在高温高湿的环境中暴露的时间越长，灭菌效果越好。
值得注意的是，湿热灭菌只适用于耐热的物品，例如玻璃器皿、金属器具等。
对于某些热敏感的物品，湿热灭菌可能会对其造
成损坏。
因此，在选择灭菌方法时，需要根据物品的特性和要求进行合理选择。
湿热灭菌
湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，所以该法的灭菌效率比干热灭菌法高，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。
湿热灭菌法可分为：煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法。
影响湿热灭菌的主要因素有：微生物的种类与数量、蒸汽的性质、药品性质和灭菌时间等。
（1）煮沸灭菌法：将水煮沸至100摄氏度，保持5-10分钟可杀死细菌繁殖体，保持1-3小时可杀死芽胞。
在水中加入百分之一至百分之二的碳酸氢钠时沸点可达105摄氏度，能增强杀菌作用，还可去污防锈。
此法适用于食具、刀箭、载玻片及注射器等。
（2）巴氏消毒法：一种低温消毒法，因巴斯德首创而得名。
有两种具体方法，一是低温维持法：62摄氏度维持30分钟；二是高温瞬时法：75摄氏度作用15-30秒。
该法适用于食品的消毒。
（3）流通蒸气灭菌法：利用常压下的流通蒸汽进行灭菌。
（4）间歇蒸汽灭菌法
（5）高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3摄氏度，维持15-20分钟。
湿热灭菌法湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，因为：①湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性；②水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能；③蒸汽有潜热存在，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可迅速提高物体的温度。
湿热灭菌法一般采用121摄氏度，灭菌20-30min，如果是产孢子的微生物则应采用灭菌后适宜温度下培养几小时，再灭菌一次，以用于杀死刚刚萌发的孢子。
中国药典湿热灭菌法
中国药典湿热灭菌法
中国药典中的湿热灭菌法是一种用于灭菌药品和医疗器械的方法。
该方法主要适用于那些不能经受高温或干热灭菌的物品。
湿热灭菌法是通过在高温高湿的环境下使用水蒸气来杀灭微生物。
具体步骤包括：
1. 准备设备：准备一个能够加热并保持高压高温的容器，如高压蒸汽灭菌器。
2. 清洁物品：将待灭菌的药品或医疗器械进行清洁和准备工作，确保表面没有污垢或其他物质。
3. 包装物品：将物品放入特殊的灭菌袋或容器中，以防止再次被污染。
4. 加热灭菌器：将装有物品的灭菌袋或容器放入高压蒸汽灭菌器中，并关闭密封。
5. 灭菌过程：启动灭菌器，使其产生高温高压的水蒸气。
根据不同的物品和要求，灭菌时间和温度会有所不同。
6. 冷却和干燥：在灭菌过程结束后，将容器从灭菌器中取出，并放置在通风良好的区域进行冷却和干燥。
通过湿热灭菌法，可以有效地杀灭细菌、真菌和病毒等微生物，从而保证药品和医疗器械的无菌状态。
然而，使用湿热灭菌法时需要注意操作规范，确保灭菌过程的完整性和有效性，以避免可能的再污染和交叉感染的风险。
湿热灭菌的原理以及影响因素
湿热灭菌的原理以及影响因素湿热灭菌的原理：是使微生物的蛋白质及核酸变形导致其死亡。
这种变形首先是分子中的氢键分裂，当氢键断裂时，蛋白质及核酸内部结构被破坏，进而丢失了原有功能。
湿热灭菌法是在饱和蒸汽或沸水或流通蒸汽中进行灭菌的方法。
