纯化水微生物限度检查法验证方案和验证报告.(DOC)

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纯化水微生物限度检查法验证方案

题目：纯化水微生物限度检查法验证方案编号：VDP-JY-010-01-1 共页

第页

起草：日期：审核：

日期：

批准：

日期：

颁发部门：

质量部

生效日期：分发部门：工程设备部、质量部

纯化水微生物限度检查法验证方案起草、审核、批准：

起草人：起草日期：审核人：

审核日期：

批准人：

批准日期：

颁发部门：

质量部分发部门：

质量部

验证组织：

验证小组名称：纯化水微生物限度检查法验证方案验证小组组长质量部经理负责组织、实施

组员

1 QC主管负责验证方案的起草

负责检测数据的复核

负责出具检验报告

2 QA主管负责验证方案的确认

负责方法评价

3 微生物限度检验员负责测试操作和操作原始记录

1.验证目的

2.验证人员职责

3.参照标准

4.验证项目内容

5.评价合格标准

6.验证试验材料

7.验证实施计划

8.菌液制备

9.供试液制备

10.计数方法验证

11.控制菌检查方法验证

12.验证结论和评价

纯化水微生物限度检查法验证方案

1. 验证目的：

纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。确认该方法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定，控制菌的测定。

2．验证人员职责

2.1验证领导小组：

2、1、1负责验证方案及报告的批准

2、1、2组织协调验证工作

2、1、3签发验证证书。

2.2.项目验证小组长

2.2.1.负责验证方案的起草

2.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。

2.2.

3.负责验证报告的起草。

2.2.4.负责再验证周期的确认。

2．3. 质量部

2．3.1.负责验证方案审核

2．3.2.负责取样及对样品的检验

2．3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，协助项目验证小组长起草验证报告。2．3.4.负责验证数据及结果的审核

3. 参照标准：

2010版中国药典一部附录XIII微生物限度检查法。

4. 验证项目内容：

细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，控制菌检查方法验证。

5. 评价合格标准：

试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。

6. 验证试验材料：

6.1. 被验证产品：

品名纯化水取样点：（1）4T/h纯水系统二级反渗透装置进纯水箱口;(2) 4T/h纯水系统液体制剂二楼洁具间用水点；(3) 4T/h纯水系统三楼固体制剂纯水箱总回水口。

检验量5ml /次

6.2. 仪器设备：

6.2.1. YX.400A电热蒸汽压力消毒器

6.2.2 YS－840净化工作台

6.2.3. 101型电热干燥箱

6.2.4. SPX-250B型生化培养箱

6.2.5.PYX-DUS-X型隔水式电热恒温培养箱

6.2.6 303A-4型电热培养箱

6.2.7 天平

6.3. 稀释剂：PH

7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液；0.9%的无菌氯化钠溶液

6.4. 验证用培养基

名称批号生产厂家营养琼脂培养基

营养肉汤培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

改良马丁培养基

改良马丁琼脂培养基

6.5. 验证用菌株：

验证菌株

代号

（代数）

来源

培养基培养温度

培养时间

（小时）

大肠埃希菌营养肉汤30—35℃金黄色葡萄

球菌

营养肉汤30—35℃枯草芽孢

杆菌

营养肉汤30—35℃白色念珠菌改良马丁培养基23—28℃

黑曲霉菌改良马丁琼脂

培养基

23—28℃

7、验证设施计划

序号项目确认名称实施负责人起始和完成日期

1 细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证

2 验证结果评定、验证周期确认、验

证报告和发放验证证书

8. 菌液制备

8.1.大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌悬液的制备

①取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜斜面培养物1白金耳接种至10ml 营养肉汤培养基中，35℃培养18~24小时。

②取经35～36℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7约为

50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

8.2白色念珠菌、黑曲霉菌悬液的制备

①取白色念珠菌的新鲜斜面培养物1白金耳接种至10ml改良马丁培养基中，25℃培养24~48小时。取培养物1ml，加入9%灭菌生理盐水9ml，混匀，10倍稀释至10-5~10-6细菌数约50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

②接种黑曲霉的新鲜培养物于改良马丁琼脂斜面培养基上，25℃培养5~7天至大量孢子产生。加0.9%无菌氯化钠溶液10ml将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液，加入蒙有灭菌纱布的无菌试管中。取此孢子悬液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，逐管10倍稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

9.供试品制备供试品名称及取样点：纯化水取样点（1）4T/h纯水系统二级反渗透装置进纯水箱口;(2) 4T/h纯水系统液体制剂二楼洁具间用水点；(3) 4T/h纯水系统三楼固体制剂纯水箱总回水口。

方法建立：2010版中国药典规定纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。但没规定取样量,由于所使用的滤膜孔径不大于0.45um ，直径为50mm, 规定每片滤膜上的菌落数应不超过100个。如果取样量过大,样品含菌量较多,就会造成细菌不宜分散,点计困难; 如果取样量过少,不能有效反映样品染菌量。为此采用每张滤膜取样品5ml。

10.计数方法验证

10.1试验组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器内，用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜3次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培养基上培养。

10.2菌液组大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注营养琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置35～36℃培养24小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置24～25℃培养48小时。菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表

菌落计数结果（cfu∕ml）

试验次数

10-5稀释10-6稀释10-7稀释1 2 1 2 2

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

10.3 供试品对照组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器内，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次100ml，平行两张滤膜，过滤后，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。细菌、霉菌及酵母菌各制备2个平皿，测定供试品本底菌数。

10.4.稀释剂试验组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作加入过滤器内，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培养基上培养。

10.5.稀释剂对照组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作加入过滤器内，平行两张滤膜，减压抽干后,取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养，平行制备2个平皿，置适宜温度培养48～72h，观察结果，测定菌数。

10.6. 结果见附表

11、控制菌检查方法验证（常规法）

11.1 试验组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器内，用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，冲洗滤膜3次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，接入胆盐乳糖培养基100ml中，按相应控制菌检查法进行检查。

