实验四 葡萄果实中花色苷提取与测定
HPLC法测定果实中花色素苷含量
（ 上海市农业科学院林木果树研究所 ． 上海 ２ １０ ； ０ １６ 上海市农产品质量标准与检测技术研究所 ． 上海 ２ １０ ） ０ ６ １
摘
要： 建立了果实 中花色素苷的 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ测定方法 ， 采用 ＯＤ － １ （５ ｒ ＳＣ ８柱 ２０ｎｎ×４ ６ｎｎ ， 动相 Ａ：． ％ ． ｒ）流 １６
收稿 日期： ０ ５ ０ ９ ２０ —１ —１ 初稿 ； ０ ６ Ｏ — １ ２ ０ 一 ６ ２ 二改稿 作者简介：骆 军（９ １ ． ． １７ 一）男 大学本科 ． 副研究员． 研究方向 ： 果树裁培与育种 Ｔｄ：０ １５ ２ ５ ７ ：Ｅｍａｌｌ （２ ）２ ３ ４ ３ － ｉ ：
＠ｖｈ０ ∞ｍ． ａ０． ∞
１２ 方 ． 法
从大石早生李和藤稔葡萄果实赤道部位取 ０２ｇ ． 果皮 ， 液氮研磨 ， ３ 用 ０ｍＬ含 １６ ． ％甲酸 的甲 醇 溶 液 在 ４℃ 下 浸 提 过 夜 ， 声 波 处 理 超
０ ００ ．１ ０８
０ ０５ ・１ ０３
１ ｉ， ．２ ５ｍ ｎ用０ ２ ｍ滤膜过滤后 Ｗａ ｒ 液相色 ｔｓ ｅ 谱测定花色素苷含量。 《。 。。 ・ｏ ｏ９ ＯＳ １ Ｄ － ８柱 （ ５ ｍ ×４ ６ｎ ， Ｃ ２０ｎ ． ｍ） 流动相 Ａ：．％甲酸水溶 液； ：． ％甲酸 甲醇溶液 ， １６ Ｂ １６ 梯度 洗脱 为 ０ ｉ， ５ ～５ ｍ ｎ ８ ％Ａ＋１ ％Ｂ ５ ５ ；～
学院果树试验园。试验仪器为 Ｗａ ｒ 液相色谱 ， ｔｓ ｅ 双波长检测器 ， 色谱纯的矢车菊素一一 ３葡萄糖苷（ ｙｎ 一 Ｃ ａｉ ３ ｎ一 ｇ ｃ ｉ ）矢车菊素一一 ｌ ｏｄ 、 ｕ ｓｅ ３ 芸香糖苷 （ ｙｎ －一 ｔ ｏｉ ） ２ Ｃ ａｉ ３ ｕｉ ｓ ｅ ， 种标样均购 自Ａ ｉ Ｃ ｅ ｉ ｌ公 司。甲酸为分 ｎ ｒ ｎ ｄ ｐ ｈｍｃ ｓ ｎ ａ 析纯 ， 甲醇为色谱纯 ， 水为 ０ ２ ＿ ．２／ ｔ ｍ过滤的纯水。
葡萄皮花色苷的提取
葡萄皮中花色苷和油的提取一. 实训目的：1.会通过查阅文献资料，搜集有关数据，并正式选用公式的能力。
当缺乏必要数据尚需自己通过实验测定或在生产现场进行实际查定。
2.在兼顾技术上先进性，可行性，经济合理性的前提下，学生能够综合分析设计任务要求，确定仪器分析测定。
进行设备选型，并提出保证过程正常，安全运行所需要的监测和计量参数，同时，还要考虑改善劳动条件和环境保护的有效措施。
3.进一步巩固、提高已有的实验操作技能，掌握常规工艺试验技术，常规检验技术，学会设计工作思路、方法、步骤，受到技术员的基本训练，提高技术实施能力。
4.能够用精炼的语言，简洁的文字，清晰地的图标来表达自己的实际思想和实验结果。
5.树立严谨的科学作坊的良好的工作习惯，提高独立思考和与他人合作完成任务的能力。
二、实训场所：北京电子科技职业学院色谱分析实验室及生化实验室。
三、实训要求：1.论述相关企业中分析仪器的种类，尤其侧重于气象色谱仪、液相色谱仪、紫外可见以及酸度计等仪器的使用。
2.测定方法依据和方法原理。
3.样品及采样过程。
4.分析工作质量保证措施。
5.测定数据记录以及数据计算处理过程。
6.报告测定结果，对样品质量作出评价7.分析工作质量作出自我评价四、实训内容及安排：（一）课程设计的主要任务：1.葡萄皮中花色苷和油的提取本组做的是葡萄皮中油的提取。
五、实训过程：12月26日查阅相关资料确定实验方案1、超声波提取法：利用超声波破碎细胞（空化）和强化传质作用（机械作用），使溶剂分子渗透到组织细胞中，能更好地与溶质分子接触，使细胞中可溶成分更好地释放出来。
它具有操作简单、提取温度低、提取率高、提取物结构不易被破坏等优点。
近年来，研究者们已将超声波技术应用到多种油脂的提取中。
相关研究表明，对比无水乙醇、丙酮、石油醚和正己烷四种提取剂在超声波作用下对油的提取效率，石油醚为较适宜的提取剂。
以石油醚作为提取剂时，最佳提取工艺为超声时间25min,功率500W循环泵转速1200r/min ,料液比1: 5, 在此条件下提取率可达94． 1 2%。
葡萄果皮花色素的提取及其理化性质
２８８
果树学报
２４ 卷
１ 材料和方法
１．１ 材料 试验于 ２００５ 年 ７ 月—２００６ 年 ６ 月进行， 以浙
江省农业科学院试验基地的 ３ 年生葡萄品种红地球 （ Ｒｅｄ Ｇｌｏｂｅ） 为 试 材 ， 选 择 着 色 良 好 、无 损 伤 的 成 熟 葡萄果实。 １．２ 葡萄皮花色素提取方法 １．２．１ 提 取 液 的 确 定 初 步 选 定 了 Ａ： ９５％ 乙 醇 － ４．７％盐酸 （ ｖ／ｖ＝８５／１５， ｐＨ ２） ， Ｂ： １％盐酸－ 无水乙醇 （ｖ／ｖ， ｐＨ ３）， Ｃ： ０．１％盐酸－ 无水乙醇（ｐＨ ４）， Ｄ： ２．５％柠 檬酸－ 无水乙醇 （ｗ／ｖ， ｇ／ｍＬ， ｐＨ ５）， Ｅ： １％盐酸－ 无水 甲醇（ｐＨ ２）， Ｆ： 去离子水（ 用盐酸 调 ｐＨ ２） 等 ６ 种 提 取液提取葡萄果皮中花色素。称取液氮研磨葡萄皮 粉末 １ ｇ， 加入 上 述 提 取 液 １０ ｍＬ， 室 温 下 于 暗 处 浸 提 １ ｈ， ４ ８００×ｇ 离心 １０ ｍｉｎ， 冲洗 ２ 次， 定容 ５０ ｍＬ。 色素的不同提取液在 ４００～６００ ｎｍ 内进行扫描， 测定 最大吸收波长处吸光度值。３ 次重复。各提取液的提 取效率用花色素含量表示。葡萄果皮中花色素含量 的计算参照张昭其等［３］的方法：