以高温高压水蒸气为介质，由于蒸汽潜热大，穿透力强，简单使蛋白质变性或凝固，最终导致微生物的死亡，所以灭菌效率比干热灭菌法高。
湿热灭菌是应用最广泛的一种灭菌方法，它具有灭菌牢靠，操作便利，易于掌握和经济等优点，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。
湿热灭菌法可分为：煮沸灭菌法、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法、流通蒸汽灭菌法、和间歇蒸汽灭菌法影响因素主要有：1）细菌的种类与数量：不同细菌的不同发育阶段对热的反抗力有所不同。
细菌数越少，灭菌时间越短。
2）蒸汽的性质：蒸汽有饱和蒸汽，湿饱和蒸汽和过热蒸汽。
饱和蒸汽热含量较高，热穿透力较大，因此灭菌效力高。
湿饱和蒸汽带有水分，热含量较低，穿透力差，灭菌效力较低。
过热蒸汽温度高于饱和蒸汽，但穿透力差，灭菌效率低。
流通蒸气灭菌法：是指在常压条件下，采纳100摄氏度流通蒸气加热杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。
该法适用于消毒以及不耐高热制剂的灭菌，但不能保证杀灭全部芽孢，是非牢靠的灭菌方法。
间歇蒸汽灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽加热，杀灭全部微生物，包括芽胞。
方法同流通蒸汽灭菌法，但要重复3次以上，每次间歇是将要灭菌的物体放到37℃孵箱过夜，目的是使芽胞发育成繁殖体。
若被灭菌物不耐100℃高温，可将温度降至75℃～80℃，加热延长为30～60分钟，并增加次数。
适用于不耐高热的含糖或牛奶的培育基。
高压蒸汽灭菌法：103.4千帕蒸汽压温度达121.3℃，维持15-20分钟。
湿热灭菌法湿热法可在较低的温度下达到与干热法相同的灭菌效果，由于：①湿热中蛋白汲取水份，更易凝固变性；②水分子的穿透力比空气大，更易匀称传递热能；③蒸汽有潜热存在，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可快速提高物体的温度。
湿热灭菌工作原理
湿热灭菌工作原理
湿热灭菌是一种常用的消毒方法，常用于灭活微生物、病原体或其他有生物污染的物品。
其工作原理主要是通过高温和水蒸气的共同作用，使微生物的细胞结构受到破坏，从而达到灭菌的效果。
具体工作原理如下：
1. 在湿热灭菌过程中，通常会使用蒸汽作为热源。
蒸汽能够快速传递热能，使温度迅速升高。
2. 当温度升高到一定程度时，微生物细胞内的许多生物分子开始变性，其中包括蛋白质和核酸。
这些变性过程导致细胞结构的破坏和功能的丧失。
3. 水蒸气在高温下还具有氧化作用，能够与物质发生反应，产生杀菌作用。
例如，氧化剂可以通过与微生物的细胞膜和细胞壁反应，造成破坏和死亡。
4. 湿热灭菌还能有效杀灭耐热孢子等抵抗力极强的微生物，因为高温和水蒸气能够渗透到细胞内部，使其无法继续生长和繁殖。
总的来说，湿热灭菌通过高温和水蒸气的作用，破坏微生物的细胞结构和功能，从而实现灭菌的目的。
湿热灭菌的原理以及影响因素
湿热灭菌的原理以及影响因素湿热灭菌是一种常用的灭菌方法，特别适用于对热敏感性物品进行灭菌。
它的原理是通过加热和水蒸气的作用，将物体表面和内部的微生物杀灭。
1.温度：湿热灭菌需要在较高的温度下进行，一般在121°C至134°C之间。
这个温度范围可以有效杀灭细菌、真菌和孢子等微生物。
2.湿度：湿热灭菌需要加入适量的水蒸气以提高湿度。
湿度的增加可以加速微生物的灭活速度，提高灭菌效果。
3.压力：湿热灭菌需要在一定的压力条件下进行，一般在1.2至2.2大气压之间。
增加压力可以提高水蒸气的作用力，使其更好地渗透和杀灭微生物。