试验结果：上述试验组检出试验菌，按此控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。故可按常规法进行控制菌检查。

12 验证结论和评价

根据验证试验结果，纯化水微生物限度检查按照2010版中国药典二部附录XIII微生物限度检查法检验，细菌、霉菌及酵母菌计数可采用薄膜过滤法检查。

附表1：独立试验一：各试验组菌落计数（回收率%）

取样点：

试验时间年月日完成时间年月日

验证菌株平皿号菌液组

菌落数

(cfu)

供试品对

照组菌落

数(cfu)

试验组菌

落数

(cfu)

稀释剂对

照组菌落

数(cfu)

试验组

菌回收

率(%)

稀释剂对

照组菌回

收率(%)

大肠埃希菌(培养48小时计数)

2 平均值

金黄色葡萄球菌(培养48小时计数)

2 平均值

枯草芽孢杆菌(培养48小时计数)

2 平均值

白色念珠菌(培养72小时计数)

2 平均值

黑曲霉(培养72小时计数)

2 平均值

结论：

本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定, 本次试验结果符合规定。

复核人(签名)：试验人(签名)：

取样点：

试验时间年月日完成时间年月日

验证菌株平皿号菌液组

菌落数

(cfu)

供试品对

照组菌落

数(cfu)

试验组菌

落数

(cfu)

稀释剂对

照组菌落

数(cfu)

试验组

菌回收

率(%)

稀释剂对

照组菌回

收率(%)

大肠埃希菌(培养48小时计数)

2 平均值

金黄色葡萄球菌(培养48小时计数)

2 平均值

枯草芽孢杆菌(培养48小时计数)

2 平均值

白色念珠菌(培养72小时计数)

2 平均值

黑曲霉(培养72小时计数)

2 平均值

结论：

本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定, 本次试验结果符合规定。

复核人(签名)：试验人(签名)：

取样点：

试验时间年月日完成时间年月日

验证菌株平皿号菌液组

菌落数

(cfu)

供试品对

照组菌落

数(cfu)

试验组菌

落数

(cfu)

稀释剂对

照组菌落

数(cfu)

试验组

菌回收

率(%)

稀释剂对

照组菌回

收率(%)

大肠埃希菌(培养48小时计数)

2 平均值

金黄色葡萄球菌(培养48小时计数)

2 平均值

枯草芽孢杆菌(培养48小时计数)

2 平均值

白色念珠菌(培养72小时计数)

2 平均值

黑曲霉(培养72小时计数)

2 平均值

结论：

通过三次独立试验,证明所采用的供试液制备方法及薄膜过滤法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。

复核人(签名)：试验人(签名)：

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纯化水微生物限度检查法验证报告

题目：纯化水微生物限度检查法验证报告编号：VDP-JY-010-01-2 共页

第页

起草：日期：审核：

日期：

批准：

日期：

颁发部门：

质量部

生效日期：分发部门：

1、验证目的

2、参照标准

3、验证项目内容

4、评价标准

5、验证实施时间

6、验证方法

7、验证结论和评价

一、验证目的

根据中国药典2010年版的要求，纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。为了确认该方法适合于本公司纯化水细菌、霉菌及酵母菌数计数测定，控制菌的测定。特对此检测方法进行验证。

二、参照标准

中国药典2010版二部附录微生物限度检查法。

三、验证项目内容

细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证，控制菌的验证。

四、评价标准

试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。

五、验证实施

我们项目验证小组从(微生物限度检验室完成验证时间开始)开始，进行各种菌液、供试液的制备，开始验证工作。

1、菌液制备

1.1大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌悬液的制备

①取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜斜面培养物1白金耳接种至10ml 营养肉汤培养基中，35℃培养18~24小时。

50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

1.2白色念珠菌、黑曲霉菌悬液的制备

2.供试品制备

供试品名称及取样点：纯化水。取样点（1）4T/h纯水系统二级反渗透装置进纯水箱口;(2) 4T/h纯水系统液体制剂二楼洁具间用水点；(3) 4T/h纯水系统三楼固体制剂纯水箱总回水口。

按照验证方案，采用每张滤膜取纯化水5ml。

六、验证方法

（一）、细菌、霉菌及酵母菌计数方法

1、试验组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器内，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培养基上培养。计数。

2、菌液组大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注营养琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置35～36℃培养24小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml面液分别注入平皿中，并立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每个面液分别制备二个平皿，置24～25℃培养48小时。菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表

菌落计数结果（cfu∕ml）

试验次数

10-5稀释10-6稀释10-7稀释

1 2 1 2 1 2

大肠埃希菌

金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉

3 供试品对照组取纯化水5ml，以无菌操作加入过滤器内，用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗滤膜3次，每次100ml，平行两张滤膜，过滤后，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养。细菌、霉菌及酵母菌各制备2个平皿，测定供试品本底菌数。

4. 稀释剂试验组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作加入过滤器内，每次

100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，将其菌面朝上贴于相应培养基上培养。

5.稀释剂对照组取0.9%无菌氯化钠溶液300ml，以无菌操作加入过滤器内，平行两张滤膜，减压抽干后,取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养，平行制备2个平皿，置适宜温度培养48～72h，观察结果，测定菌数。

6.附表

（二）控制菌检查方法验证（常规法）

试验组取5ml的纯化水，以无菌操作加入过滤器内，用PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，冲洗滤膜3次，每次100ml，在最后一次的冲洗液中分别加入上述的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌菌液（50～100cfu/ml）各1ml，平行两张滤膜，过滤后，取滤膜，接入胆盐乳糖培养基100ml中，按相应控制菌检查法进行检查。

试验结果：上述试验组检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查。故可按常规法进行控制菌检查。

七、验证结论和评价

通过三次独立试验,证明所采用的供试液制备方法及薄膜过滤法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。控制菌可按常规法进行检查。