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｅｘｔｒ ａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｃａｌ － ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒ ｏｐｅｒ ｔｉｅｓ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｆｒ ｏｍ Ｒｅｄ Ｇｌｏｂｅ ｇｒ ａｐｅ ｐｅｅｌ
ＹＡＮＧ Ｆｕ－ ｃｈｅｎ１， ２， ＷＵ Ｊｉａｎｇ２＊， ＣＨＥＮＧ Ｊｉａｎ－ ｈｕｉ２， ＸＵ Ｋａｉ１， ＣＨＥＮ Ｊｕｎ－ ｗｅｉ２
（１Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ， Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈｅｆｅｉ， Ａｎｈｕｉ ２３００３６ Ｃｈｉｎａ； ２Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｈａｎｇｚｈｏｕ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ ３１００２１ Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｃａｌ－ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｆｒｏｍ Ｒｅｄ Ｇｌｏｂｅ Ｇｒａｐｅ （Ｖｉｔｉｓ ｖｉｎｉｆｅｒａ Ｌ．） ｐｅｅｌ ｗｅｒｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ １％ ＨＣｌ－ ｍｅｔｈａｎｏｌ． ９５％ Ｅｔｈａｎｏｌ－ １．５ ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ （ｖ／ｖ＝８５／１５） ａｎｄ １％ ＨＣｌ－ ｅｔｈａｎｏｌ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｏｒｓ ｏｆ ａｎｔｈｏ－ ｃｙａｎｉｎ． Ｗｈｅｎ １％ ＨＣｌ－ ｅｔｈａｎｏｌ ｕｓｅｄ， ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｇｒａｐｅ ｐｅｅｌ ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｏｒ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ａｔ １∶５ ｔｏ １∶１０ （ｇ∶ｍＬ）． Ｐｉｇｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｇｒａｐｅ ｐｅｅｌｓ ｗｅｒｅ ａ ｋｉｎｄ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅｉｒ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｕｍ． ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆ－ ｉｃａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ． Ｗｈｅｎ ｐＨ≥９ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉａｌ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｄｉｓａｐｐｅａｒｅｄ． ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｋｅｐｔ ａｔ ２ ｔｏ ３． Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｈａｄ ｈｏｔ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｗｈｅｎ ｈｅａｔｅｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ≤６０ ℃．