4.时间：湿热灭菌需要一定的时间来保证灭菌效果。
在常规的灭菌流程中，通常需要将物体加热至所需温度并保持一定时间，以确保全部微生物完全被杀灭。
与湿热灭菌相关的影响因素主要包括以下几个方面：1.温度的选择：不同的物品对温度的要求不同。
过低的温度可能无法达到灭菌要求，而过高的温度则可能导致物品的热损伤。
因此，在进行湿热灭菌时，应根据物品的特性选择合适的温度。
2.湿度的控制：适当的湿度可以增加灭菌效果，但过高的湿度可能导致物品受潮或滋生霉菌等问题。
因此，应根据物品的特性选择合适的湿度。
3.压力的控制：合适的压力可以增加水蒸气的作用力，但过高的压力可能对物品造成压力损伤或变形。
因此，在进行湿热灭菌时，应根据物品的特性选择合适的压力。
4.时间的确定：灭菌时间是保证灭菌效果的关键因素之一、时间太短可能导致微生物未能被完全杀灭，时间过长则可能导致物品的热损伤。
因此，在进行湿热灭菌时，应根据物品的特性和灭菌要求来确定合适的时间。
5.物品的包装方式：不同的物品包装方式可能会影响湿热灭菌的效果。
过于密封的包装可能导致水蒸气无法充分渗透，从而影响灭菌效果。
因此，在进行湿热灭菌时，应根据物品的特性选择合适的包装方式。
综上所述，湿热灭菌通过加热和水蒸气的作用，将物体表面和内部的微生物杀灭。
其原理涉及温度、湿度、压力和时间等因素，而影响因素主要包括温度的选择、湿度的控制、压力的控制、时间的确定以及物品的包装方式等。
湿热灭菌法的五种方法
湿热灭菌法的五种方法
湿热灭菌法的五种方法
一、蒸气灭菌法
蒸气灭菌是指以蒸汽的形式，以高温高压的物理环境，破坏病原体，从而使其死亡的灭菌方法。
蒸气灭菌法的特点是对于抗热性很强的病原体也有良好的灭菌效果，温度高、时间短，但是要求灭菌容器密封性必须要好，并且要用恒温恒压的蒸汽灭菌。
二、热风灭菌法
热风灭菌法是指以高温的空气为灭菌容器内部创造一个高温的
环境，以达到消毒的目的。
它要求灭菌容器的密封性好，并且要使得温度和湿度都稳定恒定，以达到有效地消毒的目的。
三、电离辐射灭菌法
电离辐射灭菌法是指通过电离辐射来实现灭菌的技术。
它的优点是不需要投入大量的能量，灭菌过程中没有气味，而且可以有效地杀灭病原体，但是缺点是要求灭菌容器的密封性较好，以及灭菌时间较长。
四、紫外线灭菌法
紫外线灭菌法是通过对具有细菌孢子的物体进行紫外线照射，以达到杀灭病原体的目的。
紫外线灭菌法最大的优点是操作简便、灭菌效率高，灭菌时间短，而且不受温度、湿度等条件的影响，但是紫外线灭菌法对于皮肤有一定的辐射危害，所以操作过程中要注意防护。
五、化学灭菌法
化学灭菌法是指采用化学物质来消毒的方法，它要求化学物质的浓度、温度、湿度等条件必须恒定，以达到有效地杀灭病原体的目的。
它的优点是杀活性比较强，灭菌时间短，但是缺点也有，比如产生一些有毒气体，以及对人体有一定的刺激作用。
湿热灭菌法分类
湿热灭菌法分类
湿热灭菌法主要分为以下几种：
1.煮沸法：煮沸100℃，5分钟，能杀死一般细菌的繁殖体。
许多芽胞需经煮潮5～6小时才死亡。
水中加入2%碳酸钠，可提高其沸点达105℃，既可促进芽胞的杀灭，又能防止金属器皿生锈。
煮沸法可用于饮水和一般器械（刀剪、注射器等）的消毒。
2.流通蒸汽灭菌法：利用100℃左右的水蒸汽进行消毒，一般采用流通蒸汽灭菌器（其原理相当于我国的蒸笼），加热15到39分钟，可杀死细菌繁殖体。
消毒物品的包装不宜过大、过紧以利于蒸汽穿透。
3.间歇灭菌法：利用反复多次的流通蒸汽，以达到灭菌的目的。
一般用流通蒸汽灭菌器，100℃加热15～30分钟，可杀死其中的繁殖体，但芽胞尚有残存。
取出后放37℃孵箱过夜，使芽胞发育成繁殖体，次日再蒸一次，如此连续三次以上。
本法适用于不耐高温的营养物（如血清培养基）的灭菌。
4.巴氏消毒法：用于消毒牛奶和酒类等。
