霉菌和酵母菌介绍及检测方法
霉菌、酵母检验
霉菌、酵母菌检验（一）实验原理霉菌和酵母菌菌数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g 或1mL检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数（粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数）。
（二）实验器材1.培养基：马铃薯－葡萄糖－琼脂培养基马铃薯（去皮切块）300 g葡萄糖20.0 g琼脂20.0 g氯霉素0.1 g蒸馏水1000 mL制法：将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10 min－20 min。
用纱布过滤，补加蒸馏水至1000 mL。
加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，121 ℃灭菌20 min。
倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。
2.器皿：已灭菌的平皿（9套/组），1mL吸管（6支/组），试管（15×150）（6/组），三角锥瓶500mL、三角锥瓶500mL（内装蒸馏水250mL），10mL吸管。
3.其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽菌锅，电烘箱，线绳，毛刷等。
（三）操作步骤1.检验程序2.操作要点1）采样选取有代表性的样品并避免采样时的污染。
2）样品处理（1）以无菌操作称取检样25mL，放入含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30 min，即为1:10稀释液。
（2）用灭菌吸量管吸取1:10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL 灭菌吸量管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。
（3）取1mL 1:10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸量管吹吸5次，此液为1:100稀释液。
（4）按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸量管。
3）接种培养根据对样品污染情况的估计，选择3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45 ℃左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于25－28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。
4）计算方法通常选择菌落数在10－150之间的平皿进行计数，一个稀释度使用两个平板，采用两个平板的平均数；选择稀释度也选择平均菌落数在10－150之间的稀释度，菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）检样中所含霉菌和酵母数。
食品检测食品中的霉菌和酵母菌的检测
3、谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面 包等)、发酵食品、乳及乳制品以及其 他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉 变食品250g，装入灭菌容器内送检。
（二）、样品处理（稀释）
1、以无菌操作称取检样25g(或25mL)，放人含有225mL 灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀 释液。 2、用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中， 另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉 菌孢子充分散开。 3、取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中， 另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1∶100稀释 液。
3。孟加拉红金霉素琼脂：
适用于粮食及一般食品 4、孟加拉红嗜霉菌性琼脂：
最适酸碱度为pH 4～6
最适的温度为22℃～28℃，实验证明29 ℃生长更快
但深部感染真菌在37℃下生长良好
需较高的湿度和氧气
思考题
列表说明霉菌数的测定与菌落总数的测 定有什么相同的地方和不同的地方。
3、产生无性孢子
少数酵母菌可在卵圆形营养细胞上长出小梗，其上产生 肾形的掷孢子
四、酵母菌的菌落 菌落与细菌的相仿，但 由于细胞比细菌的大， 细胞内有许多分化的细 胞器，细胞间隙含水量 相对较少，以及不能运 动等特点，因此菌落较 大、较厚、外观较稠和 较不透明。
酵母菌菌落特征 具有湿润，较光滑 有一定透明度 容易挑起，菌落质地均匀 正反面和边缘，中央部位颜 色都很均一等特点
（一）、采样 1、粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮)样品的采集， 可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可 分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后， 取500g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、 取表层、上层、 中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如 船仓盛粮超过10000t，则应加采一个样品。必要 时采取有疑问的样品送检。
霉菌、酵母菌及空气检测PPT课件
显微镜直接观察法
总结词
直接、快速、简便
详细描述
通过显微镜直接观察样品中是否存在霉菌和酵母菌的菌落或菌体形态，无需进行 培养，操作简便，快速得到结果。
培养基培养法
总结词
准确、灵敏度高
详细描述
将样品接种在选择性培养基上，在适宜的温度和湿度条件下培养一段时间，观察菌落生长情况，对菌落进行形态 学观察和生化鉴定，准确度高，灵敏度较高。
室外空气中的霉菌与酵母菌检测
城市环境
城市环境中可能存在的霉菌和酵母菌，如公 园、街道、建筑工地等，检测方法包括空气 采样、培养和显微镜检查。
自然环境
自然环境中可能存在的霉菌和酵母菌，如森 林、湖泊、河流等，检测方法同上。
06
CATALOGUE