Ｔｈｅ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｕｎｄｅｒ ｓｕｎ ｌｉｇｈｔ． Ｈｅａｔｅｄ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｄｅｇｒａｄｅｄ ｍｏｒｅ ｑｕｉｃｋｌｙ ｕｎｄｅｒ ｓｕｎ ｌｉｇｈｔ ｔｈａｎ ｉｎ ｄａｒｋ ｐｌａｃｅ． Ｆｅ３＋ ｈａｄ ｍｏｒｅ ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｔｈａｎ Ｚｎ２＋， Ｃａ２＋． Ｈｉｇｈ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｎｄ ｆｒｕｃ－ ｔｏｓｅ ｃｏｕｌｄ ｍａｉｎｔａｉｎ ｉｔｓ ｃｏｌｏｒ． Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｃｒｏｓｅ ａｎｄ ｆｒｕｃｔｏｓｅ， ｇｌｕｃｏｓｅ ｈａｄ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ． Ｖｉｔａｍｉｎ Ｃ ａｎｄ ｓｏｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｔｓ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： Ｒｅｄ Ｇｌｏｂｅ Ｇｒａｐｅ； Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ； Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； Ｐｈｙｓｉｃｏ－ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ
花色苷的提取及分析研究进展
花色苷的提取及分析研究进展王化;周丽萍;于志民;吕品;张悦【摘要】花色苷是广泛存在于自然界植物中的一类黄酮类化合物,来源广泛、种类繁多且具有多种保健功能,具有较好的开发利用价值和应用前景,近年来一直是国内外研究的热点之一.文章综述了花色苷的结构及稳定性、提取和纯化以及分析方法的研究进展,旨在为进一步展开植物花色苷的研究提供参考.【期刊名称】《国土与自然资源研究》【年(卷),期】2018(000)006【总页数】4页(P85-88)【关键词】花色苷;稳定性;高速逆流色谱;离子迁移质谱【作者】王化;周丽萍;于志民;吕品;张悦【作者单位】黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040;黑龙江省科学院自然与生态研究所湿地与生态保育国家地方联合工程实验室,哈尔滨150040【正文语种】中文【中图分类】Q946花色苷（Anthocyanin）一词是Marguart在1835年首先用来命名矢车菊花朵中的蓝色提取物时提出来的，现为同类物质的总称[1]。
大量研究表明，花色苷广泛存在于自然界中植物的细胞液中，使根、茎、花、叶、果实呈现蓝、紫红、红等不同颜色。
花色苷属黄酮类物质，具有较好的营养及药理作用，在医药、食品、化妆品等领域有很大应用潜力。
近年来，花色苷受到越来越多的关注，研究表明，花色苷能以糖苷的形式进入体内，具有抗氧化、抗肿瘤、保护视力、保护心血管、保护肝脏等多种生理功能[2，3]，采取适当的方法对花色苷结构进行深入研究可与其功能研究相辅相成，相得益彰。
本文主要根据近年来对花色苷化合物的研究，对国内外关于花色苷的结构及稳定性、提取和纯化以及分析方法的研究进展予以简要综述。
液相色谱使用方法(花色苷)
一、摘要⑴、葡萄皮色素来源较为丰富。
葡萄果皮花色苷不但含量高, 而且种类多,葡萄花色苷作为一种天然食用色素, 安全、无毒，且具有降低肝脏及血清中脂肪含量、抗氧化、抗肿瘤、延迟血小板凝集等多种生理和药用活性功能对葡萄皮花色苷的提取技术及稳定性的研究具有重要意义⑵、目前为止花色苷的定量分析方法主要有直接比色法、pH示差法、亚硫酸脱色法、色谱法，本次实训我们采用液相色谱法对花色苷进行提取。
⑶、用于液相色谱法提取葡萄酒中的花色苷前要进行样品的预处理，再测定其中的花色苷来判断葡萄酒或者葡萄皮中的花色苷，标定是否合格以及是否符合国家标准。
二、关键词⑴花色苷⑵液相色谱⑶分光光度计三、正文引言花色苷的提取方法有溶剂浸提法、微波辅助萃取法、酶解法超高压辅助提取法、本次我们是利用微波萃取，微波是一种频率300～300 000 MHz的电磁波。
在微波场中吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使得被萃取物质从基体或体系中分离，进入到介电常数较小、微波吸收能力相对较弱的萃取剂中。
由于传统提取过程中能量累积和渗透过程以无规则的方式发生，萃取的选择性较差，只能通过改变溶剂性质或延长溶剂萃取时间来获得，同时又受限于溶解能力和扩散系数，效果不够理想；微波因其能对萃取体系中不同组分进行选择加热，因而能使目标组分直接从基体分离萃取。