本次验证各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定, 本次试验结果符合规定。

根据验证试验结果，纯化水微生物限度检查按照2010版中国药典二部附录XIII微生物限度检查法检验，细菌、霉菌及酵母菌计数采用平皿法检查，符合规定。

附表1：独立试验一：各试验组菌落计数（回收率%）

取样点：

试验时间年月日完成时间年月日

验证菌株平皿号菌液组

菌落数

(cfu)

供试品对

照组菌落

数(cfu)

试验组菌

落数

(cfu)

稀释剂对

照组菌落

数(cfu)

试验组

菌回收

率(%)

稀释剂对

照组菌回

收率(%)

大肠埃希菌(培养48小时计数)

2 平均值

金黄色葡萄球菌(培养48小时计数)

2 平均值

枯草芽孢杆菌(培养48小时计数)

2 平均值

白色念珠菌(培养72小时计数)

2 平均值

黑曲霉(培养72小时计数)

2 平均值

结论：

本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定, 本次试验结果符合规定。

复核人(签名)：试验人(签名)：

取样点：

试验时间年月日完成时间年月日

验证菌株平皿号菌液组

菌落数

(cfu)

供试品对

照组菌落

数(cfu)

试验组菌

落数

(cfu)

稀释剂对

照组菌落

数(cfu)

试验组

菌回收

率(%)

稀释剂对

照组菌回

收率(%)

大肠埃希菌(培养48小时计数)

2 平均值

金黄色葡萄球菌(培养48小时计数)

2 平均值

枯草芽孢杆菌(培养48小时计数)

2 平均值

白色念珠菌(培养72小时计数)

2 平均值

黑曲霉(培养72小时计数)

2 平均值

结论：

本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%,按标准规定, 本次试验结果符合规定。

复核人(签名)：试验人(签名)：

取样点：

试验时间年月日完成时间年月日

验证菌株平皿号菌液组

菌落数

(cfu)

供试品对

照组菌落

数(cfu)

试验组菌

落数

(cfu)

稀释剂对

照组菌落

数(cfu)

试验组

菌回收

率(%)

稀释剂对

照组菌回

收率(%)

大肠埃希菌(培养48小时计数)

2 平均值

金黄色葡萄球菌(培养48小时计数)

2 平均值

枯草芽孢杆菌(培养48小时计数)

2 平均值

白色念珠菌(培养72小时计数)

2 平均值

黑曲霉(培养72小时计数)

2 平均值

结论：

通过三次独立试验,证明所采用的供试液制备方法及薄膜过滤法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。

复核人(签名)：试验人(签名)：

11. 验证结论和评价

根据验证试验结果，纯化水微生物限度检查按照2010版中国药典二部附录XIII微生物限度检查法检验，细菌、霉菌及酵母菌计数可采用薄膜过滤法检查。

微生物限度检查办法验证方法

精心整理微生物限度检查方法验证方案 1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。 2.3. 4.0.22um 121营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL ）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG ）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min ，在3周内使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml ）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min ，在3周内使用。

4.4.2 试验菌的制备和稀释： 4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液： 4.4 4.4 4.4 4.4.2.2控制菌检查方法验证用菌液： 1ml 含菌10 3g单 45℃pH7.0 液。 3 4.4.4.2试验组： 4.4.4.2.1 平皿法：分1：20的供试液1ml和试验菌液（含菌50～100CFU）1ml，注入同一直径90mm的灭菌平皿中，每株试验菌平行制备2个平皿。 4.4 4.4

4.4.4.4.1 平皿法：取1：20供试液1ml，注入直径90mm的灭菌平皿中，每种培养基平行制备2个平皿。 4.4 4.4.4.5稀释剂对照组：若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心等特殊处理时，需增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。 4.4 养48 培养72 稀释剂对照组回收率＝结果判定：在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的回收率应均不低于％。试菌回收率低于70％，则应采用薄膜过滤法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、中和法等方法或联合使用上述方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法学验证。 4.4.4.11细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果：

药品微生物检验替代方法验证指导原则

药品微生物检验替代方法验证指导原则本指导原则是为所采用的试验方法能否替代药典规定的方法用于药品微生物的检验提供指导。随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：（1)基于微生物生长信息的检验技术，如生物发光技术、电化学技术、比浊法等；(2)直接测定被测介质中活微生物的检验技术，如固相细胞技术法、流式细胞计数法等；（3)基于微生物细胞所含有特定组成成分的分析技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。这些方法与传统检查方法比较，或简便快速，或具有实时或近实时监控的潜力，使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能，同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。在控制药品微生物质量中，微生物实验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要而采用非药典规定的检验方法（即替代方法）时，应进行替代方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。微生物检验的类型及验证参数药品微生物检验方法主要分两种类型：定性试验和定量试验。定性试验就是测定样品中是否存在活的微生物，如无菌检查及控制菌检査。定量试验就是测定样品中存在的微生物数量，如菌落计数试验。由于生物试验的特殊性，如微生物检验方法中的抽样误差、稀释误差、操作误差、培养误差和计数误差都会对检验结果造成影响，因此，药品质量标准分析方法验证指导原则（附录XIX A)不完全适宜于微生物替代方法的验证。药品微生物检验替代方法的验证参数见表1。表1 不同微生物检验类型验证参数注：尽管替代方法的验证参数与药品质量标准分析方法验证参数有相似之处，但是其具体的内容是依据微生物检验特点而设立的。替代方法验证的实验结果需进行统计分析，当替代方法属于定性检验时，一般采用非参数的统计技术；当替代方法属于定量检验时，需要采用参数统计技术。进行微生物替代方法的验证时，若替代方法只是针对药典方法中的某一环节进行技术修改，此时，需要验证的对象仅是该项替代技术而不是整个检验方法。如无菌试验若改为使用含培养基的过滤器，然后通过适宜的技术确认活的微生物存在，那么，验证时仅需验证所用的微生物回收系统而不是整个无菌试验方法。替代方法验证的一般要求在开展替代方法对样品检验的适用性验证前，有必要对替代方法有一个全面的了解。首先，所选用的替代方法应具备必要的方法适用性证据，表明在不含样品的情况下，替代方法