空气质量改善措施
控制污染源
减少工业排放
通过技术改造和升级，降低工业生产过程中的污 染物排放。
使用空气净化器
1 2
选择合适的空气净化器
根据室内空气污染情况选择合适的空气净化器。
定期更换滤网
按照说明书要求定期更换空气净化器的滤网。
3
合理使用
不要长时间开启空气净化器，以免造成二次污染 。
07
CATALOGUE
总结与展望
当前研究现状与成果
研究进展
近年来，随着人们对空气质量的关注度不断 提高，霉菌、酵母菌及空气检测技术得到了 广泛研究。研究者们针对各种检测方法进行 了深入探讨，并取得了一系列成果。
食品安全问题
霉菌和酵母菌产生的毒素可能对人类 健康造成威胁，如黄曲霉素、赭曲霉 素等。
03
CATALOGUE
空气检测技术
空气检测的定义与目的
霉菌和酵母菌认知 酵母菌和霉菌的个体形态观察
酵母菌的形态观察
基本原理
• 对酵母菌用美蓝染色，活细胞的代谢能力较快， 能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型。死 细胞或代谢缓慢的老细胞，变为蓝色或淡蓝色。
操作步骤
• ①载玻片上滴加1滴0.1%吕氏碱性美蓝染液，取酵 母放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀 混合；
• ②用镊子取盖玻片一块，小心地盖在液滴上； • ③用制好的水浸片放置约3min后镜检； • ④染色30min后，再观察死细胞数量是否增加；⑤
霉菌和酵母菌 的形态观察
霉菌的形态观察
基本原理
① 霉菌的菌丝体及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌 的重要依据。
② 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多， 通常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此用低倍显 微镜即可观察。
1 直接制片观察法
基本原理：菌丝粗大，细胞易收缩变形，且孢子容易分散， 因此将培养物置于乳酸石碳酸棉蓝染色液中，制成制片镜 检。 制成标本特点：细胞不变形，有杀菌防腐作用，不易干燥， 且保持较长时间；防止孢子飞散，溶液本身呈蓝色，能增 强反差。
操作步骤：①干净的载玻片上，滴一滴乳酸石碳酸棉蓝 染色液；②用解剖针从霉菌尽量的边缘处取少量带有孢 子的菌丝，先置于50%的乙醇中浸以下，以洗去脱落的 孢子，再置于染色液中；③小心将菌丝挑散开，然后盖 上盖玻片，置显微镜下观察。
2 载玻片培养观察法
基本原理：接种霉菌于载玻片上的适宜培养基上，接种盖 上盖玻片培养，霉菌就在载玻片和盖玻片之间的有限空间 内沿盖玻片横向生长。培养一段时间后，将载玻片上的培 养物置于显微镜下观察。
用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
谢谢！
3 玻璃纸培养观察法
基本原理：用玻璃纸的半透膜特性及透光性，将霉菌生 长在覆盖于琼脂培养基表面的玻璃纸上，然后将长菌的玻 璃纸减取一小片，贴在载玻片上用显微镜观察。
霉菌和酵母计数
霉菌和酵母计数1、原理、定义、目的：霉菌和酵母数的测定是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所的霉菌和酵母菌落数（粮食样品是指1g粮食表面的霉菌总数）。
霉菌和酵母数主要作为判定食品被污染程度的标志，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
本方法适用于所有食品。
2.仪器设备与器具：参照大肠杆菌群的检测标准。
3.试剂：3.1 霉菌和酵母菌培养基的配置：3.1.1 称取30g虎虹琼脂培养基加入蒸馏水1000ml，摇动灭菌。
3.1.2 以棉塞或硅胶塞，牛皮纸包封好瓶口，3.1.3 置于高压杀菌釜内，以116℃30分钟灭菌。
3.1.4 取出培养基自然冷却至不烫手后（约45℃）备用。
3.2稀释液：8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，高压灭菌121℃、15分钟。
4.测定方法：4.1.检样稀释及培养：4.1.1以无菌操作将检样25g（ml）放于含有225 ml灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内（瓶内预放置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳体内，经充分震摇或研磨成1：10的均匀稀释液。
4.1.2用1 ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1 ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，用定量加液器在试管内鼓气三至四次使其混合均匀，作成1：100的稀释液。
4.1.3另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液，每递增一次，换用一支1 ml灭菌吸管。
4.1.4根据食品卫生标准要求或对污染情况的估计，选取三个适宜稀释度，分别在10倍递增的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1 ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做二个平皿。
4.1.5培养皿上分别注明样品编号，稀释度等。
4.1.6稀释液移入平皿后，注入冷却到45℃虎红琼脂约15 ml，水平徐徐震摇，使培养基检液混合均匀后，同时将虎红琼脂培养基倾入加有1 ml稀释液的灭菌平皿内做空白对照。
4.1.7待虎红琼脂凝固后，翻转平板，置25至28℃培养箱中培养3天后观察，共培养观察五天。
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法
菌落总数、霉菌和酵母菌总数等微生物检验方法下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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霉菌及其酵母菌
1、样品的稀释培养
（1）以无菌操作将检样25mL(或25g)放于含
有225mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，振摇30min，
即为1：10稀释液。
（2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，
沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌蒸馏水的试管内，
