哺乳动物精子获能及其鉴定
哺乳动物精子获能以及鉴定
摘要：精子获能是精卵结合的前提，是哺乳动物受精过程中的关键环节。
精子获能
的发现促使体外授精研究取得了突破性进展，为人类研究受精机理奠定了基础。
本
文从体内、体外两方面论述了哺乳动物精子获能的培养方法，并且对精子获能的
评价方法进行了总结。
关键词：精子获能；培养；评价
人及哺乳动物的精子在离开生殖道时，还不能立即与卵子受精，它必须经历一系列生理生化及形态的变化才能获得受精能力，这种生理现象称之为获能（capacitation）。
精子获能是精子受精前必须经历的一个生理阶段。
自然情况下，精子获能是在雌性生殖道内进行，自宫颈开始，经历子宫和输卵管，最后完成于输卵管壶腹部。
研究表明，精子获能不仅可以在雌性动物生殖道内进行，也可以在体外适当的培养条件下进行。
1 精子获能的方法
精子获能的方法分为体内获能和体外获能两种。
1.1 体内获能
早期的获能研究，采用体内获能的方法，即从交配母畜的子宫内取出精子用于受精，以受精率为指标，分析获能的部位、时程及其机制。
进一步研究发现，获能过程没有种的特异性，即精子不仅在同种生殖道内，而且可以在异种动物生殖道内或液体内进行获能。
将牛精子放入家兔子宫和猪输卵管内培养同样能使精子获能。
精子在成熟过程中，表面被覆了蛋白质类和多胺类，这些物质的存在对获能具有抑制作用。
在体内获能期间，精子在雌性生殖道内运动时，子宫颈黏液输卵管液和卵泡液，以及输卵管上皮细胞等，都有助于清除精子表面的抑制因子，促进获能的发生由于体内获能的研究，经常受到许多条件的限制，在机体生殖道内培养需时间，其环境也受卵巢激素影响，不稳定因素多，且雌性生殖道内，特别是输卵管内回收到的精子数量太少，测定获能精子化学成分的改变更加困难；并且，精子在体内总是与雌性生殖道分泌物接触，而雌性生殖道中存在着影响获
能的因子，对于复杂的体内环境人们又很难控制，因而给研究精子获能带来极大的困难为此，体外获能的研究方法应运而生。
1.2 体外获能
早期研究精子体外获能通常使用各种动物的体液（如输卵管液滤泡液和血清等），而这些体液的成分相对复杂，很难确定何种成分诱发或支持精子获能。
自从Toyoda等最先报道了采用一种特定的化学培养基获得体外受精成功以来，分析体外精子获能已成为比较容易的事情以Tyrode KRB HamF10BSA BWW BO等培养液进行哺乳动物精子获能培养均见报道。
目前，常用的为 BO液和改良的 Tyrdoe 液（TALP）两大类，许多哺乳动物，如鼠牛猴马等，其精子体外获能的研究越来越多。
近年来的研究表明，体外获能发展起来的实验手段几乎可以达到与体内获能相同的效果，这就使得体外获能的研究可以揭示体内获能的本质精子体外获能技术可以较好地控制实验条件，并可逐个分析获能的相关因子，极大地促进了精子获能的研究。
精子体外获能总体包括两个步骤：一是精液的处理，目的是减少或去除精浆内前列腺素免疫活性细胞细菌和碎片，减少精液的黏稠度，以促进精子获能；二是使用某些特定成分诱导精子获能和顶体反应目前，诱导精子体外获能的方法主要有上浮法、沉淀加上游法和不连续密度梯度法。
经上浮法处理可获得活力较强的精子，但精子回收率较低，目前该方法已成为牛精子（尤其是冻精）洗涤与体外获能的主要方法；精子沉淀加上游法适用于精子活力尚可或含有大量白细胞及碎片的精液，此方法有利于分离活动精子与死精子，且回收率较高；不连续密度梯度法是近年用于分离精子的良好方法，密度梯度离心法原理是形态正常精子的密度要高于异常的精子，经平衡离心后得到高受精力的正常精子，该法适用于精子数量正常而活力较差的精液若与精子上浮技术相结合，不连续密度梯度法可获得更高质量的精子。