加温61.1～62.8℃半小时，或71.7℃15～30秒钟。
5.高压蒸汽灭菌法：压力蒸汽灭菌是在专门的压力蒸汽灭菌器中进行的，是热力灭菌中使用最普遍、效果最可靠的一种方法。
其优点是穿透力强，灭菌效果可靠，能杀灭所有微生物。
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湿热灭菌湿热灭菌法比干热灭菌法更有效。
湿热灭菌是利用热蒸汽灭菌。
在相同温度下，湿热的效力比干热灭菌好的原因是：①热蒸汽对细胞成分的破坏作用更强。
水分子的存在有助于破坏维持蛋白质三维结构的氢键和其他相互作用弱键，更易使蛋白质变性。
蛋白质含水量与其凝固温度成反比(表2-1)；②热蒸汽比热空气穿透力强，能更加有效地杀灭微生物：③蒸汽存在潜热．当气体转变为液体时可放出大量热量，故可迅速提高灭菌物体的温度。
多数细菌和真菌的营养细胞在60℃左右处理15min后即可杀死，酵母菌和真菌的胞子要耐热些，要用80℃以上的温度处理才能杀死，而细菌的芽胞更耐热，一般要在120℃下处理15min才能杀死。
湿热灭菌常用的方法有常压蒸汽灭菌和高压蒸汽灭菌。
表2-1蛋白质含水量与其凝固温度的关系蛋白质含水量/% 蛋白质凝固点/℃50 5625 74-8018 80-906 145(一)常压蒸汽灭菌(1)常压蒸汽灭菌是湿热灭菌的方法之一，在不能密闭的容器里产生蒸汽进行灭菌。
在不具备高压蒸汽灭菌的情况下，常压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法。
此外，不宜用高压蒸煮的物质如糖液、牛奶、明胶等，可采用常压蒸汽灭菌。
这种灭菌方法所用的灭菌器有阿诺氏(Aruokd)灭菌器或特制的蒸锅，也可用普通的蒸笼。
由于常压蒸汽的温度不超过100℃，压力为常压，大多数微生物的营养细胞能被杀死，但芽胞细菌却不能在短时间内死亡，因此必须采取间歇灭菌或持续灭菌的方法，以杀死芽胞细菌，达到完全灭菌。
1)巴氏消毒法是用于牛奶、啤酒、果酒和酱油等不能进行高温灭菌的液体的一种消毒方法，其主要目的是杀死其中的无芽胞病原菌(如牛奶中的结核分枝杆菌或沙门氏菌)，而又不影响其特有风味。
巴氏消毒法是一种低温消毒法，具体的处理温度和时间各有不同，一般在60-85℃下处理15-30min。
具体的方法可分两类，第一类是较老式的，称为低温维持法，例如在63℃下保持30min可进行牛奶消毒；另一类是较新式的，称为高温快速法，用于牛奶消毒时只要在85℃下保持5min即可。
但是巴氏消毒法不能杀灭引起Q热的病原体--伯氏考克斯氏体(一种立克次氏体)。
2)间歇灭菌法又称分段灭菌法。
适用于不耐热培养基的灭菌。
方法是：将待灭菌的培养基在100℃下蒸煮30-60min，以杀死其中所有微生物的营养细胞，然后置室温或20-30℃下保温过夜，诱导残留的芽胞萌发，第二天再以同法蒸煮和保温过夜，如此连续重复3天，即可在较低温度下达到彻底灭菌的效果。
例如，培养硫细菌的含硫培养基就应用间歇灭菌法灭菌，因为其中的元素硫经常规的高压灭菌(12l℃)后会发生熔化，而在100℃的温度下则呈结晶状。
3)蒸汽持续灭菌法微生物制品的土法生产或食用菌菌种制备时常用这种方法。
在容量较大的蒸锅中进行。
从蒸汽大量产生开始，继续加大火力保持充足蒸汽，待锅内温度达到100℃时，持续加热3-6h，杀死绝大部分芽胞和全部营养体，达到灭菌目的。
以上三种方法通常是在无高压蒸汽灭菌条件的地方(如农村)使用。
(2)灭菌过程中应注意1)使用间歇法或持续法灭菌时必须在灭菌物里外都达到100℃后开始计算灭菌时间，此时锅顶上应有大量蒸汽冒出。
2)为利于蒸汽穿透灭菌物，锅内或蒸笼上堆放物品不宜过满过挤，应留有空隙。
固体曲料大量灭菌时，每袋以1.5-2.0kg为宜，料袋在锅内用蓖子分层隔开，不能堆压在一起。