微波萃取受溶剂亲和力的限制较小，可供选择的溶剂较多。
另外，微波加热则利用分子极化或离子导电效应直接对物质进行加热，避免了传统加热过程因热传导、热辐射造成的热量损失，加热效率高、升温快速均匀，缩短了萃取时间。
具有设备简单、适用范围广、重现性好、萃取效率高、萃取时间短、能耗低、污染轻等特点。
用液相色谱法来检测葡萄酒及葡萄皮中的花色苷，用等度及梯度检测花色苷的存在来判断其营养成分。
⑴、材料及方法①仪器及试剂材料：葡萄皮仪器：超声波提取器、紫外-可见分光光度计、安捷伦-高效液相色谱仪试剂：甲醇、甲酸、水②实验方法葡萄皮花色苷提取液的制备干葡萄皮→粉碎→加入提取液→超声波辅助提取→花色苷提取液称取 1g 粉碎过的干葡萄皮，按 1:40（g/mL）的料液比加入酸性乙醇提取液，用超声波清洗器辅助提取。
2019年葡萄皮中花色苷的提取.doc
目录摘要 ....................................................................................................................................................................... 关键词................................................................................................................................................................... Abstract .............................................................................................................................................................. Key words............................................................................................................................................................1 绪论 (1)1.1 葡萄的概述.................................................................................................................. 错误！未定义书签。
葡萄果皮花色素提取的研究进程
广东石油化工学院Guangdong University of Petrochemical Technology文献综述题目：葡萄果皮花色素提取的研究进程姓名：余荣春班别:食品11-3学号：11114050333摘要花色素是一种广泛存在于植物中的天然产物，具有清除自由基、抗氧化、抑制酶活性、保护血管、抗炎症和抑制肿瘤等多种功能，在食品、保健品、化妆品和药品中具有广泛应用价值。
本文就葡萄果皮花色素的提取、纯化方法及应用存在的问题进行介绍。
关键词花色素价值葡萄提取应用AbstractProanthocyanidins ( PCs) , which is widely distributed in plants, is a kind o f valuable natural products. It has been revealed that the PCs has multiple biological activities, such as anti-oxidation, scavenging of free radicals, inhibiting of enzymes, protecting of blood vessel, anti-inflammation and repressing of tumors, and can be extensively utilized in food, cosmetic, health product and medicine industries. This paper mainly talks about several kinds of extracting methods of the natural pigments of grapes and problems in applications. Keywords PCs value grape extraction application1 前言花色素是天然色素的一种, 存在于植物的花、果实、叶、茎、种子等器官和组织中, 具有一定的营养、保健和药理作用, 现已进行了开发、利用及商品化生产; 但是花色素化学性质不稳定, 受pH值、温度、光照、金属离子等影响容易变色, 极大限制了其开发利用[1-2]。