中国药典纯化水检验标准

纯化水汉语拼音: Chunhuashui 英文名: Purified Water 性状: 本品为无色的澄清液体；无臭，无味。检查: 酸碱度取本品10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。氯化物、流酸盐与钙盐取本品，分置三支试管中，每管各50ml。第一管中加硝酸5滴与硝酸银试液1ml，第二管中加氯化钡试液2ml，第三管中加草酸铵试液2ml，均不得发生浑浊。硝酸盐取本品5ml置试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管子50℃水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液［取硝酸钾 0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得（每1ml相当于1pg NO3）0.3ml，加无硝酸盐的水4.7ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000 006%）。亚硝酸盐取本品10ml，置纳氏管中，加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液（1→100）lml与盐酸菜乙H肢溶液（0．l＋100）1ml，产生的粉红色，与标准亚硝酸盐溶液〔取亚硝酸钠0.750g（按干燥品计算），加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50ml，摇匀，即得（每1ml相当于1μg NO2）]0.2ml，加无亚硝酸盐的水9.8ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.000 002%）。氨取本品50ml，加碱性碘化汞钾试液2ml，放置15分钟；如显色，与氯化铵溶液（取氯化铵31.5mg，加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml）1.5ml，加元氨水48ml与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深（0.000 03%）。二氧化碳取本品25ml，置50ml具塞量筒中，加氢氧化钙试液25ml，密塞振摇，放置，小时内不得发生浑浊。易氧化物取本品100ml，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。

微生物限度检查方法验证方案

微生物限度检查方法验证方案 1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。验证过程应严格按照本方案规定的容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准 2.围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。 3.规性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。 4.验证实施： 4.4.1 试验前的准备: 4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天使用。 4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周使用。 4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、

药品微生物限度检验方法标准操作规程

标准操作规程目的：建立一个药品微生物限度检验标准操作规程。范围：适用于本企业生产的所有品种，本企业所有洁净生产区域，QC微生物限度检查室，洁净工作室等。责任者：QC主任、化验员。规程：本规程引至《中国药典》2000年版。 1. 概述：微生物限度检查系指非规定灭菌制剂及其原辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。我公司QC设无菌操作室，用于微生物限度检查。无菌操作室的管理及使用制度见本文附录一。 2. 抽样：供试品应按批号随即抽样，一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍。抽样时，凡发现有异常可疑的样品，应缺陷选用疑问的样品，但因机构损伤明显破裂的包装不得作为样品，凡已能从药品、瓶口（外盖内侧及瓶口周围）外观看出长螨、长霉、虫蛀及变质的药品，可直接判为不合格，无需要再抽样检验。 3. 供试品的保存：供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，以防供试品中的污染菌因保藏条件所引起致死、损伤或繁殖。供试品在检验之前，应该保持原有包装状态，严禁开启，包装已开启的样品不得作为供试品。 4. 检查： . 使用设备：电热恒温培养箱、电热恒温水温箱、试管、刻度吸管、量筒、三角瓶、培养皿、试管架、注射器、针头、注射器盒、研钵、75％酒精棉球、紫外灯（365nm波长）。 . 检查的全过程应严格遵守无菌操作，严防再污染。使用设备、仪器、人员及无菌操作室常用的消毒、灭菌方法见本文附录二。除另有规定外，供试品制备成供试液后，均在均匀状态取样。制成供试液后，应该在60分钟内注皿操作完毕。标准操作规程 . 培养：除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30－35℃，霉菌、酵母菌培养温

大豆磷脂微生物限度检查法验证(DOC)

验证文件大豆磷脂微生物限度检测方法验证起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期文件编号

目录 1适用范围 ....................................................................................................................... - 1 - 2目的 ............................................................................................................................... - 1 - 3概述 ............................................................................................................................... - 1 - 4验证所需要的仪器设备及文件 ................................................................................... - 1 - 5可接受的限度范围标准 ............................................................................................... - 2 - 6测试方法 ....................................................................................................................... - 5 - 7异常情况处理 ............................................................................................................. - 15 - 8测试结果 ..................................................................................................................... - 15 - 9结论 ............................................................................................................................. - 15 - 10再验证周期 ............................................................................................................... - 16 - 11附表 ........................................................................................................................... - 16 -

微生物限度方法学验证

WOIRD格式微生物限度检测方法学验证方案&D.|[0w#j!Q+{/w 7^#E:k'p(t9J!T 3W#O&W!d8S*\7k!y$k!C1A |*Q4X*I)[5@8g %_8H0}!X:c5V4s :w%J'K)}0Q-W :H1f9N$[4V7L7} 文件编号：P-AMV002-1101 "r%|2C7e-IY#s%f 1v8U8D4M(n(q*a6o3e2f0z/_ 9`'j5[+y9c&C)D!O*O \%X:d,r0C(o3D "A2c,\6C'j+^ (L1L-n3{/J;K 执行前批准签字页2N+}8E8x%C!M1b2~1o'} 方案起草姓名公司/岗位签字日期 :c"s'R:u"l1q#l'o)}8h (@.}&N#s;[2E)H&U!R 1G5Q-h5N)|+I2p 方案审核姓名公司/岗位签字日期 +N:w0{4j"`"} -x4r(Z#P;a3Z/|0U 1\2P&v6j*`2h 方案批准姓名公司/岗位签字日期$p1h:X#G"u.} )B;d.V7R!@7t5v&D 9a0l!i,W4p4o6f+Z4V 7s*X3F8A7B3q"`1g 6T9y;U,k+k9b 目录 ,t,n2w&_4mT 1.目的4 2.范围4,V*l"_%Q5f,K#k 3.责任者及职责43^X*Q$x(E3g:B)E