精子的质量不同，获能所使用的处理方法也不同，要根据精子的来源及质量选择相应的处理方法江峰根据所使用人精液的质量，将其处理方法分为7 种：（l）少精子症，离心后再重悬于较小体积营养液中；（2）弱精子症，离心 - 上游技术结合添加咖啡因或血管舒缓素；（3）畸形精子，牛血清白蛋白（BSA ）人血清白蛋白或牛宫颈黏液滤过 Percoll 密度梯度离心；（4）液化不全，玻璃纤维过滤；（5）黏度过高，淀
粉酶处理密度梯度离心等；（6）杂质过多，上游法和 Percoll 密度梯度离心；（7）逆行射精，洗涤加上游处理。
2 获能评价的方法
精子获能是一系列的生理生化反应过程，其步骤分为：（1）超激活运动（hyperactivated motility，HAM ）：精子鞭毛运动的频率及类型发生改变；（2）获能：精子膜结构及特征的精细改变；（3）顶体反应（Arcosomal reaction， AR）：标志着精子获能已经完成根据获能精子在运动形态及代谢等方面的变化特征，创立了多种精子获能的评价方法目前，常用的精子获能评价方法为精子超激活运动顶体反应和精子穿卵试验（sperm penetration test， SPA ）此外还有去能因子鉴定法测定精子呼吸能等方法。
2.1 超激活运动
精子一旦获能，其运动类型即发生显著改变，精子头部侧摆幅度和频率明显增加，尾部振幅加大，频率加快，呈现一种特殊的超激活运动或鞭打样运动。
它是精子为适应受精而形成的一种特殊的运动类型，所反映的是精子运动能力和方式的改变其特点是头部运行轨迹呈不规律的 8 字形，并显著地偏离直线精子的超激活运动一般存在两种运动类型：急剧地前向运动（或穿梭运动）和鞭打样运动。
Yanagimachi 于 1970 年首先在仓鼠精子获能时观察到这种现象。
Wang等报道，人精子超激活运动的发生率与体外受精率呈高度相关性，并且对于精子穿越输卵管峡部，克服输卵管上皮细胞的阻力，最后穿过卵丘细胞及其细胞外基质和透明带起着重要的作用。
目前，观察精子超激活运动的应用技术有：显微录像技术、连续分步曝光技术和计算机辅助精子分析（CASA ）技术等。
CASA分析系统在临床研究时备受青睐，它可达到客观准确地量化精子运动情况，通过对精子头部运动轨迹摆动图形的分析，可获得精子运动的多项参数，使人们对精子运动有更深层次的了解。
2.2 顶体反应
顶体反应是精子在获能过程中的生理变化和形态学变化，是哺乳动物的精子具备受精能力的必要条件早期的研究者认为，顶体反应是由精子质膜和顶体外膜相互融合，形成囊泡化，使顶体内含物逸出顶体陈大元等认为质膜并不参与顶体囊泡化，而是双层顶体外膜多位点自我融合而成。
虽然顶体反应是获能的终
点，但获能过程本身还存在着不同阶段，需要采用相应的判断指标随着细胞生物学、分子生物学和免疫学以及显微镜技术的发展，许多检测精子顶体反应的技术相继建立，如普通光镜中的三色染色法（TST）和考马斯亮蓝染色法（CBB），电子显微镜检查法（TEM）荧光显微技术中的金霉素荧光染色法（Chlortetracycline，CTC ）Hoechst33258 结合的植物凝集素标记法顶体酶释放测定法单克隆抗体间接免疫荧光法和豌豆凝集素（FITC- PSA ）标记法等。
近年来，金霉素荧光染色法技术越来越受到人们的重视，它是根据精子不同获能状态进行染色，并可将精子分为 3 种 CTC荧光染色类型，即 F B和AR 型F 型为未获能精子，其顶体帽完整，整个顶体布满黄绿色荧光；B 型精子为已获能精子，其特点是顶体帽仍然存在，但在顶体后区出现一条暗淡的荧光区带；AR 型精子，顶体帽缺，如整个精子头部显示淡绿色或无荧光，即为完成顶体反应的精子。
目前此法已广泛应用在小鼠牛猪猴和狗等哺乳动物和人顶体反应机理研究中并且 Hewitt 等将金霉素与活体荧光染料 H33258 对活精子进行双色染色用于观察整个体外受精获能和顶体反应过程中顶体的变化。
2.3其他方法
去能因子鉴定法和测定精子呼吸能法也是精子获能的鉴定方法。