葡萄皮花色苷的提取及稳定性研究(二)
葡萄皮花色苷的提取及稳定性研究（二）3结果与讨论3.1单因素实验3.1.1提取温度对葡萄皮花色苷提取的影响实验结果分析在提取液乙醇浓度为60%，提取液ph1.0的条件下，于30℃、40℃、50℃、60℃、70℃下提取葡萄皮中的花色苷，结果见图3-1。
图3-1提取温度对葡萄皮花色苷提取的影响从图3-1可以明显看出，提取温度在30℃-50℃时，葡萄皮花色苷的提取率受提取温度的影响不大。
当提取温度上升到50℃以后，随着提取温度的升高，葡萄皮花色苷的提取率有着较大的提高，当提取温度达到60℃时，花色苷的提取率达到最大，温度过高会对花色苷的稳定性产生影响，因此，提取温度为60℃时的提取效果最佳。
3.1.2乙醇浓度对葡萄皮花色苷提取的影响实验结果分析在温度60℃，提取液ph1.0的条件下，分别用乙醇浓度为0%、20%、40%、60%、80%、95%的酸性乙醇溶液来提取葡萄皮中的花色苷，结果见图3-2。
图3-2乙醇浓度对葡萄皮花色苷提取的影响结果从图3-2可以明显看出，提取液的乙醇浓度在0-80%之间时，花色苷的提取率随着提取液乙醇浓度的增大而提高，当乙醇浓度达到80%时，花色苷的提取率达到最大。
提取液乙醇浓度超过80%以后，花色苷的提取率随着乙醇浓度的升高而有所降低。
因此，提取液的乙醇浓度为80%时，花色苷的提取率最高。
3.1.3ph对葡萄皮花色苷提取的影响实验结果分析在温度60℃，提取液的乙醇浓度在80%条件下，分别用ph为3.0、2.5、2.0、1.5、1.0、0.5的酸性乙醇溶液提取葡萄皮的花色苷，结果见图3-3。
图3-3ph对葡萄皮花色苷提取的影响结果从图3-3可以明显看出，花色苷的提取率随着提取液ph增大而减小，ph值越低提取率越高，说明提取液中较强的酸性有利于葡萄皮中花色苷物质的浸出。
当提取液的ph为0.5时，花色苷的提取率达到最高。
因此，提取液ph为0.5时的提取效果最好。
3.2正交实验3.2.1正交实验的结果及分析根据提取温度、提取液乙醇浓度、提取液ph等单因素试验的结果，以提取温度、乙醇浓度、ph值三个因素作为研究对象，分别设三个水平，按l9(33)正交表进行正交试验，以花色苷提取液吸光值为考察指标，选出葡萄皮花色苷的最佳提取条件。
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实验四葡萄果实中花色苷提取与测定
一、实验目的
1、了解并掌握葡萄果皮中花色苷提取的原理和操作；
2、掌握葡萄果皮重花色苷含量的测定方法和步骤。
二、实验原理
花色苷是红色葡萄果实中一类非常重要的呈色物质，并且多数情况下主要存在于果皮当中，只有极少数染色品种的果肉中存在花色苷。
花色苷主要有花色素（包括花翠素、花青素、甲基花青素、甲基花翠素及二甲花翠素）经过羟基化后以单体糖苷的形式存在。
三、实验材料
红色葡萄果实、吸水纸、研钵、研杵、液氮、分光光度计等
四、主要项目和方法
1、果皮花色苷提取
把每个样本（20粒）的葡萄果皮取下，然后用蒸馏水冲洗果皮，除去果皮粘连的部分果肉与糖分等并用吸水纸吸干，进行称重（M），然后再液氮中将果皮研
磨成粉末，准确称取3.0000g粉末放入50ml离心管中，加入30ml酸化甲醇溶液（1mol/L HCl/MOH/水，1/80/19，v/v/v），在100%功率条件下超声辅助提取30min，温度控制在25摄氏度，然后将其只置于低温离心机中离心（8000r/min）15min，收集上清液。
向残渣中继续加入30ml酸化甲醇溶液，在此按照上述步骤进行提取，重复4次，合并所有上清液（120ml）于细口瓶中，-20摄氏度避光保存。
2、花色苷含量测定和计算
采用pH示差法，提取液分别用pH值为1.0盐酸-氯化钠缓冲液稀释20倍。
然后分别在510nm与700nm下测定两种稀释液的吸光度。
吸光度A为：
A=(A510nm-A700nm)pH1.0 - (A510nm-A700nm)pH4.5
花色苷含量用矢车菊素-3葡萄糖苷（R CGE , mg/g）表示，即
R CGE=（A × MW × DF × Ve × 1000）/（ε× 1 × M）
式中 MW-矢车菊素-3葡萄糖苷相对分子量，取449
DF-稀释倍数
Ve-提取液总体积
M-葡萄皮质量
ε–摩尔吸光系数，取29600
五、实验结果
A=0.9007-0.0087-(0.0813-0.0065)=0.8172nm
R CGE=
因此该葡萄果实中，花色苷含量为 mg/g。
六、实验总结
花色苷是花色素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，是类黄酮——以黄酮核为基础的一类物质中能呈现红色的一族化合物。
它是葡萄果实中重要的呈色物质，主要存在与果皮中。
通过了解花色苷的相关特性以及掌握花色苷的提取原理和技术，可以更好地完成葡萄果实中花色苷的提取，为后续研究奠定基础。