4.验证简介4 5．验证过程7 6．结果判断76c9[/O1U&R 7．结论和建议7%{)x.{$f%I 8．异常情况报告7*E.Q.`;?!k#q 9．再验证7 10．附件8/O0@.@8O!`:c5c1n!k 1L)N.^2w+d3Y%V 1.目的$M;j2K6p'|:y3F'K+K 按照中国药典2010版（第一部），采用平皿法对龙加通络胶囊（成品）进行微生物限度检查，本方案是对此方法进行验证。;x'?8a'^6C5@!^ 2.范围&J+b'o7r7m6Z5t 龙加通络胶囊成品8A,S/U]3h1J 3.责任者及职责部门职责 QC起草并审核验证方案进行验证试验的具体操作完成验证记录中相关操作记录的填写根据验证结果起草和审核验证报告6q5D5e1|(h,f3C QA审核并批准验证方案和验证报告(S&h:^!z#k,K:B1Q!j)?&^ 监督验证方案的实施7?4y(`6P(r 4.验证简介 4.1定义 CFU：菌落数供试液3].N/E/p"O8}6C7R4d 取样品10g，取pH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲溶液稀释至1g/ml（1:10）。供试品对照组取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。'S#h$n1U:X's/J)e"C 试验组取规定量供试液采用平皿法进行细菌、霉菌及酵母菌计数。菌液组测定所加的试验菌数。%I8Y$G*Q4f;u.C*|%l+N 样品组样品溶液菌悬液（50-100CFU）稀释液平均菌落数 (CFU/皿) 供试液对照组+-+C供试液对照组3G#_,O-A'P#P;H 试验组+++C试验组菌液组-+-C菌液组'z5n%U:j2A(~"}N 4.2菌悬液 4.2.1菌种及来源(y)W#A2Q$p.I8y4M4m"z.|#p 本次验证涉及到金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏杆菌、枯草芽胞杆菌、白色念珠菌、黑曲霉，其详细情况如下：培养基名称名称及代号编号批号代次有效期至来源

001.纯化水微生物限度检查法操作规程

SOP/QC(09)001－01 纯化水微生物限度检查法操作规程文件类别：标准操作规程审批表江西中兴汉方药业有限公司

1.目的规范纯化水微生物检查的操作方法，确保药品检验的准确性。 2.适用范围适用于纯化水的微生物检查。 3.责任人 QC：负责按此规程执行。 4.程序 4.1 概述本规程是以营养琼脂培养基作为细菌培养基，采用平板表面涂布法测定纯化水菌落总数。其操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 4.2 仪器与用具电热恒温培养箱（30～35℃）霉菌培养箱（23～28℃）超净工作台无菌双碟移液管0.45μm微孔滤膜过滤器抽滤泵 4.3 试药与试剂营养琼脂培养基玫瑰红钠培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 4.4 纯化水的取样 4.4.1取样时，须先开启取样阀门，用工艺用水本身冲冼取样口，约冲水1升以上，而后以无菌具塞10ml试管取水，取水量约为试管高度的1/2～2/3。 4.4.2检测周期：见“工艺用水监测规程（SMP-ZL-016-）”规定。 4.4.3取样后的水样应立即检验。 4.5 检查方法量取9ml纯化水置盛有90ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的锥形瓶中混匀，作为供试液；量取供试液10 错误！未找到引用源。供试液置安装好的无菌抽滤装置，进行过滤。用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板上，盖好，倒置培养皿，分别将营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板置电热恒温培养箱（30～35℃）及霉菌培养箱（23～28℃）中培养。细菌培养3天后进行菌落计数，霉菌培养5天后进行菌落计数。计数结果即为每ml水中含细菌及霉菌的菌落数。 4.6 结果判定每1ml纯化水中的细菌数及霉菌数之和应不得过100个。 5 相关记录 6变更履历表

微生物限度检查方法及其验证报告(修改)

文件编号：73021微生物限度检查方法及其验证报告

目录1 样品相关信息 1.1 基本信息 2 主要仪器设备和试验耗材信息 2.1 主要使用的仪器设备 2.2 试验用培养基 2.3 试验用试剂 2.4 试验用菌种 3 试验环境 3.1 无菌室 3.2 洁净工作台 3.3 生物安全柜 4 试验方案 4.1 验证试验目的 4.2 微生物限度检查方法草案 5 方法验证试验 5.1 菌液制备 5.2 计数培养基适用性检查 5.3 控制菌检查用培养基使用性检查 5.4 供试液制备 5.5 方法验证 5.5.1 菌落计数方法验证试验 5.5.2 控制菌检查方法的验证 5.6 方法验证结论 6 供试品微生物限度检查结果

1 样品相关信息 1.1 基本信息（三批） 2 主要仪器设备和试验耗材信息2.1 主要使用的仪器设备 2.2 试验用培养基 2.2.1 对照培养基

2.2.2 试验用培养基 2.3 试验用试剂 2.4 试验用菌种

3 试验环境《中国药典》2015版规定，微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域进行。本公司微生物限度室、阳性对照室、生物安全柜及超净工作台洁净度检测无特殊情况下每季度进行一次。 3.1 无菌室无菌室按《医药工业洁净厂房设计规》GB 50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对10000级洁净度要求。 3.2 超净工作台超净工作台按《医药工业洁净厂房设计规》GB50457-2008监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。超净工作台沉降菌检测记录 2015.11.15 3.3生物安全柜生物安全柜按《生物安全实验室建筑技术规》GB50346-2011监测，静态洁净度检测结果符合GB50457-2008对100级洁净度要求。生物安全柜沉降菌监测记录 2015.11.15 4 试验方案按《中国药典》2015年版第四部：（通则1105）非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法、（通则1106）非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、（通则1107）非无菌药品微生物限度标准及（通则1121）抑菌效力检查法规定，本品微生物限度标准为：1g供试品中，需氧菌总数不得过1000cfu，霉菌和酵母菌总数不得过100cfu，大肠埃希菌不得检出。