去能因子鉴定法是用 T- HCl（Tetracycline）标记去能因子，获能处理后，在显微镜下观察，如果没有荧光说明精子表面的去能因子已被除去，精子可能已获能；如果还可以看见荧光，则精子还没有获能由于荧光的易淬灭性，使得这一方法并不可靠。
测定精子呼吸能法所依据的原理是获能精子比新鲜精子代谢能量要大但是由于其操作繁琐，结果不稳定，可信度不高，应用较少。
3 结语
精子获能是受精的重要因素。
精子获能被发现以来，对精子获能的研究特别是体外获能、获能的评价等已经取得了很大的进展。
对精子获能的变化，包括精子质膜结构与生物化学特性发生系列改变，质膜胆固醇含量减少，膜的离子渗透性增加，膜的超极化，胞内pH 升高，Ca2+和 cAMP含量增加，超氧阴离子生成量增多，以及特异蛋白质的酪氨酸磷酸化增强等现象进行了研究。
而由于精子获能的分子机制相当复杂，且受到多种细胞信号途径的调控，目前尚未明确，有待
进一步研究。
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牛羊精子体外获能技术
获能过程 中发生 了一系列 的过氧化 过程 ， 产生 了过量的氧 自由基是导致体 外受 精率低下 的原 因之 一。本文主要 介绍 了体外受精用精子的筛选及抗氧化方法 、 影响体外获能 的因素等 。 关键词 牛羊 ； 精子 ； 获能技术 ； 抗氧化剂
经 过多 年 的研 究 ，Fra bibliotek精 子 体外 获 能 已取 得 了很 大
去除精清 、 死精 等 ， 为体外获 能创造类 似体 内的获 在 获能 液 中添 加 抗 氧化 剂 ，如 褪 黑 素 、 Ｂ一巯 基 乙
能 环境 。
醇、 半胱氨酸等 ， 来清除体外受精 过程 中产生的过
１ ） 上 浮 筛 选精 子 法 。将 精 液加 入 获 能 液底 部 ， 氧化 物 。 然后静 置 在培 养箱 ３ ０～６ ０ ｍｉ ｎ 。目的是 活力 高 的精
子 会 上 游 到上 层 ，吸 出上层 液 后进 行 离 心 筛选 ， 获
３ 抗 氧 化 剂 种 类
得高活力精子。在此操作过程中要避免室内的操作 氧 自由基 （ Ｒ Ｏ Ｓ ） 产生与消除的平衡是体外受精 温度过低或过高 ， 尽 量 避 免 日光 、 室 内灭 菌 过程 中 的重 要影 响 因素 。精 子 与卵子 体 外受 精 时会受 到氧
佟桂芝 ， 女， １ ９ ６ ７年生 ， 研究员 ， 研究方 向： 反刍动物饲养及繁殖 。
殖与饲料 ２ ０ １ ７年第 ６ 期
殖生产 ． ３ ３．
蝾螺生物学特性及其浅海筏式笼养技术
林 星 福 建省 莆 田市生 物 工程 研 究所 ， 福 建莆 田 ３ ５ １ １ ０ ０
摘要 蝾螺是近年来福建省沿海新开发的一种浅海中大型经济螺类 。简要 介绍 了蝾螺生物学特性 和人工繁
精子获能的分子机制及研究进展
文章 编号 ：０ ５ ２ ３ （０ ８Ｏ — ０ １ Ｏ １０ — ７ ９２ ０ ）２ ０ Ｏ 一 ３
哺乳 动 物 的精子 在 刚 射 入 雌性 生 殖 道 时 ， 从 附 或
许多试验证实 ， 、 、 、 鼠及猫等物种的精子 人 牛 猪 小
睾取 出后 ， 不 具 备 受 精 能力 ， 须 在 雌 性 生 殖 道 内 获 能 与 Ｐ Ｐ相 关 。 并 必 Ｔ 在获 能精 子 中 ， Ｔ Ｐ Ｐ主要 发生 在精 子
制 进行 研 究 ， 得 了～定 的 突破 。 取 １ Ｃ 和 Ｈ ａ Ｃｏ３在精 子 获 能 中的 作 用机 制 ＿
如果培养液组分 中缺乏上述任何一种成分 ，都将阻碍 Ｐ Ｐ和获 能 的发 生 。所 以 附睾 头 部精 子 即使 在 普 通获 Ｔ
能培 养 的条件 下 也不 表 现ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ出 Ｐ Ｐ的改 变 ，说 明这 时 的 Ｔ
维普资讯