3)火大水足才能保证蒸汽足，蒸锅里应先把水加足。
一次持续灭菌时，如锅内盛水量不能维持到底．应在蒸锅侧面安装加水口，以便在蒸煮过程中添水。
添水应用开水，以防骤然降温。
4)间歇法灭菌时应在每次加热后，迅速降温，然后在室温放置24h，再第二次加热。
如果降温慢，往往使未杀死的杂菌大量滋长，反面导致灭菌物变质，特别是固体曲料包装过大时，靠近中心部分更易发生这种情况。
5)从使用效果看，分装试管、三角瓶或其他容器的培养基，因其体积小，透热快以用间歇法为佳。
固体曲料，因其包装较大，透热慢，用间歇法容易滋生杂菌变质或者水分蒸发过多，曲料变得不新鲜，影响培养效果，因此使用一次持续灭菌法较好。
(二)高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌法是微生物学研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌方法。
(1)灭菌原理高压蒸汽灭菌是在密闭的高压蒸汽灭菌器(锅)中进行的。
其原理是：将待灭菌的物体放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内。
把锅内的水加热煮沸，并把其中原有的冷空气彻底驱尽后将锅密闭。
再继续加热就会使锅内的蒸汽压逐渐上升，从而温度也随之上升到100℃以上。
为达到良好的灭菌效果，一般要求温度应达到121℃(压力为0.1MPa)，时间维持15-30min。
也可采用在较低的温度(115℃，即0.075MPa)下维持35min的方法。
此法适合于一切微生物学实验室、医疗保健机构或发酵工厂中对培养基及多种器材、物品的灭菌。
蒸汽压力与温度的关系如表2-2所示。
在使用高压蒸汽灭菌器进行灭菌时，蒸汽灭菌器内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压；所以当水蒸汽中含有空气时，压力表所表示的压力是水蒸气压力和部分空气压力的总和，不是水蒸气的实际压力．它所相当的温度与高压灭菌周内的温度是不一致的。
这是因为在同一压力下的实际温度，含空气的蒸汽低于饱和蒸汽。
见表2-3所示。
表2-2蒸汽压力与温度的关系由上表看出：如不将灭菌锅中的空气排除干净，即达不到灭菌所需的实际温度。
因此，必须将灭菌器内的冷空气完全排除，才能达到完全灭菌的目的。
在空气完全排除的情况下，一般培养基只需在0.1MPa下灭菌30min即可。
但对某些物体较大或蒸汽不易穿透的灭菌物品，如固体曲料、土壤和草炭等，则应适当延长灭菌时间，或将蒸汽压力升到0.15MPa 保持1-2h。
(2)灭菌设备高压蒸汽灭菌的主要设备是高压蒸汽灭菌锅，有立式、卧式(图2-5)及手提式(图2-6)等不同类型。
实验室中以手提式最为常用。
卧式灭菌锅常用于大批量物品的灭菌。
不同类型的灭菌锅，虽大小外形各异。
但其主要结构基本相同。
表2-3空气排除程度与温度的关系压力表读数/Pa灭菌器内温度/℃未排除空气排除1/3空气排除1/2空气排除2/3空气完全排除空气35 72 90 94 100 10970 90 100 105 109 115105 100 109 112 115 121140 109 115 118 121 126175 115 121 124 126 130210 121 126 128 130 135高压蒸汽灭菌器的基本构造如下：1)外锅或称“套层”，供贮存蒸汽用，连有用电加热的蒸汽发生器，并有水位玻管以标志盛水量。
外锅的外侧一般包有石棉或玻璃棉绝缘层以防止散热。
如直接使用由锅炉接入的高压蒸汽，则外锅在使用时充满蒸汽，作为内锅保温之内锅或称灭菌室，是放置灭菌物的空间．可配制铁蓖架以分放灭菌物3)压力表内外锅各装一只，老式的压力表上标明三种单位：公斤压力单位(kg/cm2)，英制压力单位(1b/in2)和温度单位(℃)，便于灭菌时参照。