2010版中国药典纯化水标准

纯化水質量要求參照《中国药典》2010版二部标准p411页【性状】本品为无色的澄清液体；无臭，无味。【检查】酸碱度取本品10ml，加甲基红指示液2滴，不得显红色；另取10ml，加溴麝香草酚蓝指示液5滴，不得显蓝色。【硝酸盐】取本品5ml置试管中，于冰浴中冷却，加10%氯化钾溶液0.4ml与0.1%二苯胺硫酸溶液0.1ml，摇匀，缓缓滴加硫酸5ml，摇匀，将试管于50℃水浴中放置15分钟，溶液产生的蓝色与标准硝酸盐溶液[取硝酸钾0.163g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，再精密量取10ml，加水稀释成100ml，摇匀，即得(每1ml相当于1μgNO3)]0.3ml,加无硝酸盐的水4.7ml,用同一方法处理后的颜色比较,不得更深(0.000006%)。【亚硝酸盐】取本品10ml，置纳氏管中，加对氨基苯磺酰胺的稀盐酸溶液(1→100)1ml 与盐酸萘乙二胺溶液(0.1→100)1ml，产生的粉红色，与标准亚硝酸盐溶液[取亚硝酸钠 0.750g(按干燥品计算)，加水溶解，稀释至100ml，摇匀，精密量取1ml，加水稀释成100ml，摇匀，再精密量取1ml，加水稀释成50ml，摇匀，即得(每1ml相当于1μgNO2)]0.2ml，加无亚硝酸盐的水9.8ml，用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0.000002%)。【氨】取本品50ml，加碱性碘化汞钾试液2ml，放置15分钟；如显色，与氯化铵溶液(取氯化铵31.5mg，加无氨水适量使溶解并稀释成1000ml)1.5ml，加无氨水48ml与碱性碘化汞钾试液2ml制成的对照液比较，不得更深(0.00003%)。总有机碳不得过0.50mg/L (附录ⅧR) 。【易氧化物】取本品100ml，加稀硫酸10ml，煮沸后，加高锰酸钾滴定液 (0.02mol/L)0.10ml，再煮沸10分钟，粉红色不得完全消失。以上总有机碳和易氧化物两项可选做一项。不挥发物取本品100ml，置105℃恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，并在105℃干燥至恒重，遗留残渣不得过1mg。【重金属】取本品100ml，加水19ml，蒸发至20ml，放冷，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml 与水适量使成25ml，加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，与标准铅溶液1.0ml加水19ml用同一方法处理后的颜色比较，不得更深(0.00001%)。【微生物限度】取本品，采用薄膜过滤法处理后，依法检查(附录ⅪJ)，细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。【另外要求】：電導率：<0.8US/CM；電阻率：>15MΩ.CM；NO指標: 合格。 2012-10-07

微生物限度方法学验证

微生物限度检查方法学验证一、检验方法依据微生物计数法（中国药典2015年版四部1105）；控制菌检查法（中国药典2015年版四部1106）；非无菌药品微生物限度标准（中国药典2015年版四部1107）；抑菌效力检查法（中国药典2015年版四部1121）检查。二、菌种、培养基及稀释液表1菌种

表2培养基

表3对照用培养基

表4试剂

稀释液：（1）pH6.8缓冲液取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至1000ml，摇匀，既得。（2）0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000ml，过滤，分装、灭菌。（3）0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液取聚山梨酯80 0.5ml，用0.9％无菌氯化钠溶液溶解并稀释至1000ml，滤过，分装，灭菌，备用。（4）靛基质试液

取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。三、菌液的制备 1细菌、霉菌、酵母菌接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，培养48小时。上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，培养7天，加入5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱，然后吸出孢子悬液（用带有无菌棉花的能过滤菌丝的无菌毛细吸管）用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。 2控制菌接种大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，培养24小时。用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～ 100cfu的菌悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。四、验证内容 1、计数方法验证

微生物方法学验证范本

编码：VP-C01-MM-01 XXXX软膏微生物限度检查方法学验证方案起草人：年月日审核人：年月日年月日年月日批准人：年月日目录 1.验证立项表 2.验证内容 2.1验证目的 2.2验证范围 2.3 验证要求 2.4 验证方法 2.4.1.试验原料、稀释剂和标准微生物 2.4.2细菌、霉菌及酵母菌验证内容 2.4.3 金黄色葡萄球菌验证内容 2.4.4铜绿假单胞菌验证内容 3. 验证报告验证立项表（REC）立项题目立项部门申请人

申请日期要求完成日期验证类别负责部门参与部门及人员验证原因质量部审核意见审核人：日期：验证领导小组审批人：日期：审批意见备注 XXXX软膏微生物限度检查方法学验证方案编码：VP-C01-MM-01品名验证依据2005版药典规格验证日期年月日数量报告日期年月日验证项目细菌、霉菌及酵母菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌 1.验证目的XXXX软膏配方中含水杨酸、硼酸，该两种物质具有一定的抑菌性。根据《中国药典》（2005年版）微生物限度检查标准规定，对XXXX软膏进行细菌、霉菌及酵母菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌检查方法的验证试验，以确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。 2.验证范围本公司XXXX软膏的微生物限度检测。