振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。
（3）另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序，
制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换
用1支1mL灭菌吸管。
（4）根据标准要求或对污染情况的估计，选
择3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的
同时，以吸取该稀释度的吸管移取1mL稀释液
于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
及时将15mL～20mL 冷却至46℃的马铃薯-葡 萄糖-琼脂或孟加拉红培养基(可放置于 46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转 动平皿使其混合均匀。 待琼脂凝固后，将平板倒置，28℃±1℃培养 5d，观察并记录。
制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊 呈烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着 生，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。 制片镜检观察，可见分生孢子梗很粗糙。顶囊呈 烧瓶形或近球形。分生孢子在小梗上呈链状着生 ，分生孢子的周围有小突起、球形、粗糙。
二、黄曲霉毒素检测方法
可归纳为化学方法、生物学方法和免疫学方法 三大类。 1、生物学方法 1. 抑菌试验 通过平皿中抑菌圈大小来衡量AFT含量 2. 荧光测定法 将待检菌株接种于培养基中，28—30 ℃培养48 ～72h，产生的毒素便浸入培养基中，在紫外灯光 下照射培养基会呈现出特异的荧光。此法操作简便 对AFT最低检出量为5pg/mL(拷贝数/毫升)。 3. 动物试验 大白鼠试验法、鸡胚试验、鸭雏试验
酵母菌和霉菌的检验
菌落总数稀释度选择及菌落计数报告方式
例 次 10-1 1 2 多不可计 164 多不可计 295 稀释液及菌落数 10-2 20 46 10-3 —— 1.6 16400 37750 两稀释 液之比 菌落总 数 报告方 式（个 /g,个/ml）
16000或 1.6 ×104 38000或平皿 进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀 释倍数。即为每克（g)或每毫升（ml）检样中所含霉 菌和酵母数。 稀释度选择和菌落报告方式可参考GB/T4789.2。 6、报告：每克（g)或每毫升（ml）检样中所含霉菌 和酵母数以cfu/g(ml)表示。
3
4 5 6 7
多不可计 271
多不可计 多不可计 27 11
60
313 5 12 0
2.2
—— —— —— ——
27100
313000 270 30500
27000或 2.7 ×104
310000或 3.1 ×105
270或 2.7 ×102 3100或 3.1 ×104
多不可计 305 0 0
＜1×10 ＜10
第七章 食品中酵母菌和霉菌的检验
一、教学目的：了解酵母菌和霉菌的形态特征和生 物学特性；掌握霉菌和酵母菌检验的一般程序。 二、教学重点及难点：霉菌和酵母菌检验的一般程 序；样品的处理和稀释。
一、酵母菌和霉菌菌数的测定： 酵母菌和霉菌侵袭食品，发生霉坏。有些霉菌产生 毒素引起各种急性和慢性中毒，特别是有些霉菌毒 素具有具有强烈的致癌性，一次大量食入或长期少 量食入，皆能诱发癌症。对食品加强霉菌的检验， 在食品卫生学上具有重要的意义。 测定：食品检样经过处理，在一定条件下培养后， 所得1g或1ml检样中所含霉菌和酵母菌菌落数（粮 食样品指1g 粮食表面的霉菌总数）。 霉菌和酵母数数主要作为判定食品被霉菌和酵母 污染程度的标志，以便对被检样品做出适当的卫生 学评价。
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霉菌和酵母菌介绍及检测方法
一、霉菌和酵母菌介绍：
霉菌和酵母菌及其检验酵母菌是真菌中的一大类,通常是单细胞，呈圆形，卵圆形、腊肠形或杆状。
霉菌也是真菌，能够形成疏松的绒毛状的菌丝体的真菌称为霉菌。
霉菌和酵母广泛分布于自然界并可作为食品中正常菌相的一部分。
长期以来,人们利用某些霉菌和酵母加工一些食品，如用霉菌加工干酪和肉，使其味道鲜美;还可利用霉菌和酵母酿酒、制酱；食品、化学、医药等工业都少不了霉菌和酵母。
但在某些情况下,霉菌和酵母也可造成中腐败变质。
由于它们生长缓慢和竞争能力不强，故常常在不适于细菌生长的食品中出现,这些食品是pH低、湿度低、含盐和含糖高的食品、低温贮藏的食品，含有抗菌素的食品等。
由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长;有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素.霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味.例如,酵母在新鲜的和加工的食品中繁殖，可使食品发生难闻的异味，它还可以使液体发生混浊，产生气泡，形成薄膜，改变颜色及散发不正常的气味等。
因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌,并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。
目前已有若干个国家制订了某些食品的霉菌和酵母限量标准.我国已制订了一些食品中霉菌和酵母的限量标准。
二、检验方法：
霉菌和酵母的计数方法,与菌落总数的测定方法基本相似。
主要步骤为：将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，计数.对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。
具体检测标准参见：
GB4789.15—94，《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数》
三、说明：
1．样品的处理。
为了准确测定霉菌和酵母数，真实反映被检食品的卫生质量，首先应注意样品的代表性。
对大的固体食品样品，要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料,再混合磨碎.如样品不太大，最好把全部样品放到灭菌均质器杯内搅拌2min。
液体或半固体样品可用迅速颠倒容器25次来混匀.