现在的压力表用MPa表示。
4)温度计可分为两种，一种是直接插入式的水银温度计，装在密闭的铜管内，焊插在内锅中．另一种是感应式仪表温度计，其感应部分安装在内锅的排气管内，仪表安装于锅外顶部．便于观察。
5)排气阀一般外锅、内锅各一个，用于排除空气。
新型的灭菌器多在排气阀外装有汽液分离器(或称疏水阀)．内有由膨胀盒控制的活塞。
利用空气、冷凝水与蒸汽之间的温差控制开关，在灭菌过程中，可不断地自动排出空气和冷凝水。
6)安全阀或称保险阀．利用可调弹簧控制活塞，超过额定压力即自动放气减压。
通常调在额定压力之下，略高于使用压力。
安全阀只供超压时安全报警之用，不可在保温时用作自动减压装置。
7)热源除直接引入锅炉蒸汽灭菌外，都具有加热装置。
近年来的产品以电热为主，即底部装有调控电热管，使用比较方便。
有些产品无电热装置，则附有打气煤油炉等。
手提式灭菌器也可用煤炭炉作为热源。
(3)几种常用高压蒸汽灭菌锅的使用方法1)立式灭菌锅使用要点：①加水由漏斗处加水，加水量应在标定水位线以上，可在水位玻管刻度处观察。
⑦装锅将待灭菌物品装入锅内时，不要太紧太满，应留有间隙，以利蒸汽流通。
盖好锅盖后。
即可将螺旋柄旋紧。
③加热和排冷空气如果是电热高压蒸汽灭菌锅，则合上电闸通电加热。
如届非电热装置，可点燃煤气炉或煤油喷灯加温。
同时打开排气阀及下部排冷气余水阀，继续加热到锅中水沸腾，待排气阀冒出大量蒸汽后，关闭盖顶排气活塞，使冷空气由下部疏水阀排出。
此时如有少量冷凝水排出是正常现象。
待下部疏水阀有大量蒸汽冒出时，证明锅中已充满蒸汽，应继续排汽，使锅中及灭菌容器中的冷空气完全排除干净。
一般不应少于5min。
④升压保压排气完毕后．关小下部疏水阀，锅内压力即逐渐升高，注意升压不要过猛。
当压力升高到0.lMPa时，调节火力，使压力保持稳定。
压力选择应视具体灭菌物品而定，如草炭、土壤等则可在压力升至0.14MPa-0.15MPa后定时保压。
⑤降压与排汽保压时间(一般为30min)结束后，即应停止加热，使其自然冷却。
此时切勿急于打开排气塞，因为压力骤然降低，将导致培养基剧烈沸腾而冲掉或污染棉塞。
待压力降至0.025MPa以下可打开排气阀使余汽排出，同时打开下部疏水阀，排出锅内冷凝水。
⑧出锅排气完毕后，即可扭松螺旋柄使锅盖松动。
先将锅盖打开5-10cm，不必完全推开锅盖，目的是借锅中余热将棉塞及包装纸烘干。
烘烤30min后，即可推开锅盖，取出已灭菌的物品。
2)卧式灭菌锅使用要点：①加水先将排水阀关闭，调整总阀至“全排”。
然后，开启进水阀，放蒸馏水至蒸汽发生器内，待水进至距水表顶端大约1-2cm处时，关闭进水阀，并将总阀调至“关闭”。
⑦装锅将待灭菌物品装入锅内，注意不要塞得过紧过满，盛有培养基的三角瓶和试管应立放或适度倾斜．以免灭菌过程中培养基污染棉塞。
②关门按顺时针方向转动紧锁手柄至红箭头处，使撑挡进入门圈内。
然后旋动八角转盘，使门和垫圈密合，以灭菌时不漏气为度，不宜太紧，以免损坏垫圈。
④通电加温待电源控制开关的旋钮旋至“开”处，电源指示灯亮，表示已通电，然后再按灭菌物品所需灭菌汽压将旋切旋至0.07MPa、0.1mPa或0.14MPs处。
此时电热指示灯亮，表示已通电加热。
⑤保温保压当蒸汽套层内的蒸汽随加热达到自动控制压力时，电热指示灯会白动熄灭，表示停止加热。
随着热力散发压力降低，电热指示灯再亮，表示继续加热，这表明压力控制器工作正常。
当套层内的蒸汽加热到所选择的控制压力时，即可将套层内的蒸汽导入消毒室进行灭菌。
此时应先将汽液分离器前的冷凝阀开放少许，然后将总阀调至“消毒”，套层内的蒸汽即通过总阀进入消毒室进行消毒，冷凝水则通过汽液分离器自动排出。