高效液相色谱 拖尾因子
液相色谱中的拖尾因子
液相色谱中的拖尾因子
液相色谱是一种广泛应用于分析化学、生物化学和制药化学的分析技术。
然而，液相色谱中常常会出现一些奇怪的现象，比如所谓的拖尾现象。
这个现象一般表现为峰形的后面出现一个长长的尾巴，这对于分析精度和灵敏度都会带来一些影响。
拖尾现象的出现主要是因为样品在某些条件下被吸附到了柱壁或者固定相上，导致了样品组分在某些位置停滞时间过长，从而形成了拖尾现象。
为了解决这个问题，可以采取一些措施，比如优化流动相组成，改变柱子温度，调整采样体积和浓度等等。
总之，了解和掌握拖尾因子对于液相色谱分析是非常重要的，只有掌握了这个知识点，才能更好地进行分析和解决问题。
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高效液相色谱仪常识
被分离组分在柱中的洗脱原理
Ⅱ 基本概念和理论
一、基本概念和术语
1.色谱图和峰参数
⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）.
⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
⊕拖尾因子（tailing factor,T）--T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。
⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。
4.相平衡参数（distribution coefficient,K）--在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。K=[xs]/[xm]
Cs-溶质在固定相中的浓度
Cm－溶剂在流动相中的浓度
分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数（或称交换系数），凝胶色谱法为滲透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
⊕保留时间（retention time,tR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
⊕保留体积（retention volume,VR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F*tR .
⊕调整保留时间（adjusted retention time,tR’）--扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间（reduced retention time）。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR’只决定于组分的性质，因此，tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0
高效液相色谱测定法标准操作规程
标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。
2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。
3责任：QC人员对本SOP实施负责。
4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。
超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。
高效液相色谱基础知识总结
（LC-MS），有效的弥补了色谱法定性分析特征性差的弱 点，成为最重要的分离分析方法之一， LC-MS在选择性、 灵敏度、分子量测定和提供结构信息方面具有明显的优 势，能够同时获得可靠的定性定量结果，因而被广泛应 用于药物的质量控制（杂质、副产物、降解产物等的鉴 定和测定）、药物在生物体内的吸收、分布和代谢研究 （包括代谢物的结构确定及定量）和临床医学研究（如 蛋白异常的研究）。 LC-MS已成为新药研究必不可少的 手段。20世纪70年代，高效液相色谱法崛起克服了
高效液相色谱基础知识总结
二、基本概念和术语
一、色谱图和峰参数 1、色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器， 所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。 2、基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到 平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行 于时间轴。基线反映仪器及操作条件的恒定程度，主要 由流动相中的杂质等因素决定。
键合相色谱法是将类似于气相色谱中的固定液的液 体，通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。
高效液相色谱基础知识总结
采用化学键合固定相的色谱法称为键合相色谱。若采用 极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非 极性键合相、极性流动相，则称为反相色谱。这种分离 的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子 间作用力的大小。
高效液相色谱基础知识总结
气相色谱法不能直接用于分析难挥发、热不稳定及高分 子化合物等的弱点，大大扩大了色谱法的应用范围，把 色谱法推进到一个新水平。
高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）是一种高效、快速的分离分析 技术，具有灵敏度高、选择性好的特点。HPLC具有的同 时分离和分析的功能对于体内药物分析和体内内源性物 质的分析及成分复杂的中药分析尤其重要。 HPLC的分离 功能还广泛用于药物的纯化和制备，如用制备色谱分离