Ｓ ＨＥＮＧＺＨＩＳ ＨＥＮＧＬ Ｉ
圈 生 理 殖
中 图分类 号 ：８ ４ ￥ １
精 子获 能 的分 子 机 制 及 研 究进 展
单世梁 ， 金
（ 延边大学农学院 ， 吉林
一
龙井 １３ ０ ） ３ ４ ０
文 献标 识码 ： Ｂ
增加 到 ２ ０ ｍ ｌ ，并 且 之后 不再 有 明显 的增 加 。从 信 号 途 径 调 节 ， 白激 酶 ＡＰ Ａ 对 精 子 Ｐ Ｐ的作 用 ５ ｏＬ ／ 蛋 （Ｋ ） Ｔ
ｃ ２ 精子头部质膜 表面 的分 布来看 ，头部质 膜上 Ｃ ２ 主 要 是 通 过 对 酪 氨 酸 激 酶 或 磷 酸 化 酶 的直 接 或 间 接 ａ在 ＋ ａ
蛋 白酪氨酸磷 酸化（ Ｉ ）。对 Ｃ２作用 的不 同认 识 ， Ｐｐｔ ３ １ ａ 原 腺 苷 酸 环 化 酶 合 成 ｃ ＭＰ Ａ ；对 于 ｃ ２ 钙 调 素 来 说 ， ａ＋ ／ 一 因可 能在于顶 体反应 中 Ｃ２作 用 的不 同 ， ａ 以及研究 Ｃ２ 方 面通 过 腺 苷 酸 环 化 酶 增 加 ｃ Ｐ的 合 成 ， ａ＋ ＡＭ 另一 方 面 作用 和相关 事件 的复杂性 。 １ Ｈ Ｏ一 精子 获 能 中 的作用 机 制 ． ２ Ｃ 。在
哺乳动物精子发生与运动能力的研究
哺乳动物精子发生与运动能力的研究众所周知，精子是哺乳动物生殖过程中至关重要的一部分。
精子的发生和运动能力直接影响了生殖的效率和质量。
因此，对于哺乳动物精子的发生和运动能力进行研究具有重要意义。
一、精子的发生哺乳动物精子的发生是通过睾丸中的精原细胞分化而来的。
精原细胞在不同发育阶段会经历几轮有丝分裂和一次减数分裂，形成四个细胞体。
其中有一个具有发育潜能的原精子细胞，它会经过一系列内部改变并分裂为成熟的精子。
这个过程被称为精子发生。
精子发生的过程是一个高度有序而又复杂的过程。
具体的，我们可以将精子发生的过程分为三个阶段:1.发育前期在睾丸中，每个精原细胞都会分裂成一组精原细胞和一组细胞，这个过程叫做有丝分裂。
在接下来的发育前期，精原细胞会持续经历一系列内部改变，直到分裂成成熟的精子。
2.成熟期在成熟期，精子的核被紧紧压缩成一个小球，这个小球叫做精子头。
精子头中含有一个 DNA 分子，这个 DNA 分子携带了父亲的遗传信息。
精子头的外面有一层叫做顶体的附属结构。
3.精液分泌期精子在进入前列腺之前并不具备精液成分，只有在精液分泌期才开始分泌精液成分。
精液成分的功能是提供精子的营养和移动，有助于精子更快地移动到输精管。
二、精子的运动能力精子的运动能力是指精子在生殖系统中的运动和前进能力。
这个过程需要精子的鞭毛有自我运动能力和流体的支持，也就是说，它们能够在精液中向前移动。
精子的移动能力对于受精过程至关重要。
正常的精子能够自由移动、穿过阻力，寻找和认识卵子。
当精子发生功能障碍或缺乏活力时，它们的运动能力就会受到影响，从而影响受精过程。
近年来，对于精子运动能力的研究越来越深入。
研究人员发现，精子的运动能力可能受到环境和饮食的影响。
比如，高温环境和高脂肪饮食会对精子的形态和运动能力造成负面影响。
此外，最近一些研究表明，压力和睡眠不足也可能会对精子的运动能力造成潜在影响。
因此，良好的休息和减轻压力的方法能够通过提高精子的运动能力来提高生育率。
哺乳类动物精子的获能和顶体反应
哺乳类动物精子的获能和顶体反应
闫文龙;李扬
【期刊名称】《畜牧与饲料科学》
【年(卷),期】2001(022)002
【摘要】介绍了在生殖过程中的2个重要的生理变化--获能和顶体反应,并综述了最近几年来在生殖生物学领域关于获能与顶体反应机制方面的最新成果.结果显示,cAMP、Ca2+、咖啡因等因素对精子获能有促进作用,ZP3、Ca2+、cAMP、肝素等因素对顶体反应有促进作用.所有研究成果表明,精子的荻能和顶体反应与精子膜的生理变化有着密切关系.