3.判定标准 3.1验证小组成员姓名职务职责组长负责验证方案、报告的批准项目负责人负责验证方案、报告的起草与具体实施验证小组成员负责验证试验及填写记录 3.2细菌、霉菌及酵母菌在3次平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%，试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值占菌液组的平均菌落数的百分率）均不低于70%；产品的试验组与阳性菌组的菌落数差异不超过30%，假定产品试验组的平均值与阳性菌组的平均值之比为Q，则0.7≤Q≤1.3。 3.3金黄色葡萄球菌在3次平行试验中，供试品组：结果应为阴性，未检出金黄色葡萄球菌；试验组：结果应为阳性，检出金黄色葡萄球菌；阴性对照组：结果应为阴性，未检出阴性对照菌；阳性对照组：结果应为阳性，检出金黄色葡萄球菌。 3.4铜绿假单胞菌在3次平行试验中，供试品组：结果应为阴性，未检出铜绿假单胞菌；试验组：结果应为阳性，检出铜绿假单胞菌；阴性对照组：结果应为阴性，未检出阴性对照菌；阳性对照组：结果应为阳性，检出铜绿假单胞菌。 4.验证方法 4.1.试验原料、稀释剂和标准微生物 4.1.1试验样品：XXXX软膏三批，批号为、、。4.1.2稀释剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。配法：照（05版药典附录XIII C）配制； 0.9%无菌氯化钠溶液的配制：取氯化钠9.0g，加1000ml使完全溶解，分装，灭菌。 4.1.3实验仪器：无菌培养皿（直径9.0cm）、净化室、灭菌锅、无菌刻度吸管（10ml、1ml）,水浴锅，试管（18×180）,具塞三角瓶。 4.1.4验证用培养基营养琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、溴化十六烷基三甲铵培养基、玫瑰红钠培养基。 4.1.5验证用微生物名称及编号菌珠名称传代次数大肠埃希菌MCC(B)44102 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501

微生物组性能验证报告

微生物检测系统/方法的分析性能验证一．鉴定/药敏检测系统分析性能验证（一）材料 1、检测系统：长沙天地人生物科技有限公司的TDR-1002细菌鉴定及药敏测试仪及耗材等。 2、评价材料（1）细菌鉴定符合率评价材料： 1）菌株：大肠埃希菌A TCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853 金黄色葡萄球菌A TCC29213、粪肠球菌ATCC29212 2）肠杆菌科生化试验： LDC、 PD、 MAU、 GLU、 INO、 RHA、 ODC、 IND、 HYS、 ADO、 MEL、 SOR、 URE、VP、 BGA、 MAN、 CEL、 SUC 3）非发酵菌科生化试验： ADH、 NIT、 GEL、 DXY、 MAL、 LDC、 CIT、 BGA、 LAC、 MAN、 URE、 ESC、 GLU、SUC、 FRU。 4）微球菌科生化试验： VP 、 ADH、 LAA、 BGA、 TRE、 HIP、 ESC、 AGA、 RIB、 LAC、 AMD、ALP、 BGU、MAN、 RAF。 5）链球菌科生化试验： URE、 NIT、 BGU、 SUC、 MAL、 ADH、 VP 、 BGA、 MNE、 TRE、 NOVO、ALP、 GLU、MAN、 LAC、 6）酵母样真菌生化试验： GLU、 GAL、 NAG、 MAL、 RAF、 DXY、 INO、 CEL、 SUC、 MEL、 ADO、AMG、 LAC、TRE、 DUL。 7）奈瑟/嗜血杆菌生化试验 NIT、 GLU、 SUC、 ALP、 LAC、 FRU、 BGA、 MAL、 STA。（2）药敏试验评价材料： 1）菌株肠杆菌科：大肠埃希菌ATCC25922；非发酵科：铜绿假单胞菌ATCC27853、微球菌科：金黄色葡萄球菌A TCC29213、链球菌科：粪肠球菌ATCC29212 酵母样真菌：近平滑念珠菌A TCC22019 奈瑟/嗜血杆菌：流感嗜血杆菌ATCC49247

微生物检验方法验证方案

微生物限度检查方法（平皿法）验证方案目录一、验证方案的制定二、验证方案的起草与审批三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案 1．验证目的和原理 2．验证方法步骤 3．试验实施 3.1试验前的准备 3.2验证试验操作 3.3试验结果 4．验证结果评价分析

5．附件微生物限度检查方法（平皿法）验证文件一、验证方案的制定二、验证方案的起草与审批 1验证方案的起草

2．验证方案的审核与批准验证方案审核人：审核日期：年月日验证方案批准人：批准日期：年月日三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案 1．验证目的和原理 1.1 验证目的为确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定，特制定本方案。验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。 1.2 原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。 2．验证方法步骤 2.1验证前的准备进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。 2.2验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。 2.3试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。 3．试验实施 3.1试验前的准备 3.1.1主要仪器设备：高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、

2015版药典微生物限度微生物无菌方法学验证流程

微生物限度/无菌方法学验证流程 1.：提交单位购买申请菌种的购买：需要1.5个月单位介绍信证明工作用途等文件，并向中检院网站提交申请，接到申请后一个月后中检院会把有的菌种邮寄到使用单位，中检院菌种经常缺货并不是很齐全，不能一次买齐所需要的8种菌一次性买齐， 2.每种从菌复活、分离、纯化复壮：共需要30天药典规定进行药品检验所需8种标准阳性菌，购买中检院冻干菌粉后进行复活与保藏1大肠埃希菌 2金黄色葡萄球菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5铜绿假单胞菌 6沙门菌（细菌每种冻干菌粉复活到分离纯化保藏各需要3-4天时间） 7白色念珠菌 8黑曲霉菌（霉菌酵母菌冻干菌粉从复活到分离纯化制备孢子菌悬液需要至少7天时间） 3.培养基适用性/灵敏度验证：需要60-80天实验中使用的培养基需要进行与中检院提供的标准培养基进行培养基适用性验证每种培养基不同批号之间也需要进行验证之后方可以进行微生物检验用药检室现有培养基种类20余种，每种培养基验证需要3-4天，完成所有培养基适用性验证需要60-80天。