高效液相色谱法考试答案
高效液相色谱仪试卷满分100分一、填空题共52分,每空2分1、高效液相色谱仪由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、记录系统等五大部分组成.2、拖尾因子T用于评价色谱峰的对称性,除另有规定外,T应在0.95-1.05之间.3、梯度洗脱装置分为两类：一类是外梯度装置又称低压梯度流动相在常温常压下混合,用高压泵压至柱系统,仅需一台泵即可.安捷伦液相,另一类是内梯度装置高压梯度.将两种溶剂分别用泵增压后,按电器部件设置的程序,注入梯度岛津液相.4、如色谱柱需长期保存,反相柱可以贮存于甲醇或乙腈中,正相柱可以贮存于经脱水处理后的正己烷中.保存时要旋紧柱堵头防止有机溶剂挥发导致色谱柱填料干裂、脱落.5、气泡空气会致使压力不稳,重现性差,所以在使用过程中要尽量避免产生气泡.6、高效液相色谱进样针：应选用液相专用的平头针.流动相pH值应控制在2-8之间.7、将吸滤头分别放入脱气后的流动相中,旋转排液阀,排液5min；排液结束后应先更改低流速再旋紧排液阀,避免压力过大冲坏色谱柱.8、以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40°C,为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度,但不宜超过60°C.9、亲水性固定液常采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定相的极性,称为正相液液色谱法,极性柱也称正相柱.若流动相的极性大于固定液的极性,则称为反相液液色谱,非极性柱也称为反相柱.组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反.10、高效液相色谱法常用的检测器类型有紫外检测器、示差折光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器、光电二极管阵列检测器等.任意写4种二、名词解析共16分,每空4分1、基线：是在操作条件下,没有组分流出时的流出曲线.2、保留时间：是从进样到某组分在柱后出现浓度极大时的时间间隔,即从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔.3、色谱流出曲线：是由检测器输出的电信号强度对时间作图所绘制的曲线,又称为色谱图4、梯度洗脱：就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例,从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化,达到提高分离效果,缩短分析时间的目的.三、选择题共16分,每空2分1、当流动相使用含有缓冲盐时,关机之前应对流路如何进行的清洗BA、不需要清洗,直接关机B、先用10%甲醇水冲60min,再用100%甲醇冲洗30min以上,最后进行关机C、先用100%甲醇冲洗60min以上,再用10%甲醇水冲30min后关机D、使用90%甲醇冲洗60min后关机2、在液相色谱法中,提高柱效最有效的途径是DA、提高柱温B、降低板高C、降低流动相流速D、减小填料粒度3、在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是BA、贮液器B、输液泵C、检测器D、温控装置4、在液相色谱中,某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力CA、组分与流动相B、组分与固定相C、组分与流动相和固定相D、组分与组分5、下列用于高效液相色谱的检测器,D检测器不能使用梯度洗脱.A、紫外检测器B、荧光检测器C、蒸发光散射检测器D、示差折光检测器6、液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜BA、0.5μmB、0.45μmC、0.6μmD、0.55μm7、在液相色谱中,不会显着影响分离效果的是BA、改变固定相种类B、改变流动相流速C、改变流动相配比D、改变流动相种类8、在高效液相色谱流程中,试样混合物在C中被分离.A、检测器B、记录器C、色谱柱D、进样器四、简答题共16分,每空8分1、反相色谱柱的冲洗方法.对于反相色谱柱,如使用缓冲液或含盐溶液作为流动性,在试验结束后,应用10倍柱体积如150mm柱长,约15ml的低浓度甲醇/乙腈-水溶液10%-20%冲洗,使色谱柱内的盐完全溶解洗脱出,再用较高浓度的甲醇/乙腈-水溶液50%冲洗,最后用高浓度的甲醇/乙腈-水溶液80%-100%冲洗,使色谱柱中的强吸附物质冲洗出来.如流动相中没有盐溶液,只是甲醇/乙腈-水溶液小于80%,可直接用高浓度的甲醇/乙腈-水溶液80%-100%冲洗.2、为什么作为高效液相色谱仪的流动相在使用前必须过滤、脱气若流动相中所含有的空气不除去,则流动相通过柱子时其中的气泡受到压力而压缩,流出柱子进入检测器时因常压而将气泡释放出来,造成检测器噪声增大,使基线不稳,仪器不能正常工作,这在梯度洗脱时尤其突出.。
高效液相色谱法的计算方法
高效液相色谱法的计算方法高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。
1、对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。
色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定。
常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。
后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。
注样量一般为数微升。
除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录ⅣA）项下对溶剂的要求。
正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于20分钟内记录完毕。