【总页数】3页(P20-22)
【作者】闫文龙;李扬
【作者单位】内蒙古大学实验动物研究中心生殖生物学及生物技术国家教育部重点实验室,内蒙古,呼和浩特,010021;内蒙古大学实验动物研究中心生殖生物学及生物技术国家教育部重点实验室,内蒙古,呼和浩特,010021
【正文语种】中文
【中图分类】S8
【相关文献】
1.糖原合成酶激酶3在精子成熟、获能和顶体反应中的作用 [J], 屈夏;王昊;周家豪;赵紫薇
2.人和哺乳类精子的获能与顶体反应及其相关因子 [J], 王云美;贲昆龙
3.钙离子在精子获能和顶体反应中的作用 [J], 宫璀璀;刘影;韩玉春
4.哺乳动物精子获能前后的理化变化及获能机制研究进展 [J], 贺亚南;朱化彬;陈晓丽;郝海生;秦彤;赵学明;路永强;王栋
5.荧光染色法分析17β-雌二醇对获能人精子细胞顶体反应及细胞外Ca^(2+)和蛋白激酶C抑制剂的影响 [J], 王嵘;何彦芳;郑洁
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哺乳动物的精子获能及其鉴定
配母畜的子宫 内取 出精子用于受精 ，以受精率为指 Ｂ Ａ、ＷＷ、Ｏ等 培养 液 进 行 哺乳 动物 精 子 获 能培 Ｓ Ｂ Ｂ
标， 分析 获能 的部 位 、 时程及其 机制［ 进一 步研究 发 养 均见 报道 。 目前 ， ３ １ 。 常用 的为 Ｂ Ｏ液 和改 良的 Ｔｒｏ ｙｄｅ 现 ， 能过程 没有 种 的特 异性 ， 获 即精 子不 仅在 同种 生 液 （Ａ Ｐ 两 大 类 。许 多 哺 乳 动物 ， 鼠 、 、 、 ＴＬ） 如 牛 猴 马 殖 道 内 ，而且 可 以在 异种 动物 生殖 道 内或 液体 内进 等 ， 其精 子体外 获能 的研 究越 来越 多。近年来 的研究
培养 基获得 体外 受精 成功 以来 ，分 析体外 精 子获 能
精子 获能 的方法分 为体 内获能和体外 获能两种 。 能 。 自从 Ｔｙｄ 等 最先报 道 了采用 一种特 定 的化学 ｏｏａ １ 体 内获能 ． １ 早 期 的获能研 究 ， 用体 内获 能 的方 法 ， 采 即从 交 已成 为 比较容 易 的事 情【 ５ ＿ Ｔｒｄ 、 Ｒ Ｈ ｍＦＯ 。以 ｙｏｅＫ Ｂ、 ａ ｌ 、
经 上浮 法处理 可获 得活 力较 强 的精子 ，但 精子
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
黑龙江动物 繁殖
第 １ ８卷
第 ２期
２１ ０ ０年
回收率较低 ，目前该方法已成为牛精子 （ 尤其是冻 剧 地 前 向运 动 （ 穿 梭 运 动 ）和 鞭 打 样 运 动 ［ 或 ３ １ 。 精） 洗涤与体外获能的主要方法 ； 精子沉淀加上游法 Ｙ ｎｇ ａｈ 于 １７ 年首先在仓 鼠精子获能时观察 ａａ ｃｉ ９０ ￣ ｍ
外授精研 究取得 了突破 性进展 ， 为人 类研 究受精机 理 奠定 了基础 。本 文从体 内、 体外 两方 面论述 了
精子的获能情况了解
发现的，后来被Austin 称为精子获能。
这一现象中精子发生很多生理生化改变，包括一些精子内部和表面的一些变化，如：精浆蛋白的移除、糖蛋白被吸收到精子的表面和精子质膜的改变。
一、体内获能