恩替卡韦分散片微生物限度方法学适用性验证： 1.回收率验证：回收率验证实验共需要26天（若回收率达不到药典规定需要重新选用另一种方法进行验证）五种实验菌分别验证 1金黄色葡萄球菌 2铜绿假单胞菌 3枯草芽孢杆菌 4白色念珠菌 5黑曲霉菌五种阳性菌的回收率验证需使标准阳性菌回收率在阳性对照组计数达到50％-200％之间假设验证一次成功 3种细菌回收率各需要4天时间，2霉菌酵母菌各需要7天时间 2.控制菌适用性验证：共需要20天大肠埃希菌控制菌方法：需要5天时间其他制剂含药材原粉的中药制剂需要检查沙门菌、耐胆盐革兰式阴性菌各需要7天时间共1周实验室消毒实验用具灭菌，实验细菌培养物灭活处理，实验用具洗涮等方法学验证一次顺利完成共需要46天，验证方法过程需要重复一遍作为方法学适用性确认复方茵陈注射液无菌方法学适用性验证： 1.方法适用性验证：验证实验共需要30天（若回收率失败或达不到药典规定回收率需要重新选用方法进行验证）五种实验菌分别验证 1金黄色葡萄球菌 2大肠埃希菌菌 3枯草芽孢杆菌 4生孢梭菌 5白色念珠菌 6黑曲霉菌 6种实验组阳性菌需与对照管组进行对照,含供试品的实验菌均生长良好则说明方法可行假设验证一次成功每种菌分别按规定温度培养，培养时间不得超过5天实验室消毒实验用具灭菌，实验细菌培养物灭活处理，实验用具洗涮等，方法学验证一次顺利完成共需要30余天，验证方法过程需要重复一遍作为方法学适用性确认

2015年版微生物限度检验操作规程

2015 版微生物限度检验操作规程目的建立微生物限度检查操作规程，规范操作，保证结果的准确性。范围成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。内容概述：本检验操作规程依据中国药典2015 年版四部《通则1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》和《通则1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》进行检查。微生物计数法一、计数方法 1．微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 2、计数方法本法包括平皿法、薄膜过滤法。 3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。 4、菌种及菌液的制备试验用菌株的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 袋)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验见表 1。菌液制备按表 1 规定培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用无菌氯化钠- 蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3-5ml含％(ml/ml )聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含%(ml/ml )聚山梨酯80的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉抱子悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2-8 C,可在24小时内使用。黑曲霉抱子悬液可保存在2-8 C,在验证过的贮存期内使用。表 1 试验菌液的制备和使用阴性对照为确认试验条件是否符合要求,应进行对照试验,阴性对照试验应无菌生长。培养基适用性检查按照表1规定,接种不大于100cfu 的菌液至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基平板或沙氏葡萄糖琼脂培养基平板,置规定的条件下培养。每一试验菌株平行制备 2 管或 2 个平皿。同时用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在范围内,且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。被检液体培养基管与对照培养基管比较,试验菌应生长良好。 5、计数方法适用性检查

微生物限度检测方法验证操作规程(2015年版)

微生物限度检测方法验证操作规程 1 目的确认所采用的方法适合于该产品的微生物限度检测。 2 依据《中国药典》2015版。 3 范围所有需进行微生物限度检测的产品。 4 责任 4.1验证小组负责检验方法验证/确认方案的起草、验证/确认方案的实施。 4.2验证委员会负责验证/确认方案的审批，验证/确认结论的审核。 5 程序 5.1 由验证小组提出验证申请，验证方案编制完成后，填写《确认和验证方案审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证方案编制人对验证小组其余人员进行培训后，方可按验证方案试验。 5.2 试验完成后及时编制验证报告，并填写《验证报告审批表》，经验证小组会签，报验证委员会审核，由生产负责人和质量负责人批准后，验证报告结论才可实施。 6 内容 6.1 概述通过验证以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定及控制菌的检查。根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方案进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行产品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。 6.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法的验证 6.2.1 验证用菌株

铜绿假单胞菌[CMCC（B）10 104] 金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63 501] 黑曲霉[CMCC（F）98 003] 白色念珠菌[CMCC（F）98 001] 6.2.2 验证用菌液制备 6.2.2.1接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌至胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。取上述培养物各1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。 6.2.2.2 接种白色念珠菌至沙氏葡萄糖液体培养基中，于20～25℃培养2～3天。取上述培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液，备用。 6.2.2.3接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20～25℃培养5～7天，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的孢子悬液，备用。 6.2.3 供试液的制备 6.2.3.1 水溶性供试试品取供试品，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 6.2.3.2 水不溶性非油脂类供试品取供试品，用pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1：10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如0.1﹪的聚山梨酯80，使供试品分散均匀。若需要，调节供试液pH值至6～8。必要时，用一稀释液将

2015年版中国药典微生物限度检查方法验证的方案.doc

人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史。

目录 1. 概述 2. 验证目的和范围 3. 组织及职责 4. 验证进度计划表 5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认 6. 验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认 7.验证项目和验证方法 7.1试验菌株 7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备 7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证--常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法 7.5控制菌检查方法验证—离心沉淀-薄膜过滤法 8.偏差与漏项控制 9.验证报告会审

1. 概述我公司生产品种人工牛黄甲硝唑胶囊，产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。人工牛黄甲硝唑胶囊处方中含有甲硝唑、人工牛黄以及常用辅料成分，文献资料介绍甲硝唑对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。甲硝唑在水中微溶，可以通过离心沉淀-薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。本验证方案通过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于本品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试品抑菌物质的离心沉淀-薄膜过滤法是否适用于本品的微生物限度检查。本验证方案根据样品特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。 2. 验证目的和范围验证该产品的微生物限度检查方法的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。本验证方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝唑胶囊，进行微生物限度检查方法的验证。 3.组织及职责 3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最终由质量负责人批准。验证方案实施完成后，由QC组负责汇总微生物限度检查法验证的结果、撰写报告，由质量部审核，最终由质量负责人批准报告。 3.2验证方案的培训验证方案在经质量负责人批准后，，由QC组组长对本次验证实施的相关人员组织培训工作，并将该次的培训记录归档。 3.3验证方案实施过程中的变更和偏差验证方案实施过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采取相应的控制措施。 3.4 验证工作小组成员表 4. 验证进度计划表本次微生物限度检查方法验证的计划安排时间是2015年12月至2016年1月。 5. 验证所需要的仪器设备及相关文件的确认 5.1.主要检验仪器设备确认表