2．样品的稀释：为了减少榈稀释倍数的误差，在连续递增稀释时,每一稀释度应更换一根吸管。
在稀释过程中，为了使霉菌的孢子充分散开，需用灭菌吸管反复吹吸50次。
3．培养基的选择：在霉菌和酵母计数中，主要使用以下几种选择性培养基。
马铃薯-葡萄糖—琼脂培养基（PDA):霉菌和酵母在PDA培养基上生长良好.用PDA作平板计数时,必项加入抗菌素以抑制细菌。
孟加拉红（虎红)培养基：该培养基中的孟加拉红和抗菌素具有抑制细菌的作用。
孟加拉红还可抑制霉菌菌落的蔓延生长。
在菌落背面由孟加拉红产生的红色有助于霉菌和酵母菌落的计数。
高盐察氏培养基:粮食和食品中常见的曲霉和青霉在该培养基上分离效果良好，它具有抑制细菌和减缓生长速度快的毛霉科菌种的作用。
4．倾注培养.每个样品应选择3个适宜的稀释度，每个稀释度倾注2个平皿。
培养基熔化后冷却至45℃，立即倾注并旋转混匀，先向一个方向旋转，再转向相反方向，充分混合均匀。
培养基凝固后，把平皿翻过来放温箱培养。
大多数霉菌和酵母在25－30℃的情况下生长良好，因此培养温度25～28℃。
培养3d后开始观察菌落生长情况，共培养5d观察记录结果.
5．菌落计数及报告：选取菌落数10~150之间的平板进行计数。
一个稀释度使用两个平板，取两个平板菌落数的平均值，乘以稀释倍数报告。
固体检样以g为单位报告，液体检样以mL 单位报告.关于稀释倍数的选择可参考细菌菌落总数测定。
6．霉菌直接镜检计数法：对霉菌计数,可以采用直接镜检的方法进行计数。
在显微镜下，霉菌菌丝具有如下特征：
平行壁：霉菌菌丝呈管状，多数情况下，整个菌丝的直径是一致的。
因此在显微镜下菌丝壁看起来象两条平行的线.这是区别霉菌菌丝和其他纤维时最有用的特征之一.
横隔：许多霉菌的菌丝具有横隔,毛霉、根霉等少数霉菌的菌丝没有横隔.
菌丝内呈粒状：薄壁、呈管状的菌丝含有原生质，在高倍显微镜下透过细胞壁可见其呈粒状或点状。
分枝：如菌丝不太短，则多数呈分枝状,分枝与主干的直径几乎相同，有分枝是鉴定霉功得出可靠的特征之一。
菌丝的顶端：常呈钝圆形.无折射现象。
凡有以上特征之一的丝状均可判定为霉菌菌丝。
观察视野中有无菌丝,凡符合下列情况之一者为阳性视野。
一根菌丝长度超过视野直径1/6；
一根菌丝长度加上分枝的长度超过视野直径1/6；
两根菌丝总长度超过视野直径1/6；
三根菌丝总长度超过视野直径1/6；
一丛菌丝可视为一个菌丝，所有菌丝（包括分枝）总长度超过视野直径1/6。
根据对所有视野的观察结果，计算阳性视野所占比例，并以阳性视野百分数(%）报告结果。
计算公式：
每件样品阳性视野(％）=(阳性视野数/ 观察视野数）×100。