所有被研究过的哺乳动物的精子必须在雌性动物生殖道内停留一段时间才能获能。精子的获能是通过一系列的膜性能的改变和精子头部和尾部多种酶激活从而激活细胞信号通路的结果。
精子体内获能的最初改变包括：（1）精浆蛋白的移除，糖蛋白被吸收到精子的表面；（2）经过雌性动物生殖道时精子表面分子的改变。精子获能主要是精子质膜蛋白发生多种分子变化和甾醇类物质（主要是胆固醇）的变化改变了精子质膜的性质。胆固醇的流出改变了膜的通透性和流动性导致了离子的流入，从而激活了细胞内第二信使。
白蛋白是雌性生殖道内分泌的主要蛋白质，同时也是体内和体外获能的关键物质。这种蛋白质被认为是通过促进甾醇类（主要是胆固醇）从精子质膜流出从而启动精子获能。甾醇类物质的流出导致了膜性质的改变，增加了膜的通透性和流动性，造成了钙离子和碳酸氢根负离子的流入，同时激活了细胞内的第二信使。
总之，精子获能时质膜经历了一些生理变化并重新定位。
总之，在获能的过程中，这些改变引起了精子蛋白激酶的激活，蛋白酪氨酸磷酸化从而激活精子。
二、体外获能
哺乳动物的精子也能在体外通过在某种包含能量物质，物质中获能。只需放在含有牛血清蛋白、能量物质和电解质的混合液中即能获能。
疑难问题：以前在讲述胚胎工程中精子的获能，一直认为是获得受精的生理状态。对于具体的机理含糊不清，不知所云。今天看了一篇文章《精子获能机理的研究》学习了其中的机理。
射出的精子当经过雌性动物生殖道时必须经历生理变化，这样才能与卵子结合。精子这一系列的生物和功能的改变就叫做精子获能。
驯鹿的人工授精及分子鉴定
摘要摘要我国驯鹿种群是３００年前，随鄂温克人为躲避战乱而迁移到此。
这一驯鹿种群在大兴安岭当地的生态环境中，经过数百年的封闭、隔离饲养，形成了其特有的生活习性，也是栖息在最南部少有的驯鹿种群。
我国一直未开展有关驯鹿人工饲养的科学研究工作。
目前，鄂温克猎民饲养驯鹿仍沿用多年来所形成的固有的传统模式，采用半野生饲养方式，对驯鹿进行租放管理。
把驯鹿散放在暂住点的周围，无人看管，自由采食，不进行补饲，不为其筹备饲料，不论天气多么恶劣，驯鹿仍依赖自然采食而维持其生存。
驯鹿的繁殖是采用自然交配，种群处于自然淘汰状态，近交衰退严重。
这使驯鹿的养殖业的发展受到了极大的限制。
驯鹿人工授精技术的应用，可以极大地提高种鹿的质量，使良种基因得到最大限度地传播，种鹿利用率高：避免疾病传播：避免种公鹿争斗而造成损失。
驯鹿是唯一一种雌雄都长茸的鹿。
驯鹿在传统中药中，一直被作为伪品处理。
现今常用的鉴定驯鹿雌雄鹿茸方法有性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等，在分子水平上的鉴定一直没有人研究。
驯鹿雌雄鹿茸分子鉴定的研究为茸鹿伪品鉴别试剂盒提供了进一步的完善。
我国驯鹿一直是闭锁繁育，种群退化明显。
驯鹿遗传多样性的研究．为我国驯鹿的育种工作提供了分子基础，为以后的分子育种工作提供了可能，也为我们研究群体遗传和遗传分化、系统发育提供了基础资料。
在本次研究中主要分为三个部分。
第一，驯鹿的人工授精。
通过对１１头母驯鹿人工授精的初步研究，结果同期发情和人工授精的结果都很理想，同期发情率和受精率均为１００％。
第二，驯鹿的分子生物学鉴定。
本次试验采用分子生物学鉴定的方法，对雌、雄驯鹿茸的ＳＲＹ基因进行扩增，从扩增的图像可以看到，我们采用的引物能够准确的对雌、雄驯鹿茸进行区分。