2、系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。
(1) 色谱柱的理论板数(N，用于定量表示色谱柱的分离效率，简称柱效)。
在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽(W h/2)，按n＝5.54(t R/W h/2)2计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。
高效液相色谱的拖尾因子太长的原因
高效液相色谱的拖尾因子太长的原因1.拖尾因子可能是由于色谱柱中填充物的不均匀性引起的。
The tailing factor may be caused by the unevenness of the packing material in the chromatographic column.2.可能是样品分子与填料之间存在相互作用导致拖尾现象。
The tailing phenomenon may be caused by interactions between sample molecules and the packing material.3.拖尾因子过长可能会导致色谱峰分辨率下降。
Excessive tailing factor may lead to reduced chromatographic peak resolution.4.使用不合适的流动相也可能导致拖尾现象。
The use of inappropriate mobile phase may also lead to tailing phenomenon.5.如果柱温过高，也可能会导致拖尾现象。
Excessive column temperature may also result in tailing phenomenon.6.色谱柱老化或污染也可能是拖尾因子过长的原因。
Column aging or contamination may also be the cause of excessive tailing factor.7.样品制备不完全可能导致拖尾现象。
Incomplete sample preparation may lead to tailing phenomenon.8.可以尝试调整样品溶液的pH值来减少拖尾现象。
Adjusting the pH of the sample solution may help reduce tailing phenomenon.9.合理调节色谱柱温度可以改善拖尾因子。
实用高效液相色谱法的建立
液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。
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色谱分离与在线检测技术已经成为当今分析化学的一门重要学科，而因其衍生出的相关产品也日益丰富。
对色谱工作者来说，在面对具体方法开发中如何获得适当的分离度则成为关注的焦点。
本文仅从网络上的资源收集简要介绍反相液相色谱法的建立思路。
一、 基本术语基本术语读者可跳过本部分内容，直接阅读实例讲解部分在评价色谱分离的品质时，通常用以下相关术语来反映色谱特征（如图1.）：图1. 典型色谱图1. 保留因子(k)：t t t k R −=(1) 用于反映化合物的色谱保留性质，跟化合物性质有密切关系。
如图1，设t R1 =3.65min, t 0 =1.20min, 则峰1的保留因子为：(3.65-1.20)/1.20=2.042. 拖尾因子(T f )液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。
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aba f W W W T 2+=(2)图2. 典型拖尾峰在理想情况下，色谱峰为高斯型对称峰，其拖尾因子为1.0，但在实际情况中，由于化合物的二次保留等其他因素，色谱峰大多会呈现一定程度的拖尾。
如图2中，该色谱峰的拖尾因子可计算得：{(41.5-37.0)+(37.0-35.0)}/{2*(37.0-35.0)}=1.63.3. 理论塔板数（N ）液相色谱方法开发（实例讲解）2010© 未经许可，不得复制。
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图3. 峰高与峰宽的关系2(16Wt N R= (3) 或2(54.55.0W t N R= (4) 注意：在上式中W 为图3中的W b ，为基线峰宽(4σ)，W 0.5 为峰高一半处的峰宽W h (2.335σ), 并非峰宽的一半(2σ)。
设图1中峰1的基线峰宽为0.25min, 则塔板数为：16*(3.65/0.25)^2=34104. 分离因子(α)10212t t t t k k R R −−==α (5) 又称两个色谱峰的相对保留值。
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高效液相色谱拖尾因子
高效液相色谱（HPLC）中的拖尾因子（tailing factor，T）是一个重要的参数，用于衡量色谱峰的对称性。
它也被称为对称因子或不对称因子。
拖尾因子T的计算公式为：T = W0.05h/2d1。
其中，W0.05h 为0.05峰高处的峰宽，d1为峰极大至峰前沿之间的距离。
在高效液相色谱分析中，拖尾因子T应在0.95～1.05的范围内。
这个范围是根据实际应用的需要设定的，以使色谱峰的对称性在可接受的范围内。
如果T不在这个范围内，可能需要对色谱条件进行调整，例如改变流动相的组成、流速、柱温等，以改善色谱峰的对称性。
另外，也可以通过配制不同浓度的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，注样3次，计算平均校正因子，来评估色谱峰的对称性。
这种方法可以更准确地反映色谱峰的形状和对称性。