应用ＤＮＡＭＡＮ４．０对驯鹿、梅花鹿、马鹿进行聚类分析，结果梅花鹿与马鹿同源性为Ｏ．９９，梅花鹿、马鹿与驯鹿同源性为０．３７。
第三，驯鹿的遗传多样性研究。
本次试验采用２４个引物进行ＲＡＰＤ—ＰＣＲ扩增，在其中筛选出１４个扩增条带清晰引物。
精子的获能整理
精子的获能整理整理者：苗振学号1510736PART1研究的历史：⑴张明觉发现：精子需要在雌性生殖道中停留一段时间才能与卵子受精。
⑵后来，许多科学家都证明精子获能是哺乳类动物精子都必须经历的一个生理成熟过程。
⑶早期的获能研究仅限于体内实验，即自然交配或人工受精(即从交配母畜的子宫内取出精子用于受精，以受精率为指标，分析获能的部位、时程及其机制)。
⑷但体内手段常受到某些条件的限制。
为此，亟待发展另外一种研究获能的方法——体外获能。
⑸精子体外获能技术可以较好地控制实验条件，并可逐个分析获能的相关因子，极大地促进了精子获能的研究。
因此半个世纪以来，已建立了较为理想的获能技术及评价方法，获能机制研究也取得了一定进展。
⑹体外获能的研究，为人工授精提供了理论的依据，极大的方便了优良种畜的繁殖。
PART2 体内的获能：⑴经过附睾成熟，精子表面被覆了蛋白和多胺类等对获能有抑制作用的去能因子。
（获能精子一旦与精浆和附睾液接触，可去获能，表明精浆和附睾液中都存在去能因子。
）⑵获能过程是子宫液和输卵管液之间出现的一种协同作用, 自然情况下，精子获能是在雌性生殖道内进行，自宫颈开始，经历子宫和输卵管，最后完成于输卵管壶腹部。
⑶精子获能是一系列的生理生化反应过程，其步骤大致可区分为：①激活精子鞭毛运动的频率及其类型发生改变【有的作者称作超激活运动】（运动活跃，尾部振幅大而有力，获能后精子由直线前进变为激烈的曲线运动，即超活化。
其特征为头部侧向曲线运动，鞭打幅度加宽和沿星状自旋轨道运动。
）；②获能精子膜结构及其特征的精细改变，以促进顶体外膜和质膜之间的融合；③顶体反应：研究者认为，顶体反应是由精子质膜和顶体外膜相互融合，形成囊泡化，使顶体内含物逸出顶体。
陈大元等认为质膜并不参与顶体囊泡化，而是双层顶体外膜多位点自我融合而成。
顶体反应表示精子获能已经完成。
【不过也有作者认为顶体反应并不属于精子的获能，他认为精子获能与顶体反应是精子完成受精必须经历的两个重要阶段，多方比较发现这个争论颇多。
浅谈哺乳动物体外受精技术的研究进展
浅谈哺乳动物体外受精技术的研究进展【摘要】哺乳动物体外受精是哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。
长期以来，国内外学者对哺乳动物体外受精技术做了大量研究，取得了突破性进展。
本文分别对哺乳动物体外受精技术的研究历史、现状及方法进行探讨，以期通过本文的阐述对该技术发展进行总结。
【关键词】哺乳动物；体外受精；卵母细胞；精子获能1.哺乳动物体外受精技术研究历史和现状哺乳动物体外受精技术的研究在世界科学史上已有100余年的历史了。
德国科学家Scnenk在1878年就开始对家兔和豚鼠进行研究实验，在实验中他对哺乳动物受精进行了大胆的研究，开始了哺乳动物体外受精的探索。
但在此期间哺乳动物的体外受精研究并没有长足的进步，该技术进入科研的新纪元是在1951年美籍华人张明觉和澳大利亚人Austin发现了哺乳动物的精子获能现象以后。
1959年，张明觉和Austin以家兔为实验材料，在受体外进行受精，接着把受精卵移植到母兔体内，最后母兔产出健康正常的兔仔，而且产出的兔仔发育正常。
张明觉进行哺乳动物体外受精研究的成功，这只兔仔成为世界上第一个试管哺乳动物。
20世纪60年代初至8O年代中期，界内科研工作者在进行了大量的基础研究后，取得了长足的进步，对今后体外受精技术的应用奠定了基础。
研究从最初的精子在同种或异种雌性生殖道内完成体内获能过程，发展到用化学成分明确的溶液培养获能。
这一系列的研究成果大大推动了体外受精技术的发展并获得成功。
20世纪80年代中期以后，以牛为代表的家畜体外受精技术迅速发展，研究从理论向实践应用发展。
此后，牛的卵母细胞体外成熟和胚胎培养体系逐步趋于成熟，胚胎体外生产效率得到很大提高。
20世纪8O年代后期，体外受精技术成为发展畜牧业的重要手段，利用此技术保留了良种家畜的遗传基因，在欧美等发达国家中得到了广泛的应用并且在效益上取得了显著的效果。
2.哺乳动物体外受精的研究方法及进展2.1卵母细胞的采集卵母细胞的来源及质量如何直接影响了体外受精的成功率，在进行卵母细胞的采集上我们通常采用3种方法，先对这三种方法进行如下介绍：（1）超数排卵直接获得成熟卵母细胞。
哺乳动物精子获能及其鉴定
哺乳动物精子获能以及鉴定摘要：精子获能是精卵结合的前提，是哺乳动物受精过程中的关键环节。
精子获能的发现促使体外授精研究取得了突破性进展，为人类研究受精机理奠定了基础。
本文从体内、体外两方面论述了哺乳动物精子获能的培养方法，并且对精子获能的评价方法进行了总结。
关键词：精子获能；培养；评价人及哺乳动物的精子在离开生殖道时，还不能立即与卵子受精，它必须经历一系列生理生化及形态的变化才能获得受精能力，这种生理现象称之为获能（capacitation）。
精子获能是精子受精前必须经历的一个生理阶段。
自然情况下，精子获能是在雌性生殖道内进行，自宫颈开始，经历子宫和输卵管，最后完成于输卵管壶腹部。
研究表明，精子获能不仅可以在雌性动物生殖道内进行，也可以在体外适当的培养条件下进行。
1 精子获能的方法精子获能的方法分为体内获能和体外获能两种。
1.1 体内获能早期的获能研究，采用体内获能的方法，即从交配母畜的子宫内取出精子用于受精，以受精率为指标，分析获能的部位、时程及其机制。
进一步研究发现，获能过程没有种的特异性，即精子不仅在同种生殖道内，而且可以在异种动物生殖道内或液体内进行获能。
将牛精子放入家兔子宫和猪输卵管内培养同样能使精子获能。
精子在成熟过程中，表面被覆了蛋白质类和多胺类，这些物质的存在对获能具有抑制作用。
在体内获能期间，精子在雌性生殖道内运动时，子宫颈黏液输卵管液和卵泡液，以及输卵管上皮细胞等，都有助于清除精子表面的抑制因子，促进获能的发生由于体内获能的研究，经常受到许多条件的限制，在机体生殖道内培养需时间，其环境也受卵巢激素影响，不稳定因素多，且雌性生殖道内，特别是输卵管内回收到的精子数量太少，测定获能精子化学成分的改变更加困难；并且，精子在体内总是与雌性生殖道分泌物接触，而雌性生殖道中存在着影响获能的因子，对于复杂的体内环境人们又很难控制，因而给研究精子获能带来极大的困难为此，体外获能的研究方法应运而生。